INTRODUCCIN Una vez que se halla producida la fertilizacin, el "nuevo ser" debe dar aviso de su presencia en el tero de su madre,

de manera tal a que las condiciones ptimas para que este nuevo ser se pueda desarrollar sean otorgadas justamente por la madre. Segn las especies a tratar, la seal enviada por el embrin se debe dar antes que el tero empiece a secretar PGF2alfa, hormona que causa la destruccin del cuerpo lteo productor de la progesterona necesaria para la gestacin. Es as como tempranamente el embrin debe secretar sustancias (denominadas en su conjunto EPF: early pregnant factors/factores de preez temprana) que capte el endometrio materno y sirva para evitar la accin luteoltica de la PGF2alfa. Por ejemplo, en la vaca, entre los das 16 y 19 de gestacin el embrin produce varias protenas como seal para el reconocimiento materno de gestacin. En la oveja, una protena especfica (Interfern) es secretada por el embrin entre los das 12 y 21, inhibindose as la produccin de PGF2alfa. En la cerda, los estrgenos son la principal seal enviada por los embriones porcinos (por lo menos 2 embriones por cuerno uterino) entre los das 11 y 12 de gestacin; slo que en la cerda, en vez de evitarse la secrecin de PGF2alfa, la mencionada hormona es "secuestrada en la luz del tero" y de esta foma pasa a secretarse en forma excrina, sin tener efecto en el cuerpo lteo. Bsicamente es as como en las diferentes especies de mamferos ocurre el establecimiento y mantenimiento de la gestacin, a partir de la seal antiluteoltica enviada por el embrin o los embriones al tero materno.

FISIOLOGA MATERNA EN EL EMBARAZO

El embarazo temprano se hace notar por procesos que prolongan la vida media del cuerpo lteo cclico e indican un reconocimiento materno del embarazo.

RECONOCIMIENTO MATERNO DEL EMBARAZO

Se sabe que la prostaglandina f2alfa (PGF 2) es una hormona uterina luteoltica en ovejas, cerdos, vacas y caballos. Durante la lutelisis, el tero segrega PFC 2 en forma pulstil (Mc-Cracken y col., 1984) hacia la vena uteroovrica, y llega al ovario en forma directa por un sistema contra corriente (vacas, ovejas, cerdos) o por conductos sistmicos (caballo) para terminar la vida del cuerpo lteo. En el embarazo temprano no hay esta secrecin pulstil de PGF 2, lo que permite que el cuerpo lteo funcione y segregue progesterona durante las etapas tempranas si no es que durante todo el embarazo. El mecanismo por el que el producto en desarrollo elimina este efecto luteoltica opera mediante un producto secretorio del embrin que mantiene la accin de la progesterona en el tero. El momento del reconocimiento materno del embarazo se presenta despus de que el blastocisto ha sido transportado hacia el tero, aunque se sabe que solo los huevos fecundados entran en el tero de la yegua. Si no hay blastocisto en el tero de la oveja en el da 12, en la cerda en da 13 y en la yegua entre los das 14 a 16 del ciclo, el cuerpo lteo empieza a degenerar. En la cerda se requiere un mnimo de cuatro embriones para mantener el embarazo (Polge y col., 1966). Hay controversia respecto al factor luteoprotector secretado por el blastocisto. En ovejas pudiera ser trofoblastina (una protena del desarrollo, con peso molecular de 17 000) o PGF 2; un antagonista directo de la PGF 2alfa. En otras especies como el cerdo y el caballo, la secrecin embrionaria de estrgenos mantiene el cuerpo amarillo.

RECONOCIMIENTO MATERNO DE LA PREEZ

La implantacin permite que el producto y el endometrio uterino establezcan un ntimo contacto para intercambiar nutrientes y compartir productos endocrinos. En el momento apropiado, el producto produce hormonas esteroides, protenas, o ambas, que anuncian su presencia al sistema materno. Esta seal es necesaria para que persista el cuerpo lteo, se produzca progesterona y haya un continuo desarrollo endometrial y actividad secretora. A este periodo crtico, en el que el producto seala su presencia para permitir que la preez se establezca, se llama reconocimiento de la preez por parte de la madre. Si el producto no avisa en el momento exacto, se termina la funcin del cuerpo lteo por accin luteoltica de la prostaglandina F 2alfa (PGF 2alfa) del tero. Esto garantiza que la hembra entrara en estro y se apareara a intervalos frecuentes hasta que se establezca una preez exitosa. La PGF 2alfa es producida por el endometrio de la vaca, borrega, yegua y cerda (Bazer y col., 1981) y origina regresin morfolgica del cuerpo lteo y cese de la produccin de progesterona. El potencial luteoltico de la PGF 2alfa endometrial deber bloquearse si se establece la preez, dado que el cuerpo lteo funcional es esencial para la iniciacin y el mantenimiento de la preez en todos los animales de granja, el efecto del feto es luteoltico pues la produccin de progesterona se mantiene en cifras similares a las del diestro durante la preez. La secrecin basal de LH por la hipfisis anterior tambin es esencial para que el cuerpo lteo se mantenga y funcione durante la preez. RECONOCIMIENTO MATERNO DE LA GESTACIN. Este fenmeno se presenta en la hembra despus de la fertilizacin. Como es sabido, las hembras clasificadas como polistricas continuas presentan ciclos estrales en forma constante pero, cuando estn gestantes, aparece una serie de eventos para que el prximo ciclo no se inicie, por lo que al conjunto de estos eventos se les conoce como reconocimiento materno de la gestacin que bsicamente est

encaminado a evitar la destruccin del cuerpo lteo (cl) es decir, la presencia de esta estructura y la produccin de progesterona (P4) es necesaria para el mantenimiento de la gestacin, si la hembra, no qued gestante, entonces el cuerpo lteo se destruye, los niveles sricos de P4 disminuyen, se produce una retroalimentacin negativa hacia el hipotlamo que lo estimula para producir hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) y se presenta el arranque de un nuevo ciclo estral. Los mecanismos para evitar esta destruccin, son diferentes en las diversas especies animales incluyendo al ser humano y han sido ampliamente estudiados dando a conocer en algunos casos la totalidad del mecanismo (mujer, rumiantes cerda y perra) y en otros parte del mismo (yegua y gata). En el caso particular de la perra, es necesario decir que no existe un mecanismo de reconocimiento de la gestacin con base en los siguientes argumentos: A) No es una especie continua ya que presenta una etapa de anestro que puede durar de 3 a 9 meses. B) El cuerpo lteo permanece sin importar si existe o no la gestacin, de tal forma, que la perra estar bajo la influencia de P4 durante 63 das si qued gestante y hasta 100 das si qued vaca, lo que sugiere que la perra desde el punto de vista endcrino, no presenta diferencias entre la etapa de diestro (fase ltea) y el periodo gestacional en lo que se refiere al nivel de sntesis de P4, lo que en conclusin significa, que

la perra no gestante pero en diestro, automticamente se le debe considerar pseudogestante y no en un periodo conocido como embarazo psicolgico, lo cual en mi opinin es un error ya que no es una alteracin provocada por el sistema nervioso central sino una manifestacin clara de la actividad del sistema endcrino de la perra. En mi concepto muy particular, difiero con aquellos colegas que se refieren a este fenmeno como una patologa endocrina o como un factor predisponente a la presentacin de la hiperplasia qustica endometrial piometra ya que hay pacientes que padecen piometra y nunca presentaron pseudogestacin y pacientes con pseudogestacin que no sufren piometra. Aquellos casos en los que ambas entidades se presentaron, deben ser considerados como coincidencias ya que actualmente se estn realizando estudios al respecto y todava no hay estudios que avalen cientficamente que un padecimiento favorece la aparicin del otro. Es muy importante identificar a la pseudopreez clnica que es en la que se presenta la secrecin lctea, el desarrollo del tejido mamario, el cambio de conducta y el crecimiento del abdomen pero, en este caso, se debe hablar de la relacin entre la progesterona y la prolactina que debemos recordar es inversamente proporcional, es decir, a mayor progesterona menor prolactina y viceversa sin considerarla como patolgica ya que, algunas perras pueden presentar durante la gestacin fluctuaciones en los niveles de P4, lo que estimula la secrecin de prolactina y por lo tanto, la presentacin del cuadro clnico de pseudogestacin. Con base en esto,

el tratamiento que se le debe dar a este fenmeno es la administracin de substancias agonistas de la dopamina debido a que son inhibidoras de la prolactina. En este grupo se encuentran la bromocriptina y el hidroxigenmaleato de lisurida. C) El embrin canino, no produce ninguna seal qumica que sirva como mensaje para evitar la destruccin del cuerpo lteo. En especie como el rumiante, esta seal esta dada a travs de la sntesis de protenas trofoblasticas, en la mujer el embrin produce hormona corinica (HCG) y en la cerda y la yegua, sus embriones producen estrgenos. En la gata y en la yegua al parecer, hay produccin de protenas trofoblasticas sin estar totalmente aclarado este mecanismo. D) La instruccin para la formacin de la placenta esta dada por intervencin del cdigo gentico del embrin y no, por instruccin del tero como sucede en otras especies. E) El mecanismo de lutelisis por medio de prostaglandina f2a en la perra, al parecer solo se presenta en el momento del parto pero todava hay dudas entre la comunidad internacional.

