UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

MICROBIOLOGA GNERAL

PROFESOR: Blog. JUAN JARA CHUMPITAZ

SEMINARIO 6: OTRAS DIFERENCIAS DE LA CLULA PROCARITA: EXOSPORA; ESPORAS REPRODUCTIVAS DE ACTINOMICETOS; QUISTE, HETEROQUISTES Y ACINETOS. EMPLEO DE LOS PLSMIDOS EN LA BIOTECNOLOGA. BIOINSECTICIDAS Y MICROBIANOS INTEGRANTES: WENDY VARGAS ARAUJO CARMEN GUERRA PACOTAIPE LAURA LEON RAMOS

DIFERENCIACIN implica cambios morfolgicos o funcionales y COEXISTENCIA

Dos clulas son diferentes entre si cuando, an teniendo el mismo genoma, el patrn de protenas que sintetizan es diferente.

Podemos decir que DIFERENCIACIN es el conjunto de cambios estables en la forma y funcin de una clula, cuando dichos cambios forman parte del ciclo de vida normal de la clula en cuestin. La DIFERENCIACIN procariota implica cambios morfolgicos y funcionales que juegan un papel predominante en el ciclo de vida normal de un organismo

EXOSPORA
Determinadas bacterias (Methylosinum, Rhodomicrobium) forman esporas reproductivas por gemaciones sucesivas al final de sus prostecas. Estas exosporas poseen una envuelta a base de pared rodeada de una cpsula o cubierta gruesa

ACTINOMICETOS
Los actinomicetos constituyen un grupo amplio y complejo de bacterias Gram positivas con tendencia a un tipo de crecimiento micelial y un estilo de vida similar a los hongos. Muchos de los taxones de Actinomicetos y bacterias relacionadas poseen clulas diferenciadas de tipo reproductivo, genricamente conocidas como esporas.

Estructuras portadoras de esporas en los estreptomicetos

Propiedades de las esporas de los estreptomicetos

La pared celular de la espora es ms gruesa que la de la clula vegetativa.

No hay cambio cualitativo en el peptidoglucano.

Son muy hidrofbicas: se resisten a ser suspendidas en agua. Esto parece que se debe a una vaina que rodea a la pared celular, compuesta a base de tbulos auto-ensamblables.

no hay crtex ni cubiertas

Resisten ms al calor y a la desecacin en comparacin a las clulas vegetativas, pero menos que las endosporas.

Son metablicamente durmientes (clulas en reposo)

LOS ACTINOMICETOS SON ORGANISMOS COLONIALES

Corte transversal de una colonia de actinomicetos con hifas vivas (vivas) y muertas (blanca). Se muestran el micelio del sustrato y el micelio areo con cadenas de conidioesporas.

QUISTES BACTERIANOS
Son formas de resistencia que aparecen por engrosamiento de la pared celular, acumulan materiales de reserva, tienen metabolismo endgeno y mayor resistencia al calor, desecacin y agentes qumicos que la clula vegetativa

DIFERENCIACIONES EN CIANOBACTERIAS

HETEROQUISTES:Son clulas de trmino, sin funcin Rrproductiva, especializadas en la fijacin de nitrgeno molecular (N2), de mayor tamao que las clulas vegetativas.

ACINETOS: Son formas de reposo que se originan a partir de clulas vegetativas, por acumulacin de nuevas capas de materiales polisacardicos por fuera de la pared celular, y por formacin de acmulos de reserva en el citoplasma

1. Acineto 2. Heterociste 3. Hormogonio

Engrosamiento de la pared celular, carencia de ficobilinas y solo realizan fotofosforilacin cclica.

PLSMIDOS

DEFINICIONES GENERALES

Los plsmidos son molculas circulares de ADN de doble cadena que se encuentran naturalmente en varias especies de bacterias.

