Anda di halaman 1dari 22

METODE ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF KARBOHIDRAT

Oleh :

Ni Luh Mega Desyanti P07134011035

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2013

Metode An l!"!" K# l!t t!$ D n K# nt!t t!$ K %&oh!d% t


A' U(! K# l!t t!$ 1' U(! Mol!")h Uji ini untuk semua jenis karbohidrat. Monosakarida disakarida dan !o"isakarida akan memberikan hasi" !ositi#. Uji !ositi# jika timbu" $in$in merah ungu yang meru!akan kondensasi antara #ur#ura" atau hidroksimeti" #ur#ura" dengan a%na#to" da"am !ereaksi mo"ish. a. Prinsi! Prinsi! reaksi ini ada"ah dehidrasi senya&a karbohidrat o"eh asam su"#at !ekat. Dehidrasi heksosa menghasi"kan senya&a hidroksi meti" #ur#ura" sedangkan dehidrasi !entosa menghasi"kan senya&a #u"#ura". Uji !ositi# jika timbu" $in$in merah ungu yang meru!akan kondensasi antara #ur#ura" atau hidroksimeti" #ur#ura" dengan a%na#to" da"am !ereaksi mo"ish. Uji mo"is$h ada"ah uji kimia kua"itati# untuk mengetahui adanya karbohidrat. Uji ini untuk semua jenis karbohidrat. Mono% di% dan !o"isakarida akan memberikan hasi" !ositi#. b. 'ara (erja 1. 15 tetes "arutan uji dimasukkan ke da"am tabung reaksi. ). 3 tetes !ereaksi Mo"is$h ditambahkan dan di$am!ur dengan baik. 3. *abung reaksi dimiringkan "a"u dia"irkan dengan hati%hati 1 mL +),-4 !ekat me"a"ui dinding tabung agar tidak ter$am!ur. 4. .eaksi !ositi# ditandai dengan terbentuknya $in$in ber&arna ungu !ada batas antara kedua "a!isan 2' U(! Bened!)t Uji /enedi$t ada"ah uji kimia untuk mengetahui kandungan gu"a 0karbohidrat1 !ereduksi 0yang memi"iki gugus a"dehid atau keton bebas1 . 2u"a !ereduksi me"i!uti semua jenis monosakarida dan bebera!a disakarida se!erti "aktosa g"ukosa dan ma"tosa. Uji benedi$t berdasarkan reduksi 'u)3 menjadi 'u3 o"eh gugus a"dehid atau keton bebas da"am

suasana a"ka"is biasanya ditambahkan 4at !engom!"eks se!erti sitrat atau tatrat untuk men$egah terjadinya !engenda!an 'u'-3. Uji !ositi# ditandai dengan terbentuknya enda!an merah bata kadang disertai dengan "arutan yang ber&arna hijau merah atau orange. a. Prinsi! 5 2u"a yang mem!unyai gugus a"dehid atau keton bebas akan mereduksi ion 'u b. 'ara kerja 1. 6"at dan bahan disia!kan ). 3 tetes sam!e"0da"am bentuk "arutan1 dimasukkan keda"am tabung reaksi yang masih kering dan bersih 3. ) mL !ereaksi /enedi$t ditambahkan kemudian diko$ok. 4. Dimasukkan keda"am !enangas air se"ama 5 menit. 6mati kuning atau merah !erubahan &arna enda!annya. 5. Pembentukan &arna enda!an hijau menunjukan reaksi !ositi# karbohidrat. 3' U(! Sel!* no$$ Uji ,e"i&ano## bertujuan untuk mengeahui adanya ketosa 0karbohidrat yang mengandung gugus keton1. Pada !ereaksi se"i&ano## terjadi !erubahan o"eh +'" !anas menjadi asam "e7u"inat dan 4% hidroksi"meti"#ur#ura". 8ika di!anaskan karbohidrat yang mengandung gugus keton akan menghasikan &arna merah !ada "arutannya. Disakarida sukrosa yang mudah dihidro"isa menjadi g"ukosa dan #ruktosa memberi reaksi !ositi# dengan uji ,e"i&ano##. 2"ukosa dan karbohdrat "ain da"am jum"ah banyak da!at juga memberi &arna yang sama. a. Prinsi! 5 Dehidrasi #ruktosa o"eh +'" !ekat menghasi"kan hodroksimeti"#ur#ura" dan dengan !enambahan resorsino" akan menga"ami kondensasi membentuk senya&a kom!"eks ber&arna merah oranye.
)3

da"am suasana a"ka"is menjadi 'u3 yang

mengenda! sebagai 'u)- ber&arna merah bata.

