Anda di halaman 1dari 19

Artikel Hipotesis Laktat Sebagai Substrat Energi Oksidatif Terakhir di Otak dan Jaringan Lainnya Avital Schurr

Abstrak Saat ini, fokus pada laktat dikarenakan laktat adalah substrat oksidatif untuk metabolisme energi di otak (dan jaringan lainnya), bukan produk akhir tak berguna dari glikolisis anaerobik. Beberapa bukti menunjukkan laktat yang memainkan peran utama dalam metabolisme energi aerobik di otak, jantung, otot rangka dan mungkin dalam jaringan dan organ lainnya. Namun demikian, bukti ini telah menantang konsep lama laktat sebagai produk limbah anaerobik dan memicu perdebatan sengit antara pendukung glukosa sebagai substrat energi oksidatif utama dan mereka yang mendukung laktat sebagai alternatif yang mungkin untuk glukosa dalam kondisi tertentu. Sementara para peneliti bekerja pada metabolisme energi dalam otot rangka telah mengambil langkah besar untuk menjembatani antara dua posisi ekstrim, menerima peran laktat sebagai substrat energi oksidatif, ahli saraf tampaknya agak lebih emosional tentang perbedaan mereka dan kurang setuju. Dalam tulisan ini saya telah berusaha menemukan dari penelitian tentang otot rangka menggunakan data lama dan baru yang ada pada metabolisme energi otak, untuk mengungkapkan laktat yang merupakan satu-satunya produk utama dari glikolisis otak (dan jaringan lain), apakah aerobik atau anaerobik, saraf atau astrositik, selama istirahat atau selama aktivasi. Oleh karena itu laktat adalah utama, tapi bukan satu-satunya substrat yang digunakan oleh siklus asam trikarboksilat mitokondria. Jika terbukti benar, hipotesis ini harus memberikan pemahaman yang lebih baik dari sisi biokimia dan fisiologi metabolisme energi (otak) dan implikasi penting di mana pencitraan neuro bersangkutan. Kata kunci: metabolisme energi otak, glukosa, glikolisis, laktat, siklus asam trikarboksilat

Pendahuluan Selama bertahun-tahun, kebanyakan ilmuwan setuju bahwa laktat adalah produk akhir yang tidak berguna dari metabolisme energi anaerobik, yang kadangkadang bisa menjadi berbahaya. Gagasan ini telah diwujudkan, antara lain, konsep bahwa akumulasi laktat dalam jaringan otot menyebaban kelelahan otot, sebuah konsep yang baru-baru ini dibantah [1]. Di otak, laktat telah dianggap sebagai faktor utama yang memperburuk kerusakan akibat iskemik otak. Reputasi buruk seperti itu akan menjelaskan mengapa penelitian tentang tubuh kita sangat penting tentang oksidasi monokarboksilat di otak, yang saat ini diabaikan dan sebab utama mengapa bukti terbaru yang menunjukkan laktat menjadi substrat energi oksidatif penting otak masih penuh dengan keragu-raguan. Sebuah hipotesis yang diajukan oleh Magistretti dan rekan-rekannya [2], yang dikenal sebagai astrocyte-neuron lactate shuttle hypothesis (ANLSH), semakin menambah panas perdebatan tentang mana di antara glukosa atau laktat yang merupakan substrat energi yang lebih penting selama aktivasi otak [3-6]. Baru-baru ini, ANLSH memicu kontroversi lama lainnya menyangkut peran hipotesis dalam penelitian ilmiah [7-8]. Apapun itu, tulisan ini mengajukan hipotesis baru pada laktat yang memainkan peran metabolisme energi dalam otak (dan jaringan lainnya). Dalam mengumpulkan hipotesis, saya telah menggunakan studi lama dan baru yang dilakukan baik di otak dan jaringan lain. 'De facto,' ada banyak kesepakatan di antara para ilmuwan saat ini tentang peran laktat dalam metabolisme energi. Pada bagian ini, setidaknya di antara ahli saraf, tampaknya fokus terutama pada apakah laktat memainkan peran penting atau tidak dalam metabolisme energi oksidatif otak seperti halnya glukosa. Jika seseorang menerima laktat yang bukan substrat oksidatif energi otak yang signifikan maka, setiap hipotesis yang mempromosikan laktat sebagai substrat tersebut, termasuk ANLSH, tidak akan dapat diterima. Ini adalah keyakinan saya bahwa perdebatan 'yang lebih penting' mulai menyadari kemungkinan yang lebih signifikan, yaitu, bahwa glukosa dan laktat adalah integral dan wujud penting dari metabolisme energi.