CERDA

La PGF 2alfa uterina es luteoltica y los estrgenos producidos por el feto proporcionan la seal para el reconocimiento materno de la preez que se presenta entre los das 11 y 12 de la gestacin. Entre los das 16 y 30 de la preez hay un segundo periodo de produccin de estrgeno. La inyeccin de estrgeno exgeno (valerato de estradiol, 5mg/da) del da 11 al 15 del ciclo estrual permitir el mantenimiento del cuerpo lteo por un periodo equivalente o ligeramente ms largo que la preez. Esta condicin se denomina seudopreez. Entre los das 12 y 16 del ciclo, las concentraciones plasmticas de PGF 2alfa en la vena uteroovrica son elevadas y producen lutelisis. Sin embargo , la PGF 2alfa del plasma de la vena uteroovrica de cerdas preadas y seudopraadas es significativamente ms baja que las cerdas durante el ciclo; pero cantidades mayores de PGF 2alfa se recuperan en los lavados uterinos de cerdas preadas y seudopreadas que en aquellas que estn en su ciclo. Por tanto, los estrgenos no inhiben la produccin de PGF 2alfa en el endometrio uterino, pero permiten que la PGF 2alfa sea secuestrada en la luz uterina. La secrecin de PGF 2alfa en una direccin endocrina es bloqueada y la PGF 2alfa no est disponible para que el cuerpo lteo experimente lisis. Eh la cerda debern haber fetos en ambas trompas uterinas, por lo menos dos en cada una, para que se establezca la preez. Si no hay feto en una de ellas, la PGF 2alfa liberada del endometrio del asta uterina no ocupada producir lutelisis del cuerpo lteo en ambos ovarios. La falla en mantener la preez unilateral en cerdas indica que el feto o fetos formados en una asta uterina no producen el o los factores que actan sistemticamente para permitir el mantenimiento del cuerpo lteo bilateral.

BORREGA
En la borrega, la PGF 2alfa es la luteolisina, y la protenas secretadas por el feto entre los das 12 y 21 de la gestacin inhiben la produccin de PGF 2alfa del endometrio uterino. Moor y Rowson (1966, 1967) determinaron que el reconocimiento materno de la preez en las borregas se inicia el da 12 y que la infusin intrauterina pero no la endovenosa de homogneos de feto los das 14 y 15 prolongan la funcin del cuerpo lteo. En borregas en ciclo, los episodios de produccin de PGF 2alfa entre los das 14 y 16 aumentan de

frecuencia hasta alcanzar cinco episodios en 25 horas, y luego ocurre la regresin del cuerpo lteo. Los estrgenos estimulan el aumento de receptores de oxitocina en el endometrio de la borrega. La oxitocina de la apfisis anterior, del cuerpo lteo, o de ambos, pueden originar episodios de PGF 2alfa (McCracken y col., 1984). Un promedio de 7.6 episodios de PGF 2alfa se presentan entre los das 14 y 15 en borregas no preadas, contra solo 1.3 en borregas preadas durante ese mismo periodo. La infusin intrauterina continua de homogenizados de fetos del da 14 al 15 prolonga la vida media del cuerpo lteo en borregas; sin embargo, la infusin de homogenizados de feto en la vena uterina no es efectiva (Moor y Rowson, 1967; Ellinwood, 1979). El (o los) agente(s) activo(s) del homogenizado, se supone que es una protena porque fue destruida por ebullicin. Godkin y col. (1982) purificaron una protena producida por el feto de borrega entre los das 12 y 21 de la preez, y le llamaron protena trofoblastica ovina 1 (OTP1). OTP-1 se une a la superficie y a clulas epiteliales glandulares de la superficie del endometrio y aumenta en forma selectiva la secrecin de protenas por el endometrio uterino (Godkin y col., 1984). La introduccin tanto de protenas secretoras totales del feto ovino como de OTP-1 en la luz uterina prolongara la vida media del cuerpo lteo. Las protenas de feto ovino del da 16, introducidas en la luz uterina de borregas no preadas, inhiben la produccin de PGF 2alfa en respuesta a la ventaja tanto de estrgenos como de oxitocina. De manera semejante, cuando las borregas preadas y las borregas en ciclo responden con un marcado aumento en la produccin uterina de PGF 2alfa (Fincher y col., 1984). La OTP-1 purificada no ha sido probada en sus efectos especficos sobre la produccin de PGF 2alfa. Las protenas secretoras del feto ovino pueden: 1)interferir con la capacidad del estrgeno para inducir receptores de oxitocina; sin embargo, su efecto antiestrgeno parece improbable; 2)competir con las uniones de la oxitocina con su receptor; es decir, desnaturaliza el receptor de oxitocina o bloquea la sntesis o insercin de ste en la membrana celular, o 3)estimula la actividad de la enzima 9cetoreductasa, la cual mejora la produccin de PGF 2alfa a partir de PGF 2alfa del endometrio uterino. Los valores de PGF 2alfa en la sangre de la

vena uteroovrica aumentan cerca de cuatro veces entre los das 12.5 y 14.5 de la preez y reflejan un aumento en la produccin total de PGF 2alfa del endometrio, del feto o de ambos (Silvia y col., 1984).

VACA
La luteolisina uterina es PGF 2alfa y se cree que el reconocimiento materno de la preez ocurre entre los das 16 y 19 de la gestacin en vacas (Thatcher y col., 1984). La 15 ceto-13, 14 dihidro PGF 2alfa (PGFM) del plasma perifrico propicia un medio confiable para el estudio de la secrecin de PGF 2alfa del tero bovino. En vacas no preadas, la PGFM esta marcadamente reducida y se mantiene el cuerpo lteo. Un aumento en el triple o cudruple de PGFM se detecta a las seis horas despus de la inyeccin endovenosa de 3 mg de estradiol en el da 13 del ciclo estrual, pero esta respuesta es significativamente reducida cuando el estradiol se inyecta entre los das 18 y 20 de la preez. El intervalo entre periodos estruales aumenta desde 20=. 8 das (cuando el feto es sacado el da 15) a 25= 1 da (cuando el feto es eliminado el da 17). La infusin intrauterina de homogenizados de feto tambin prolonga el intervalo interestrual (Northey y French, 1980). El feto del bovino produce un buen nmero de protenas de bajo peso molecular, de tipo acido. Cuando estas protenas se introducen en la luz uterina de vacas no preadas entre los das 15 y 21, prolongan la funcin del cuerpo lteo por un promedio de 8 das (intervalo interestrual de 30.3= 1.9 das) ms que la vacas control inyectadas con protenas plasmticas (intervalo interestrual de 22.3 =.6 das). Cuando se introducen las protenas secretoras del feto bovino en la luz uterina entre los das 15 y 18, inhiben la capacidad del tero para producir PGF 2alfa en repuesta a una inyeccin de estradiol en el da 18. Como se explic antes en el caso de la borrega. Las protenas del feto bovino pueden ser la clave del reconocimiento materno de

la preez (Knickerbocker y col., 1984). Los fetos bovinos producen tambin PGF 2 que puede jugar un importante papel en el mantenimiento del cuerpo lteo.

YEGUA
La sustancia luteoltica uterina de las yeguas es la PGF 2alfa y el feto parece inhibir su produccin por el endometrio uterino (Sharp y col., 1984). En la yegua en ciclo, las concentraciones en el plasma venoso uterino y en los lavados uterinos aumentan desde el octavo da a los das 14 y 16 cuando se produce la lutelisis y disminuyen las concentraciones plasmticas de progesterona. La cantidad de PGF 2alfa unida por receptores del cuerpo lteo es mxima el da 14 del ciclo y el da 18 de la preez. Al parecer, el cuerpo lteo de la yegua puede responder a la PGF 2alfa circulante durante la preez; por eso, el feto debe tener algn mecanismo antiluteoltico. Las yeguas preadas tienen poca PGF 2alfa en los lquidos uterinos; la PGF 2alfa en el plasma venoso uterino esta reducido y la PGFM en el plasma perifrico no muestra patrones de liberacin episdica (Sharp y vol., 1984). Sin embargo, el tejido endometrial tanto de yeguas preadas como no preadas produce PGF 2alfa in vitro. Pero en presencia de feto, la produccin endometrial de PGF 2alfa esta marcadamente reducida. El feto equino migra dentro del tero de un cuerno uterino al otro de 12 a 14 veces al da entre los das 12 y 14 de la preez (Ginther, 1984) posiblemente para inhibir la produccin endometrial de PGF 2alfa y, por tanto, proteger al cuerpo lteo. El feto equino realmente suprime la produccin de PGF 2alfa del endometrio, pero an no se ha identificado el agente activo (Sharp y col., 1984). El feto equino tambin hace que aumente la cantidad de estradiol entre los das 8 y 20 de la gestacin. Algo semejante sucede con la estrona, pero en mayor magnitud.