b. 'ara kerja 1. 5 tetes "arutan uji dan 15 tetes !ereaksi ,e"i&ano## dimasukkan ke da"am tabung reaksi ). *abung dididihkan di atas a!i ke$i" se"ama 30 detik atau da"am !enangas air mendidih se"ama 1 menit. 3. +asi" !ositi# ditandai dengan terbentuknya "arutan ber&arna merah orange. +' U(! B %$oed Uji ini untuk membedakan monosakarida dan disakarida dengan ja"an mengontro" kondisi%kondisi !er$obaan se!erti !+ dan &aktu !emanasan. Pada ana"isa ini karbohidrat direduksi !ada suasana asam. Disakarida juga akan memberikan hasi" !ositi# bi"a didihkan $uku! "ama hingga terjadi hidro"isis. a. Prinsi! 9on 'u)3 0dari !ereaksi /ar#oed1 da"am suasana asam akan direduksi "ebih $e!at o"eh gu"a reduksi monosakarida dari!ada disakarida dan menghasi"kan enda!an 'u)- ber&arna merah bata. b. 'ara kerja 1. 1 mL "arutan uji karbohidrat dimasukkan keda"am tabung reaksi yang masih kering dan bersih. ). 1 mL !ereaksi /ar#oed ditambahkan kemudian diko$ok. 3. *abung dimasukkan keda"am !enangas air se"ama 3 menit. 4. Dinginkan da"am air menga"ir. 5. /i"a tidak terjadi reduksi se"ama 5 menit "akukan !emanasan se"ama 15 menit sam!ai ter"ihat adanya reduksi. ,' U(! O" -on Untuk membedakan berma$am%ma$am karbohidrat dari gambar krista"nya. a. Prinsi!

,uatu a"dosa atau ketosa dengan #eni" hidra4in akan membentuk (rista" osa4on. (rista" osa4on yang terbentuk khas sesuai dengan jenisnya. b. 'ara kerja 1. ) mL "arutan uji dimasukkan ke da"am tabung reaksi ). ,eujung s!ate" #eni"hidra4in%hidrok"orida dan krista" natrium asetat ditambahkan ke da"am tabung. 3. *abung di!anaskan da"am !enangas air mendidih se"ama bebera!a menit. 4. Didinginkan !er"ahan diba&ah air keran. 5. Perhatikan krista" yang terbentuk dan diidenti#ikasi diba&ah mikrosko!. .' U(! Tollen" Uji ini untuk !ositi# terhada! karbohidrat !entosa yang membedakannya dengan heksosa. 6"dehida da!at mereduksi !ereaksi *o""ens sehingga membebaskan unsur !erak 06g1. Pereaksi to""ens !engoksidasi ringan yang digunakan da"am uji ini ada"ah "arutan basa dari !erak nitrat. Larutannya jernih dan tidak ber&arna. Untuk men$egah !engenda!an ion !erak sebagi oksida !ada suhu tinggi maka a. Prinsi! 6"dehid dioksidasi menjadi anion karboksi"at ion 6g3 da"am reagensia *o""ens direduksi menjadi "ogam 6g. Uji !osit# ditandai dengan terbentuknya $ermin !erak !ada dinding da"am tabung reaksi. b. 'ara kerja 1. Masukkan bebera!a tetes "arutan uji karbohidrat keda"am tabung rekasi yang te"ah diisi ) mL !ereaksi *o""ens. ). Masukan keda"am !enangas air se"ama 1 menit. Perhatikan !erubahan &arna yang terjadi. 3. +asi" di$atat ditambahkan bebera!a tetes "arutan amonia. 6monia membentuk kom!"eks "arut air dengan ion !erak.