Pertimbangan Sejarah Sebagian besar pengetahuan terkini mengenai pembentukan dan nasib laktat berasal dari studi awal pada latihan otot [9]. Para penulis studi tersebut juga menciptakan terminologi utama yang berhubungan dengan jaringan laktat dan pada akhirnya, bertanggung jawab dalam sebagian besar kesalahpahaman tentang laktat. Oleh karena itu, hingga akhir tahun 1958, laktat digambarkan sebagai produk akhir dari pengurangan sistem LDH (lactate dehydrogenase), yang tidak memiliki fungsi lain dalam metabolisme [10]. Selain itu, LDH digambarkan sebagai sistem buntu yang unik di mana laktat endogen tidak berpartisipasi dalam reaksi lain yang akan terpengaruh oleh akumulasinya dalam sel. Meskipun demikian, banyak makalah tentang metabolisme energi otak yang diterbitkan pada akhir tahun 1920 dan awal 1930-an telah benar-benar diabaikan selama bertahun-tahun. Setelah meninjau makalah ini, kita harus memperhitungkan fakta bahwa pada saat publikasi mereka tidak ada siklus mitokondria tricarboxylic acid (TCA) maupun jalur glikolisis telah diusulkan. Namun demikian, fakta bahwa siklus TCA dirumuskan pada tahun 1937 (Krebs dan Johnson), tiga tahun sebelum perumusan jalur glikolisis, bisa berkontribusi, dengan konsep yang berlaku tentang peranan substrat tertentu dan produk dari jalur glikolisis (lihat di bawah). Para peneliti paling aktif di bidang metabolisme sistem saraf selama periode awal adalah Holmes dan Ashford. Keduanya menerbitkan sejumlah studi mengenai oksidasi glukosa dan terutama laktat pada jaringan otak. Dalam sebuah studi awal mereka menyimpulkan bahwa jaringan otak memiliki dua mekanisme pembentukan laktat, satu, melibatkan glukosa, yang secara kuantitatif lebih penting dan independen dari fosfat, yang lain, yang jauh lebih kecil, melibatkan glikogen dan tergantung pada ketersediaan fosfat [11]. Kemudian, mereka menerbitkan studi rinci tentang oksidasi asam laktat di otak [12,13]. Dalam studi ini mereka menunjukkan bahwa tidak ada sintesis karbohidrat dari porsi asam laktat yang menghilang tetapi tidak dicatat oleh penyerapan O2. Selain itu, mereka menemukan bahwa penyerapan oksigen dengan adanya glukosa dihambat oleh NaF, sedangkan serapan tersebut dengan adanya asam

