UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS CARRERA DE INGENIERIA BIOQUIMICA BIOQUIMICA I NOMBRE: Jonathan Gavilanes Lpez;

Cinthya Romero Flores. PROFESOR: Ing. Carlos Moreno. AYUDANTE: Egdo. Oscar Salazar. SEMESTRE: 5 Ingeniera Bioqumica. TEMA: AISLAMIENTO DE COLESTEROL I. INTRODUCCION

El Colesterol es un esterol que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hgado, mdula espinal, pncreas y cerebro. Todas las clulas de los vertebrados en una u otra etapa del desarrollo producen colesterol. En el adulto, sin embargo, los principales sitios de sntesis son el intestino, el hgado y la piel. El tejido nervioso es en particular rico en colesterol. Es un componente de la mielina, una lipoprotena compleja que sirve como envoltura de los axones y se comporta como un aislante. En los humanos y otros omnvoros, y en los carnvoros, existe un consumo continuo de colesterol a travs de los alimentos, aunque el esteral es absorbido de manera ineficiente. El colesterol de la dieta complementa el producido por la biosntesis. (Garca J. 2009) El colesterol es un constituyente de algunos clculos biliares y tambin existe en las placas arteriales caractersticas de la arteriosclerosis. La primera es por su excrecin en la bilis y en grado mucho menor a travs de las paredes del intestino delgado. El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones: ESTRUCTURAL: el colesterol es un componente muy importante de las membranas plasmticas de los animales.
PRECURSOR DE LA VITAMINA D PRECURSOR DE LAS HORMONAS SEXUALES. PRECURSOR DE LAS HORMONAS CORTICOESTEROIDALES. PRECURSOR DE LAS SALES BILIARES. PRECURSOR DE LAS BALSAS DE LPIDOS.

(Ayala y Mndez. 2005)

II.

OBJETIVOS

GENERAL Determinar la presencia de colesterol y lpidos en muestras de cerebro de res por medio de extraccin con diferentes solventes.

ESPECIFICOS Reconocer grasas en la muestra de cerebro de res por medio de la reaccin de saponificacin. Aplicar la reaccin de Liebermann-Burchard y fraccionamiento de extractos para el reconocimiento de colesterol en muestras de cerebro de res. III. IV. MATERIALES Y REACTIVOS 30 gr de cerebro de res 50 ml de Alcohol etlico 35 ml de ter etlico 25 ml de acetona Anhdrido actico cido sulfrico concentrado Cloroformo PROCEDIMIENTO DIAGRAMA DE FLUJO N1 EXTRACCION DE LIPIDOS
Pesar 20 g de cerebro, triturarlo en un mortero y secarlo parcialmente en un vaso de precipitado. Agregar 50 ml de alcohol etlico, llevar a ebullicin y mantenerlo por 3 minutos, luego filtrar por gasa. El filtrado se concentra en manta calefactora hasta unos 30 ml y se agregan luego 25 ml de ter, agitar y separar en ampolla de decantacin. Se obtienen dos fracciones

Hidrxido de sodio al 40% Ampolla de decantacin Bao de hielo Vaso de precipitacin Bao Mara Gasa

Fraccin superior A: etrea, que tendr disueltos lecitina, cefalina, grasas, colesterol y restos de esfingomielina y cerebrsidos.

Fraccin A: concentrar en bao mara a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona: se observar un precipitado que corresponde principalmente a fosfolpidos, quedando en solucin el colesterol y las grasas. Separar por centrifugacin obteniendo un sobrenadante C y un precipitado D. .

Tomar el tiempo en que se estn produciendo burbujas.

Fraccin A: concentrar en bao mara a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona: se observar un precipitado que corresponde principalmente a fosfolpidos, quedando en solucin el colesterol y las grasas. Separar por centrifugacin obteniendo un sobrenadante C y un precipitado D.

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

DIAGRAMA DE FLUJO N2 RECONOCIMIENTO DE GRASAS: SAPONIFICACIN

Se separan las grasas por saponificacin, para esto se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de etanol y 0,5 ml de hidrxido de sodio al 40%. Calentar suavemente. Agregar unas gotas de cido sulfrico. La presencia de enturbiamiento indica liberacin de cidos grasos.

Es una prueba para identificar cidos grasos, por lo tanto, general para los lpidos que los contengan. Los jabones se define qumicamente como, las sales metlicas de los cidos grasos superiores.

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

DIAGRAMA DE FLUJO N3 RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL: REACCIN DE BURCHARD

El colesterol reacciona con anhdrido actico y cido sulfrico concentrado. Se produce una prdida de agua y una protonizacin del colesterol. Se constituyen en medio anhidro polmeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado

LIEBERMANN

Secar la muestra a bao Mara. Resuspender en 2 ml de cloroformo

En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de anhdrido actico y 1 ml de cloroformo. Enfriar a 0C en bao de hielo. Agregar al tubo los 2 ml de la muestra y colocar en hielo. Agregar por las paredes 1 gota de cido sulfrico cc. Enfriar y observar. Una coloracin verde azulada indica la presencia de grupo esteroide, colesterol en nuestro caso

Elaborado por: Gavilanes J.; Romero C.