/' H!d%ol!" S#0%o" Mengidenti#ikasi hasi" hidro"isis sukrosa a. Prinsi! ,ukrosa da"am +'" da"am keadaan !anas akan terhidro"isis "a"u menghasi"kan #ruktosa dan g"ukosa. +a" ini menyebabkan uji /enedi$t dan ,e"i&ano## yang sebe"umnya hidro"isis menghasi"kan hasi" negati7e menjadi !ositi#. Uji /ar#oed menjadi !ositi# !u"a dan menunjukkan bah&a hidro"isis sukrosa menghasi"kan monosakarida. b. 'ara kerja 1. 9si tabung reaksi dengan 5 mL "arutan uji sukrosa. ). *ambahkan 1 mL +'" 10:. 3. Masukan keda"am !enangas air se"ama 15 menit. ,e"i&ano## dan 4. Dinginkan !er"ahan%"ahan kemudian netra"kan. 5. *es hidro"isa dengan !ereaksi /enedi$t /ar#oed. ;. 'atat hasi" dan buat"ah kesim!u"annya 1' U(! B! l Uji bia" untuk menguji adanya gu"a !entose. Pemanasan !entose dengan +'" !ekat akan menghasi"kan #ur#ura" yang berkondensasi dengan or$ino" dan ion #eri. +asi" !emanasan akan menghasi"kan &arna biru hijau yang menunjukkan adanya gu"a !entosa. a. Prinsi! Dehidrasi !entosa o"eh +'" !ekat menghasi"kan #ur#ura" dengan !enambahan orsino" 03.5%dihidroksi to"uena1 akan berkondesasi membentuk senya&a kom!"eks ber&arna biru. b. 'ara kerja 1. 5 tetes "arutan uji dimasukkan ke da"am tabung reaksi. ). 10 tetes !eraksi /ia" dan ) tetes +'" !ekat ditambahkan

3. 'am!ur"ah dengan baik "a"u di!anaskan di atas a!i ke$i" sam!ai timbu" ge"embung%ge"embung gas di!ermukaan "arutan. 4. Perhatikan &arna atau enda!an yang terbentuk. *erbentuknya &arna biru menunjukan adanya !entose. 2' U(! Iod!#3 Uji iod bertujuan untuk mengidenti#ikasi !o"isakarida. Uji iod juga da!at membedakan ami"um dengan nitrogen. .eaksi antara !o"isakarida dengan iodin membentuk rantai !o"iiodida. Po"isakarida umumnya membentuk rantai he"iks 0me"ingkar1 sehingga da!at berikatan dengan iodin sedangkan karbohidrat berantai !endek se!erti disakarida dan monosakaraida tidak membentuk struktur he"iks sehingga tidak da!at berikatan dengan iodin. a. Prinsi! Po"isakarida dengan !enambahan iodium akan membentuk kom!"eks adsor!si ber&arna yang s!esi#ik. 6mi"um atau !ati dengan iodium menghasi"kan &arna biru merah anggur b. 'ara kerja 1. 3 tetes "arutan uji dimasukkan ke da"am tabung reaksi ). Ditambahkan ) tetes "arutan iodium 3. Diamati !erubahan &arna yang terjadi 4. 10' H!d%ol!" P t! Mengidenti#ikasi hasi" hidro"isis ami"um 0!ati1. a. Prinsi! Pati da"am suasana asam bi"a di!anaskan akan terhidro"isis menjadi senya&a%senya&a yang "ebih sederhana. +asi" hidro"isis da!at diuji dengan iodium dan menghasi"kan &arna biru sam!ai tidak ber&arna. +asi" akhir hidro"isis ditegaskan dengan uji /enedi$t. dekstrin menghasi"kan &arna sedangkan g"ikogen dan sebagian !ati yang

terhidro"isis bereaksi dengan iodium membentuk &arna $oke"at.

b. 'ara kerja 1. 5 mL ami"um 1: dimasukkan ke da"am tabung reaksi kemudian ditambahkan ) 5 mL +'" ) N ). 'am!ur"ah dengan baik !enangas air mendidih. 3. ,ete"ah 3 menit uji"ah dengan iodium dengan mengambi" ) tetes "arutan ditambah ) tetes iodium da"am !orse"in tetes. 'atat"ah !erubahan &arna yang terjadi. 4. Lakukan uji iodium setia! 3 menit sam!ai hasi" ber&arna kuning !u$at. 5. Lanjutkan hidro"isis se"ama 5 menit "agi. ;. ,ete"ah didinginkan diambi" ) mL "arutan hasi" hidro"isis "a"u netra"kan dengan Na-+ ):. Uji dengan kertas "akmus. 7. (emudian uji"ah dengan /enedi$t. <. ,im!u"kan a!a yang dihasi"kan hidro"isis !ati. 11' U(! A" 3 M#" t Di"akukan untuk membedakan antara g"ukosa dan ga"aktosa. a. Prinsi! Larutan uji di$am!urkan dengan +N-3 !ekat kemudian di!anaskan. (arbohidrat dengan asam nitrat !ekat akan menghasi"kan asam yang da!at "arut. Namun "aktosa dan ga"aktosa menghasi"kan asam musat yang da!at "arut. b. 'ara kerja 1. 10 tetes "arutan uji dan ) tetes +N-3 !ekat dimasukkan di da"am tabung reaksi. ). ,e"anjutnya di!anaskan da"am !enangas air mendidih sam!ai 7o"umenya kira%kira tingga" )%3 tetes. 3. La"u didinginkan !er"ahan%"ahan dan !erhatikan terbentuknya krista"%krista" keras se!erti !asir. 4. ,e"anjutnya diamati di ba&ah mikrosko!. "a"u dimasukkan ke da"am