laktat kebal terhadap fluoride [14]. Dengan demikian, mereka adalah yang pertama menunjukkan pemanfaatan aerobik laktat dalam jaringan otak, yaitu hubungan antara hilangnya asam laktat dan konsumsi oksigen. Mereka juga menunjukkan bahwa hasil bagi pernapasan, baik jaringan otak dengan dan tanpa suplementasi laktat, yang dekat dengan kesatuan, bahkan ketika hewan yang dipakai jaringan otaknya mengalami hipoglikemik setelah diberikan suntikan insulin [13]. Mereka juga menyimpulkan bahwa oksidasi laktat tidak mungkin untuk cadangan pemanfaatan substrat lain [13]. Satu hal yang mungkin agak membingungkan, jika ada yang menganggap bahwa pemanfaatan laktat menggantikan glukosa. Namun, in vivo, laktat berasal dari glukosa dan oksidasi terdahulu yang telah digunakan sebelumnya, daripada menghematnya. Penghematan glukosa dapat terjadi hanya ketika laktat (atau piruvat) digunakan secara eksogen dalam tingkat yang cukup tinggi langsung ke otak, melewati hati. Selain itu, para peneliti ini tidak dilengkapi dengan peralatan yang memadai untuk bereksperimen dengan dua substrat yang berbeda (glukosa dan laktat) secara bersamaan untuk langsung menilai apakah dengan penambahan laktat mereka bisa menyisihkan pemanfaatan glukosa atau sebaliknya. Dengan demikian, kesimpulan mereka harus dipandang terutama sebagai sebuah perkiraan. Jelas, Holmes dan Ashford tidak menyadari, hingga kini tidak ada, gagasan bahwa dalam kondisi aerobik glukosa seharusnya dikurangi menjadi piruvat, bukan laktat. Konsep piruvat sebagai produk akhir dari glikolisis aerobik dirumuskan dengan pengenalan jalur glikolisis. Yang paling masuk akal penjelasan untuk keputusan jalur formulator untuk menempatkan piruvat sebagai produk akhir aerobic harus dilakukan dengan pengenalan siklus TCA tiga tahun sebelumnya, di mana piruvat diusulkan untuk memainkan peran utama dalam pembentukan siklus sitrat dari oksaloasetat dan asetilSCoA [15]. Jelas, banyak ahli biokimia periode ini sudah akrab dengan persyaratan siklus TCA untuk piruvat sebagai substrat utamanya. Glikolisis baik dulu maupun sekarang, masih dianggap sebagai sumber terbaik untuk piruvat dalam jumlah yang cukup. Sementara itu ada laporan tersendiri tentang konversi laktat menjadi piruvat [16], kebanyakan studi telah menunjukkan reaksi sebaliknya, yaitu, produksi laktat dari glukosa, fruktosa, heksosedifosfat atau piruvat [17-22].

Dengan demikian, lebih dari 60 tahun setelah glikolisis diperkenalkan, sebuah peristiwa yang meluncurkan era biokimia modern, hal ini dijelaskan dalam semua buku teks sebagai jalur yang dimulai dengan fosforilasi glukosa dan diakhiri dengan pembentukan laktat (reaksi I dan Gambar 1). I. Glukosa+2ATP+4ADP+2Pi+2NAD+ 2laktat+2ADP+4ATP+2NAD+

Gambar 1. Ilustrasi skematik jalur glikolisis anaerobik. Seperti digambarkan dalam kebanyakan buku glukosa adalah substrat glikolisis, yang melalui serangkaian reaksi enzimatis, dikonversi menjadi laktat. Reaksi memerlukan 2 molekulATP untuk setiap molekul glukosa dan menghasilkan 2 molekul laktat dan 4 molekul ATP.

Deskripsi ini berubah ketika oksigen ada, dalam hal ini glikolisis berhenti dari langkah enzimatik terakhir, yaitu, laktat dehidrogenase (LDH), berakhir dengan piruvat, substrat ciri khas mitokondria siklus TCA (reaksi II dan Gambar 2).

