Anda di halaman 1dari 10

Identifikasi Escherichia coli Pada Sampel Urin Hari/Tanggal Hari Ke-1: 28 Mei 2013 Hari Ke-2: 29 Mei 2013

Hari Ke-3: 30 Mei 2013 Tujuan Praktikum Memahami gambaran koloni Escherichia coli pada media MC dan media selektif lainnya dan memahami ara identifikasi serta isolasi Escherichia coli. Teori Dasar !dentifikasi dan determinasi s"at" biakan m"rni bakteri yang diperoleh dari hasil isolasi dapat dilak"kan dengan ara pengamatan sifat morfologi koloni# morfologi sel bakteri# peng"$ian sifat-sifat fisiologi dan biokimianya% &ert"mb"han bakteri di alam dipengar"hi oleh beberapa faktor l"ar seperti s"sbtrat# pert"mb"han # pH# temperat"r# dan bahan kimia% 'akteri yang nampak dapat memiliki morfologi yang sama# nam"n keperl"an n"trisi dan persyaratan ekologinya berbeda% ( !rianto #200)*% 'eberapa media dib"at oleh ahli mikrobiologi "nt"k membedakan mikroorganisme# kelompok media biakan ini diseb"t dengan media selektif dan media diferensial% Media selektif adalah media biakan yang mengand"ng paling sedikit sat" bahan yang menghambat perkembangbiakan mikroorganisme yang tidak diinginkan dan membolehkan perkembangbiakan mikroorganisme tertent" yang ingin di isolasi% +edangkan media diferensial dib"at agar dapat membedakan kelompok mikroorganisme tertent" yang t"mb"h pada media biakan% Media diferensial ini biasanya mengand"ng bahan kimia yang dapat dig"nakan oleh kelompok mikroorganisme tertent"% ,pabila beberapa mikroorganisme t"mb"h pada media diferensial# maka dapat dibedakan kelompok mikroorganisme berdasarkan per"bahan pada media biakan ata" penampilan koloninya ( -ay# 199. *% Karakteristik mikroorganisme dapat dilak"kan dengan beberapa metode seperti pengamatan mikroskopik koloni# pe/arnaan mikroba "nt"k mengetah"i penampakan mikroskopik sel ma"p"n membedakan golongan-golongan mikroorganisme# serta karakteristik dengan serangkaian "$i-"$i biokimia yang men erminkan akti0itas metabolisme

en1imatik mikroorganisme% 2eaksi-reaksi biokimia bagi mikroorganisme dapat dikatakan sebagai sidik $ari biokimia (bio hemi al fingerprints*# sebagaimana sidik $ari pada man"sia yang men$adi pembeda antara sat" orang dengan orang lainnya% +at" spesies mikroba akan memiliki 3sidik $ari4 biokimia ata" karakter biokimia identitas yang berbeda dengan spesies mikroba lainnya ( -ay# 199. *% 5s heri hia oli (5% oli* mer"pakan salah sat" spesies bakteri 6ram negatif% 'akteri ini hid"p pada sal"ran pen ernaan# ata" dikenal dengan bakteri 5nteroba teri iae (-anin# 2007*% 5s heri hia oli mer"pakan salah sat" spesies gen"s 5s heri hia yang bersifat 6ram negatif# fak"ltatif anaerob# tidak berspora# motil# berbent"k batang pendek (kokobasil* "k"ran 0#.-0#) g 8 1#. g% +e ara normal hid"p dalam sal"ran pen ernaan he/an dan man"sia% 5s heri hia oli t"mb"h baik pada temperat"r 3)9C tetapi $"ga dapat t"mb"h pada s"h" 1:9C- .:9C% Koloni berbent"k b"lat emb"ng# perm"kaan li in dengan pinggiran rata dan dapat t"mb"h s"b"r pada biakan n"trient agar (;a0is dkk%# 1987*% +erta motil (sel-selnya peritrik"s# yait" flagela se ara merata tersebar disel"r"h perm"kaan sel* dan ada $"ga yang non motil% Ciri- iri biokimia/inya adalah banyak sekali ter$adi per"bahan pada s"bstrat% Media yang dig"nakan "nt"k reaksi biokimia adalah : a% <riple +"gar !ron ,gar (<+!,* Media ini terdiri dari 0#1= gl"kosa# 1 = s"krosa# 1 = laktosa% >erri s"lfat "nt"k mendeteksi prod"ksi H2+# protein dan indi ator phenol red% +almonella bersifat alkali a id# alkali terbent"k karena adanya proses oksidasi dekarboksilasi protein membent"k amina yang bersifat alkali dengan adanya phenol red maka terbent"k /arna merah# 5s heri hia oli memfermentasi gl"kosa# s"krosa dan laktosa yang bersifat asam sehingga terbent"k /arna k"ning pada dasar dan lereng dan menghasilkan gas% (,smil# 2011* b% +"lf"r !ndol Motility (+!M* Media +!M adalah perbenihan semi solid yang dapat dig"nakan "nt"k mengetah"i pembent"kan H2+# indol dan motility dari bakteri% 5s heri hia oli membent"k indol dan motility positif% (,smil# 2011*