B'U(! K# nt!t t!$


1. An l!"!" tot l 4#l 5Metode Anth%one6

2u"a da!at bereaksi dengan sejum"ah !ereaksi menghasi"kan &arna s!esi#ik. 9ntensitas &arna di!engaruhi o"eh konsentrasi gu"a. 9ntensitas &arna yang terbentuk diukur dengan s!ekto#otometer. Pereaksi 6nthrone 0= 10%dihidro%=%oksoantrasena1 0 1: da"am asam su"#at !ekat. Pereaksi 6nthrone bereaksii dengan karbohidrat da"am asam su"#at !ekat menghasi"kan &arna biru kehijauan. 9ntensitas absorbansnya diukur !ada >?;30nm. Metode ini digunakan untuk ana"isis tota" gu"a bahan !adat atau $air. a. Prinsi! 5 Prinsi! dasar dari metode anthrone ada"ah senya&a anthrone akan bereaksi se$ara s!esi#ik dengan karbohidrat da"am asam su"#at !ekat menghasi"kan &arna biru kehijauan yang khas. ,enya&a anthrone 0= 10% dihydro%=% o@anthra$ene1 meru!akan hasi" reduksi anthraAuinone. b. 'ara kerja 1. Pembuatan kur7a standar 5 a1 (eda"am tabung reaksi bertutu! !i!et "arutan g"ukosa standar sebanyak 0 )B0 4B0 ;B0 <B dan 1 0 m" 0g"ukosa standar 0 ) mgCm"1 "a"u en$erkan sehingga tota" 7o"ume masing%masing tabung 1 0 m". b1 /uat "arutan b"anko dengan $ara memi!et 1 m" air desti"ata ke da"am tabung reaksi "ain. $1 *ambahkan !ereaksi 5 m" 6nthrone dengan $e!at ke da"am "arutan g"ukosa standard an b"anko kemudian tutu!. Doerte@ dan ko$ok hingga merata. d1 Panaskan tabung reaksi di atas !enangas air 100 o' se"ama 1) menit. Dinginkan e1 Pindahkan "arutan ke da"am ku7et dan ba$a absorbans dengan UD%Dis s!ektro#otometer !ada ;30 nm. #1 /uat !"ot kur7a yaitu konsentrasi 0g1 g"ukosa standar !ada sumbu @ dan ni"ai absorbans !ada sumbu y.

). 6na"isis $ontoh 5 a1 Lakukan !engen$eran $ontoh b1 Masukkan sebanyak 1m" $ontoh keda"am tabung reaksi tertutu! $1 Lakukan taha! se!erti !ada !embuatan kur7a standar 3. Perhitungan Perhitungan metode ini ada"ah dengan menentukan konsentrasi gu"a da"am $ontoh mengguanakan kur7a standar 0hubungan antara konsentrasi gu"a standar dengan absorbans1 dan mem!erhitunkan !engen$eran yang di"akukan. .umusnya da!at ditu"is sebagai berikut. *ota" gu"a 0:1 ? 002@EP1CF1@100 Dimana5 2 0gram1 EP F ? #aktor !engen$eran ? berat $ontoh 0gram1 ? konsentrasi gu"a dari kur7a standar

2' An l!"!" tot l 4#l 5Metode Fenol6 Metode ini digunakan untuk meneta!kan tota" gu"a semua bahan !angan. ,ebe"umnya $ontoh harus disia!kan se!erti !ada !ersia!an $ontoh untuk ana"isis gu"a. a. Prinsi! 2u"a sederhana o"igosakarida !o"isakarida dan turunannya da!at bereaksi dengan #eno" da"am asam su"#at !ekat menghasi"kan &arna oranye kekuningan yang stabi". b. Prosedur 1. Pembuatan kur7a standar 5