II. Glukosa+2ATP+4ADP+2Pi+2NAD+ 2piruvat+2ADP+4ATP+2NADH

Sementara itu, pengecualian urutan aerobik telah didokumentasikan, di mana hasil glikolisis untuk membentuk laktat, seperti sel darah merah, otot jantung dan retina, gagasan yang berlaku adalah bahwa, di bawah pasokan oksigen yang cukup, piruvat, bukan laktat, adalah produk akhir dari glikolisis aerobik. Namun demikian, selama 50 tahun terakhir, bukti telah terkumpul, yang menunjukkan laktat menjadi substrat energi aerobik yang cocok untuk jaringan otak [23-43]. Bukti ini tentunya sudah mengangkat keraguan dalam hal gagasan bahwa laktat adalah produk buntu. Selain itu, sebuah studi terbaru oleh Dalsgaard dan rekan-rekannya [44] telah menunjukkan bahwa laktat, yang dihasilkan selama aktivitas, diambil dan dimetabolisme oleh otak. Sebuah komentar kritis yang secara luas diterima terhadap dogma bahwa secara aerobik, piruvat, bukan laktat, adalah produk akhir dari glikolisis (reaksi II dan Gambar 2) menunjukkan bahwa baik secara kimiawi dan termodinamika adalah cacat. Pertama, secara termodinamika, glikolisis harus diproses sampai selesai, yaitu pembentukan laktat, mulai dari konversi piruvat hingga menjadi laktat menghasilkan energi bebas (G0 = -6 kkal/mol). Kedua, secara kimiawi, glikolisis harus harus diproses hingga membentuk laktat, mulai dari reaksi LDH meregenerasi NAD+ dengan mengoksidasi bentuk NADH selama gliseraldehida fosfat (GAP) reaksi dehidrogenase, menjamin siklus alamiah glikolisis (reaksi III dan Gambar 1). NAD+ NAD+

III. Glukosa (glikogen)

GAP

1,3 BPG

piruvat

laktat

NADH

NADH

Gambar 2. Ilustrasi skematik glikolisis aerobik. Secara umum diterima bahwa dengan adanya oksigen, jalur glikolitik memetabolisme glukosa menjadi piruvat, melewatkan langkah terakhir jalur tersebut, konversi piruvat menjadi laktat oleh laktat dehidrogenase (LDH). Piruvat bukan diangkut ke dalam mitokondria via monocarboxylate transporter (MCT) untuk digunakan sebagai substrat untuk siklus asam trikarboksilat (TCA).

Selain itu, asumsi bahwa di bawah kondisi aerobik konversi piruvat menjadi asetil-SCoA, terjadi reaksi dalam mitokondria dan membutuhkan NAD+, di mana secara termodinamika lebih baik dari konversi piruvat menjadi laktat, tidak dapat dibuktikan. Asumsi ini akan memiliki beberapa dasar jika saja enzim glikolitik, substrat dan produk itu ada, seperti yang diyakini selama bertahun-tahun, berada bebas di sitosol yang sifatnya seperti media air. Lehninger [45] secara umum pada glikolisis aerobik menyatakan bahwa baik laktat atau piruvat dioksidasi menjadi CO2 dan H2O. Namun, dalam berurusan dengan organisasi intraselular dari sistem glikolitik ia menyatakan bahwa 11 enzim yang mengkatalisis urutan glikolitik berada dalam sitoplasma, setidaknya di sebagian besar

sel. Jelas, itu tidak terjadi kepada beberapa ahli kimia yang besar bahwa asumsi tentang urutan glikolitik, reaksi-reaksi dan enzim-enzim seperti yang ada dalam larutan bebas belum tentu mencerminkan dalam situasi in situ. Dengan demikian, banyak bahkan sampai hari ini, berpendapat bahwa reaktan glikolisis dan enzimenzim mengalir dengan bebas dalam sitosol. Hanya gagasan seperti ini yang akan menjelaskan mengapa jalur glikolisis digambarkan sebagai rantai cabang, di mana piruvat, dengan adanya oksigen, tidak sesuai dengan aturan termodinamika dan mengubah arah untuk mencari mitokondria dan tidak dilanjutkan melalui langkah terakhir, reaksi LDH. Meskipun demikian, gagasan Lehninger sebagaimana dikutip di atas, agak mengejutkan, karena selama 6 tahun sebelum pertanyaan ini dipublikasi telah timbul mengenai validitas konsep bahwa jalur glikolitik berada bebas dalam larutan. Green dkk [46] dari studi mereka pada sel darah merah dan ragi menyimpulkan bahwa dalam sel utuh, kompleks enzim-enzim glikolitik berhubungan dengan membran plasma dan bukan dalam larutan bebas. Schrier [47], yang meneliti juga menggunakan eritrosit, mencapai kesimpulan yang sama. Pada tahun 1978, Knull, yang menggunakan jaringan otak tikus, menunjukkan bahwa semua enzim glikolitik berhubungan dengan partikel fraksi ujung saraf segaris [48]. Clegg berpendapat bahwa ada hubungan yang erat antara susunan selular dan kebanyakan, dan mungkin semua, dari kerja metabolik. Dia juga menyimpulkan bahwa hubungan tersebut dinamis dan di bawah kontrol ketat, dan apabila terjadi gangguan dapat menyebabkan kerusakan dan hilangnya regulasi [49]. Oleh karena itu, pembentukan laktat dari piruvat berlangsung dalam agregat enzim glikolitik, sementara konversi piruvat menjadi asetil-SCoA, langkah awal dalam siklus TCA, berlangsung di mitokondria, konversi yang pertama yang membutuhkan transportasi dari monokarboksilat menuju organel melalui membran dalamnya. Hal ini juga penting untuk mempertimbangkan bahwa keberadaan mitokondrial LDH telah ditetapkan dan laktat yang telah terbukti sama baiknya, jika tidak lebih baik daripada, piruvat sebagai substrat untuk mitokondria siklus TCA [5052].