Estos elementos genticos son extracromosomales, se replican de manera independiente del cromosoma bacteriano y codifican para una gran variedad de enzimas

Dadas estas caractersticas, los plsmidos han sido empleados como vectores o vehculos de clonacin de molculas de ADN forneas que permiten el transporte y manipulacin del mismo

Es as como, hoy en da, se dispone de una gran variedad de plsmidos sintticos

FENOTIPOS DETERMINADOS POR LOS PLSMIDOS Los plsmidos no suelen determinar productos esenciales para el crecimiento (por eso son dispensables), pero en la naturaleza parece que resultan favorecidas las bacterias con algn plsmido, quiz porque acarrean ventajas selectivas en determinados ambientes o en determinadas condiciones. Existe una variedad de fenotipos y funciones determinados por plsmidos:
Resistencia a antibiticos (plsmidos R; los estudiaremos en la seccin de Gentica). Resistencia a metales pesados (por ejemplo, resistencia a mercurio). Plsmidos de virulencia: produccin de toxinas, factores de penetracin en tejidos, adherencia a tejidos del hospedador, etc., en ciertas bacterias patgenas. Produccin de bacteriocinas (protenas txicas producidas por bacterias que matan a otras de la misma especie). Produccin de siderforos (quelatos para secuestrar iones Fe3+). Utilizacin de determinados azcares. Utilizacin de hidrocarburos, incluyendo algunos cclicos recalcitrantes (degradacin de tolueno, xileno, alcanfor, etc.) en Pseudomonas. Induccin de tumores en plantas (plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens). Interacciones simbiticas y fijacin de nitrgeno en ciertos Rhizobium.

etc...

EMPLEO DE LOS PLSMIDOS EN LA BIOTECNOLOGA Los plsmidos utilizados en ingeniera gentica son llamados vectores. Los plsmidos sirven como herramientas importantes en la gentica y la biotecnologa, los laboratorios donde se utilizan comnmente para multiplicar o expresar genes particulares. Muchos plsmidos estn comercialmente disponibles para tales usos.

Los vectores de ADN tpicos tienes tres caractersticas:

Un origen de replicacin que les permita replicarse en forma independiente del cromosoma del hospedador.

Algn tipo de marcador seleccionable que les permite identificar con facilidad las clulas que contienen el vector (y cualquier fragmento de ADN unido a l).

Sitios independientes para la unin de una enzima de restriccin o de varias de ellas. Esto permite la insercin de los fragmentos de ADN en un punto especfico dentro de un vector ntegro

TECNICAS DE CLONACION DE ADN

Estas tcnicas que utilizan al ADN recombinante, que son tcnicas de ingeniera gentica, nos permiten introducir y mantener un gen no bactrico dentro de una bacteria y formar lo que se denominan clones de ADN.

PLASMIDO Ti PARA INTRODUCIR NUEVOS GENES EN PLANTAS

Un sistema similar al visto anteriormente se utiliza para introducir genes en sistemas vegetales.

Los investigadores realizan en laboratorio lo que una bacteria, el Agrobacterium tumefacien realiza en forma natural desde hace millones de aos. Esta bacteria, normalmente presente en el suelo, es la responsable de la produccin de un tumor en ciertas especies vegetales,

Dicha bacteria posee un plsmido, llamado Ti (Tumor inducing) que lleva en su ADN los genes necesarios para que el Agrobacterium tenga propiedades infectivas. En otras palabras, no es la bacteria la causante de la enfermedad, sino el plsmido que lleva dentro

Actualmente, por tcnicas biotecnolgicas modernas, mediadas por microorganismos transformados se producen, por ejemplo, insulina, hormonas del crecimiento, interfern y la vacuna contra la hepatitis B.

Las especies vegetales ya transformadas por medio de la ingeniera gentica son numerosas. La aparicin de vegetales transgnicos, o sea portadores de genes de otras especies, con resistencia a plagas y a herbicidas, en el mercado de los alimentos alerta sobre el uso y el manejo de los mismos.

Existen muchas especies ya manipuladas genticamente, desde la alfalfa hasta el algodn, arroz, centeno, girasol, lechuga, maz, lino, papa, soja, tabaco, tomate, trigo y muchas ms.

PLSMIDOS RESISTENTES A METALES PESADOS APLICACIN

Ciertos plsmidos pueden llevar genes relacionados con la resistencia a metales en forma de sales, como por ejemplo el mercurio, as como algunos que los agentes fsicos como radiacin ultravioleta. Es interesante recordar aqu que ciertos estafilococos responsables de infecciones posoperatorias de suturas llevan un plsmido que no solo capacitaba a las bacterias a la destruccin de la penicilina, sino tambin las ayudaba a crecer en el desinfectante usado, que estaba basado en sales de mercurio.

