Peran teknologi asam deoksiribonukleat dalam kedokteran gigi forensik

Pankaj Datta dan Sonia Sood Datta 1

Penulis Informasi Hak Cipta dan Lisensi Informasi

Abstrak Dalam beberapa tahun terakhir, Deoxyribonucleic Acid (DNA) metode analisis telah diterapkan untuk kasus-kasus forensik. Perbandingan catatan forensik gigi telah digunakan untuk identifikasi manusia dalam kasus di mana kerusakan aringan tubuh atau kontak yang terlalu lama terhadap lingkungan telah membuat cara lain identifikasi praktis, yaitu, setelah terkena kebakaran atau bencana massal. !igi memainkan peran penting dalam identifikasi dan kriminologi, karena karakteristik yang unik dan tingkat yang relatif tinggi perla"anan fisik dan kimia. Penggunaan tes profil DNA forensik di kedokteran gigi mena"arkan perspektif baru dalam identifikasi manusia. DNA bertanggung a"ab untuk menyimpan semua materi genetik dan unik untuk setiap indi#idu. $es DNA saat ini tersedia memiliki keandalan yang tinggi dan diterima sebagai bukti hukum di pengadilan. Artikel ini memberikan gambaran e#olusi teknologi DNA dalam beberapa tahun terakhir, menyoroti pentingnya dalam kasus penyelidikan forensik. Kata kunci: DNA profiling, forensik kedokteran gigi, identifikasi manusia, gigi Pengantar %orensik kedokteran gigi memainkan peran penting dalam identifikasi manusia dalam bencana massal, terutama di kebakaran, ledakan, tubuh membusuk atau badan skeletoni&ed, ketika ada sedikit bahan yang tersisa untuk melakukan identifikasi #isual. 'ni telah menyebabkan dokter gigi beker a dengan tim in#estigasi forensik untuk men adi lebih akrab dengan teknologi biologi molekul baru. ( ) * +encana identifikasi korban tradisional bergantung pada upaya mana ante-mortem informasi dari orang hilang dibandingkan dengan data postmortem dari orang-orang mati. (,* -ika ante-mortem data tidak tersedia maka identifikasi yang tepat men adi sulit dan hanya sistem DNA profiling yang dapat mengungkapkan identitas sebenarnya dari seseorang. Pencocokan DNA diekstraksi dari gigi dari seorang indi#idu tak dikenal dengan DNA diisolasi dari dikenal ante-mortem sampel, seperti, disimpan, sikat gigi darah, sikat rambut, pakaian, smear ser#iks, biopsi, untuk orang tua atau saudara adalah prosedur biasa di DNA analisis (. . * Artikel ini menya ikan tin auan literatur tentang analisis DNA untuk identifikasi manusia, dan membuat gambaran e#olusi teknologi ini, menyoroti pentingnya biologi molekuler dalam kasus penyelidikan forensik. Metodologi /ntuk ulasan ini, artikel yang diidentifikasi oleh pencarian pada database elektronik seperti database Pubmed dan 01+A20, dari tahun )345 hingga -uni ,6)). 'stilah pencarian berikut digunakan7 8bubur !igi dan analisis DNA8 8DNA finger printing di forensik

kedokteran gigi8, 8!igi dan analisis DNA8,, 8DNA isolasi dan amplifikasi metode8, 8%orensik DNA 1engetik8. Latar belakang 1anusia dapat diidentifikasi dengan pemeriksaan DNA sekuens. 2etiap sel indi#idu memba"a salinan DNA. 2etiap manusia ditandai berdasarkan urutan DNA yang unik, karena daerah hiper#ariabel DNA, yang khusus bagi seorang indi#idu. /rutan pasangan basa (bp) dalam DNA dari setiap indi#idu berbeda kecuali pada kembar identik. 