% Citrate 'akteri yang memanfaatkan sitrat sebagai s"mber karbon akan menghasilkan natri"m karbonat yang bersifat alkali# dengan adanya indi ator brom thymol bl"r menyebabkan ter$adinya /arna bir"% &ada 5s heri hia oli tidak memanfaatkan sitrat# sehingga pada penanaman media sitrat hasilnya negatif% (,smil# 2011* d% ?rea 'akteri tertent" menghidrolisis "rea dan membent"k ammonia dengan terbent"knya /arna merah karena adanya indi ator phenol red# 5s heri hia memberikan hasil negatif karena 5s heri hia membent"k ammonia% (,smil# 2011* e% Metil 2ed Media ini bert"$"an "nt"k mengetah"i kemamp"an dari beberapa bakteri yang memprod"ksi asam sebagai hasil fermentasi dari gl"kosa dalam media ini# yang dapat dit"n$"kkan dengan penambahan indi ator metal red% 5s heri hia oli memprod"ksi asam k"at sehingga pada penambahan lar"tan metal red akan terbent"k /arna merah% (,smil# 2011* f% @oges proska"er 'akteri tertent" dapat memprod"ksi a etyl methyl arbinol dari fermentasi gl"kosa yang data diketah"i dengan penambahan lar"tan 0oges proska"er# 5s heri hia oli tidak memprod"ksi a etyl metal arbinol sehingga penanaman pada media ini memberikan hasil negatif% (,smil# 2011* g% >ermentasi karbohidrat Media ini berf"ngsi "nt"k melihat kemamp"an bakteri memfermentasikan $enis karbohidrat# $ika ter$adi fermentasi maka terlihat /arna k"ning karena per"bahan pH men$adi asam% 5s heri hia oli memfermantsi gl"kosa men$adi asam dan gas# memfermentasi laktosa# s"krosa# maltosa dan mannitol dengan ata" tanpa gas% (,smil# 2011* Keterangan ini memberikan ara- ara dasar "nt"k membedakannya dengan yang lain% Habitatnya pada lingk"ngan aA"atik# tanah# makanan# air seni dan tin$a (&el 1ar# 1987*% oli pada media "rea oli tidak menghidrolisis "rea dan tidak

