UNIVERSIDAD DE LOS ANDES.

MRIDA VENEZUELA FACULTAD DE INGENIERIA ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA DEPARTAMENTO DE QUIMICA INDUSTRIAL Y APLICADA LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL D. Canro, O. Garc a, !. G"#rr#ro. D#$#r%&nac&'n (#) P"n$o I*o*+,*$&co - )a con*$an$# (# (&*oc&ac&'n (# "n &n(&ca(or Ac&(o. Ba*#. R#*"%#n Mediante medidas espectrofotomtricas se determinan las concentraciones de la forma asociada y de la disociada de una sustancia sobre la base de que ambas formas obedecen la ley de LambertBeer y las concentraciones de las mismas son determinables, ya sea porque absorben a diferentes longitudes de onda o bien porque cumple la condicin de aditividad. Las dos formas tienen la misma absortividad a una misma longitud de onda lo que se conoce como punto isosbstico. Experimentalmente se determin midiendo absorbancias a varias longitudes de ondas, de soluciones acida, basica y neutra con indicador de a ul bromotimol. !onstruyendo el espectro de absorcin se determino que el a ul de bromotimol presenta un punto isosbestico a longitud de onda de "##$%nm y a una absorbancia de #,%$#,##%. &tili ando las expresiones del equilibrio quimico del indicador y la ley de beer se determino para el a ul de bromotimol un valor de p'a de (,#()* con una discrepancia del valor terico de #,+,-. Los mtodos de an.lisis por espectrometr/a de lu visible permiten identificar sustancias presentes en una solucin y determinar constantes de equilibrio de .cidos dbiles con bastante precisin. In$ro("cc&'n La ley de Beer, 0 1 b ! 2donde es una constante caracter/stica del soluto denominada coeficiente de extincin molar, b es la longitud recorrida por la radiacin electromagntica y c es la concentracin del soluto en la disolucin3 es una ley experimental que se 4a tratado de establecer tericamente, est. ley rige el proceso de absorcin en cualquier regin del espectro electromagntico, ya sea absorcin de radiacin visible-ultravioleta, absorcin de rayos 5, absorcin de rayos g, entre otros. La absorbancia es una propiedad aditiva, es decir, en disoluciones que contengan m.s de una especie absorbente la absorbancia total es la suma de las absorbancias individuales de cada especie absorbente ./0. La relacin es valida cuando existe una sola especie absorbente a la longitud de onda estudiada, sin embargo cuando no ocurre la relacin se modifica como se muestra en la ecuacin *. 6uponiendo que no 4ay interaccin entre las distintas especies absorbentes 2es decir, que estas sean independientes entre s/3, la absorbancia total para un sistema absorbente multicomponente %, *, +,... n, cuyas absorbancias individuales sean 0 %, 0*, 0+,....0n viene dado por7 A 1 A & 1 A/ 2 A3 2 A4 2.......... 2 An

La absorbancia de la energ/a radiante de las molculas que est.n en solucin, dependen de la forma que est.s se encuentren en equilibrio. En particular para las especies que presentan propiedades acido- base la absorcin de la lu ser. diferente si dic4a especie se encuentra protonada

o no, consecuentemente las disoluciones de especie acido-base presentar.n valores de absorbancia que depender.n del valor de p8 en equilibrio. En el caso de un indicador acido base se genera un sistema de dos especies absorbentes, as/ que la absorbancia de la solucin del indicador ser. el resultado de la contribucin de cada una de las especies de acuerdo a su concentracin en el equilibrio. .30 6e observa un punto isosbstico o un isoabsortivo cuando dos especies absorbentes en equilibrio7 59 5 e 9, tienen la misma absorbancia a una misma longitud de onda, es decir, si 5 e 9 est.n en equilibrio, para la longitud de onda del punto isosbstico la absorbancia total es independiente de las concentraciones relativas de 5 e 9. En general, para poder observar un punto isosbstico la absorbancia debe permanecer constante durante la reaccin o el cambio f/sico. En la pr.ctica nos daremos cuenta que el puntos isosbstico ser. el mismo en medio :cido, en medio B.sico y;o en medio <eutro. .30

=igura %. 0bsorbancia >s Longitud de ?ndas. El punto isosbstico puede llegar a ser una longitud de onda @til anal/ticamente ya que, a esta longitud de onda se obtiene una curva de calibracin lineal sin controlar las condiciones de la disolucin. . .40 La presencia de un punto isosbstico significa que la concentracin anal/tica total se distribuye entre solamente dos especies 28An e An-3. 6i la absorbancia y longitud de onda de un presunto punto isosbstico var/a ser. porque existe una tercera o m.s especies para la sustancia 2o indicador3 y que no se observa en los espectros. . .40 6e determinan las concentraciones de las formas .cida y b.sica de un indicador a un p8 determinado en el que ambas formas existen en concentraciones apreciables, mediante mediciones espectrofotomtricas, sobre la base que ambas obedecen la ley de LambertBeer.