9eunikan ini disebabkan daerah intron dari DNA, yang mengandung urutan yang ,6 - )66 bp pan angnya, dan diulangi pada lokasi yang berbeda (lokus) di sepan ang kromosom, seperti A!A:$A!A:A$$ -. A!A$$A!!:A$$, yang disebut polimorfisme urutan ( ; * $he polimorfisme pan ang seperti (AA$!) (AA$!) (dua ulangan) dan (AA$!) (AA$!) (AA$!) (tiga ulangan) yang disebut sebagai 8mengulangi tandem pendek8 (2$<), yang digunakan dalam identifikasi forensik. ( ; , 5 * -effreys et al, (. = * pada tahun )345, menciptakan probe molekuler radioaktif yang bisa mengenali daerah sangat ber#ariasi dari DNA (minisatellites dalam genom manusia) dan dengan demikian menentukan pola tertentu dari masing-masing indi#idu. >okus hiper#ariabel yang dibentuk oleh ulangi tandem urutan oligonukleotida (,-46 bp). $ergantung pada ukuran mereka, lokus dinominasikan sebagai #ariabel umlah mengulangi tandem (?N$<) atau minisatellites, 3-46 pb, dan 2$< (short tandem repeats) atau mikrosatelit, , sampai @ bp (. ) * 1etode forensik yang paling umum untuk mengkarakterisasi ?N$<s pertama kali dianalisis menggunakan hibridisasi 2outhern. Analisis 2$< dilakukan dengan mengekstraksi DNA nuklir dari sel-sel bunga. DNA ini diperkuat dengan menggunakan polymerase chain reaction (P:<) dan diu i dengan elektroforesis gel atau elektroforesis kapiler. /rutan ini berulang diberi nama sidik ari DNA atau mengetik DNA (profiling) seperti yang sekarang dikenal. Profil DNA adalah sistem DNA forensik standar yang digunakan dalam identifikasi manusia, ker a kasus pidana, serta pengu ian paternitas, di seluruh dunia (. @ * A"alnya, masyarakat forensik digunakan pengu ian ?N$<, tetapi metode ini memerlukan se umlah besar bahan dan memiliki hasil kualitas rendah, terutama bila hanya se umlah kecil sampel bahan biologis yang tersedia. 2aat ini, dalam sampel forensik kebanyakan, studi DNA biasanya dilakukan dengan analisis 2$<. Para 2$< paling berharga untuk identifikasi manusia adalah mereka yang hadir polimorfisme yang lebih besar (lebih banyak alel), ukuran yang lebih kecil (dalam pasangan basa), frekuensi yang lebih tinggi dari hetero&igot (lebih tinggi dari 36A) dan frekuensi rendah dari mutasi. Namun, mutasi 2$< dapat disebabkan oleh berbagai mekanisme seperti selip polimerase, mismatch primer atau penghapusan lokus %!A. ( 4 * Asam deoksiribonukleat dan Kedokteran Gigi Forensik 9arena sifat tahan dari aringan gigi untuk serangan lingkungan, seperti, trauma insinerasi,, perendaman, mutilasi, dekomposisi, dan tindakan mikroba, gigi merupakan sumber yang sangat baik dari bahan DNA.

Pada gigi, dentin dan pulpa merupakan sumber kaya DNA, yang dapat berhasil diekstraksi. ( 3 * $otal produksi DNA genomik yang diperoleh dari sampel gigi segar mungkin berkisar =-56 mg DNA (. )6 * 2"eet menyatakan bah"a 1etode P:< memungkinkan diferensiasi satu indi#idu dari yang lain, dengan tingkat kehandalan yang tinggi, dan dengan sekitar ) ng (satu miliar gram) dari DNA target (. )) * Dengan demikian, kelimpahan DNA berkualitas dapat diekstraksi dari gigi, yang merupakan keuntungan penting dalam analisis DNA (. ), * Asam deoksiribonukleat yang dia"etkan dalam gigi dan tulang untuk angka "aktu yang sangat lama dan dengan demikian merupakan sumber informasi berharga. Analisis DNA (aDNA) kuno dapat dilakukan dalam sampel yang ratusan hingga puluhan ribu tahun (. ). * Sampling dari Gigi dan Ekstraksi Asam deoksiribonukleat Prosedur ekstraksi DNA yang efisien serta metode DNA akurat kuantifikasi adalah langkah penting yang terlibat dalam proses analisis DNA sukses sampel tersebut. +erbagai metode telah dilaporkan mengenai ekstraksi DNA dari gigi, yang mencakup sectioning gigi hori&ontal di