Enzymologie-5

Inhibition de lactivit enzymatique

Biochimie : Stryer, chap. 8)

R. Hienerwadel, 2013

(Cintique enzymatique : Cornish-Bowden et al.

E I

Kd
@

EI

avec

Kd

E I k Af f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f @ 1 @ A K i constante d'inhibition k1 EI

A @ A

Fig. 5-1

Schma de raction de linhibition rversible: KA kP

E + A + I Ki

EA + I Ki

E + P

EI + A III)

KA

EAI

kP

EI + P

Fig. 5-2

Modes de linhibition rversible

Substrat

Inhibiteur comptitif

Inhibiteur incomptitif Substrat Inhibiteur non comptitif

Substrat

A)

B)

C)

Enzymologie-5

R. Hienerwadel, 2013

Fig. 5-3

Equation de Michealis - Menten en presence d'un inhibiteur : V A A max f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f v app @ A Km A

Fig. 5-4
app

@ A

A) Inhibition comptitive

Fig. 5-5

Remarques i) Schma de raction de linhibition comptitive KA kP E + P

E + A + I Ki

EA

EI
Fig. 5-6

iv)

Enzymologie-5

R. Hienerwadel, 2013

Inhibiteur comptitif : V max V max Km V K

app f f f f f f f f f f f f f max app m app app

@ Ai I f f f f f f f f k K mj1

Ki

V f f f f f f f f f f f f f f f max K f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f m f f@ Ag I f f f f f f f f 1 f Ki

Fig. 5-7

v)

([E] = [EI])

Fig. 5-8

vi)

Dtermination exprimentale de Vmax et Kmapp

a)

Fig. 5-9

b)

Enzymologie-5 0.8 0.7 1/v 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0

R. Hienerwadel, 2013

V max

1 f f f f f f f f f f f f f

vii) Dtermination de Ki a)

Km

1 f f f f f f f f f f f f f
app

Fig. 5-10

Fig. 5-11

b) Mthode de Dixon

Fig. 5-12

B)

Enzymologie-5

Inhibition incomptitive (anti-comptitive, uncompetitive)

R. Hienerwadel, 2013

i) Schma de raction E + A KA EA + I kP E + P

Ki = Ki ( et Ki ne sont pas dfinies)

Fig. 5-13

ii)

EAI
Inhibiteur incomptitif V max
app

V V f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f max max @ A @ A I I f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f 1 f 1 f AK i K i. K K f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f m m @ A @ A I I f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f 1 f 1 f AK i K i.

Km

app

V f f f f f f f f f f f f f V f f f f f f f f f f f f f max max app Km Km

app

Fig. 5-14

Km

Fig. 5-15

Km

app

Enzymologie-5

iii)

R. Hienerwadel, 2013

[I]2 > [I]1 [I]1 sans inhibiteur

Fig. 5-16

iv)

Dtermination de A K i Q K i . (

V max

1 f f f f f f f f f f f f f
app

Fig. 5-17

C)

Inhibition non comptitive i) Schma de raction E + A + I Ki KA KA EA + I Ki kP E + P

EI + A

EAI

Enzymologie-5

R. Hienerwadel, 2013

Fig. 5-18

ii)
Inhibiteur noncomptitif V max Km
app app

V f f f f f f f f f f f f f f f f max
Ki
@ A I f f f f f f f f f

Km
V f f f f f f f f f f f f f f f max Ki

V K f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f max m app f@ Ag Km I f f f f f f f f 1 f
app

Fig. 5-19

Fig. 5-20

iii) Dtermination de K i par graphique de Dixon

V max

1 f f f f f f f f f f f f f f f
app

-Ki

Fig. 5-21

D) i)

Enzymologie-5

Linhibition mixte Schma de la raction E + A + I Ki

A KA

R. Hienerwadel, 2013

KA

EA + I
Ki

kP

E + P

EI + A

EAI

Fig. 5-22

ii)
v
@ A V A Af max f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f @ A g @ Ag @ A I I f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f f

AA 1

AK i

K mA 1

Ki

Fig. 5-23

iii)

Graphique de Lineweaver-Burk en fonction de

[I]3 [I]2 [I]1

>1

Fig. 5-24
[I]3

<1

[I]2 [I]1

Fig. 5-25

iv)

Enzymologie-5

Dtermination de A K i et de K i

R. Hienerwadel, 2013

Fig. 5-26

Rsum : Reprsentations graphiques des diffrentes modes dinhibition I) inhibition comptitive

v
V max V max
app

Enzymologie-5

R. Hienerwadel, 2013

10

1/v

0.5 AV max
[A]

1 /V max Km K
app m

@1/Km

1/[A]

II)

inhibition incomptitive
v 1/v

[A]

1/[A]

III) inhibition noncomptitive

v 1/v

=1
[A] 1/[A]

1/v

IV) inhibition mixte

v >1
1/[A]

[A]

<1
1/[A]

Fig. 5-27