Penentuan HPLC asam organik, gula, komposisi fenolik dan kapasitas antioksidan dari jus jeruk dan anggur

oranye yang terbuat dari cv Turki. Kozan

1. Abstrak Asam-asam organik, gula, komposisi fenolik dan kapasitas antioksidan jus jeruk dan anggur jeruk yang ditentukan diperoleh dari CV Kozan Turki. metode Kinerja tinggi kromatografi cair digunakan untuk mengidentifikasi dan menghitung senyawa ini. Menentukan tiga asam organik (sitrat, malat dan asam askorbat) dan tiga gula (sukrosa, glukosa dan fruktosa). Asam organik utama ditemukan sebagai asam sitrat . Berkenaan dengan gula, sukrosa hadir dalam jumlah terbesar untuk jus jeruk dan anggur. Sebanyak 13 senyawa fenolik diidentifikasi dan dihitung dalam jus jeruk dan anggur, termasuk asam hidroksibenzoat , asam hydroxycinnamic , dan flavanones . Hesperidin, narirutin dan asam ferulat adalah yang paling berlimpah senyawa fenolik dalam jus jeruk dan anggur. Kegiatan antioksidan jus jeruk dan anggur diukur dengan menggunakan DPPH (2,2-difenil-1pikrilhidrazil) assay, dan kapasitas antioksidan jus jeruk ditemukan lebih tinggi dari anggur jeruk.

2. Tujuan Menentukan asam organic, gula, komposisi fenolik, dan kapasitas antioksidan jus jeruk dan anggur jeruk yang di produksi oleh CV.Kozan dengan menggunakan HPLC. 3. Alat dan Bahan Bahan : a. Millli-Q water b. 2,2 - difenil-1-Pikril hydrazyl (DPPH ) c. Asam Askorbat d. Asam Fenolik e. Flavanones f. Jeruk g. Anggur jeruk h. Pelarut A air/ asam format (95:5)

i. Pelarut B Asetonnitril/pelarut A (60 : 40 ) Alat : a. PH meter digital b. Pompa c. Detector indeks bias d. Detector UV e. kolom HPX-87H Aminex (300 7,8 mm) f. DAD ( Diode Array Detector) 4. Cara Kerja a. Pembuatan Anggur Oranye diperoleh dari jus ekstraktor melewati finisher untuk buang bijinya dan pulp, dan 50 m L-1 SO2 ditambahkan. Jus jeruk kemudian ditransfer ke dalam dua tangki stainless steel (100 L) untuk fermentasi menggunakan ragi spontan. Fermentationwas dilakukan di duplikat pada suhu terkendali (192C). Selama beralkohol fermentasi, 145 g L-1 gula juga ditambahkan untuk mendapatkan etanol lebih tinggi tingkat. Setelah fermentasi, thewinewas memeras dengan menambahkan 50mg L-1 SO2. b. Standar Analisis Kimia Keasaman titrasi total dinilai oleh titrasi dengan natrium hidroksida (0,1 N) dan dinyatakan sebagai asam sitrat. Nilai pH diukur menggunakan pH meter digital (WTWInolab pH-L1, Jerman). Total padatan terlarut diukur sebagai Brix menggunakan refraktometer (Carl Zeiss, Jena, Jerman) [23]. Ashwas ditentukan oleh memicu sampel dalam tungku meredam pada 550 C sampai berat konstan, dan ekstrak diukur dengan metode AOAC. c. Analisis Kromatografi Cairan Asam Organik dan Gula Sebuah sistem HPLC (LC-10A HPLC Series, Shimadzu, Kyoto, Jepang) dilengkapi dengan sistem pompa, detektor indeks bias (RID-10A) untuk analisis gula, dan detektor UV / Vis (SPD-20A) dimonitor pada 210 nm, untuk analisis asam organik. Gula dan asam organik dianalisis secara bersamaan ke sebuah kolom HPX-87H Aminex (300 7,8 mm) (Bio-Rad) dan disimpan pada 55 C. Analisis kondisi digunakan adalah sebagai berikut: aliran 0,3 ml min-1, eluent0.045NH2SO4 dengan 6% asetonitril. d. Analisis Kromatografi Cair Senyawa Fenolik