a1 6mbi" sebanyak )m" "arutan !ada bebera!a konsentrasi b1 *ambahkan 1m" "arutan #eno" 05:1 "akukan 7orte@ $1 *ambahakan 5 m" "arutan asam su"#at !ekat dengan $e!at se$ara tegak "urus ke!ermukaan $airan d1 Diamkan se"ama 10 menit 7orteks dan tem!atkan da"am !enangas air se"ama 15 menitUkur absorbansnya !ada 4=0nm untuk hekstosa sedangkan untuk !entosa dan asam uronat 4<0 nm. e1 /uat !"ot kur7a standar. La"u tentukan !ersamaan regresi "inier. ). 6na"isis $ontoh a1 Lakukan !engen$eran $ontoh b1 Masukkan )m" $ontoh ke da"am tabung reaksi dan "akukan taha! se!erti !ada !embuatan kur7a standar. ). Perhitungan Perhitungan menggunakan metode #eno" ada"ah konsentrasi gu"a da"am $ontoh ditentukan dengan menggunakan kur7a standar 0hubungan antara konsentrasi gu"a standar dengan absorbans1 dan mem!erhitungkan !engen$eran yang di"akukan. .umus !erhitungannya da!at ditu"is sebagai berikut. *ota" gu"a 0:1 ? 002@EP1CF1@100 Dimana5 2 EP F ? konsentrasi gu"a dari kur7a standar 0gram1 ? #aktor !engen$eran ? berat $ontoh 0gram1

3' An l!"!" 4#l %ed#0"! 5Metode L ne7E8non6

2u"a

!ereduksi

da"am

bahan

!angan

da!at

ditentukan

konsentrasinya berdasarkan !ada kemam!uannya untuk mereduksi !ereaksi "ain. 6na"isis gu"a !ereduksi dengan metode Lane%Gynon di"akukan se$ara 7o"umetri dengan titrasiCtitrimetri. Metode ini digunakan untuk !enentuan gu"a !ereduksi da"am bahan !adat atau $air se!erti "aktosa g"ukosa #ruktosa ma"tosa. a. Prinsi! Metode Lane%Gynon didasarkan !ada reaksi reduksi !ereaksi Eeh"ing o"eh gu"a%gu"a !ereduksi. Peneta!an gu"a !ereduksi dengan me"akukan !engukuran 7o"ume "arutan gu"a !ereduksi standar yang dibuthkan untuk mereduksi !ereaksi tembaga 0991 basa menjadi tembaga 0991 oksida 0'u)-1. Udara yang mem!engaruhi reaksi dike"uarkan dari $am!uran reaktan dengan $ara mendidihkan "aruta se"ama titrasi. *itik akhir titrasi ditunjukkan dengan meti"en b"ue yang &arnanya akan hi"ang karena ke"ebihan gu"a !ereduksi di atas jum"ah yang dibutuhkan untuk mereduksi semua tembaga b. Prosedur 1. ,tandarisasi "arutan #eh"ing 5 a1 Masukkan 10 m" "aruta $am!uran Eeh"ing 6 dan / keda"am er"enmeyer dan tambah )%4 tetes meti"en b"ue 0 ):. b1 (emudian "akukan taha!an se!erti !ada ana"isis $ontoh. ). 6na"isis $ontoh 5 a1 'am!urkan "arutan #eh"ing 6 dan / dengan 7o"ume yang sama b1 Pi!et 10 m" "arutan dari hasi" !ersia!an $ontoh keda"am er"emeyer

$1 *ambahkan 0 ) :.

keda"am

er"enmeyer

10 m" "arutan

$am!uran #eh"ing 6 dan / serta )%4 tetes meti"en b"u

d1 Panaskan $am!ura "arutan di atas hot !"ate magneti$ stirrer e1 ,ete"ah mendidih "akukan titrasi sengan "arutan gu"a standart sam!ai &arna biru hi"ang #1 *itrasi tertentu. 3. Perhitungan 2u"a !ereduksi 0:1 ? H0D0%Ds1@2@*s@E@100IC0*@F1 Dimana5 Do Ds 0m"1 2 *s * F E ? konsentrasi "arutan g"ukosa standar 0gCm"1 ? 7o"ume $ontoh tota" dari !ersia!an $ontoh 0m"1 ? 7o"ume $ontoh yang di!er"ukan untuk titrasi 0m"1 ? berat $ontoh 0g1 ? #aktor !engen$eran ? 7o"ume "arutan g"ukosa standar untuk titrasi "arutan ? 7o"ume "arutan g"ukosa standar untuk titrasi $ontoh Eeh"ing 0m"1 di"akukan dengan $e!at maka !er"u

ditambahkan "arutan g"ukosa standar dengan 7o"ume

3' An l!"!" 9#l Red#0"! 5Nel"on7So3o48!6 Metode in digunakan unttuk mengetahui kada" gu"a !ereduksi da"am sam!e". a. Prinsi! Metode Ne"son%,omogyi didasarkan !ada reaksi reduksi !ereaksi tembaga su"#at o"eh gu"a%gu"a !ereduksi. 2u"a