Bara un indicador .cido monoplico7 HIn1HCCInD

K=

[ H ] * [ In ]
+

[ HIn]

Eomando logaritmos7 log K1logFH+GClogF In-G FHInG pK1PHClogF HIn G F InDG Heterminando la relacin logar/tmica de esta ecuacin para un p8 conocido, es posible obtener el correspondiente valor de p'. Bara ello, se obtienen los espectros de absorcin de tres soluciones que contengan la misma concentracin total del indicador a diferentes p8. &na, cuyo p8 sea tal que la forma disociada del indicador sea la especie predominante, otra en que la especie predominante sea la no disociada y la tercera solucin a un p8 intermedio en el que ambas formas se encuentren en equilibrio. .40 El punto isosbestico puede determinarsele a varios indicadores, en la practica se utili o el a ul de bromotimol. Muc4os de los colores producidos por el indicador, se producen por me cla de otros colores, en el caso del a ul de bromotimol, cuyos cambios de color se deben a las absorciones de la lu de las siguientes formas en equilibrio La aparicin del color verde en el medio de la regin, se debe a la combinacin de los colores a ul y amarillo de las formas en equilibrio entre p8 , y I. Lo mismo ocurre con las combinaciones a ul y roJo que produce una tonalidad viol.cea, a p8 elevado. .50 La medicion de la absorbancia, a diferentes valores de B4 impuesto en disolucin permite obtener el intervalo de B4 util para que este sea usado para indicar el punto final de las valoraciones. La determinacin espectrofotometrica del B4 aun se utili a para calibrar electrodos selectivos de p4 o en medios acuosos en los cuales dic4os electrodos no pueden utili arse. Bor supuesto este metodo puede emplearse para determinar no solo el pKa de los indicador acido-base, sino el pK de pares redox o compleJos como es el caso de la determinacin de EL de citocromos mitocondriales y cloroplasticos en bioquimica. La determinacin del punto isosbestico es utili ado en bioquimica clinica y quimica de los alimentos como criterio de control de calidad espectrofotometrico. .60 En esta experiencia experimental se busca principalmente determinar el punto isosbstico de un indicador, mediante varios medios 2acido, b.sico y neutro3. 0s/ como tambin calcular la constante de equilibrio del indicador.

METODOLOGIA E7PERIMENTAL Bara la determinacin del especto de absorcin del indicador en su forma acida, b.sica y neutra se prepararon soluciones de *"ml de 8!l, <a?8 9 buffer respectivamente, cada una con indicador de a ul de bromotimol. 6e verifico que el color de la solucion coincida con lo esperado y se les midi el p8 para corroborar que sea el indicado para cada sustancia.

Bara la determinacin de espectro de absorcin se 4icieron mediciones de abs para las tres soluciones utili ando un espectrofotmetro 6pectronic *# Menesys con una aprecisin de con apreciacion #,##% de absorbancia y %nm en longitud de onda . 6e reali o la calibracin del equipo utili ando como blanco agua destilada, para el aJuste de %##-E, esto para cada cambio del longitud de onda. 6e reali o el barrido para la construccin del espectro midiendo absorbancias a cada solucin a longitudes de onda desde +(" a ,N"nm. Los valores obtenidos fueron graficados y utili ados para la determinacin del punto isobestico. Bara la determinacin del p'a del indicador acido base se utili o una ecuacin que se deduce relacionando las ecuaciones de los equilibrios qu/micos y la ley del Lambert Beer, como se muestra a continuacin7

R#*")$a(o* - D&*c"*&on#* El a ul de bromotimol es un .cido dbil utili ado com@nmente como un indicador acido-base cuya estructura y reaccin de disociacin es7

=igura %. Oeaccin de disociacin del a ul de bromotimol.

Bresenta color amarillo en solucin acida 2forma no disociada3, color verde a p8 neutro y en su forma disociada a p8 alcalino es de color a ul. !on un valor de p'a de (,%. Este tipo de compuestos presentan grupos cromforos unidos a los anillos bencnicos, originalmente incoloros, que le otorgan el color. Esto se debe a que estos compuestos presentan gran cantidad de electrones capaces de absorber radiacin visible a ciertas longitudes de onda, refleJando otras longitudes correspondientes a los colores que presentan. 6e reali el espectro de absorcin de lu visible para una solucin acida 2p81%,)3 del a ul de bromotimol y se obtuvo la siguiente figura.