V. VI.

DATOS OBTENIDOS DISCUSIN

En la prctica de laboratorio se llev a cabo la determinacin de lpidos complejos contenidos en una muestra de cerebro de res, para lo cual se aplicaron dos pruebas cualitativas, las mismas que ayudaron a comprobar la presencia de estas molculas en dicha muestra. Considerando que el colesterol es una de las molculas importantes en el ser humano ya que se encuentran formando parte del sistema nervioso, vitaminas entre otros; se utiliz una muestra de cerebro de res debido a que es rico en lpidos, los mismos que fueron sometidos a pruebas tanto de saponificacin y la prueba de Liebermann Burchard. La prueba de SAPONIFICACION se realiz para identificar grasas, dando un resultado la formacin de jabn (obtenido de la reaccin entre cidos grasos ms la adicin de lcali), de esta manera se obtuvo un resultado positivo para esta prueba. Por otro lado, la prueba de LIEBERMANN BURCHARD se realiz para el reconocimiento de colesterol en la muestra de cerebro de res, la misma que se realiz en ausencia de agua; para esta prueba el resultado fue positivo ya que present una coloracin azul verdosa indicando la presencia de un grupo esteroide en la muestra (colesterol). VII. CUESTIONARIO 1. Describa un mtodo de reconocimiento de fosfolpidos: lecitina y cefalina. EXTRACCIN Y SEPARACIN La reaccin se basa en que el fosfato inorgnico, en medio cido, con el molibdato da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido ascrbico a azul de molibdeno, color azul verdoso. El arsenito/citrato se combina con el exceso de molibdato impidiendo su reaccin posterior con fosfatos liberados de steres lbiles, lo que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgnico libre en presencia de, por ejemplo, fosfolpidos.

PROCEDIMIENTO: Agregar 1ml de la muestra soluble de precipitado D Agregar 0,5 ml de Reactivo 1 Mezclar y esperar 30 segundos. Agregar 0,5 ml de Reactivo 2 Mezclar y esperar 30 segundos Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la presencia de fosfato unido a lecitina y cefalina en el tejido.
(Ayala y Mndez. 2005)

2. Enumere las principales funciones que cumple el colesterol. El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones: ESTRUCTURAL: el colesterol es un componente muy importante de las membranas plasmticas de los animales. Aunque el colesterol se encuentra en pequea cantidad en las membranas celulares, en la membrana citoplasmtica lo hallamos en una proporcin molar 1:1 con relacin a los fosfolpidos, regulando sus propiedades fsico-qumicas, en particular la fluidez. Sin embargo, el colesterol se encuentra en muy baja proporcin o est prcticamente ausente en las membranas subcelulares. PRECURSOR DE LA VITAMINA D: esencial en el metabolismo del calcio. PRECURSOR DE LAS HORMONAS SEXUALES: progesterona, estrgenos testosterona. PRECURSOR DE LAS HORMONAS CORTICOESTEROIDALES: cortisol y aldosterona. PRECURSOR DE LAS SALES BILIARES: esenciales en la absorcin de algunos nutrientes lipdicos y va principal para la excrecin de colesterol corporal.
(Ayala y Mndez. 2005)

3. Seale las principales aplicaciones comerciales de los esteroles de origen vegetal y animal. El aceite de girasol puede utilizarse como combustible mezclado con gasleo en motores de inyeccin indirecta o de precmara, y en motores de bajas revoluciones (barcos y generadores), sustituye totalmente en este ltimo caso al fuelleo. Puede utilizarse tambin en quemadores en los sistemas de calefaccin. En motores de inyeccin directa podra utilizarse el aceite de girasol mezclado en bajas proporciones con el gasleo, con lo que se requiere la realizacin de ensayos de larga duracin para determinar la cantidad mxima admisible. Los steres metlicos del aceite de girasol y colza (biodiesel) pueden utilizarse directamente como combustibles en cualquier tipo de motor disel. Los precios de los mismos son competitivos con los del gasleo si se establece una adecuada poltica de subvenciones para combustibles de origen vegetal. La utilizacin de biodiesel permitira la explotacin de tierras sin cultivar, tras la reforma de la Pol-tica Agraria Comunitaria, para la produccin de aceite de girasol no alimentarlo. Paralelamente, se con tribuira a la creacin de empleo rural con el consiguiente ahorro del PER. La utilizacin de estos combustibles de origen vegetal contribuira a disminuir la acumulacin de CO2 procedente de los combustibles fsiles. Dada la produccin de combustibles vegetales, su idnea aplicacin se dara en las grandes ciudades, donde el impacto del transporte automovilstico es ms acusado. Se reduciran las misiones de CO, HC, xidos de azufre y partculas

(Garca J. 2009)

4. Describa un mtodo para reconocer cerebrsidos. ANLISIS DE MONOGLYCOSYLCERAMIDES se puede hacer por de alta resolucin cromatografa en capa fina, cromatografa lquida de alta resolucin, y espectrometra de masas. HPLC de fase es ahora el mtodo estndar para la separacin de especies moleculares, a menudo despus de benzoilacin, permitiendo a los lpidos que se detectaron por espectrofotometra UV.
(Garca J. 2009)

VIII. IX.

CONCLUSIONES BIBLIOGRAFIA

BUTLER J. 2005. SOLUBILITY AND PH CALCULATIONS .Addison Wesley Publishing Company. Washington-DC. Pp1052. GARCIA J. 2009. QUMICA. LOS ELEMENTOS Y SUS REACCIONES. 2 Edicin. Editorial Revert S.A. Mxico. Pp. 206-209. AYALA Y MENDEZ. 2005. BIOMOLCULAS. Primera Edicin. Ed. EGB. Bogot- Colombia. Pp. 19-22 Nelson DL- Cox MM. Lehninger.2006. PRINCIPIOS DE BIOQUMICA. Cuarta Edicin. Ediciones Omega. Barcelona- Espaa. Pp 63-65.