Brandt dkk, dalam penelitian mereka mengenai persiapan mitokondria dari jaringan yang berbeda, menempatkan bagian besar dari mitokondrial LDH dalam mitokondria [51]. Mereka membedakannya dari sitosolik LDH, dicirikan oleh mereka sebagai LDH5 (lihat juga di bawah), yang lebih suka melekat pada membran luar mitokondria. Dari semua jaringan yang berbeda para peneliti ini mengisolasi mitokondria, termasuk jantung, ginjal, limfosit hati dan otak, hanya persiapan yang terakhir agak terkontaminasi dengan 3 enzim glikolitik, fosfoglukomutase, isomerase fosfoglukosa dan 3-fosfogliserat kinase [51]. Dengan demikian, glikolisis aerobik, ketika digabungkan dengan mitokondrial siklus TCA, lebih baik dijelaskan oleh reaksi berikut: IV. Glukosa +2ATP + 4ADP + 2Pi + 2NAD+ 2laktat + 2ADP + 4ATP + 2NAD+ (kaskade reaksi yang terjadi dalam agregat glikolitik) V. 2laktat + 2NAD+

2piruvat + 2NADH

(konversi yang terjadi di dalam membran dalam mitokondria setelah laktat diangkut melalui membran luar mitokondria oleh monocarboxylate transporter [MCT]) Oleh karena itu, satu yang dapat disimpulkan bahwa hasil glikolisis melalui konversi piruvat menjadi laktat dalam kondisi baik anaerob dan aerob adalah secara termodinamika, kimia dan spasial. Satu juga harus dipertimbangkan mengenai jumlah laktat dan piruvat dalam jaringan. Pada tahun-tahun awal setelah perumusan jalur glikolisis, banyak peneliti mempelajari rasio dalam darah manusia saat istirahat, selama beraktifitas, setelah makan, setelah pemberian piruvat, laktat atau glukosa dan dalam berbagai keadaan patologis [10, 18,19,53-55]. Dalam semua studi jumlah piruvat selalu ditemukan lebih rendah dibandingkan laktat dan dengan demikian rasio diukur [laktat] / [piruvat] dari jaringan mana saja sekitar 7,0-25,0, tergantung pada kondisi di mana pengukuran dilakukan. Rasio yang rendah ini biasanya berhubungan dengan keadaan patologis.