!ereduksi mereduksi !ereaksi tembaga 0991 basa menjadi tembaga 091 oksida 0'u)-1. 'u)- ini bersama dengan arsenomo"ibdat membentuk senya&a kom!"ek ber&arna. 9ntensitas &arna menunjukkan banyaknya gu"a !ereduksi dengan !engujian menggunakan >?5)0 nm. b. Prosedur (erja 1. Pembuatan kur7a standar a1 ,ia!kan ; tabung reaksi masing masing diisi dengan 0B 0 )B 0 4B 0 ;B 0 < dan 1 m" "arutan g"ukosa standar. b1 *ambahkan aAuadest da"am tia! tia! tabung tersebut sehingga 7o"ume untuk tia!%tia! tabung men$a!ai 1 m" $1 *ambahkan 1 m" reagensia Ne"son !ada tia!%tia! tabung dan !anaskan da"am air mendidih se"ama )0 menit d1 Dinginkan semua tabung dengan $ara direndam da"am air dingin hingga suhu men$a!ai )50' e1 *ambahkan 1 m" reagen 6rsenomo"ibdat !ada tia!%tia! tabung ko$ok homogen sam!ai semua enda!an ku!rooksida "arut semua. #1 *ambahkan 7 m" aAuadest ko$ok homogen g1 *era absorbansinya !ada > 540 nm dengan s!ektro#otometer h1 /uat kur7a standar hubungan antara absorbansi dan konsentrasi i1 *entukan !ersamaan kur7a standarnya ). Penentuan kadar gu"a reduksi sam!e"5 a1 6mbi" 1 m" "arutan sam!e" jernih "akukan !rosedur yang sama dengan !embuatan kur7a standar mu"ai dari no. 3 J 7. b1 *entukan kadar gu"a reduksi sam!e" dengan menggunakan !ersamaan kur7a standar. 3. Perhitungan

Perhitungan da"am metode ini ada"ah kandungan gu"a !ereduksi da"am $ontoh ditentukan dengan menggunakan kur7a standar 0hubungan antara konsentrasi gu"a standar dengan absorbans1 dan mem!erhitungkan !engen$eran yang di"akukan. 6!abi"a kandungan gu"a !ereduksi diketahui maka kandungan gu"a non%!ereduksi da!at ditentukan sebagai se"isih antara kadar tota" gu"a dengan kadar gu"a !ereduksi. *ota" gu"a ? gu"a !ereduksi 3 gu"a non%reduksi +' An l!"!" Tot l P t!: A3!lo" : A3!lo;e0t!n (andungan !ati da"am bahan !angan da!at ditentukan se$ara 7o"umetrikCtitrimetri atau ko"orimetri. Penentuan tota" !ati ada"ah dengan $ara menghidro"isis !ati se$ara sem!urna menjadi g"ukosa. +idro"isis !ati menjadi gu"a da!at terjadi saat ada !er"akuan asam yaitu meme$ah ikatan g"ikosidik yang menghubungkan antar g"ukosa. Da!at juga terjadi se$ara en4imatis 0en4im K%ami"ase dan g"ukoami"ase1 yang meme$ah mo"eku"%mo"eku" ami"osa dan ami"o!ektinn menjadi gu"a sederhana. (andungan g"ukosa da!at ditentukan menggunakan metode !eneta!an gu"a se!erti metode 6nthrone metode #eno" metode Lane%Gynon metode Ne"son%,omogyi. (andungan !ati ditentukan menggunakan #akor !enga"i 00 =1. ,ehingga kandungan !ati ada"ah kandungan g"ukosa @ 0 =. Da!at ditentukan untuk ana"isis kadar !ati !ada $ontoh !adat atau $air. a. Prosedur kerja 1. Persia!an sam!e"

a1 Masukkan sebanyak ) J 5 g $ontoh !adat atau $air ke da"am ge"as 0untuk $ontoh !adat !er"u diha"uskan dahu"u1 b1 *ambahkan ke da"am ge"as !ia"a sebanyak 50 m" a"koho" <0:. 6duk se"ama 1 jam