5s heri hia oli dapat dim"snahkan dengan pendinginan (s"h" es* dalam /akt" 120 menit% (;a0is dkk%# 1987*% &ada media differential dan selektif (+oemarno# 2000*: 'lood ,gar &late : Koloni sedang# ab" B ab"# smooth# keeping# haemolytis ata" anhaemolytis Ma Conkey : Koloni sedang# merah bata ata" merah t"a# metalli # smooth# keeping ata" sedikit emb"ng 5M' ,gar : Koloni sedang# smooth# keeping kehi$a" B hi$a"an# metali 5ndo ,gar : Koloni besar# b"lat# smooth# mera B merah t"a# metali (+oemarno#2000*% 5s heri hia oli mer"pakan bagian dari mikrobiota normal sal"ran pen ernaan% 5s heri hia oli dalam "s"s besar bersifat patogen apabila melebihi dari $"mlah normalnya% 6al"r-gal"r tertent" mamp" menyebabkan peradangan selap"t per"t dan "s"s (gastroenteritis*% 'akteri ini men$adi patogen yang berbahaya bila hid"p di l"ar "s"s seperti pada sal"ran kemih# yang dapat mengakibatkan peradangan selap"t lendir (sistitis* (&el 1ar dan Chan# 1988*% Alat, Bahan, dan Metode Alat Ca/an petri# ink"bator# ose b"lat dan ose $ar"m# pembakar spirt"s# rak tab"ng# tab"ng d"rham# tab"ng reaksi# tiss"e% Bahan ,lkohol )0=# kertas label# KCH .0=# Mac Conkey Agar (MC,*# media g"la-g"la air (gl"kosa# laktosa# maintol# s"krosa*# media M2 (Methyil Red*# media +!M (Sulfit Indol Motility*# media +C (Simmons Citrate*# media "rease# media @& (Voges Proskauer*# reagen Ko0aks# reagen M2#sampel "rin# Triple Sugar Iron Agar (<+!,*# D-naftol% Metode Metode yang dig"nakan pada praktik"m ini adalah metode streak plate# metode agar miring goresan# metode t"s"kan agar tegak# dan metode ad"kan pada medi"m agar air%

Hasil Pengamatan Hari &ertama : !solasi pada media MC Hari Ked"a : Ta el !" Hasil !solasi pada Media +elektif Eo% 1 2 3 . : 7 Hari Ketiga : Ta el #" Hasil &engamatan ?$i 'iokimia Eo% 1 Eama ?$i 6"la-g"la air : 6l"kosa &engamatan fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : tidak ter$adi per"bahan% 6as : menghasilkan sedikit gelemb"ng% ter$adi per"bahan /arna media dari k"ning men$adi merah setelah ditambahkan reagen M2% <idak terbent"k in in merah ke oklatan men$adi "ng" setelah ditambahkan D-naftol dan KCH .0=% <idak terbent"k /arna hitam% <erbent"k in in merah setelah ditambahkan reagen ko0aks% ,danya pergerakkan bakteri ke perm"kaan% -ereng : ber"bah dari merah men$adi k"ning Hasil (GH-* G Ciri Koloni : 'ent"k ?k"ran Farna 5le0asi &inggiran Ciri khas lainnya Media : MC '"lat 1-3mm Merah m"da emb"ng rata &erm"kaan kering

-aktosa

Manitol

+"krosa 2 M2

G G

@&

+!M

G G G

<+!,

7 ) Pem ahasan

+C ?rease

;asar : ber"bah dari merah men$adi k"ning H2+ : tidak terbent"k /arna hitam 6as (G* : terbent"k gas <idak ter$adi per"bahan <idak ter$adi per"bahan