Los intentos para prolongar la vida media del cuerpo lteo en yeguas con inyeccin de estrgenos han dado resultados confusos. Los fetos de equinos secretan tres protenas principales entre los das 12 y 14 de la preez, con pesos moleculares tan grandes como 400 000, 50 000 y 65 000. Sin embargo, se desconoce la funcin de estas protenas (Fazleabas y McDowell, 1983). Los estrgenos, las protenas secretoras, o ambos, proporcionan las seales de preez para el reconocimiento materno en la yegua, en forma directa o indirecta con solo inhibir la produccin de PGF 2alfa endometrial. GATA En general, los mamferos son vivparos; es decir, su desarrollo embrionario y fetal se completa dentro del tero. Este perodo se denomina gestacin y en l ocurren principalmente la nutricin del feto en crecimiento y las adaptaciones maternas con este propsito (Jainudeen y Hafez, 1987). Se ha demostrado en la gata la necesidad de varias cpulas para aumentar los niveles sricos de LH y asegurar la ovulacin, la cual por lo general ocurre 48 a 52 horas despus del alza de LH (Concannon y col., 1980; Wildt y col., 1981; Lein y Concannon, 1983). En caso de monta no frtil la gata experimenta un perodo de pseudogestacin, durante el cual toda o casi la totalidad de la P4 medible en plasma es producto de la actividad luteal. Este perodo tiene una duracin de entre 30 y 45 das (Tsutsui y Stabenfeldt, 1993). En la gata despus de la ovulacin, los ovocitos en metafase II permanecen en el oviducto, lugar donde ocurre la fecundacin dentro de 30 horas posteriores a la ovulacin. Se ha descrito que la tasa de ovulacin en la gata sera de 2 - 11 ovocitos con promedios que varan entre 4.5 0.4 (Chaffaux, 1993) y 5.6 1.9 (Tsutsui y col., 1989). Cinco a seis das despus de la fecundacin, luego de migrar a travs del oviducto, los embriones ingresan al tero e ingresan al mismo en estado de mrula compacta. Al octavo da el blastocisto tiene un dimetro de 500-600 mm y en el dcimo da algunos han completado su expansin alcanzando un dimetro de 2300 mm (Tsutsui y Stabenfeldt, 1993). Antes de la implantacin los blastocistos se mueven libremente entre ambos cuernos uterinos, asegurando de esa manera una distribucin equitativa de los fetos entre ellos. La implantacin se inicia entre 12 y 13 das despus de la cpula (la primera monta se considera como el estmulo ovulatorio). La posicin de los blastocistos en la cavidad uterina es central y la orientacin del disco embrionario respecto al mesometrio es antimesometrial.

Una vez que se ha establecido la orientacin de los blastocistos, estos invaden la mucosa uterina. En una primera fase ocurre la aposicin entre el trofoectodermo y el epitelio del lumen uterino, luego se inicia la fase de adhesin por interdigitacin de microvellosidades uterinas con la membrana trofoblstica y finalmente ocurre la invasin de la mucosa uterina (Faber y Thornburg, 1983). La invasin del endometrio implica la penetracin de la lmina basal epitelial por el trofoblasto, el cual rodear los vasos sanguneos del estroma. La invasin es intrusiva, es decir, proyecciones del sincicio trofoblstico penetran en el espacio intercelular del endometrio sin lisis celular. De acuerdo a la clasificacin descrita por Faber y Thornburg (1983), basada en el nmero de capas de tejido materno que separan el corion embrionario de la sangre materna, la gata posee una placenta endoteliocorial y desde un punto vista macroscpico es zonaria (o zonal) completa. Segn, la relacin anatmica entre los microvasos maternos y fetales es fisiolgicamente importante, ya que la microvasculatura abastece aquellas reas de la placenta donde ocurre el intercambio difusional. En la gata, vellosidades muy vascularizadas de la superficie del corion se introducen ampliamente entre las criptas endometriales hasta descansar en el endotelio de los vasos uterinos. Este tipo de distribucin de la microvasculatura se conoce como laberntica; adems, a lo largo de ambos bordes de la zona placentaria ocurre ruptura de vasos sanguneos maternos, acumulndose sangre en la periferia de la placenta, lo que se denomina borde hemocorial o hematoma marginal. El peso de la placenta flucta entre 10.75 0.47 y 20.25 0.47 g en los das 32 y 58 despus del apareamiento respectivamente. Segn Evans y Sack (1973) el perodo fetal en gatos comienza entre 28 y 30 das despus del coito. El desarrollo del feto ha sido evaluado a travs de la medicin del largo occipitococcgeo y el peso de fetos en varias etapas de la gestacin: da 33, largo 3.7 4.9 cm y peso de 3.8 6.8 g; da 42, largo 7.4 8.2 cm y peso 30.8 66.5 g; da 51, largo 9.2 10.4 cm y peso 78.3 86.5 g y finalmente en el da del parto, largo 10 15 cm y peso 85 105 g.. En general se acepta que la duracin de la gestacin en la gata vara entre 64 y 67 das, describindose valores promedio de 64.2 0.4 (Schmidt y col., 1983), 65 4 (Scott, 1970), 66 1 (Tsutsui y Stabenfeldt, 1993), 65.8 2.5 (Munday y Davidson, 1993), 63 0.7 (Verstegen y col., 1993) y 66.9 2.9 (Root y col., 1995). No se observ correlacin significativa entre la duracin de la gestacin y el tamao de camada (Root y col., 1995). El tamao de la camada vara entre 1 y 5, con promedios de 3,3 y 3.5 gatitos por camada, sin que estos ltimos autores observaran correlacin significativa entre el tamao de camada y el peso de la madre al momento de la cpula, as como tampoco con la edad de la madre al momento de la cpula. ENDOCRINOLOGIA DE LA GESTACION

Verstegen (1998) informa que la gestacin de la gata, as como en otras especies, involucrara factores luteotrficos o antiluteolticos especficos de origen fetal, placentario y/o hipofisiario que actan como una seal para la mantencin del cuerpo lteo impidiendo su regresin. Adems, destaca que probablemente esta seal provenga del feto y/o de la placenta, ya que en gatas histerectomizadas durante la etapa temprana de la gestacin (antes del da 2025) la vida media del cuerpo lteo fue de 25 a 35 das, lo que es similar a lo observado en hembras pseudogestantes. En la gata gestante, la secrecin de prolactina aumenta alrededor del da 25 a 30 despus de la primera cpula, plantendose que esta hormona ejercera un efecto luteotrfico esencial durante la segunda mitad de la gestacin. El rol luteotrfico de la prolactina en carnvoros, ha sido estudiado indirectamente evaluando el descenso de la P4 plasmtica y la capacidad de interrumpir la gestacin con drogas dopaminrgicas o antiprolactnicas como la bromocriptina y la cabergolina. La gata comparte con otros carnvoros, tales como hurn y visn, la peculiaridad de la ovulacin inducida a travs de la cpula, esta ltima estimula un reflejo de liberacin de hormona luteinizante (LH) por parte de la hipfisis y mediado por el hipotlamo medio basal. Concannon y col. (1980) demostraron que la cantidad de LH presente en el suero de gatas cubiertas se correlaciona positivamente con el nmero de cpulas que estas reciben. Niveles mximos de LH (121 24 ng/ml) se presentaron 1 a 4 horas despus del inicio de una serie de 8 a 12 cpulas en un perodo de 4 horas, mantenindose hasta por 8 horas; 24 horas ms tarde se observ un descenso a valores basales (1.8 0.1 ng/ml). Durante la gestacin temprana se ha observado un aumento significativo de los receptores luteales a LH. Esto estara asociado al aumento de P4 plasmtica durante las primeras semanas de gestacin. Si bien existe escasa informacin respecto a los patrones de secrecin de LH en la gestacin felina, se ha descrito que en la primera mitad, la LH se mantiene en niveles inferiores a 10 ng/ ml, mostrando un mayor grado de variabilidad y aumentos espordicos durante el perodo prximo al parto (Schmidt y col., 1983). El rol de la LH durante la segunda mitad de la gestacin en la gata no ha sido definido, sin embargo cabe considerar que en otros carnvoros este rol es variable, por ejemplo en mustlidos, la LH es necesaria para la activacin del cuerpo lteo durante el perodo de diapausa embrionaria y mantencin del mismo durante toda la gestacin; sin embargo, en caninos pareciera no tener un efecto luteotrfico directo (Onclin y col., 2000). Despus de la ovulacin, bajo la influencia de LH, las clulas de la granulosa se luteinizan y comienzan a secretar P4. Se describe que 48 a 72 horas despus de la primera monta los niveles plasmticos de P4 son superiores a 1.0 ng/ml.