Dengan demikian, Flock dkk [17] menunjukkan perfusi konversi piruvat menjadi laktat pada anjing. Huckabee [10] mempelajari hubungan piruvat, laktat dan oksigen dan dapat dirumuskan sebagai berikut: [NADH] [Laktat] = [Piruvat] x K [NAD+] Persamaan di atas menyatakan ketergantungan pembentukan laktat pada piruvat dan konstanta K x [NADH / NAD+]. Oleh karena itu, dalam kondisi penuh oksigen, ketika rasio [NADH] / [NAD+] diadakan, lebih atau kurang, konstan, perubahan konsentrasi piruvat harus membawa perubahan yang sesuai dalam konsentrasi laktat, yaitu peningkatan [piruvat] akan segera diikuti dengan peningkatan [laktat] tanpa adanya perubahan dalam konsumsi oksigen. Tentu saja, hubungan ini berlaku asalkan pH darah tidak berubah. Sebagai akibatnya, peningkatan fluks glikolitik dalam kondisi penuh oksigen harus menghasilkan peningkatan piruvat yang diikuti bertambahnya konsentrasi laktat, rasio [laktat] / [piruvat] konstan. Menurut persamaan di atas dan rasio tinggi [laktat] / [piruvat] yang biasanya dipertahankan, jelas bahwa bahkan di bawah kondisi penuh aerobik, laktat adalah produk akhir dari glikolisis. Menariknya, Huckabee [10] tidak mempertimbangkan dalam perhitungannya dua faktor penting: a) perubahan lokal dalam konsentrasi oksigen, yang dapat menyebabkan perubahan dalam [NADH / NAD+] dan b) penurunan konsentrasi laktat yang akan menurunkan [NADH]. Saya menguraikan kedua faktor ini kemudian. Beberapa pertimbangan di atas berkaitan dengan metabolisme energi otot rangka dan jantung dan peran laktat dalam metabolisme ini dirinci dalam review yang sangat bagus oleh Gladden [56].

Hipotesis Berdasarkan pertimbangan sebelumnya, dihipotesiskan bahwa di otak, dan kemungkinan besar di jaringan lainnya, baik saat istirahat (pernahkah otak beristirahat?) atau selama aktifitas, baik dalam kondisi aerobik dan anaerobik,

glikolisis selalu berproses hingga ke langkah akhir, reaksi LDH dimana piruvat diubah menjadi laktat. Dengan demikian, hipotesis ini mendalilkan bahwa laktat, bukan piruvat, merupakan substrat oksidatif untuk mitokondrial siklus TCA in situ (Gambar 3).

Gambar 3. Sebuah gambaran skematis penyusunan hipotetis jalur glikolitik yang beragregat dengan semua enzim, substrat dan produk. Menurut hipotesis pada bagian depan artikel ini, glikolisis, baik aerobik atau anaerobik, selalu berakhir pada langkah terakhir, pembentukan laktat, substrat in situ untuk respirasi mitokondria. Langkah enzimatis terakhir dalam glikolisis sitosolik adalah laktat dehidrogenase umumnya terdiri dari isoform yang mengkatalisis konversi piruvat menjadi laktat (LDH5). Berbeda dengam hal tersebut, isoform yang mengubah laktat menjadi piruvat (LDH1) adalah enzim pertama mitokondria jalur oksidatif, yang menyediakan piruvat untuk siklus asam trikarboksilat.

Hal ini penting dan adil untuk menunjukkan bahwa peneliti tentang metabolisme energi dalam otot rangka dan jantung telah mempertimbangkan gagasan bahwa laktat adalah produk dari glikolisis aerobic baik secara intrasel maupun

ekstrasel dari tempat pembentukannya hingga teroksidasi dalam mitokondria [52,5660].