Se debe indicar que cepas selectas de bacterias son resistentes a compuestos mercuriales debido a la adquisicin de un elemento genticamente transferible conocido como el OPERON MER ( contenido en el plsmido) dedicado conjunto a genes resistentes al mercurio, que son autorregulados por protenas MER en la zona de ADN. Las bacterias resistentes al Hg inico y el metilmercurio codifican protenas que regulan el transporte de ( MerA, MerP, MerT) y la degradacin del metal ( MerA y MerB). El sistema Mer rompe con la propiedad de los enlaces fuertes.

BIOREMEDIACIN DE METALES PESADOS

BIOREMEDIACIN DE METALES PESADOS Por precipitacin extracelular

Los microorganismos son capaces de precipitar metales y radionucloide y en forma de carbonato e hidrxidos. Este mecanismo aparece por el funcionamiento de una bomba que expulsa metal txico presente en el citoplasma en contracorriente a un flujo de H haca el interior celular. Esto produce a una alcalinizacin localizada sobre la superficie celular externa y en consecuencia la precipitacin del metal pesado.

TRATAMIENTO MICROBIANO Las observaciones sobre la presencia y distribucin de las bacterias nativas capaces de tolerar altas concentraciones es de vital importancia en la ecologa microbiana para entender en toda su extensin la contaminacin por metales as, como reflejar la habilidad de estas formas nativas para sobrevivir en ambientes extremos. Las bacterias resistentes al Hg (MRB) son de 1- 10% de todas las bacterias heterotrficas arobicas. MECANISMOS DE BIOREMEDIACIN

REDUCCIN ENZIMTICA A Hg0 Y VOLATILIZACIN Por la presencia del determinante de resistencia Tn5073

Hg2 Mercurio Bivalente

BACTERIA Flavoenzima citoplasmtica mercurio reductasa

Hg0 Mercurio elemental

BACTERIAS GRAM NEGTIVA transporte de Hg2 Haca el citoplasma, seguidas de su reduccin Hg0

El mercurio elemental parece ser eliminado por difusin pasiva

Seguidamente la volatiliza

FORMACIN DE HgS INSOLUBLE

Hg2

Hg2S

HgS

Producido anaerbicamente por la bacteria Clostridium cochelearium

Klebsiella aerogenes produce HgS cuando se cultiva de manera continua en un ambiente aerbico

Klebsiella pneumoniae, remueve el Hg presente en agua residuales

PLANTAS GENTICAMENTE MODIFICADAS

La modificacion de algunas especies de plantas mediante la insercin del gen MerA de Eschericha coli que cataliza la reduccin del mercurio bivalente a mercurio elemental , el que posteriormente se volatiliza.

Arabidopsis thaliana +

GEN MerA

Plantas resistentes y volatilizadas Hg

Plantas capaces de extraer, secuestrar y descontaminar los contaminantes mercuriales

BIOINSECTICIDAS MICROBIANOS Son insecticidas que contienen microorganismos (virus, bacterias, hongos) y/o toxinas producidas por los mismos, los cuales son efectivos contra insectos plagas.

DESARROLLO DE BIOINSECTICIDAS

El manejo y control de insectos plaga es importante para la comunidad agrcola Ayuda a los agricultores a reducir la dependencia de insecticidas, adems de cumplir con las regulaciones ambientales. Propsito: Crear resistencia contra insectos plaga

MICROORGANISMO UTILIZADO

Bacillus thuringiensis (Bt)

Bacilo gram positivo Bacteria que ms se ha e x p l o t a d o comercialmente. Formador de esporas

55 serotipos: Antgeno Hflagelar Hbitat natural: Ubicuo

MODO DE ACCIN THURINGIENSIS

Se caracteriza por la formacin de un cuerpo paraesporal o cristal de protena: -endotoxina Estos cristales se forman durante la esporulacin y tienen actividad txica para larvas de insectos. Varan en tamao y forma

DE

B.

MODO DE ACCIN DE LA PROTENA

Modo de accin de la protena Activacin (Protoxina toxina) Unin al receptor Insercin en membrana y formacin de poro Se adhiere a la pared del tracto digestivo del organismo, causando parlisis y destruccin de estas clulas. Se libera el contenido a todo el cuerpo y a la sangre causando la muerte al organismo en 2-3 das por septicemia. Esporas/cristales es ms efectivo que los cristales solos.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas No son txicos Excepcin: Bacillus thuringiensis var galleriae

No es bioinsecticida
Desventajas Costosos y limitada disponibilidad Calor, desecacin y luz UVreduce efectividad

Especificidad
Toxina activa para estado larvario no para