La concentracin de P4 circulante comienza a aumentar a partir de las 96 a 216 horas despus de la primera cpula, describindose un alza significativa entre las 100 y 124 horas, con valores de alrededor de 15 ng/ml. Este aumento en la actividad luteal coincide con un incremento significativo de la cantidad de tejido luteal y de la cantidad de receptores luteales a LH, entre las 100 y 124 horas despus de la primera cpula (Swanson y col., 1995). A continuacin la concentracin de P4 contina en ascenso, observndose valores mximos (> 25 ng/ml) entre 13 y 21 das despus de la primera cpula, luego se describe un plateau entre los das 28 y 33, seguido de un lento descenso hasta el fin de la gestacin; 4.2 1 ng/ml el da 62 y 0.2 0.34 ng/ml el da 65 (Verstegen y col., 1993). Durante las primeras 124 horas despus de la primera cpula las concentraciones de 17 estradiol se mantienen en valores similares a la fase folicular (>20 pg/ml), lo que asociado al lento incremento de P4 en las primeras horas despus de la ovulacin, podra explicar el lento desplazamiento de los embriones dentro del oviducto (Swanson y col., 1995). Luego, en la primera parte de la fase luteal, las concentraciones de 17 estradiol retornan a niveles basales (< 20 pg/ml) y se elevan nuevamente durante la ltima semana de gestacin (Wildt y col., 1981). No existen antecedentes respecto al origen del 17 estradiol de la gestacin tarda de la gata, existiendo la posibilidad de que la fuente sea placentaria y/o fetal as como en otras especies (Heap y Flint, 1984). La concentracin plasmtica de relaxina aumenta a partir de 20 a 30 das despus de la cpula exclusivamente en hembras gestantes, lo que le sugiere un rol como factor luteotrfico. La relaxina acta estimulando la produccin de enzimas colagenolticas (Martiel y col., 1993), ablandando el tejido conectivo que circunda a la pelvis, lo cual facilita la mxima expansin del canal del parto durante el nacimiento de los cachorros. Segn Verstegen (1998) la relaxina es la nica hormona especfica de la gestacin en gatas y perras. La relaxina es esencialmente secretada por la placenta en carnvoros y en otras especies se describe la produccin ovrica y endometrial destacan que la relaxina acta sinrgicamente con P4 relajando la musculatura uterina durante la gestacin. La produccin de PGF2 por la unidad fetoplacentaria y el endometrio comienza cerca del da 30 de gestacin y alcanza un plateau cerca del da 45, con un fuerte incremento antes del parto y una abrupta declinacin pocos das despus de ste. (Tsutsui, comunicacin personal). SINTESIS DE P4 EN LA GESTACION En mamferos, la progesterona (P4) es necesaria para el establecimiento y mantencin de un ambiente uterino adecuado para el desarrollo embrionario y

fetal. Durante la gestacin las fuentes de progesterona as como la importancia de los rganos secretores de esta hormona varan entre las especies animales. En la mayora de los mamferos el principal sitio de produccin de P 4 es el cuerpo lteo, no obstante tambin se describe la produccin placentaria y fetal. Recientemente se ha planteado que el tejido intersticial del ovario podra ser una fuente de hormonas esteroidales (Clarke y Brook, 2001). La sntesis de P4 implica una serie de vas metablicas, conocidas como vas esteroidognicas, en las cuales protenas tales como protena aguda de esteroidognesis (StAR, steroidogenic acute protein), citocromo P450 scc (cytochrome P450 side chain cleavage) y la enzima 3 - hidroxiesteroide 4 5 dehidrogenasa isomerasa (3 HSD, 3 - hydroxysteroid 4 5 dehydrogenase isomerase), desempean funciones esenciales (Robel, 1993; Granner, 1997). En clulas luteales, el colesterol almacenado en vacuolas citoplasmticas es movilizado hacia las mitocondrias por accin de StAR, all el citocromo P450 scc cataliza el corte de la cadena lateral de la molcula de colesterol, mediante hidroxilacin, y de esta manera se sintetiza 5 pregnenolona ( 5 P), la cual mediante oxidacin e isomerizacin, catalizada por 3 HSD, conduce a la sntesis de P4. La placenta es un rgano transitorio, caracterstico de los mamferos euterios que posee funcin endocrina, sintetizando tanto hormonas esteroidales como proteicas. La produccin de P4 placentaria se ha estudiado principalmente en humanos y bovinos, destacndose que la placenta contienen todas las enzimas requeridas para la conversin de derivados maternos del colesterol. En humanos la P4 se secreta por el citotrofoblasto y por el sinciciotroblstico, mientras que en bovinos lo es por clulas corinicas gigantes binucleadas (Izhar y col., 1992). Existen varios estudios que destacan la ausencia de produccin de P4 en la placenta de carnvoros. Estos trabajos se han basado en tcnicas de inmunolocalizacin de enzimas esteroidognicas en placenta canina (Canis familiaris) y de oso negro (Ursus thibetanus japonicus); adems no se reconocieron actividad de 3 HSD ni tampoco presencia de transcritos de 3 HSD en placenta de visn (Mustela vison). En la gata existe slo un trabajo describiendo la actividad esteroidognica placentaria. Estos autores evaluaron la actividad de 3 HSD in vitro midiendo la tasa de formacin de P4 a partir de 5 P marcada con un istopo radiactivo (3H), y observaron que la actividad enzimtica aumentaba significativamente en las ltimas 2 semanas de gestacin y que esta se distribua en forma proporcional entre las fracciones microsomal y mitocondrial del tejido placentario. FUNCION DE P4 EN LA GESTACION

Las principales funciones de la P4 durante el perodo gestacional son: supresin de la actividad contrctil del miometrio, estimulacin de la actividad secretora del endometrio y en general participar en la mantencin de un conceptus viable dentro del tero. Tambin la P4 acta sinrgicamente con estrgenos promoviendo el crecimiento mamario . Adems la P4 posee actividad inmunosupresora en algunas especies, inhibiendo la inmunidad de tipo celular; por lo tanto el aumento de la concentracin local de P4 contribuira a la tolerancia inmunolgica del tero frente a la invasin del tejido trofoblstico embrionario. En humanos, la P4 tambin participa en la regulacin de citoquinas dentro del endometrio durante el perodo implantacional (Kelly y col., 2001). Campos (1995) propone que niveles adecuados de progesterona aseguran un endometrio progestativo que secreta protenas que sirven como factores de crecimiento, protenas de transporte, protenas reguladoras y enzimas, adems de servir como transportadoras de nutrientes hacia el lumen uterino, esenciales para sustentar el desarrollo del producto de gestacin. Durante la gestacin temprana, las secreciones uterinas proveen un medio crtico para el crecimiento del embrin, desarrollo embrionario e implantacin. Existen estudios en varias especies que describen las caractersticas de estas secreciones y particularmente la composicin proteica de las mismas. Guillimot y col. (1993) indican que una abundante secrecin endometrial acompaa o precede el aumento de tamao del blastocisto y sealan la presencia de uteroglobina (12 kDa) en conejas y uteroferrina (31 kDa) en cerdas y yeguas. Estas protenas seran absorbidas por el embrin, sin embargo, su rol en el proceso de implantacin no est determinado. En carnvoros existe escasa informacin al respecto; sin embargo hay quienes demostraron la sntesis de novo y secrecin de varias protenas en el tero antes del ingreso de los embriones, durante el perodo de migracin embrionaria y luego de la implantacin en perras. Cabe mencionar que en caninos tambin se ha reconocido la produccin de protenas por el embrin previo a la implantacin, sin embargo, con la evidencia existente en la actualidad, se postula que estas no tendran un rol en el reconocimiento materno de la gestacin, a diferencia de lo descrito en varias especies de rumiantes (Roberts y col., 1996; Demmers y col., 2001). Si bien el estmulo de P4 para la sntesis de protenas se ha reconocido durante el perodo pre-implantacional en el endometrio de la gata (Boomsma y Verhage, 1987), cabe sealar que tambin se ha reportado la presencia de una protena de alto peso molecular (33 kDa) que es estrgeno dependiente (cat uterine secretory protein estrogen dependent, CUPED) y cuyo rol especfico en la gestacin se desconoce. Por otra parte, se observaron que estradiol y P4 son los reguladores primarios de la expresin de receptores a estas hormonas en las clulas uterinas de la gata, destacando que el proceso de implantacin no altera