Sampel disaring melalui filter 0,45 pM ukuran pori membran sebelum injeksi. Sebuah Agilent 1100 HPLC sistem (Agilent Technologies, Palo Alto CA-USA) dioperasikan oleh ChemStation NT berbasis Windows perangkat lunak digunakan. Peralatan HPLC digunakan dengan array dioda detektor (DAD). Sistem terdiri dari degasser, pompa biner dan auto sampler. Kolom yang digunakan adalah sebuah Beckman Ultrasphere ODS (Roissy CDG, Perancis): 4,6 mm x 250 mm, 5 pM dilengkapi dengan pre column 4,6 mm x 10 mm (granulometry sama). Fase gerak terdiri dari dua pelarut: A, pelarut air / asam format (95 : 5) dan B Pelarut, asetonitril / pelarut A (60 : 40). Senyawa fenolik yang dielusi dengan ketentuan sebagai berikut: 1 ml min-1 laju alir dan suhu yang ditetapkan sebesar 25 C, kondisi isokratik dari 0 sampai 10 menit dengan 0%, kondisi B gradien from 0% sampai 5% B dalam 30 menit, from5% sampai 15% B dalam 18 menit, dari 15% menjadi 25% B dalam 14 menit, dari 25% menjadi 50% B dalam 31 menit, dari 50% menjadi B 100% dalam 3 menit, diikuti dengan mencuci dan rekondisi kolom. Spektrum ultraviolet-tampak (scanning dari 200 nm sampai 600 nm) dicatat untuk semua puncak. Analyseswere rangkap tiga dilakukan untuk setiap sampel. Identifikasi senyawa fenolik yang diperoleh dengan menggunakan standar otentik dan dengan membandingkan retensi kali dan ultra-violet-terlihat spektrum dengan yang ditemukan di literatur.

whilequantification dilakukan oleh eksternal kalibrasi dengan standar. 5. Hasil Diskusi a. Komposisi Kimia dari Jus Jeruk dan Anggur Komposisi Kimia jus jeruk dan anggur terdapat di tabel 1. Hasil jus adalah 40 L/100kg. b. Gula, asam organik, komposisi fenolik dari jus jeruk dan anggur Tabel 2 menunjukkan komposisi gula, asam organik dan fenolik dari jus jeruk dan anggur, yang sesuai dengan tiga analitis ulangan. c. Komposisi Gula Suksora, glukosa dan fruktosa di tentukan sebagai komponan gula dalam jus jeruk dan anggur. Jumlah total gula adalah 120,19 g/L dan 48,78 g/L dalam jus dan anggur. Porsi utama karbonhidrat dalam buah jeruk ada tiga sampel gula :sukrosa, glukosa, dan fruktosa. Bersama-sama, mereka mewakili sekitar 80% dari total padatan larut air jeruk, dan rasio sukrosa: glukosa: fruktosa adalah umumnya sekitar 2 : 1: 1 . Rasio ini serupa