persimpangan cementoenamel atau #ertikal sampai ke u ung akar, menggores, dan aspirasi (. ); * 1etode lain termasuk menghancurkan gigi atau cryogenic grinding atau kon#ensional persiapan akses rongga dan pengambilan pulpa gigi. 9euntungan dari teknik rongga akses persiapan yang, kesederhanaan, biaya yang relatif rendah, dan pelestarian integritas gigi, yang dapat dipertimbangkan dalam penyelidikan forensik. ( )5 * 2e umlah kecil bahan DNA diekstraksi dari gigi dalam kebanyakan situasi selalu di ba"ah resiko tinggi kontaminasi akibat faktor lingkungan, yang mungkin uga mencakup inhibitor P:<. %aktor lingkungan yang menyebabkan degradasi DNA termasuk "aktu, suhu, kelembaban (memfasilitasi pertumbuhan mikroorganisme), cahaya (baik sinar matahari dan ultra#iolet (/?) cahaya) dan paparan berbagai &at kimia. ( )= * Proses ekstraksi DNA terdiri dari tiga tahapan yang berbeda7 pecah your atau lisis, denaturasi protein dan inakti#asi, dan akhirnya ekstraksi DNA itu sendiri (. 5 * 1etode DNA akurat kuantifikasi sangat penting untuk analisis DNA sukses dari sampel. $eknik-teknik ekstraksi DNA yang paling sering digunakan dalam 9edokteran !igi %orensik adalah metode organik (terdiri dari fenol-kloroform, yang digunakan untuk DNA berat molekul tinggi, dan memakan tenaga dan "aktu, dengan kemungkinan yang lebih tinggi dari kesalahan, mengingat penggunaan multiple tabung, dan hanya dapat dilakukan ika kelimpahan sampel yang tersediaB %$A Paper (terdiri dari kertas selulosa penyerap dengan &at kimia, yang mempercepat penggunaannya), isopropil alkohol (yang mengandung amonium dan isopropanol, yang lebih murah dan uga alternatif dengan metode organik), dan ( ) * :helex )66 (tercepat, sederhana dengan risiko terendah dari kontaminasi, namun sangat mahal) digunakan untuk mengekstrak DNA dari sampel yang akan digunakan dengan P:< :helax )66 ekstraksi DNA berbasis amplifikasi, dan. mengetik yang mungkin dalam gigi dibakar, kit DNA 9omersial ekstraksi yang tersedia untuk memfasilitasi pengikatan re#ersibel DNA dengan partikel magnet, sehingga pemulihan DNA yang tinggi dari sampelB 2ilika berbasis metode yang cocok untuk ekstraksi DNA dari tulang kuno dan gigi ( aDNA). 1etode ini baik untuk mengetik 2$< nuklir dari sampel

terdegradasi daripada metode fenol-kloroform ekstrak DNA berbasis silika menggunakan kolom pertukaran ion auh meningkatkan amplifikasi P:< dan dapat berguna dalam buruk dia"etkan, tahan P:<, sampel kuno.. (; * Jenis Asam deoksiribonukleat !enomik dan mitokondria dua enis DNA yang digunakan dalam ilmu forensik. DNA genomik ditemukan dalam inti setiap sel dalam tubuh manusia dan merupakan sumber DNA untuk aplikasi forensik kebanyakan. !igi merupakan sumber yang sangat baik dari DNA genomik. Asam deoksiribonukleat 1itokondria merupakan enis bahan yang dapat digunakan ketika sampel DNA diekstraksi terlalu kecil atau terdegradasi, seperti yang diperoleh dari aringan skeletoni&ed. 9emungkinan mendapatkan profil DNA dari mtDNA lebih tinggi dibandingkan dengan penanda ditemukan dalam DNA genomik (. )@ * sampel biologis +erbagai seperti rambut, tulang, dan gigi yang kekurangan bernukleus bahan selular dapat dianalisis dengan mtDNA dan sangat berguna. Aplikasi Profiling Asam deoksiribonukleat dalam Kedokteran Gigi Forensik $es DNA saat ini dilakukan profil benar-benar dapat diandalkan dan memberikan rincian tentang karakteristik fisik seseorang, etnis, tempat asal, dan enis kelamin. $es ini uga diterima sebagai bukti hukum di pengadilan, untuk in#estigasi ayah dan identifikasi manusia. ). <estriction %ragmen Pan ang Polymorphism (<%>P) digunakan untuk menganalisis #ariabel pan ang fragmen DNA yang dihasilkan dari sampel DNA mencerna dengan enis khusus dari en&im restriksi yang disebut 8pembatasan endonuklease,8 yang bagian DNA pada pola urutan tertentu yang dikenal sebagai restriksi endonuklease pengakuan situs. 