la distribucin de los receptores de estrgeno ni la de los receptores de P 4 en el tero grvido. Recientemente se ha descrito que la suplementacin con caroteno incrementara la concentracin de protenas uterinas en la gata, lo cual permitira mejorar las condiciones para la sobrevida y desarrollo de los embriones (Chew y col., 2001). IMPORTANCIA DE P4 EN LA MANTENCION DE LA GESTACION TARDIA El tema de la importancia de la fuente de P4 para la mantencin de la gestacin sobre el da 45 en la gata es controvertido. Varios autores plantean que en la gata los ovarios (cuerpos lteos) no son necesarios para la mantencin de la gestacin a partir del da 45 a 50. Courrier y Gros (1935, 1936) demostraron que la ovariectoma en la gata despus del da 45 no interrumpe la gestacin, igualmente Snchez y Silva (datos no publicados) observaron que la ovariectoma sobre el da 50 de gestacin no alter el curso de la misma. Estas observaciones pueden ser explicadas por los resultados obtenidos respecto a la produccin placentaria de P4. En oposicin a las observaciones anteriores, proponen que la principal fuente de P4 durante la segunda mitad de la gestacin es el cuerpo lteo, mientras que la produccin desde la placenta sera de menor importancia y no sera suficiente como para mantener la gestacin. Adems, proponen que el cuerpo lteo felino permanece funcional a travs de toda la gestacin y slo regresara previo al parto. Esto sugiere que la produccin de P4 placentaria no es significativa; sin embargo, cabe considerar que los valores de P4 evaluados corrientemente no discriminan respecto al origen de la P4, existiendo la posibilidad de que el descenso de P4 plasmtica asociado a una menor actividad luteal, de alguna manera sea equilibrado por el aumento de la produccin placentaria o bien que la produccin placentaria de P 4 se restrinja slo a un efecto local (accin paracrina). Cabe entonces plantear que la disminucin de la actividad luteal y el aumento de la actividad placentaria seran armnicos a fin de mantener niveles adecuados de P4 para mantener la gestacin hasta el final. En la figura 1 se muestra un esquema que resume los principales eventos biolgicos de la gestacin en la gata.

FIGURA 1. Principales eventos biolgicos de la gestacin en la gata (Felis catus). Main biological events of the gestation in the domestic cat (Felis catus).
MORTALIDAD EMBRIONARIA RELACIONADA CON FALLAS O CARENCIAS DE LA RECEPTIVIDAD UTERINA La mortalidad embrionaria constituye un problema reproductivo que produce grandes prdidas econmicas a los productores, debido en parte a que es multicausal y a que en la mayora de ocasiones se presenta sin alterar la duracin del ciclo estral (33). La mortalidad embrionaria relacionada con fallas en el establecimiento del ambiente embriotrfico puede resultar si hay defectos intrnsecos en el embrin, en el balance hormonal materno o asincrona entre la madre y el embrin, es decir que la seal de reconocimiento materno no se de en el momento indicado (6). La mayor parte de los embriones mueren entre los das 8 y 17 de la gestacin (21, 34), por lo que no se presenta en forma aparente ningn disturbio en la duracin del ciclo estral (13). El embrin
Gonella - Ambiente receptivo uterino REVISTA MVZ CRDOBA Volumen 15(1), Enero - Abril 2010 1982

puede morir al producir pocas cantidades de INFt y no lograr inhibir la lutelisis, por fallas genmicas o por tener algn grado de degeneracin al momento en que debe darse la seal de reconocimiento (6, 34). Si la falla en el ambiente embriotrfico tiene causas maternas, puede deberse a desequilibrios hormonales. Algunas vacas repetidoras de calores tienen menores niveles de P4, por lo cual se han implementado tcnicas como el suministro de P4 exgena o la induccin de cuerpo lteo accesorio para aumentar la tasa de preez (34). Esto fue demostrado al realizar biopsias endometriales a vacas con

ciclos normales y a repetidoras de celos y relacionarlo con los perfiles hormonales. Se demostr que hubo cambios histolgicos anormales en el tero de las vacas repetidoras con menores niveles de P4 durante su fase luteal. Por ejemplo, no se establece remodelacin del tero y hay disminucin marcada de las secreciones glandulares endometriales, lo cual dificultara los procesos de migracin, desarrollo e implantacin del conceptus (35). Por otro lado, tambin pueden presentarse carencias en el ambiente embriotrfico cuando no existe una correcta sincrona entre la madre y el conceptus, disminuyendo la tasa de preez (34). Por tales razones, se considera que la relacin entre la P4 y el INFt, que se establece en la preez temprana, es interdependiente en cuanto a sus funciones biolgicas porque para que se lleve a cabo exitosamente el proceso de gestacin, se requiere que tanto la P4 como el INFt se encuentren en momentos, tiempos y cantidades adecuadas, de manera que se cumplan todos los eventos fisiolgicos necesarios para que se establezca el ambiente embriotrfico (34). MORTALIDAD EMBRIONARIA Definicin: Muerte del embrin, que va desde el da de la fecundacin hasta el da 45 de gestacin Clasificacin Muerte embrionaria temprana Muerte embrionaria tarda MORTALIDAD EMBRIONARIA TEMPRANA Es la muerte del embrin antes del Reconocimiento Materno de la Gestacin (RMG), es decir, antes de los das 16 a 19 de gestacin. El embrin en el da 15 a 17 despus de la fecundacin debe establecer los mecanismos que evitan la regresin del cuerpo lteo, lo cual consigue mediante la secrecin de interfern tau, que bloquea la cascada de eventos luteolticos (Ana del Cura,2006) Las muertes entre los das 8 y 16 despus de la fecundacin representan hasta un 70 u 80% del total de prdidas de gestaciones y tericamente no tienen ningn efecto sobre la duracin del ciclo estral (Sreenan)

Puntos crticos: 4 da trnsito mrula trompa uterina

8 da apertura de zona pelcida con formacin del MUERTE EMBRIONARIA TARDIA

blastocito

La muerte embrionaria que tiene lugar despus del RMG pero antes de que la organognesis est ya completa, lo que ocurre aproximadamente el da 45 sta representa un 10% adicional de prdida de gestaciones Puntos crticos: Das 15 a 18: rpido crecimiento del blastocito Das 28 al 35: membranas extraembrionarias fijan pared uterina

Aspectos relacionados con el reconocimiento materno de la preez

El RMP se define como el periodo crtico en el cual el conceptus da seales de su presencia a la madre (Spencer et al., 2004a). Este reconocimiento requiere que el conceptus se transforme de esfrico hacia una forma elongada para generar una mayor superficie de contacto con el epitelio uterino, con la finalidad de desencadenar la produccin del factor antiluteoltico IFN-; produccin regida entre otros por el estado de desarrollo embrionario (Binelli et al., 2001). Este interfern es producido en las clulas mononucleares del trofoblasto embrionario entre los das 10 y 25, con produccin mxima alrededor de los das 14 y 19 de gestacin, tiempo en el cual el embrin se encuentra en estado de precontacto (Fleming et al., 2001; Dailey et al., 2002). La sntesis y secrecin de IFN- se relaciona con la presencia en el fluido luminal uterino del FC IGF- I y IGF-II. La presencia de un solo FC no afectara la presencia de interfern, Captulo 1 55 sin embargo ambos factores podran aumentar significativamente su secrecin, lo que podra indicar un papel importante para los FC similares a la insulina en el RMP. El IFN- comienza a establecer efecto antiluteoltico a nivel de la regin intercaruncular, en donde las clulas responden ms a concentraciones de Oxitocina (OT) (Roberts, 1999). La expresin gnica de IFN- se ha detectado en la regin de contacto de la implantacin celular, entre las clulas mononucleadas del trofoblasto embrionario y las clulas epitelio del lumen endometrial (Spencer et al., 2007). De acuerdo a la clasificacin de la Sociedad Internacional de Interferones, stos son glucoprotenas sintetizadas durante la respuesta inmunitaria as como bajo influencia de mltiples estmulos antignicos o mitgenos; igualmente poseen propiedades antivricas y antiproliferativas (Rodrguez, 2001). El IFN- se clasifica como una protena cida con peso molecular de 19 kDa y cuenta con 172 aminocidos. Es el primer interfern clasificado en la familia tipo I cuyas propiedades no solamente son antivricas y es expresado por una familia de genes que est restringida a especies de rumiantes como vacas, ovejas y cabras (Bilby et al., 2004; Roberts, 2007). Durante la fase ltea la P4 tiene una doble funcin en la regulacin de la expresin de receptores para la OT en el tero, induciendo la presencia de altos niveles de receptores para P4 en el endometrio (modulacin en alta), con lo cual se inhibe la expresin de los receptores para estrgenos (RE) y para oxitocina (ROT), fenmeno que se conoce como el "bloqueo de la P4" (Roberts, 1999). No obstante, la misma P4 comienza a ejercer gradualmente una regulacin para la disminucin de la expresin de sus propios

