Curso de Microbiologa General de Enrique Iez CITOPLASMA.

INCLUSIONES CITOPLSMICAS
CONTENIDOS
CITOPLASMA BACTERIANO (VISIN DE CONJUNTO) | INCLUSIONES DE RESERVA: INCLUSIONES POLISACARDICAS, GRNULOS DE POLI--HIDROXIALCANOATOS, INCLUSIONES DE HIDROCARBUROS, GRNULOS DE CIANOFICINA, GRNULOS DE POLIFOSFATO, GLBULOS DE AZUFRE | OTRAS INCLUSIONES: SALES MINERALES, FICOBILISOMAS | ORGNULOS PROCARITICOS: CARBOXISOMAS, VACUOLAS DE GAS, CLOROSOMAS, MAGNETOSOMAS

1. CITOPLASMA BACTERIANO: VISIN DE CONJUNTO

El citoplasma bacteriano es la masa de materia viva delimitada por la membrana citoplsmica. En su interior se albergan:

cuerpos nucleares (nucleoide); plsmidos (no en todas las cepas bacterianas); ribosomas; inclusiones (no en todas); orgnulos (no en todas).

Al igual que en los dems seres vivos, el citoplasma es un sistema coloidal cuya fase dispersante es agua junto con diversas sustancias en solucin (citosol), y cuya fase dispersa est constituida por macromolculas y conjuntos supramoleculares (partculas submicroscpicas). La viscosidad es mayor que la del citoplasma eucaritico, estando desprovisto de corrientes citoplsmicas. Observacin: A microscopa ptica, obviamente es poco lo que se puede distinguir en l. En las clulas jvenes se suele teir de modo uniforme, teniendo un carcter basfilo (debido a la abundancia de ARN). En las clulas viejas se tie irregularmente, debido a la aparicin de inclusiones y a la acumulacin de

sustancias de desecho. A microscopa electrnica destaca el carcter granulado, producido por los numerosos ribosomas (que a los aumentos habituales aparecen como partculas esfricas), aunque se observa una zona irregular hacia el centro, ms transparente a los electrones, que se debe a los cuerpos nucleares (nucleoide). En los intersticios entre las partculas granuladas existe una sustancia amorfa en la que no se pueden distinguir ms detalles, y que corresponde a la fase dispersante acuosa de la que hablbamos ms arriba. En este captulo y en los prximos nos dedicaremos al estudio de las principales estructuras y macromolculas que alberga el citoplasma. Comenzaremos con las inclusiones y orgnulos especiales que presentan algunas bacterias (este cap. 8), para abordar despus la organizacin a gran escala del material gentico bacteriano (cap. 9), y un rpido repaso al proceso de expresin de la informacin gentica contenida en ste (cap. 10, con estudio de los ribosomas bacterianos).

2. INCLUSIONES DE RESERVA
Son acmulos de sustancias orgnicas o inorgnicas, rodeadas o no de una envuelta limitante de naturaleza protenica, que se originan dentro del citoplasma bajo determinadas condiciones de crecimiento. Constituyen reservas de fuentes de C o N (inclusiones orgnicas) y de P o S (inclusiones inorgnicas). Estudiaremos: 1. Inclusiones orgnicas: a. inclusiones polisacardicas b. grnulos de poli--hidroxibutrico (o, en general de poli--hidroxialcanoatos) c. inclusiones de hidrocarburos d. grnulos de cianoficina 2. Inclusiones inorgnicas: grnulos de polifosfato a. glbulos de azufre

2.1 INCLUSIONES POLISACARDICAS Son acumulaciones de (1-->4) glucanos, con ramificaciones en (1--> 6), principalmente almidn o glucgeno (segn especies), que se depositan de modo ms o menos uniforme por todo el citoplasma cuando determinadas bacterias crecen en medios con limitacin de fuente de N, pero donde an sean abundantes las fuentes de C y energa. En esta situacin, se detiene prcticamente la sntesis de protenas y de cidos nucleicos, y la mayor parte del C asimilado se convierte

rpidamente en estos materiales de reserva. Cuando a estas clulas las pasamos a un medio rico en N, pero carente de fuente de C, estas inclusiones se usan como fuente interna de C para la sntesis de cidos nucleicos y protenas. Estas inclusiones actan, pues, como sistemas de almacenamiento de carbono osmticamente inertes (la clula puede albergar grandes cantidades de glucosa que, si estuvieran como molculas libres dentro del citoplasma, podran tener efectos osmticos muy negativos). Sntesis (veamos el ejemplo del glucgeno):
fosfoglucomutasa

Glucosa-6-P --------------------------------> Glucosa-1-P

ADP-glucosa-pirofosforilasa

Glucosa-1-P + ATP ---------------------------------------> ADP-glucosa + PP

glucgeno sintetasa

ADP-glucosa + { ,1-->4 glucano aceptor}n -----------------------------------------> { ,1-->4 glucano}n+1

Sobre este polmero lineal acta la enzima ramificadora (que introduce enlaces (1-->6) con glucosa), de modo que se forma el glucgeno maduro. Degradacin:
glucgeno fosforilasa

Glucgeno --------------------------------> n {glucosa-1-P}

Para la total degradacin del glucgeno se requieren tambin enzimas desramificadoras, capaces de romper los enlaces (1-->6). Observacin: Para observarlas se recurre a la tincin con una solucin de I2 + IK:

glucgeno: aparece de color pardo-rojizo;

almidn (amilopectina): color azul.