=igura *. Espectro de absorbancia del a ul de bromotimol en solucin .cida 2p81+3. En la figura * se puede notar que la absorbancia alcan a un m.ximo a una longitud de onda de )*"nm, a partir de esta longitud la absorbancia de la solucin cae 4asta 4acerse igual a cero. La solucin acida contiene la forma no disociada de indicador, la cual absorbe a baJas longitudes de onda, dentro del rango estudiado de lu visible, y refleJa las altas, observ.ndose que la solucin presenta coloracin amarilla. En el caso de la disolucin a p8 alcalino las longitudes de onda a las cuales absorbe la solucin del indicador tienden a ser las m.s altas dentro del rango estudiado. El espectro de absorcin se presenta en la figura siguiente.

=igura +. Espectro de absorbancia del a ul de bromotimol en solucin alcalina 2p81%*,(3. El espectro representado por la figura + presenta un m.ximo de absorbancia a una longitud de onda de ,*"nm. La absorbancia desciende 4asta )"#nm longitud en la cual se encuentra un m/nimo, y luego aumenta 4asta su m.ximo y despus la absorbancia cae 4asta alcan ar valores cercanos a cero. En este caso, en la solucin se encuentra predominantemente la especie disociada del indicador, al contrario de la solucin acida, esta absorbe longitudes de onda relativamente grandes y refleJa las m.s pequePas, encontr.ndose una disolucin de color a ul. Bor otro lado, si se estudia la absorbancia de una solucin neutra de a ul de bromotimol el espectro obtenido est. representado en la figura ). En este espectro se observan dos m.ximos de absorbancia a longitudes de onda de )*"nm y ,*"nm que corresponden con los m.ximos de los espectros de las soluciones .cida y b.sica respectivamente. Esto se debe a que en la solucin neutra se encuentra presente el indicador en sus dos formas, disociada y sin disociar 28An y An -3, por lo tanto, la solucin absorbe en ambas longitudes. 6in embargo, se puede notar que la absorbancia en estos puntos es menor que la absorbancia de las soluciones anteriormente mencionadas debido a que la concentracin de ambas especies es menor.

=igura ). Espectro de absorbancia del a ul de bromotimol en solucin neutra 2p81(3. Hebido a que la solucin a p8 ( absorbe tanto en una longitud de onda alta como en una baJa, el color verde observado se debe a que la sustancia no absorbe a longitudes de onda intermedias, correspondientes a dic4o color. 6i se grafican los tres espectros en un mismo grafico se obtiene la siguiente figura.

=igura ". Espectro de absorcin del a ul de bromotimol a distintos p8;punto isosbstico. En la figura " es posible observar con claridad que existe un punto de absorbancia y de longitud de onda espec/fico en el cual coinciden los tres espectros. Encontr.ndose que para el a ul de

bromotimol el punto isosbstico se encuentra a una longitud de onda de "##$%nm y una absorbancia de #,%$#,##%. En el punto isosbstico, la absorbancia sigue la ley de Beer, obtenindose la siguiente ecuacin7

Hado que el paso ptico 2b3 es el mismo en todas las experiencias y la concentracin total del indicador es la misma en todas las soluciones estudiadas, los coeficientes de extincin molar de las formas .cida y b.sica del indicador son iguales a la longitud de onda del punto isosbstico. He querer calcular la concentracin del indicador por espectrometr/a, se utili ar/a la longitud de onda del punto isosbstico, ya la absorcin en este punto es independiente del p8, por lo que variaciones en el mismo no afectar/a la medida reali ada. Los mtodos espectromtricos permiten determinar la constante de disociacin del indicador, obtenindose un valor promedio de p'a de (,#()* con una discrepancia del valor terico de #,+,-. En la tabla de los anexos se pueden apreciar los distintos valores de p'a calculados a las distintas longitudes de onda estudiadas, encontr.ndose que la mayor discrepancia con respecto al valor terico se obtuvo en la longitud de onda correspondiente al punto isosbstico, lo cual puede ser debido a que en este punto las diferencias entre las absorbancias son muy pequePas, tienden a #. Lo mismo ocurre a las longitudes de onda +(" y ,N#nm. Mientras que a longitudes de onda en las cuales las absorbancias son distintas, se obtuvieron los valores de p'a m.s cercanos a la terica. 6in embargo, los valores de discrepancia m.s altos encontrados no superan el *-, lo que comprueba la confiabilidad del los resultados obtenidos por an.lisis espectromtricos.

Conc)"*&on#* Los espectros de absorcin de una solucin de un acido dbil, como lo es el a ul de bromotimol, presenta distintos comportamientos dependiendo del p8 del medio. ?btenindose unas longitudes de onda con grandes diferencias de absorbancia y otras

donde las absorbancias tienden a ser iguales, lo que ocurre en el punto isosbstico. Este comportamiento es caracter/stico de compuestos que presentan equilibrios entre dos especies.