G -

&ada pengamatan ini dig"nakan berbagai ma am medi"m yait" medi"m tegak# medi"m air# medi"m agar miring# dan medi"m a/an petri% Masing-masing medi"m yang dig"nakan memberikan hasil yang berbeda-beda /ala"p"n spesies yang dig"nakan sama% Hal terseb"t berkaitan dengan iri khas dan sifat masing-masing bakteri dan medi"mnya# medi"m yang lembab memiliki bent"k koloni yang berbeda dengan medi"m kering (Clifton#19:8*% &ada pengamatan koloni bakteri pada medi"m MC dengan metode streak plate didapatkan koloni dengan bent"k b"lat# "k"ran 1-3mm# /arna koloni merah m"da dengan ele0asi emb"ng dan pinggiran koloni yang rata serta perm"kaan koloninya kering% Koloni E. coli pada media Ma Conkey : koloni sedang# merah bata ata" merah t"a# metalli # smooth# keeping ata" sedikit emb"ng (+oemarno# 2000*% &ada pengamatan medi"m air g"la-g"la laktosa# gl"kosa# manitol# /arna akhir medi"m adalah k"ning dan terbent"k gas sehingga men"n$"kkan hasil positif# sedangkan pada medi"m s"krosa /arna akhir pada medi"m tidak ter$adi per"bahan /arna tetapi hasilnya positif karena terbent"k gas dari tab"ng d"rham% ,danya per"bahan /arna pada medi"m yang berisi biakan bakteri sampel yang memb"ktikan bah/a bakteri terseb"t memp"nyai en1im "nt"k meng"bah str"kt"r g"la men$adi prod"k fermentasi% Media g"la-g"la berf"ngsi "nt"k melihat kemamp"an bakteri memfermentasikan $enis karbohidrat# $ika ter$adi fermentasi maka terlihat /arna k"ning karena per"bahan pH men$adi asam% Escherichia coli memfermantsi gl"kosa men$adi asam dan gas# memfermentasi laktosa# s"krosa# maltosa dan mannitol dengan ata" tanpa gas% (,smil# 2011* &ada medi"m M2 setelah ditambahkan reagen M2 /arna akhir medi"m men$adi merah% Hal ini men"n$"kan adanya fermentasi asam amp"ran% Media M2 bert"$"an "nt"k mengetah"i kemamp"an dari beberapa bakteri yang memprod"ksi asam sebagai hasil fermentasi dari gl"kosa dalam media ini# yang dapat dit"n$"kkan dengan penambahan indi ator metal red% Escherichia coli memprod"ksi asam k"at sehingga pada penambahan lar"tan metal red akan terbent"k /arna merah% (,smil# 2011*

&ada medi"m @& setelah ditambahkan D-naftol dan KCH .0= tidak terbent"k in in merah ke oklatan men$adi "ng"# hal ini men"n$"kan bah/a bakteri ini tidak dapat memfermentasikan 2#3-b"tanadiol% 'akteri tertent" dapat memprod"ksi a etyl methyl arbinol dari fermentasi gl"kosa yang data diketah"i dengan penambahan lar"tan 0oges proska"er# Escherichia coli tidak memprod"ksi a etyl metal arbinol sehingga penanaman pada media ini memberikan hasil negatif% (,smil# 2011* &ada pengamatan "$i +!M bakteri ini tidak menghasilkan gas Hidrogen +"lfit (H 2+* karena tidak terbent"k /arna hitam% Hasil "$i indol positif karena terbent"k lapisan ( in in* ber/arna merah pada perm"kaan# artinya bakteri ini membent"k indol dari tryptopan sebagai s"mber arbon# yang dapat diketah"i setelah menambahkan reagen ko0aks% Hasil "$i mortility positif ter$adi pergerakan bakteri ke perm"kaan karena pada bekas t"s"kan tidak terdapat adanya bakteri% 'akteri E. coli motil (sel-selnya peritrik"s# yait" flagela se ara merata tersebar disel"r"h perm"kaan sel* dan ada $"ga yang non motil (&el 1ar# 1987*% Media +!M adalah perbenihan semi solid yang dapat dig"nakan "nt"k mengetah"i pembent"kan H2+# indol dan motility dari bakteri% Escherichia coli membent"k indol dan motility positif% (,smil# 2011* +elan$"tnya pada pengamatan medi"m agar miring# pada "$i <+!, didapatkan hasil lereng k"ning# dasar k"ning# H2+ negatif dan menghasilkan gas% Hal ini men"n$"kan bah/a bakteri terseb"t mamp" memfermentasikan 3 ma am g"la yait" laktosa# gl"kosa dan s"krosa sehingga &H nya men$adi asam dan menghasilkan /arna k"ning% Media <+!, terdiri dari 0#1= gl"kosa# 1 = s"krosa# 1 = laktosa% >erri s"lfat "nt"k mendeteksi prod"ksi H +# protein dan indi ator phenol red% Escherichia coli memfermentasi gl"kosa# s"krosa dan laktosa yang bersifat asam sehingga terbent"k /arna k"ning pada dasar dan lereng dan menghasilkan gas% (,smil# 2011* &ada "$i +C tidak terlihat adanya per"bahan /arna medi"m dari hi$a" men$adi bir" yang menandakan bah/a bakteri terseb"t tidak mengg"nakan sitrat sebagai sat"-sat"nya s"mber karbon dan energi% 'akteri yang memanfaatkan sitrat sebagai s"mber karbon akan menghasilkan natri"m karbonat yang bersifat alkali# dengan adanya indi ator brom thymol bl"r menyebabkan ter$adinya /arna bir"% &ada Escherichia coli tidak memanfaatkan sitrat# sehingga pada penanaman media sitrat hasilnya negatif% (,smil# 2011*