dengan sampel jus jeruk Kozan. Sukrosa berada dalam jumlah terbesar untuk jus jeruk (59,34 g/L) dan anggur ( 44,68g/L) . mencapai sekitar 49,12% jus jeruk dan 91,6% dari kadar gula total. Jus jeruk Kozan mengandung gula pereduksi dan non reduksi dengan jumlah yang sama. Kandungan gula dalam jus jeruk Kozan disepakati dengan data sblumnua : 23,7 % glukosa, 25,8 %fruktosa adan 50,5% sukrosa berdasarkan total gula dari jus jeruk 86 Florida Valencia. Rasio dari gula yang spesifik telah diusulkan sebagai indikator untuk menentukan keaslian sampel jus. d. Komposisi Asam Organik Asam organic sebagian besar padatan larutan ditemukan dalam jus jeruk yang tidak karbonhidrat/. Tiga asam organic di pisahkan dan di identifikasi dalam jus jeruk dan anggur : sitrat, malat dan asam askorbat. asam organik utama ditemukan sebagai asam sitrat dalam jus jeruk (12,66 g L-1 ) dan anggur (6,03 g L-1 ). Dilaporkan hasil untuk asam sitrat segar, jus nevelina dari tempat yang berbda adalah 8,4-12,6 g/L. Asam malat adalah asam organik kedua melimpah di jus jeruk (1,06 g L-1) dan anggur (0,34 g L-1 ). Konsentrasi terendah dari asam organik dalam anggur disbanding dengan jus dapat dijelaskan dengan kehilangan selama fermentasi. Asam sitrat dan asam malat Antalya dilaporkan oleh Karadeniz sebagai 48,8 dan 2,2 g L-1 Jus jeruk, terutama jus jeruk yang kaya akan asam askorbat, merupakan antioksidan yang penting. Konsentrasi asam askorbat merupakan indikator signifikan dari kualitas jus jeruk. Dalam penelitian kami, konsentrasi asam askorbat dalam jus jeruk dan anggur ditemukan oleh 490,1 mg L-1 dan 230,0 mg L-1. Ditemukan bahwa kandungan asam askorbat dari jus dianalisis dalam penelitian sangat mirip dengan jus jeruk Navel yang diproduksi di Australia (498 mgL-1), Meskipun lebih tinggi dari jeruk Valencia jus dianalisis dalam studi yang sama (406mg L-1) Dan di produksi di daerah Mediterania dari varietas jeruk berbeda, mulai dari 386,2 hingga 620,0 mg L-1. e. Komposisi fenolik dari jus jeruk dan anggur Sebanyak 13 senyawa fenolik diidentifikasi dan diukur dalam jus jeruk dan anggur, termasuk asam hidroksibenzoat , asam hydroxycinnamic dan senyawa flavanones. Total jumlah dari senyawa fenolik adalah 317,36mg/L dalam jus jeruk dan 162,68mg/L dalam anggur. Total kandungan dari fenolik dalam beberapa jus diperoleh dari lima citrus sinensis yang berbeda. Varietas berkisar dari 361 (Washington Navel Varietas) hingga