1ungkin akan sulit dalam sampel terdegradasi oleh faktor lingkungan dan uga membutuhkan "aktu lebih lama untuk mendapatkan hasil. ( )4 * ,. $andem mengetik ulangi singkat. Cal ini digambarkan sebagai bentangan pendek DNA yang diulang di berbagai lokasi di seluruh genom manusia dan teknologi ini digunakan untuk menge#aluasi daerah-daerah tertentu (lokus) dalam DNA nuklir (m). 2etiap orang memiliki beberapa 2$< yang di"arisi dari ayah dan sebagian dari ibu, namun, tidak ada orang yang memiliki 2$< yang identik dengan salah satu orangtua. 9eunikan 2$< indi#idu memberikan penanda identitas ilmiah, dan karenanya, sangat membantu dalam identifikasi forensik dan pengu ian paternitas. ( )3 * 2ebuah ulangi tandem pendek dapat digunakan untuk identifikasi mayat dalam bencana massal dan sisa-sisa kerangka tua. ( ,6 * 1eskipun DNA hadir dalam sisasisa kuno tampaknya sangat terdegradasi, itu dilestarikan baik di gigi daripada di tulang sampel (. ,) * $ingkat keberhasilan tertinggi untuk identifikasi manusia dengan menggunakan analisis 2$< diamati pada sampel dari tulang kortikal padat dari tulang berat bantalan kaki (femur 4=,3A), dan gigi utuh uga menun ukkan tingkat keberhasilan tinggi (gigi 4,,@A). ( ,, * +erdasarkan 2$<, 'ndeks 2istem DNA

!abungan (:DD'2) didirikan oleh +iro 'n#estigasi %ederal (%+') (. ,. * 'ni dikembangkan khusus untuk memungkinkan laboratorium DNA forensik publik untuk membuat database DNA dicari DNA ber"enang profil. 9esempatan aneh bah"a dua indi#idu akan memiliki profil ).-lokus DNA yang sama adalah sekitar satu dalam satu miliar. Amerika 2erikat mempertahankan database DNA terbesar di dunia. +asis Data 'nggris untuk 2$< 'dentifikasi lokus adalah /9 National DNA Database (NDNAD). 2istem 'nggris menggunakan )6 lokus, daripada ). Amerika lokus. .. Pada saat itu sulit untuk melakukan identifikasi genetik dengan DNA nuklir karena inter#al "aktu yang lama antara "aktu kematian dan pemeriksaan aringan. +iasanya dalam kasus seperti hanya tulang dan gigi mungkin tersedia untuk analisis. !igi menyediakan sumber yang sangat baik untuk berat molekul tinggi mtDNA, yang mena"arkan keuntungan yang unik beberapa identifikasi asad manusia. ( ,; * Asam deoksiribonukleat 1itokondria adalah alat yang ampuh untuk identifikasi forensik karena memiliki umlah salinan tinggi, "arisan ibu, dan tingkat tinggi #ariabilitas urutan. 2etiap anak memiliki mtDNA yang sama seperti ibu mereka, sebagai mitokondria setiap embrio baru berasal dari sel telur ibu dan DNA nuklir disumbangkan oleh sperma ayah. Dalam in#estigasi yang melibatkan orang hilang, membandingkan profil mtDNA dari sisa-sisa tak dikenal dengan profil seorang kerabat ibu potensial dapat men adi teknik yang penting (. ,. * Namun, analisis mtDNA merupakan teknik yang sedikit memakan "aktu dan eksklusif matrilineal, dan karenanya, kurang informatif. Dengan demikian, analisis ini tidak biasa di semua laboratorium forensik diarahkan pada penyelesaian ke ahatan dan identifikasi orang. ;. E-9romosom