$1 ,aring sus!ensi yang terbentuk dengan kertas saring dan $u$i dengan air sam!ai 7o"ume #i"trat )50 m" 0#i"trat ini mengandung karbohidrat yang "arut dan dibuang1 d1 Untuk menghi"angakn "emak $u$i !ati yang terda!at sebagai residu dengan 10 m" eter 0sebanyak 5 ka"i1. ,aring setia! !en$u$ian dengan kertas saring. /iarkan mengua! eter yang tersisa da"am residu. e1 'u$i "agi residu dengan 150 m" a"koho" 10: untuk membebaskan "ebih "anjut karbohidrat yang ter"arut. #1 Pindahkan residu se$ara kuantitati# dari kertas saring ke da"am ge"as !ia"a dengan $ara !en$u$ian dengan )00 m" air. *ambahkan )0 m" +'" )5:. g1 *utu! sus!ensi residu di da"am ge"as !ia"a dengan !endinginan ba"ik 0kondensor1. h1 ,ete"ah didinginkan netra"kan "arutan yang terbentuk dengan "arutan Na-+ 45: dan masukkan ke da"am "abu takar 500 m" se$ara kuantitati#. i1 *e!atkan "arutan sam!ai tanda tera dengan menggunakan air desti"at. j1 ,aring kemba"i "arutan dengan menggunakan kertas saring. ). Pembuatan kur7a standar 1. *imbang sebanyak 40 mg ami"osa murni dan masukkan ke da"am tabung reaksi. ). *ambahkan ke da"am tabung reaksi 1 m" etano" =5: dan = m" Na-+ 1N. 3. Panaskan tabung reaksi di da"am air mendidih sekitar 10 menit sam!ai semua ami"osa membentuk ge".

4. ,ete"ah

didinginkan

!indahkan

$am!uran

se$ara

kuantitati# ke da"am "abu takar 100m" dan te!atkan dengan air sam!ai tanda tera 5. Pi!et ge" ami"osa 0bebera!a seri konsentrasi1 ke da"am "abu takar 100m" ;. *ambahkan ke da"am masing J masing "abu takar asam asetat 1N kemudian tambahkan masing J masing ) m" "arutan iod. 7. *e!atkan "arutan iod dengan air hingga tanda tera. <. ,ete"ah didiamkan se"ama )0 menit ukur absorbans dari intensitas &arna biru dengan s!ektro#otometer !ada !anjang ge"ombang ;)5 nm. =. /uat kur7a standar sebagai hubungan antara kadar ami"osa 0sumbu @1 dengan absorbans 0sumbu y1 3. 6na"isis $ontoh 5 1. 2unakan $ontoh te!ung yang mengandung !ati 0a!abi"a $ontoh mengandung kom!onen "ain maka !ati !er"u diekstrak dahu"u1 ). *imbang sebanyak 100mg $ontoh dan masukkan ke da"am tabung reaksi ). *ambahkan ke da"am tabung reaksi 1m" etano" =5: dan =m" Na-+ 1 N. 3. Panaskan tabung reaksi se"ama 10 menit untuk

mengge"atinisasi !ati 4. ,ete"ah didinginkan masukkan !asta !ati ke da"am "abu takar 100m" dan te!atkan hingga tanda tera dengan menggunakan air

5. Pi!et "arutan !ati tersebut dan dimasukkan ke da"am "abu takar 100m" "a"u ditambahkan asam asetat 1N ) m" "arutan iod dan air hingga tanda tera ;. ,ete"ah didiamkan se"ama )0 menit ukur absorbansinya dengan s!ektro#otometer !ada ;)5 nm. 4. Perhitungan (andungan ami"osa ditentukan berdasarkan kemam!uan ami"osa untuk bereaksi dengan senya&a iod yang menghasi"kan kom!"eks ber&arna biru. 9ntensitas &arna biru tergantung !ada kadar ami"osa dan da!at ditentukan se$ara s!ekto#otometri. (andungan ami"o!ektin ditentukan sebagai se"isih antara kandungan !ati dengan ami"osa. Pati ? ami"osa 3 ami"o!ektin Perhitungan da"am menentukan berat !ati da"am $ontoh di!ero"eh dengan menga"ikan berat g"ukosa dengan 0 =. 6ngka 0 = ada"ah #aktor kon7ersi untuk !embentukan g"ukosa dari hidro"isa !ati. rumus5 (adar ami"osa 0:1 ? 0'@D@EP@1001CF Dimana '? konsentrasi ami"osa $ontoh dari kur7a standar 0mgCm"1 D EP F ? 7o"ume akhir $ontog 0m"1 ? #aktor !engen$eran ? berat $ontoh 0mg1 Perhitungan kadar ami"osa ditentukan dengan menggunakan kur7a standar dengan menggunakan