El punto isosbstico del a ul de bromotimol se encuentra a una longitud de onda de "##$%nm y una absorbancia de #,%$#,##%.

Los mtodos de an.lisis por espectrometr/a de lu visible permiten identificar sustancias presentes en una solucin y determinar constantes de equilibrio de .cidos dbiles con bastante precisin. ?btenindose para el a ul de bromotimol un valor de p'a de (,#() con una discrepancia del valor terico de #,+,-.

6e comprueba la existencia del punto isosbestico, en el cual a una longitud de onda la absorbancia es constante independientemente de p8.

R#8#r#nc&a* +&+)&o9r:8&ca* ./0 6Koog y 8oller. 2*##%3 Brincipios de 0n.lisis Anstrumental. McMraQ-8ill Anteramericana de EspaPa, 6.0.&. Madrid, EspaPa. !apitulo %). B.gina +,N R +(#. .30 0leJandro Bea a. 2%NNI3. Espectrometr/a de lu &>;>A6 y Equilibrio qu/mico7 Bunto Asosbestico. &niversidad <acional de Mexico. =acultad de Su/mica. .40 QQQ.uniovi.es;S=0nalitica;trans;0nalisisAnstrum;EEM0-*#".ppt . Consultada el 19 de marzo del 201 .604ttp7;;depa.pquim.unam.mx;amyd;arc4ivero;Bresentacion!L06E7TBuntoTAsosbesticosT***+.pdf. consultada el %N de enero del *#%). .50 4ttp7;;QQQ.4eurema.com;SMI.4tm. !onsultada el %N de mar o del *#%).

An#;o*.

Eabla %. Hatos de absorbancia del a ul de bromotimol a distintas longitudes de onda y p8. longitud +(" )## )*" )"# )(" "## "*" ""# "(" ,## ,*" ,"# ,N" 0 p8 %,) 0 p8 ( 0 p8 %*,( #,%,()N% #,*##,"N)"% #,%(+N*"%N( #,*))%*" #,*"N,+(+%% #,%I#)",#,) #,*N*)+ #,*))%*"%)) #,#N,N%##%+ #,*,(,#, #,**%I)I(" #,#,""#%")N #,%I(#I( #,%,%%"#N#N #,#N%"%)NI% #,%#*+(+ #,%#(N#"+N( #,%%+"#N*(" #,#"#,% #,%)*,,("#) #,%,()N%#I( #,#*,I(* #,*#(,#I+%% #,+(,("#(% #,##I(() #,*I+NN,,", #,"**I(I()" #,#%+**I #,+I(*%,%)+ #,,NIN(###) #,##I(() #,+N(N)###N #,(*%*),+NN #,#***(, #,*))%*"%)) #,)*#*%,)#+ #,%)I()* #,%+,,((%) #,%%+"#N*("

Eabla *. >alores de la constante de disociacin del a ul de bromotimol calculadas a distintas longitudes de onda. 0ac #,%,()N%#I( #,*))%*"%)) #,*N*)*NI*) #,*,(,#,*) #,%I(#I,,)+ #,%#*+(*N#N #,#"#,#NNN+ #,#*,I(*%), #,##I((+N*) #,#%+**I*,, #,##I((+N*) #,#***(,+N" #,%)I()%,"% 0base #,%(+N*"%N( #,%I#)",#,) #,#N,N%##%+ #,#,""#%")N #,#N%"%)NI% #,%%+"#N*(" #,%,()N%#I( #,+(,("#(% #,"**I(I()" #,,NIN(###) #,(*%*),+NN #,)*#*%,)#+ #,%%+"#N*(" 0neu #,*##,"N)" #,*"N,+(+% #,*))%*"%) #,**%I)I(" #,%,%%"#N% #,%#(N#") #,%)*,,(" #,*#(,#I+% #,*I+NN,,, #,+I(*%,%) #,+N(N)##% #,*))%*"%) #,%+,,((%) Bromedio p'a (,)I+N,+*" (,"++,*(N% (,)*IN+)I* (,##"",I%% ,,)+#I#"*, ,,N(%*#()+ ,,N+I)NN*N ,,N*#N")+* ,,N%N)(N+ ,,INN,I#I% (,*I++(,*I (,#()%N#,% 'a +,*I%*+E-#I *,N*,,,E-#I +,(*))IE-#I N,I(*,%E-#I +,(#I)(E-#( %,#,I")E-#( %,%"*%+E-#( %,%NN,+E-#( %,*#+(%E-#( %,*"NI"E-#( ",*#()+E-#I I,)*N,"E-#I

Eabla +. !onstante de disociacin promedio del a ul de bromotimol. <a =ro%#(&o I,)*N,"E-#I =<a =ro%#(&o (,#()%N#,% D&*cr#=anc&a > #,+,