receptores (modulacin baja) en el epitelio luminal, perdiendo as su habilidad para suprimir la expresin endometrial de los RE y ROT, por lo cual en el caso de existir preez el embrin debe extender el "bloqueo de la P4", previniendo as la produccin pulstil de PGF2 mediante la secrecin de IFN- (factor luteotrpico) (Klisch et al., 2009). Este efecto antiluteoltico del IFN-, resulta en el mantenimiento estructural y funcional del CL, por lo tanto se asegura la secrecin de P4 que es esencial para mantener un ambiente uterino que soporte los acontecimientos crticos para el desarrollo exitoso del conceptus (Bilby et al., 2004). 56 Efectos de la aplicacin de eCG (Da 5 u 8) sobre el desarrollo del cuerpo lteo, nivel de
progesterona y tasa de preez en hembras receptoras de embriones bovinos

1.6.1. Seal luteotrpica

La formacin del CL activa la sntesis y secrecin de P4 por parte de esta glndula endocrina transitoria, con ello se incrementan sus receptores en el tero hacia los primeros das del diestro (regulacin en alta), lo que desencadena el bloqueo de la expresin del gen para RE, as mismo se previene que los estrgenos incrementen la expresin de genes para ROT (Rodrguez, 2001; Olivera, 2006). Hacia el final de la mitad de la fase luteal del CE los receptores de P4 en el tero comienzan a disminuir (regulacin en baja), desencadenando un incremento en la expresin de RE y ROT, con lo cual se desencadenan los factores necesarios para causar luteolisis, evidencindose un nuevo ciclo estral en el caso de no existir preez (Olivera, 2006). El IFN- producido por las clulas mononucleares del trofoblasto embrionario, acta de forma parcrina ligndose a sus receptores en las clulas endometriales, lo que desencadena el bloqueo de la expresin de ARNm que codifica para la expresin del gen de receptores alfa de E2 (RE) y la expresin del gen para ROT, impidiendo de esta forma el desencadenamiento del mecanismo endometrial luteoltico. Sin embargo el interfern no inhibe la produccin basal de la PGF2 (Igwebuike, 2006; Green et al., 2010). Algunos autores sugieren que al ligarse el IFN- a su receptor de membrana, induce la va de transcripcin citoplasmtica (StAR), protena que fosforilada forma un complejo que migra al ncleo, all se une a la regin reguladora de los genes inductores del interfern que podran estar bloqueando uno o ms pasos de la va de sntesis de la prostaglandina (Spicer et al., 2011). Igualmente se ha propuesto que el IFN- tambin ejerce un efecto antiluteoltico incrementando los niveles de cido linolico, el cual inhibe por competencia de cox 2 al cido araquidnico, con lo cual la sntesis de PGF2 se ve afectada (Rodrguez, 2001). En el mecanismo antiluteoltico se sugiere que participan adems del IFN- la prostaglandina E2 la cual ejercera proteccin del CL, el factor activador de las plaquetas (FAP), este ltimo posiblemente en sinergismo con el interfern y quizs otras protenas de origen trofoblstico entre otros (Campanile et al., 2007). Captulo 1 57 Bsicamente el RMP est regulado por la capacidad del endometrio en responder a las seales generadas por el embrin, lo que desencadena el bloqueo en la produccin de PGF2. Este bloqueo depende bsicamente de la elongacin del conceptus el cual debe cubrir una adecuada cantidad de puntos de cuerno uterino para comenzar a generar la sntesis de IFN- (Campanile et al., 2007). Teniendo en cuenta lo anterior se ha evidenciado que el conceptus bovino vara de tamao que va de 15 a 250 mm. para el da 17, con lo cual se resalta la importancia del desarrollo embrionario que es regulado en gran parte por interacciones guiadas por la P4 (Binelli et al., 2001).

1.6.2. Seal luteoltica

La vaca ovula espontneamente, lo cual es dependiente del ciclo estral que es repetitivo de acuerdo a su duracin hasta el establecimiento de la preez (Hafez, 2000). Por tal razn se podra decir que el ciclo estral es dependiente de la accin del endometrio (epitelio luminal y glandular superficial), si se tiene en cuenta que este es la fuente del factor antiluteal (PGF2) cuando la vaca no se encuentra preada o

cuando no se reconoce su preez (Barnea et al., 2000). Durante el diestro temprano, la sntesis de P4 producida por el CL recin formado comienza a disponer el tero para el establecimiento de la preez, pero igualmente activa mecanismos determinantes para la produccin endometrial del factor luteoltico (Rodrguez, 2001). Hacia los das 10 y 15 del ciclo estral, cuando comienza a disminuir el nmero de receptores de P4 en el tero (modulacin baja), comienzan a aumentar los RE endometriales los cuales inducen la expresin de ROT (Johnson et al., 2000). Los E2 provienen de los folculos en crecimiento y estimulan el aumento de sus receptores alfa. La OT proviene de las clulas luteales grandes; igualmente es producida en el hipotlamo y almacenada en la neurohipfisis (Spencer et al., 2004a). La alta concentracin de OX igualmente comienza a provocar la prdida de sensibilidad del endometrio, por lo cual luego de un lapso de tiempo se deja de secretar PGF2. El intervalo entre pulsos de PGF2 est determinado por la prdida de la sensibilidad del endometrio a la OX, y por el tiempo en que tarda en recuperarla. As, el mecanismo de 58 Efectos de la aplicacin de eCG (Da 5 u 8) sobre el desarrollo del cuerpo lteo, nivel de
progesterona y tasa de preez en hembras receptoras de embriones bovinos

retroalimentacin positiva se interrumpe y vuelve a establecerse hasta que pasan 6 horas, tiempo suficiente para que el endometrio recupere la sensibilidad a la OX; por tal motivo los pulsos de PGF2 se presentan con un intervalo de 6 a 8 horas (Thatcher et al., 2002). En la clula endometrial la unin de la OT con su receptor estimula el clivaje de cido araquidnico a partir de la fosfolipasa C (PLC), la cual activa la fosfolipasa A2 (PLA2) (localizadas en la membrana plasmtica) (Roberts et al., 1999). Intervienen para este fin mensajeros como el inositol trifosfato (IP3) y el diacylglicerol (DAG) (sistema de segundo mensajero fosfatidil inositol diacilglicerol protena kinasa C) (Rodrguez, 2001). El IP3 estimula la liberacin de Ca ++ de las reservas intracelulares (Thatcher et al., 2002). El DAG activa la protena Kinasa C (PKC) la cual estimula a la PLA2 en presencia de Ca ++ para que posteriormente se induzca la liberacin de cido araquidnico de los depsitos fosfolipidicos en el epitelio endometrial (la P4 en etapas tempranas de CE induce incremento en las reservas de fosfolpidos (Thatcher et al., 2002). La transformacin del cido araquidnico en PGF2, es regulada por la isoforma ciclooxigenaxa 2 (COX 2) de la prostaglandina sintetasa, enzima identificada en el epitelio luminal de vacas preadas, la cual limita la sntesis de las prostaglandinas (Hassan et al., 2007). La actividad de esta enzima se incrementa durante el diestro temprano por accin de la P4 la cual es inducida por el estradiol, factores de crecimiento e interleuquinas (Rodrguez, 2001; Pea et al., 2007). La concentracin de COX 2 se reduce cuando el IFN- comienza a ser secretado por parte de las clulas del trofoblasto embrionario (Thatcher et al., 2002). La ciclooxigenasa (Prostaglandina G/H sintetasa) cataliza el paso limitante en la biosntesis de prostaglandinas, que es la conversin del cido araquidnico a prostaglandina H2 (PGH2), la cual es convertida rpidamente a PGF2 gracias a la prostaglandina F sintetasa entre otras (Niswender et al., 2000). Al final de cada ciclo estral hacia el da 16 - 17 el CL sufre lutelisis (inhibicin de la esteroidognesis - induccin de la apoptosis) por la accin de la PGF2, la cual es producida en el epitelio endometrial y en menor proporcin por el CL, esta es vertida a la Captulo 1 59 vena uterina, de donde por difusin pasa a la arteria ovrica y por contracorriente alcanza al CL (Esto permite a la PGF2 viajar a la arteria ovrica sin entrar a la circulacin pulmonar, en donde podra ser enzimticamente inactivada en los pulmones), en donde se une a receptores ubicados en las clulas luteales (Niswender et al., 2000). All por eventos intracelulares se presenta la muerte de las clulas por apoptosis mediante el desencadenamiento de cascadas de sealizacin que involucran hormonas como la prolactina; citoquinas como el Factor de Necrosis