&ada "$i ?rease men"n$"kan hasil negatif karena tidak ter$adi per"bahan /arna dari orange men$adi merah% 'akteri tertent" menghidrolisis "rea dan membent"k ammonia dengan terbent"knya /arna merah karena adanya indi ator phenol red# Escherichia coli pada media "rea memberikan hasil negatif karena 5s heri hia oli tidak menghidrolisis "rea dan tidak membent"k ammonia% (,smil# 2011* ;ari hasil pengamatan dapat disimp"lkan bah/a bakteri yang diidentifikasi ialah bakteri E. coli karena terdapat kesamaan antara teori dasar dengan hasil pengamatan# $esimpulan 'erdasarkan hasil pengamatan yang telah dilak"kan pada sampel "rin no% 9 didapatkan 100= men"n$"kkan bakteri E. coli% Daftar Pustaka ,smil# 2011# 'akteriologi !!# http:HHasmil-artihid"p%blogspot% omH2011H03Hbakteriologi-iiteori-$"r"san-analis%html (diakses 2 I"ni 2013* ;a0is# '%;%# 2% ;"lbe o# H%E 5isen and 6insberg (1987*% Mi robiokogy% 5d% .# -ipo ott Company# &hiladelphia% !rianto# K# 200)# Mikrobiologi% Iilid 1% 'and"ng: C@% Jrama Fidya% -anin# ! ( 2007* 5s heri hia oli% http: /ekipedia%orgH2008H02H03% -ay# 'ibiana F% 199.% ,nalisis Mikroba di -aboratori"m%Iakarta: &<% 2a$a 6rafindo &ersada% &el 1ar# M% I% dan Chan# 5% C% +% 1988% ;asar-dasar Mikrobiologi% ?! &ress% Iakarta% &el 1ar# M% 1987% ;asar-;asar Mikrobiologi !% 5rlangga : Iakarta%

%ampiran

&am ar !" (Kiri* Koloni 'akteri pada media MC% (<engah* ?$i ?rease% (Kanan* "$i +!M% +"mber : ;ok"mentasi &ribadi

(a*

(b*

( *

(d*

&am ar #" Hasil ?$i 6"la-6"la" (a* 6l"kosa% (b* -aktosa% ( * Manitol% (d* +"krosa% +"mber : ;ok"mentasi &ribadi

(a*

(b*

( *

(d*

&am ar '" (a* ?$i M2# (b* ?$i @&# ( * ?$i +C# (d* ?$i <+!, +"mber : ;ok"mentasi &ribadi