analisis Polimorfisme asam deoksiribonukleat pada kromosom E manusia adalah alat berharga untuk memahami e#olusi manusia, migrasi, dan untuk melacak hubungan antara laki-laki (. ,5 * 1ayoritas pan ang dari kromosom E manusia di"ariskan sebagai blok tunggal dalam hubungan dari ayah ke laki-laki keturunan, sebagai entitas haploid. Dleh karena itu, #ariasi DNA kromosom E telah terutama digunakan untuk in#estigasi terhadap e#olusi manusia dan untuk tu uan forensik atau analisis ayah (. ,= * Polimorfisme E-2$< kromosom (E-2$<) yang digunakan dalam pengu ian defisiensi paternitas, kasus kekerasan fisik, pembunuhan, kekerasan seksual, dan kekerasan pada anak, di mana bekas-bekas gigitan sering ditemukan pada kulit. 5. F-9romosom ulangi pendek tandem 9romosom F-spesifik 2$< digunakan untuk studi identifikasi dan genom dari berbagai kelompok etnis di dunia (. ,@ * 2ebagai ukuran F-kromosom alel 2$< kecil, umumnya termasuk )66-.56 nukleotida, relatif mudah untuk diperkuat dan

terdeteksi dengan sensiti#itas tinggi (. ,4 * 2$< F-kromosom (F-2$<) spidol membentuk sistem pelengkap yang kuat, terutama dalam pengu ian defisiensi ayah. =. Polimorfisme nukleotida tunggal Polimorfisme nukleotida tunggal (2NP) adalah #ariasi urutan DNA yang ter adi ketika sebuah nukleotida tunggal (A, $, : atau !) dalam urutan genom diubah. 2ebagai contoh 2NP mungkin mengubah AA!!:$AA urutan DNA untuk A$!!:$AA. ( ,3 * Polimorfisme nukleotida tunggal telah muncul sebagai penanda yang menarik bagi 9edokteran %orensik karena ukuran amplikon yang kecil, yang berguna dalam menganalisis sampel terdegradasi, la u mutasi yang lebih rendah dibandingkan dengan 2$<, setu u untuk tinggi selama analisis (otomatisasi), melimpah dalam genom manusia, bisa memberikan informasi spesifik tentang keturunan, keturunan, identitas e#olusi, atau fenotipe, dan uga menentukan enis kelamin. 9eterbatasan 2NP meliputi, ada lokus inti banyak didirikan dan kebutuhan tes multiplexing besar./paya sedang dilakukan untuk menyelidiki apakah dapat menggantikan 2$<, tetap 2NP adalah teknologi DNA masa depan. @. -ender mengetik Protein enamel yang diperlukan untuk pengembangan enamel gigi normal dikodekan oleh gen amelogenin (mereka adalah bagian dari sekelompok kecil gen yang aktif pada kedua kromosom seks) (. .6 * !en amelogenin adalah salinan gen tunggal, homolognya yang terletak di Fp,,.) -. Fp,,.. dan Ep ))., ( .) .* ?ariasi pan ang dalam FE gen homolog amelogenin (A10>F dan A10>E), yang digunakan untuk identifikasi enis kelamin ( ., * enis kelamin uga mungkin diidentifikasi dari DNA pulpa gigi melalui analisis puncak lokus F dan E dengan electorphoresis gel kapiler (. .. , .; * Kesimpulan Aspek $erapan teknologi DNA telah mere#olusi prosedur identifikasi forensik. !igi merupakan sumber yang sangat baik dari DNA, dan dilindungi oleh epitel, aringan ikat, otot dan tulang dalam kasus pembakaran. 2elain itu, sel-sel pulpa gigi dilindungi oleh enamel, dentin dan sementum gigi aringan keras. Dleh karena itu, para dokter gigi yang beker a di bidang 9edokteran !igi %orensik harus memasukkan teknologi baru dalam studi mereka, karena beberapa metode yang tersedia untuk ekstraksi DNA dari bahan biologis, namun standarisasi protokol yang diadopsi untuk tu uan tersebut belum tercapai se auh ini. Namun demikian, bidang ini berkembang dengan cepat, untuk mencapai batas-batas baru dan memecahkan teka-teki yang tersembunyi dalam genom manusia.