Percobaan Hipotesis Gladden [56] mendaftar beberapa pertanyaan kunci tentang ANLSH tersebut. Sementara pertanyaan ini focus pada validitas ANLSH, salah satu isu utama yang muncul adalah apakah laktat merupakan substrat energi teroksidasi utama dalam otak. Tujuan dari hipotesis ini bukan untuk memvalidasi atau mendiskreditkan ANLSH tersebut. Sebaliknya, itu bertujuan untuk memberikan penjelasan yang masuk akal akan data yang dalam jumlah besar yang menunjukkan bahwa laktat merupakan substrat energi teroksidasi penting dalam otak. Sejak ANLSH telah menjadi isu utama dalam perdebatan peran laktat dalam metabolisme energi, penjelasan singkat tentang ANLSH bagi mereka yang tidak akrab dengan perdebatan mulai tertarik. Hipotesis ANLSH bahwa, pada saat aktivasi saraf dengan glutamat, astrosit mengambil glutamat yang dilepaskan presinaps dari celah sinaps melalui transporter glutamat spesifik Na+. Hasil peningkatan intraseluler pada astrositik [Na+] menginduksi aktivitas Na-K-ATPase bertujuan memompa keluar tambahan Na. Peningkatan permintaan ATP oleh aktifitas pemompaan ini menginduksi aktifitas glikolitik astrositik dan juga produksi laktat. Jumlah astrositik laktat diangkut melalui MCT yang ditemukan dalam membran astrosit dan neuron, pertama ke ruang ekstraseluler dan kemudian ke neuron tetangga, di mana ia teroksidasi dalam mitokondria. Selain itu, telah dinyatakan bahwa neuron secara eksklusif mengandung isoform LDH1, sementara astrosit mengandung LDH1 dan LDH5 [2,61-66]. Pellerin dan Magistretti baru-baru ini merevisi ANLSH (lihat di bawah) dan dengan demikian tidak semua detail dalam uraian singkat diatas telah diperbarui. Namun demikian, perlu ditekankan lagi bahwa banyak dari kritik ANLSH, baik dalam format asli atau revisi, telah mengarahkan gagasan laktat sebagai substrat energi aerobik utama. Konsekuensinya, setiap hipotesis, termasuk yang diusulkan di

sini, yang mempromosikan laktat sebagai substrat energi oksidatif utama akan dikritik juga. Relevansi dari distribusi dari 2 isoform LDH, LDH1 dan LDH5, antara neuron dan astrosit, masing-masing, telah dipertanyakan oleh para kritikus ANLSH, karena reaksi LDH dekat-ekuilibrium dan dengan demikian isoform yang melakukan reaksi ini mungkin hanya memiliki efek kecil pada fluks reaksi in vivo [67] (Newsholme, 2003). Dan dengan demikian, sementara relevansi distribusi dari isoform LDH antara neuron dan astrosit belum ditentukan, distribusi intraseluler mereka, di mana LDH1 adalah isoform mitokondria dan LDH5 adalah satu sitoplasma, bisa menjadi bagian penting dan relevan untuk alasan hipotesis ini. Chih dan Roberts, dua kritikus ANLSH, menjelaskan dalam makalah mereka [4] bahwa "glikolisis mengacu pada konversi glukosa menjadi piruvat dalam kondisi aerobik dan glikolisis anaerobik mengacu pada konversi glukosa menjadi laktat," definisi klasik glikolisis. Mereka menolak laktat sebagai substrat energi oksidatif in situ karena apa yang mereka istilahkan kelayakan termodinamika untuk konversi laktat menjadi piruvat. Menurut Chih dan Roberts [4], pada tahap awal aktivasi saraf, dengan meningkatnya fluks glikolitik, jumlah piruvat meningkat dan rasio sitosol NADH / NAD+ meningkat. Perubahan ini bisa dibilang mendorong reaksi katalis LDH terhadap produksi laktat daripada menggunakan laktat, membuat pemanfaatan oksidatif laktat tidak mungkin. Namun, argumen ini bertentangan dengan deskripsi glikolisis aerobik mereka. Sebenarnya, argumen mereka sepenuhnya setuju dengan hipotesis ini bahwa peningkatan fluks glikolitik karena tuntutan energi yang lebih tinggi akan menghasilkan peningkatan produksi laktat aerobik. Lebih penting lagi, jika seseorang menerima alasan hipotesis ini bahwa glikolitik (sitosolik) LDH (5) selalu mengkatalisis konversi piruvat menjadi laktat, sedangkan mitokondria LDH (1) adalah enzim yang mengubah laktat menjadi piruvat lalu, tidak boleh ada konflik antara pembentukan glikolitik laktat dan pemanfaatan bersama mitokondria laktat, apakah laktat berasal intrasel maupun ekstrasel. Selain itu, tidak boleh ada masalah dengan rasio NADH / NAD+, sejak pembentukan sitosol katalis LDH laktat juga menjamin oksidasi NADH dan siklus alami glikolisis. Reduksi NAD+ menjadi