2.2 GRNULOS DE POLI--HIDROXIBUTRICO (PHB) Y DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) Los grnulos de poli- -hidroxibutrico son acmulos del polister del cido -hidroxibutrico (= 3hidroxibutrico), rodeados de una envuelta protenica, y que al igual que en el caso anterior, se producen en ciertas bacterias como reserva osmticamente inerte de C en condiciones de hambre de N. Adems de la proteccin osmtica, estos grnulos suponen la ventaja de neutralizar un metabolito cido (el grupo carboxilo de cada unidad de -hidroxibutrico desaparece como tal, al intervenir en el enlace ster con la siguiente unidad). En las especies de Bacillus constituye la fuente de carbono y energa al inicio de la esporulacin. Una funcin semejante parece implicada a la hora del enquistamiento de Azotobacter. Una clula puede contener de 8 a 12 de estos grnulos, que miden unos 0.2-0.7 m de dimetro, y que van provistos de una envuelta proteica de unos 3-4 nm de grosor. Pueden llegar a representar el 80% en peso de la clula. Sntesis: Se produce por una rama lateral de la ruta de sntesis de los cidos grasos, a travs de hidroxibutiril-CoA. En los grnulos, el polmero queda asociado a un sistema complejo que ser utilizado en la degradacin, pero este sistema habr de activarse antes. Degradacin: 1. La degradacin comienza con la actuacin de un enzima proteoltico que desorganiza la envuelta proteica de los grnulos; 2. Los grnulos as "activados" sufren ahora la accin de una despolimerasa, que va generando dmeros de hidroxibutrico. 3. Actuacin de una dimerasa especfica, que genera -hidroxibutrico a partir de los steres dimricos. Observacin: A diferencia de los acmulos de polisacridos, los grnulos de PHB son visibles a microscopio ptico en fresco, debido a su elevado ndice de refringencia. Se tien bien mediante Negro-Sudn. Grnulos de poli- -hidroxialcanoatos (PHA): En los ltimos aos est quedando patente que los grnulos descritos de PHB son un ejemplo de una clase ms amplia de grnulos de poli--hidroxi-alcanoatos.
Por ejemplo: cuando determinadas especies de Pseudomonas crecen en n-octano como fuente de carbono, se acumula un polmero de steres del cido -hidroxi-octanoico, con una funcin metablica semejante a la del PHB.

Ciertas cepas de Alcaligenes eutrophus, cuando crecen en glucosa y propinico producen copolmeros aleatorios de unidades de -hidroxibutrico y -hidroxivalrico (=3hidroxipentanoico). Existen interesantes perspectivas de aprovechamiento econmico de estos polmeros, ya que los PHA se comportan como excelentes termoplsticos biodegradables. Por ejemplo, la empresa britnica ICI tiene patentados procesos industriales para fabricar PHA donde casi el 90% de las unidades son de hidroxivalrico, que da un polmero flexible comercializado con el nombre de Biopol . Los polmeros a base de 4- o 5-hidroxibutrico y 3-hidroxibutrico son ms largos, ms elsticos y ms biodegradables (se han empleado en la fabricacin de envases)

2.3 INCLUSIONES DE HIDROCARBUROS

Son acmulos de reserva (con envuelta proteinica) de los hidrocarburos que determinadas bacterias (especialmente Actinomicetos y relacionados) usan como fuente de C.

2.4 GRNULOS DE CIANOFICINA

Muchas cianobacterias (Oxifotobacterias) acumulan grandes grnulos refringentes de reservas nitrogenadas cuando se acercan a la fase estacionaria de crecimiento. Estos grnulos de cianoficina son acmulos de un copolmero de arginina y asprtico: consta de un ncleo de poliasprtico, en el que todos los carboxilos de las cadenas laterales estn unidos con L-arginina. Su sntesis no est basada en el mecanismo habitual en ribosomas, ya que no se ve inhibida por el cloramfenicol.