1147 ( varietas Moro) mg asam ferulat per liter. Menurut Gil Izquierdo dkk, jus jeruk navel perasan tangan mengandung 839 mg fenolik perliter. Dua asam hidroksi benzoate ; asam galat dan asam protocatechuic terdeteksi dalam jus jeruk dan anggur. Asam hidroksi benzoat adalah asam galat (3, 4, 5 trihydroxybenzoic asam). Asam galat adalah tanaman secara alami memiliki senyawa fenolik yang berlimpah. Lima asam hydroxycinnamic yang diidentifikasi dalam analisis ini adalah asam caffeic, asam chlorogenic, asam p-coumaric, asam ferulat, dan sinapic dilaporkan untuk jus jeruk yang tidak disimpan. Asam Sinapic (18,65 mg L-1 ) Adalah asam hydroxycinnamic kedua terbanyak dan diikuti dengan chlorogenic, caffeic, asam pcoumaric dalam jeruk jus dan anggur. Studi Rapisarda dkk menemukan bahwa asam ferulat (37,7 mg L-1 ) Adalah asam fenolik utama dalam jus Valencia. asam caffeic (2,1 mg L-1), Sinapic asam (9,0 mg L-1 ), Dan p-coumaric acid (8,0 mg L-1 ) Juga diukur. Tingkat ferulat dan asam p-coumaric dalam jus jeruk Kozan sedikit lebih rendah dari yang dilaporkan oleh Rapisarda dkk. Flavanon adalah flavonoid utama dalam varietas jeruk. Enam flavanon ; narirutin,naringin, hesperidin, neohesperidin, didymin dan apigenin diidentifikasi dalam jus jeruk dan anggur. Tabel 2 menunjukkan bahwa, dari lima flavanones, hesperidinwas yang paling berlimpah di kedua sampel. Neohesperidin adalah flavanon paling melimpah di dalam sampel. Hesperidin member rasa hambar dan karena itu tidak memberikan kontribusi rasa pada jus jeruk. Tingkat hesperidin dilaporkan di sini untuk jus jeruk (171,17 mg L-1 ) menunjukkan kesesuaian dengan yang sebelumnya dilaporkan oleh Toms-Barbern dan Clifford, 104-637 mg L-1 dan Gorinstein dkk. 122-254 mg L-1 . Laporan literatur yang tingkat hesperidin dalam jus jeruk tergantung pada metode ekstraksi, perawatan dan penyimpanan teknologi. Narirutin adalah yang kedua paling banyak flavanon (39,91 mg L-1) Dalam jus jeruk. Level Narirutin dalam jus jeruk manis telah dilaporkan pada 26,3-54,2 dan 30,0-80,4 mg L-1 dalam varietas yang berbeda. Dalam literatur rasio narirutin ke hesperidin telah diusulkan untuk pengendalian kualitas jus jeruk. Rasio yang diperoleh untuk Kozan jus jeruk adalah 0.233. Menurut karya sebelumnya jus jeruk, rasio narirutin-ke-hesperidin berkisar 0,151-0,262 Rouseff melaporkan bahwa rasio ini harus < 0.339 untuk jus jeruk yang otentik.

f. Aktifitas antioksidan jus jeruk dan anggur Dalam penelitian kami, kegiatan antioksidan jus jeruk dan anggur dievaluasi dengan menggunakan DPPH radikal bebas tes scavenging. Metode ini direkomendasikan oleh banyak penulis tes yang mudah dan akurat untuk mengukur aktivitas antioksidan jeruk jus dan buah lainnya. EC50 berbanding terbalik dengan antioksidan kapasitas senyawa, karena mengungkapkan jumlah antioksidan yang diperlukan untuk mengurangi konsentrasi radikal sebesar 50%. nilai rendah EC50 semakin tinggi aktivitas antioksidan dari senyawa. Nilai EC50 jus jeruk (0,31 mg mL-1 ) Ditemukan lebih rendah dari jeruk anggur (0,46 mg mL-1). Jus jeruk memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi yang terkandung konsentrasi senyawa fenolik yang tinggi. TEC50 adalah kebutuhan waktu untuk mencapai kondisi yang stabil untuk konsentrasi EC50. Waktu di steady state tergantung pada reaktivitas dari antioksidan dan konsentrasi yang digunakan. Efisiensi antiradikal (AE) adalah parameter baru untuk pengukuran radikal bebas dari sampel, dan itu menggabungkan EC50 dan TEC50. Nilai AE jus jeruk (30,72 x 10-3 ) Ditemukan lebih tinggi dari anggur (17,54 10-3 ). Dalam literatur, aktivitas antioksidan jus jeruk tergantung pada jenis (posisi dan jumlah hidroksil dalam molekul) dan konsentrasi senyawa fenolik, juga pada logam transisi. 6. Kesimpulan Dalam studi ini, untuk pertama kalinya, asam organik, gula, fenolik isi, dan aktivitas antioksidan dari jus jeruk dan anggur yang diperoleh dari CV. Kozan telah diperiksa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa total aktivitas antioksidan fenolik dan isi jus jeruk lebih tinggi dari anggur jeruk. Dari semua senyawa fenolik diidentifikasi dalam jeruk jus dan anggur, hesperidin, naruritin dan asam ferulat adalah zat yang paling banyak senyawa fenolik. Secara kuantitatif asam organik utama dan gula yang ditemukan sebagai asam sitrat dan sukrosa dalam sampel.