(adar ami"o!ektin 0:1 ? (adar !ati 0:1 J (adar ami"osa 0:1

,' An l!"!" K %&oh!d% t < n4 T!d 0 D ; t D!)e%n 6na"isis (arbohidrat Lang *idak Da!at Di$erna yaitu me"i!uti 6na"isis serat kasar 0$rude #iber1 dan ana"isis serat makanan 0dietary #iber1.,erat kasar ditentukan dari residu sete"ah $ontoh di!er"akukan dengan asam dan basa kuat. ,erat makanan ditentukan berdasarkan kadar a$id detergent #iber 06DE1 dan neutra" detergen #iber 0NDE1. 6DE itu sendiri terdiri dari sebagian besar se"u"osa dan "ignin dan sebagian ke$i" hemise"u"osa dan substansi !ektat sehingga umumnya diangga! sebagai se"u"osa dan "ignin. NDE terdiri dari se"u"osa hemise"u"osa dan "ignin. Peneta!an "ignin yaitu dengan metode k"ason. ,edangkan !eneta!an substansi !ekat dengan metode s!ektri#otometer. (adar hemise"u"osa di!ero"eh dengan menghitung se"isih kadar NDE dengan kadar 6DE. (adar se"u"osa di!ero"eh dengan menghitung se"isih kadar 6DE dan kadar Lignin. *ota" serat makanan dihitung dengan menjum"ahkan kadar NDE dengan kadar substansi !ektat. ,erat kasar yaitu residu dari bahan makanan yang te"ah di!er"akukan dengan asam dan a"ka"i mendidih. *erdiri dari se"u"osa sedikit "ignin dan !entose. a. Prosedur (erja 2i"ing $ontoh sam!ai ha"us sehingga da!at me"e&ati saringan berdiameter 1 mm. /i"a $ontoh tidak da!at diha"uskan maka digi"ing hingga homogen. *imbang sebanyak ) gram $ontoh dan ekstrak "emaknya dengan menggunakan so@h"et dengan !e"arut !etro"ium eter. Pindahkan $ontoh yang sudah bebas "emak se$ara kuantitati# ke da"am er"enmeyer. *ambahkan 0 5 g asbes yang te"ah di!ijarkan dan ) tetes 4at anti buih.

*ambahkan ke da"am er"enmeyer sebanyak )00 mL "arutan +),-4mendidih. Letakkan er"enmeyer di da"am !endingin ba"ik. Didihkan $ontoh di da"am er"enmeyer se"ama 30 menit dengan seseka"i digoyang%goyangkan. ,ete"ah se"ese saring sus!ensi dengan kertas saring. 'u$i residu yang tertingga" dengan air mendidih. Pen$u$ian di"akukan hingga air $u$ian tidak bersi#at asam "agi 0diuji dengan kertas "akmus1. Pindahkan residu se$ara kuantitati# dari kertas saring ke da"am er"enmeyer kemba"i. 'u$i kemba"i sisa residu di kertas saring dengan )00 mL "arutan Na-+ mendidih sam!ai semua residu masuk ke da"am er"enmeyer. Didihkan kemba"i $ontoh se"ama 30 menit dengan !endingin ba"ik sambi" seseka"i digoyang%goyangkan. ,aring kemba"i $ontoh me"a"ui kertas saring yang diketahui beratnya sambi" di$u$i dengan (),-4 10:. 'u$i residu di kertas saring dengan air mendidih kemudian dengan a"koho" =5:. (eringkan kertas saring da"am o7en 1100' sam!ai 1%) jam. ,ete"ah didinginkan da"am desikator timbang $onto +itung berat residu serat kasar dengan menghitung se"isih antara berat $ontoh dan kertas saring dengan berat kertas saring.

b. Perhitungan (adar F11CFIC@100 Dimana5 F)? berat residu kertas saring yang te"ah dikeringkan 0g1 F1 F ? berat kertas aring ? berat $ontoh yang diana"isis. serat kasar 0gC100 g $ontoh1 ? H0F)%

D $t % P#"t 0

Nur"ita. )00= .Karbohidrat. Diakses da"am 0htt!5CC#i"4aha4ny.&ord!ress.$om C )00=C07C10C karbohidratC1. Diakses !ada tangga" )) 6!ri" )013. .iyadi Fahyu.)00=.Uji Kualitatif Karbohidrat. .$om C)00=C Diakses da"am 0htt!5CC&ahyuriyadi.b"ogs!ot 10Cuji%kua"itati#%

karbohidrat.htm"1 Diakses !ada tangga" )) 6!ri" )013 ,udarmaji /. dkk. 1=<). 6na"isa /ahan Makanan dan Pertanian. Liberty 5 Logyakarta La4id Gstien dan Lisda Nursanti. )00;. Penuntun Praktikum BIOKIMIA untuk Mahasiswa Analis. 6ndi -##set 5 Logyakarta. Finarno E.2. 1=<;. Kimia Pangan dan Gizi. 2ramedia 5 8akarta