2.5 GRNULOS DE POLIFOSFATOS (= GRNULOS DE VOLUTINA, O GRNULOS METACROMTICOS

El nombre de "metacromticos" alude al efecto metacromtico (cambio de color): cuando se tien con los colorantes bsicos azul de toluidina o azul de metileno envejecido, se colorean de rojo. A microscopio electrnico aparecen muy densos a los electrones. Son acmulos de polifosfato, polmeros lineales del ortofosfato, de longitud variable (por trmino medio, unas 500 unidades), que representan un modo osmticamente inerte de almacenar fosfato. Parece ser que la parte central de estos grnulos constituye un ncleo formado por lpidos y protenas. En algunos casos pueden constituir una fuente de energa, en sustitucin del ATP (se trata en este caso de una especie de "fsil bioqumico?"). Se acumulan cuando algn otro nutriente distinto del fosfato se hace escaso (sobre todo cuando va desapareciendo el sulfato). En estas condiciones se detiene la sntesis de los cidos nucleicos, y la volutina se acumula a la espera de su utilizacin para esta sntesis de nucleicos, cuando aparezca el

nutriente originalmente limitante. Su sntesis se produce por adicin secuencial de restos de P a PP, actuando el ATP como donador:

P-P + ATP ------> P-P-P + ADP; (-P-)n + ATP -----> (-P-)n+1 + ADP. Los grnulos de polifosfatos tienen un interesante aspecto aplicado, en la eliminacin de fosfatos en las aguas residuales. En los lodos activados de las plantas de procesamiento de aguas y residuos es muy abundante la bacteria Acinetobacter, que puede llegar a acumular el 24% de su biomasa bajo la forma de polifosfatos. Durante los periodos de aerobiosis, esta bacteria se asegura la energa a partir de sustratros extracelulares, y mientras tanto acumula grnulos de polifosfatos; en anaerobiosis, los niveles de ATP los mantienen a expensas de usar esos grnulos de polifosfato, por lo que el lodo libera fosfatos. Esto se aprovecha para eliminar concentraciones problemticas de fosfatos en aguas residuales, derivadas del uso de fertilizantes y detergentes (proceso "Renpho").

2.6 GLBULOS DE AZUFRE

Las inclusiones de S aparecen en dos grupos de bacterias que usan sulfuro de hidrgeno (SH2):

las bacterias purpreas del azufre (que usan el SH2 como donador de electrones para la fotosntesis); bacterias filamentosas no fotosintticas como Beggiatoa o Thiothrix, que lo usan como donador de electrones para sus oxidaciones.

En ambos casos, el sulfuro de hidrgeno es oxidado a azufre elemental (S0), que en el citoplasma se acumula como glbulos muy refringentes y rodeados de envuelta protenica. Estos glbulos son transitorios, ya que el S0 se reutiliza por oxidacin hasta sulfato, cuando en el medio se agota el sulfuro.

3. OTRAS INCLUSIONES 3.1 INCLUSIONES DE SALES MINERALES

Acmulos grandes, densos y refringentes de sales insolubles de calcio (sobre todo carbonatos) que aparecen en algunas bacterias (como Achromatium), cuyo papel parece consistir en mantenerlas en el fondo de los lagos y ros.

3.2 FICOBILISOMAS
Son estructuras supramacromoleculares, en forma de cilindros o bastones, adosadas a la superficie de la membrana tilacoidal de las Oxifotobacterias, confiriendo a sta un tpico aspecto "granuloso" en las micrografas electrnicas. Como se puede ver en el esquema, estn constituidas por pilas de discos a partir de ficobiliprotenas, cromoprotenas que sirven como "antenas" para la captacin de luz en la fotosntesis de estos procariotas. Los grupos cromforos son: ficocianinas, aloficocianinas y ficoeritrina. Como veremos oportunamente, la disposicin ordenada de los distintos pigmentos tiene un papel central en la "canalizacin" de la energa de la luz hacia los centros de reaccin (ubicados ya en plena membrana tilacoidal) donde se localizan los complejos fotosintticos protenasclorofilas.

4. ORGNULOS PROCARITICOS CITOPLSMICOS

Como ya dijimos, en procariotas no existen por regla general orgnulos citoplsmicos rodeados por unidad de membrana. Las nicas excepciones estn constituidas por los tilacoides de las Oxifotobacterias, ya estudiados en el captulo anterior. En algunos grupos bacterianos se pueden encontrar orgnulos citoplsmicos no rodeados por unidad de membrana (o sea, sin bicapa lipdica). Muchos de ellos presentan envueltas basadas en subunidades de protenas:

carboxisomas vacuolas de gas clorosomas magnetosomas.