Tumoral alpha (TNF), el Interfern gamma (IFN) y el Fas ligando (FasL); especies reactivas de oxgeno (ROS), endotelina-1(E1) y la protena HSP70 de choque trmico, entre otros (Nakamura y Sakamoto, 2001; Roberts, 2007). La endotelina -1 se ha identificado como posible mediadora de los efectos de la PGF2 en el flujo sanguneo luteal. La PGF2 estimula a las clulas endoteliales del CL a producir endotelina 1 in vitro e in vivo. Esta endotelina posee actividad vasoconstrictora e inhibe la actividad esteroidognica de las clulas luteales (Niswender et al., 2000). El proceso apoptotico parece estar mediado por el ARNm para FAS y FalsL, a travs de la activacin de la caspasa-3 (Pru et al., 2002). El receptor de FasL es un dimero proteico con un solo segmento transmembranal que en su porcin intracitoplasmtica tiene un dominio de unin de muerte celular, al cual se une la protena FADD, que a la vez tiene un dominio efector de muerte, que es el sitio de unin de la procaspasa 8 para formar el complejo sealizador para la induccin de muerte. Las procaspasas 8 reclutadas, se clivan para activarse en caspasa 8 (Rueda et al., 2000) La luteolisis ha sido planteada en dos pasos: Luteolisis funcional, que consiste en la prdida de la capacidad de sintetizar P4, y luteolisis estructural, que es la involucin del CL acompaada de la prdida en la integridad de sus clulas (Pretheeban et al., 2010). Se sugiere que para que se produzca lutelisis, el CL debe ser expuesto aproximadamente de 5 a 8 pulsos de PGF2 con intervalos de 6 a 8 horas (Mann and Lamming 2006a). Esta pulsatilidad ocurre en respuesta a la unin de la OT con su receptor en las clulas del endometrio uterino (Rodrguez, 2001). Igualmente se plantea que el CL debe alcanzar cierto grado de madurez caracterizado por una amplia vascularizacin y por la produccin de P4 que lleva a niveles por encima de 1 ng/ml., esto ocurre aproximadamente hacia el da 5 del ciclo estral (Revisado por Olivera et al., 2007).

Estrategias antiluteoliticas. La
naturaleza crtica alrededor del periodo de reconocimiento, aposicin y adhesin del embrin al endomtrio uterino durante la implantacin, determina la necesidad de un estricto sincronismo entre el embrin transplantado y su receptora, enfatizando la importancia tanto del medio uterino como de las seales del conceptus que dan lugar al RMP (6), seales que deben ser emitidas en el momento y concentracin precisa, de tal manera que se garantice el mantenimiento de la estructura y funcionalidad del CL, que genere una continua produccin de P4 para el mantenimiento un ambiente uterino que apoye el normal desarrollo del conceptus (31). La hembra debe ajustar sus propiedades fisiolgicas dependiendo de si est o no preada, si lo est debe generarse un bloqueo efectivo antiluteoltico el cual depende de la habilidad del conceptus en

enviar seales para que el endomtrio uterino responda a ese bloqueo en la produccin de PGF2(27). La comunicacin entre el conceptus y el tero, no siempre tiene xito, lo que desencadena grandes prdidas embrionarias (6). Por eso mismo se plantean estrategias que buscan minimizar el efecto luteoltico, el cual desencadena la prdida temprana del embrin, acontecimiento ms fcilmente evidenciado en los programas de transplante embrionario, ya que con estos se asegura la presencia del embrin vivo y de buena calidad desde el da 6 a 8 momentos en el cual este es transplantado (32). La relacin entre la tasa de preez y la concentracin plasmtica de P4 de acuerdo al tamao del CL en receptoras de embriones
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bovinos, ha sido objeto de controversia en varios estudios realizados. Algunos investigadores han verificado la correlacin positiva entre estas variables, encontrando que a mayor rea del CL mayor es la concentracin de P4 plasmtica, y consecuentemente mayor es la tasa de preez (27, 32-35). Con estos resultados se podra evidenciar que los incrementos en la concentracin de P4 durante el periodo crtico estimula la secrecin de los agentes antiluteolticos con lo cual se hace eficiente el RMP (34). Contrariamente autores como Spell et al (36), no han encontrado correlacin entre las variables tamao del CL, concentracin de P4 plasmtica y porcentaje de preez en hembras receptoras con embrin transplantado. En varios estudios realizados el aumento en concentraciones plasmticas de P4 durante el diestro ha sido correlacionado con la capacidad del embrin en secretar IFN-, provocando as aumento en las tasas de preez (27, 37), pero en otros reportes no se ha observado esta relacin y efecto (38). Kerbler et al (39), encontraron una correlacin positiva entre la concentracin de P4 plasmtica y la sntesis de IFN- producido por embriones de 18 das de edad, en donde se hall la concentracin de interfern utilizando la prueba antiviral con virus de estomattis vesicular. Segn estos resultados se podra sugerir que a mayor concentracin de P4 plasmtica en hembras preadas mejor ser el ambiente uterino para el conceptus en vas de desarrollo (40). Esto se entiende si se tiene en cuenta que la P4

es la precursora de los diferentes componentes que conforman este ambiente. Cualquier variacin en la concentracin de P4 es determinante en la modulacin de la expresin y secrecin de factores de crecimiento, citoquinas y protenas, que condicionan el medio uterino para los procesos de receptividad endometrial y de viabilidad embrionaria (39). De acuerdo con lo anterior se podra sugerir que al brindar fuentes directas o indirectas de P4 a hembras durante los primeros das de preez el porcentaje de prdidas embrionarias disminuira, ya que se mejorara el ambiente uterino en donde el conceptus tendr un desarrollo adecuado, evidenciando mejor sntesis y secrecin de IFN-, pues esta secrecin est influenciada por el estado de desarrollo embrionario (39). Con la finalidad de aumentar la tasa de preez se han utilizado terapias de apoyo hormonal en hembras receptoras de embriones bovinos, utilizado Gonadotropina Corionica Equina (eCG) en protocolos de transplante de embriones a tiempo fijo (TETF) (32). La eCG es una hormona con promedio de vida de 3 das, producida por los clices endometriales en la yegua preada entre los das 40 a 130 (41). Esta hormona se vincula a los receptores foliculares de FSH y de LH, y a los receptores de LH del CL, creando de esta forma condiciones de crecimiento folicular, ovulacin y luteinizacin (41, 42). La aplicacin de eCG en el momento esperado de una nueva onda de crecimiento folicular, ha demostrado eficiencia en cuanto a superovulacin y/o desarrollo de un folculo dominante de mayor dimetro, determinando de esta forma un mayor nmero de cuerpos lteos o un CL de buen tamao (32). Esto va acompaado de mayores concentraciones plasmticas de P4 y mejores tasas de aprovechamiento, concepcin y de preez frente a tratamientos sin aplicacin de esta hormona (32, 43, 44). Investigaciones realizadas por Melanie et al (45), no reportaron diferencia entre la concentracin plasmtica de P4 y la cantidad de cuerpos lteos presentes en hembras preadas, por el contrario encontraron mayor perdida de preeces en las hembras con doble ovulacin, lo que sugiere que demasiada P4 plasmtica podra estar alterando el balance hormonal uterino perjudicando el ambiente para el embrin en desarrollo. Nasser et al (46), han verificado que con la aplicacin de eCG el da 8 de sincronizacin,

determina apenas un 2% de doble ovulacin en receptoras de embriones, pero evidenciaron que con la aplicacin de esta hormona se consiguen cuerpos lteos nicos de mayor tamao, incrementando as la tasa de preez. Igualmente Quezada y Ortiz (47),
Tovo - Desarrollo embrionario y estrategias antiluteolticas 1247 REVISTA MVZ CRDOBA Volumen 13 (1), Enero - Abril 2008