4.1 CARBOXISOMAS (= CUERPOS POLIDRICOS)

Estructuras presentes en bacterias fotoautotrofas (Oxifotobacterias y ciertas bacterias purpreas) y quimioautotrofas (nitrificantes, Thiobacillus), de apariencia polidrica con tendencia a esfrica. Su dimetro oscila entre 50 y 500 nm, y estn rodeadas de envuelta monocapa proteinica de unos 3,5 nm. El interior tiene aspecto granular, debido a la acumulacin de la enzima ribulosa-bifosfatocarboxilasa (RuBisCo, la carboxidismutasa, el enzima clave en el ciclo de Calvin de asimilacin de CO2). Aunque se pens que eran los sitos de fijacin del CO2, parece ms bien que se trata de reservas de dicha enzima.

4.2 VACUOLAS DE GAS

Son orgnulos muy refringentes al microscopio ptico, que al electrnico muestran una estructura a base de agrupaciones regulares de vesculas de gas. Cada vescula tiene una forma de cilindro bicnico (200-1000 nm de longitud y unos 70 nm de dimetro), rodeado de una monocapa de unidades globulares de protena ensambladas helicoidalmente que dan un aspecto a bandas ("costillas"). Esta envuelta es impermeable al agua, pero permeable a los gases, por lo que la composicin y concentracin del gas dentro de la vescula depende de las que existan en el medio. Conforme se sintetizan y ensamblan las vesculas, el agua va siendo eliminada del interior (vase esquema). La funcin de estas vacuolas es mantener un grado de flotabilidad ptimo en los hbitats acuticos a las bacterias que las poseen, permitindoles alcanzar la profundidad adecuada para su modo de vida (segn los casos, para obtener una intensidad adecuada de luz, concentracin ptima de oxgeno o de otros nutrientes). Las vacuolas de gas son muy frecuentes en Oxifotobacterias y Anoxifotobacterias; tambin se dan en algunas arqueobacterias (Halobacterium, algunas metangenas) y en bacterias prostecadas (Ancalomicrobium, Prosthecomicrobium).

4.3 CLOROSOMAS

Son vesculas oblongas situadas por debajo de la membrana citoplsmica, que contienen los pigmentos antena de las bacterias fotosintticas verdes (antigua familia Chlorobiaceae, dentro de la clase Anoxyphotobacteria). Son invisibles a microscopa ptica; miden 100-150 nm de longitud y unos 50 nm de anchura, estando rodeadas de una monocapa de protenas. Se disponen por debajo de la membrana citoplsmica, sin estar en continuidad con ella, aunque en muchos casos aparecen conectadas a travs de un pednculo de naturaleza no lipdica.

4.4 MAGNETOSOMAS

Son orgnulos sensores del campo magntico terrestre, que aparecen en ciertas bacterias acuticas flageladas microaerfilas o anaerobias (p. ej., en Aquaspirillum magnetotacticum). Consisten en cristales homogneos de magnetita (Fe3O4), de formas cubo-octadricas o de prisma hexagonal, delimitados por una envuelta protenica. Los diversos cristales suelen disponerse en filas paralelas al eje longitudinal de la bacteria, o en otras agrupaciones regulares de varios unidades, hasta varias decenas.

Fueron descubiertas en 1975, y se sabe que permiten la orientacin magntica a las bacterias que las poseen (bacterias magnetotcticas), determinando la orientacin de su natacin. En el hemisferio Norte, el campo magntico est orientado hacia abajo, y en el sur hacia arriba. Las bacterias magnetotcticas del hemisferio septentrional se orientan al N, y las del meridional, al S. Por consiguiente, cuando las bacterias son removidas de los fondos donde viven, por magnetotaxia pueden volver al fondo, que es donde encuentran las concentraciones de oxgeno adecuadas para su modo de vida

BIBLIOGRAFA
ART CULOS DE DIVULGACI N BLAKEMORE, R.P., R.B. FRANKEL (1982): Navegacin magntica en las bacterias. Inv. y Ciencia, 65 (febrero): 16-24. WALSBY, A.E. (1977): Los vacuolos gasferos de las cianofceas. Inv. y Ciencia 13 (octubre): 6270. ART CULOS DE REVISI N ALLEN, M.M. (1984): Cyanobacterial cell inclusions. Ann. Rev. Microbiol. 37: 1-25. BLAKEMORE, R.P. (1982): Magnetotactic bacteria. Ann. Rev. Microbiol. 36: 217-238. DAWES. E.A. (1992): Storage polimers in prokaryotes. En: "Prokaryotic structure and function: a new perspective". Society for General Microbiology & Cambridge University Press, Cambridge, pp. 80-122. MANN, S., N.H.C. SPARKS, R.G. BOARD (1990): Magnetotactic bacteria: microbiology, biomineralization, palaeomagnetism and biotechnology. Adv. Microb. Physiol. 31: 125-181.

actualizado el 17 de agosto de 1998 1998 ENRIQUE IAEZ PAREJA. Prohibida su reproduccin, salvo con fines educativos. Se agradecen los comentarios y sugerencias. Escrbame a eianez@goliat.ugr.es