encontraron que con la aplicacin de la eCG el da 8 se mejora la tasa de aprovechamiento, sin embargo no encontraron que esta hormona mejore el rea del CL. En un estudio realizado recientemente por Mamani et al (48) de acuerdo con la dosificacin de la eCG, no se reporta diferencia de la tasa de aprovechamiento y tasa de preez con la utilizacin de diferentes dosis de eCG (200, 300 y 400 UI) en hembras receptoras cruzadas Bos Indicus X Bos Taurus. Igualmente se han realizado estudios utilizando eCG en donde se ha observado el incremento en las tasas de preez en programas de inseminacin artificial a tiempo fijo (IATF) en hembras en estado de anestro (41, 49). Con la finalidad de incrementar la P4 plasmtica en bfalas y vacas, se han utilizado tratamientos con GnRH, LH, hCG y dispositivos de liberacin lenta de P4 aplicados el da 7 del ciclo estral (30, 50). Igualmente la hCG se ha aplicado en tratamientos de sincronizacin el da 6, obtenindose tasas de preez ms altas frente a grupos sin la aplicacin de esta hormona. Estos resultados igualmente sugieren que la hCG dependiendo del da de su aplicacin induce la ovulacin y la formacin de cuerpos lteos accesorios, los cuales incrementan la concentracin de P4 plasmtica y la tasa de preez en hembras receptoras de embriones bovinos (41).

1. Desarrollo embrionario temprano La zona pelcida es una capsula similar a la gelatina que rodea al ovocito y al embrin temprano, estos tienen receptores de esperma que son inactivados despus de la fecundacin y mantiene las clulas de los embriones precompactados juntos, y protegen estas clulas jvenes del sistema inmune y los patgenos. Si la zona pelcida es retirada de embriones pre-compactados, las clulas llegan a separarse del embrin y degeneran. Cuando el bastocele crece muy grande, el embrin se expande (8 a 9 das despus del estro) y la zona pelcida se adelgaza, este estado se denomina Blastocisto expandido. Despus, un da ms, la expansin es tan grande que la zona pelcida se rompe y el embrin sale afuera (prolapso), quizs ayudado por enzimas. Los embriones prolapsados, da 11 a 13, adquiere la forma elptica y luego se va alargando y al da 17 a 19 el embrin se alarga lo suficiente como para ocupar los dos cuernos

(Seidel, 1991) Los embriones protruidos hace ms dificultoso la identificacin. La zona pelcida es una estructura por el cual se puede identificar los embriones a temprana edad. Los embriones mantienen su forma esfrica hasta aproximadamente el da 12 cuando que se inicia la elongacin. En oveja y vaca, el blastocisto gradualmente se elonga y puede conseguir una longitud de 20 cm antes de unirse en la segunda y tercera semana de preez. En cerdos, el proceso de elongacin es acentuada entre 9 a 16 das de preez, el blastocisto experimenta elongacin (300 veces) cambiando de una forma esfrica a extremadamente larga aproximadamente a un metro de longitud antes de iniciar la unin.
Figura 1:

Figura 1: a) embrin de cerdo (18h post ovulacin), b) embrin de 8 clulas (55h post ovulacin) c) embrin de 13 das post ovulacin (157 cm de elongacin) (Austin y Short, 1982)

2. Reconocimiento materno de la preez

Una adecuada y oportuna interaccin entre el producto de la concepcin y la madre es fundamental para el establecimiento exitoso de la gestacin en la mayora de las especies. La interaccin Embrin-madre comienza poco despus la fecundacin y este se ejerce por seales locales y sistmicas. La mantencin del cuerpo lteo y por ende una adecuada produccin de hormonas esteroidales (especialmente progesterona) es esencial para el establecimiento de la gestacin en mamferos, la cual se puede hacer de dos maneras:
o Antilutelitico previene los efectos de PGF o liberacin de PGF o Luteotrfica mejora la sobrevivencia del CL, ayuda al CL.

VACA Y OVEJA
El producto de concepcin (embrin- membranas) secreta protenas de origen trofoblstico

(oTP-, bTP-1) que tiene una secuencia aminoacidica muy similar al interferon alfa II (oIFN-t, bIFN-t), que inhiben la sntesis de receptores endometriales de oxitocina y la produccin uterina de pulsos de PGF. Los das crticos son: Bovino - 16 a 17 y Ovino - 12 a 13

Figura 2: Diagrama de la luteolisis y establecimiento de la preez en vacas y ovejas. Sin preez, el estradiol de los folculos enlaza al receptor de estrgeno (ER) en el endometrio e induce la expresin de receptor de oxitocina (OTR). La oxitocina secretada del cuerpo luteo enlaza a este receptor e inicia la sntesis de PGF2a, estimulando a la regresin del cuerpo luteo. En Preez, el interferon IFN-t secretada por el embrin regula la expresin de ER y OTR y enlaza al tipo I de receptor IFN (IFN-R), Consecuentemente la sntesis de PGF2a es prevenido. La expresin de IFN-t desaparece cuando el concepto inicia el proceso de implantacin en el endometrio.

MARRANA
o El producto de la concepcin a travs de la produccin de estrgenos y en conjunto con la

prolactina inicia una serie de eventos que culminan en la redireccin de la secrecin de la PGF (hormona luteoltica de origen uterino) desde un patrn de secrecin endocrino (vena uterina), hacia un patrn de secrecin exocrina (cavidad uterina), redireccin que impide la lutelisis o Los das crticos son 11 a 12

Figura 3: Diagrama de lutelisis y establecimiento de preez en cerdo. Similar a otras especies, la PGF2a, es una seal luteolitica que induce la regresin del cuerpo luteo. En preez, el concepto produce estrgenos como factor de reconocimiento de la preez. Los estrgenos alteran la direccin de la secrecin de la PGF2a del sistema de venas uterina (endocrino) hacia el lumen uterino (exocrino). Adicional el concepto produce PGE2, el cual tiene actividad luteotrfico y IFN-y puede estar involucrada en la inmunoregulacin del tero. YEGUA
o La vescula embrionaria ingresa al tero al da 6 y con ultrasonido se puede ubicar en el

cuerno uterino al da 9, inicindose un incremento marcado de movilidad en el da 9 a 10, manteniendo su movilidad hasta antes de la implantacin da 16. Durante la fase de movilidad, el embrin atraviesa toda la longitud del cuerpo y cuerno uterino 10 a 20 veces por da bajo la propulsin de las contracciones uterinas. La delgada pared de la vescula es capaz de soportar y responder a las contracciones vigorosas porque esta cubierta por una capsula elstica fuerte.

El embrin de desarrollo temprano orquesta eventos uterinos que son requeridos para su propia sobrevivencia. Produce un sustancia de corta accin que estimula localmente contracciones uterinas y por ende su propia movilidad y enva a todas partes del tero el mensaje para bloquear el mecanismo uterino de lutelisis, asegurando una continuidad de la vida cuerpo lteo y progesterona y distribuye otras sustancias, quizs un estrgeno que mejora el tono uterino, por lo tanto provoca que la vescula

MANUAL DE LABORATORIO DE REPRODUCCIN ANIMAL

2010
E. Mellisho
VI. Desarrollo Fetal y placentacin
deje de viajar despus de que un bloqueo critico de la lutelisis es completado. El incremento en el tono uterino esta asociado con la reduccin del dimetro uterino y por lo tanto la vescula embrionaria se fija en la curva de la porcin caudal de uno de los cuernos. La vescula fijada permanece sujeta a la accin masajeante de las contracciones uterinas continuas que se cree contribuyen a la rotacin o orientacin vesicular. o Los das crticos son de 12 a 14 PRIMATES (humanos) En humanos el embrin secreta Gonadotrofina corinica (hCG), el cual tiene actividad de hormona luteinizante (LH) y mantiene la preez antes de lteo-placenta actue. La hCG (Gonadotropina corinica humana) producida tempranamente tiene actividad luteotrfico. Los das crticos son de 8 a 12

Figura 4: Diagrama del reconocimiento de la preez. A) ratones y B) Humanos ROEDORES El Lactgeno placentario de roedores (RPL), que se incrementa despus del da 7 y tiene propiedades luteotrficas, protegiendo el CL de las prostaglandinas. La monta induce la liberacin de prolactina, que mantiene el cuerpo luteo, provocando una pseudopreez
6

En no preadas, la prolactina decrece despus del da 7, mientras que la prostaglandina incrementa al da 11 y retorna el estro al da 17 aproximadamente En el ratones, el estimulo

cervical durante la monta induce la secrecin de prolactina de la hipfisis y forma el cuerpo lteo de la preez. El lactgeno placentario soporta el mantenimiento de la preez despus de la implantacin.