NADH selama oksidasi laktat terjadi dalam mitokondria dan harus memiliki efek yang dapat diabaikan pada glikolisis sitosol. Brooks dan rekan-rekannya [52,57,58,68-70], menggunakan pelacak isotop, sangat menyiratkan bahwa secara glikolisis produksi piruvat terutama dikonversi menjadi laktat, bukan asetil-CoA, sementara laktat, yang secara eksogen, istimewanya dimetabolisme menjadi asetilCoA. Brooks adalah orang pertama yang mengusulkan adanya shuttle laktat intraseluler [57], yang tidak berarti mendukung atau membantah ANLSH. Selain itu, tidak ada alasan bahwa dengan meningkatkan produksi laktat akan menghasilkan akumulasi laktat dapat diamati jika kita menganggap bahwa pada awal aktivasi setiap molekul laktat yang dihasilkan diangkut ke dan dioksidasi oleh mitokondria. Namun, praktik studi Hu dan Wilson [38] menunjukkan bahwa segera setelah stimulasi saraf ada sebuah lubang (peningkatan pemanfaatan) di ketiga substrat energi otak, glukosa, oksigen dan laktat. Jika astrosit adalah sel-sel yang bertanggung jawab untuk kelancaran rangsangan neurotransmitter dari celah sinaps maka, hal ini adalah sinyal yang menginduksi peningkatan fluks dari jalur glikolitik dalam astrosit. Seperti yang telah ditunjukkan oleh Hu dan Wilson [38], peningkatan kadar laktat ekstraseluler pada stimulasi cukup signifikan (160-200%) dan disertai dengan penurunan kadar glukosa ekstraseluler tanpa perubahan yang signifikan dari konsentrasi oksigen dalam jaringan [38]. Karena glutamat adalah neurotransmitter yang paling menonjol di otak, peran serapan astrosit adalah paling utama dalam pengiriman sinyal yang disebutkan di atas. Studi ini menggunakan irisan hippocampal telah jelas menunjukkan bahwa setiap peningkatan kadar laktat jaringan akibat aktivasi oleh glutamat hampir tidak terdeteksi, kecuali transportasi laktat dihambat [30]. Penghambatan transportasi laktat, baik dari astrosit atau ruang ekstraselular, menuju neuron harus menghasilkan akumulasi baik dalam astrosit sendiri maupun ekstrasel. Selain itu, N-metil-Daspartat (NMDA), analog glutamat tidak diakui oleh transporter astrocytic glutamat, sementara bisa merangsang neuron, tidak sama dengan induksi glutamat akumulasi laktat dengan adanya inhibisi MCT [30]. Temuan ini mendukung alasan ANLSH bahwa sebagian besar produksi laktat selama aktivasi saraf terjadi di astrosit. Selain itu, karena glikolisis adalah yang responden pertama terhadap kekurangan energy,

satu yang mungkin diharapkan bahwa glikolisis neuronal akan bereaksi sama dengan glikolisis astrositik, yaitu peningkatan produksi laktat atas gangguan dalam homeostasis ion. Beberapa skenario setuju dengan argumen Chih & Roberts [4], meskipun mereka mengklaim bahwa peningkatan kadar laktat ekstraseluler harus terjadi jika laktat adalah untuk bahan bakar elevasi dalam metabolisme oksidatif terlihat dengan peningkatan aktivitas saraf. Untuk mendiskreditkan peran laktat sebagai bahan bakar oksidatif selama aktivasi saraf, kritikus mengutip beberapa penelitian yang menunjukkan bahwa peningkatan laktat ekstraseluler in situ ketinggalan dari aktifitas saraf dan kadang-kadang tidak terlihat sampai setelah aktifitas tersebut berakhir. Namun, pencapaian Hu dan Wilson [38] sangat menyarankan bahwa induksi stimulasi saraf dengan penurunan singkat jumlah laktat ekstraseluler seiring dengan penurunan singkat serupa dalam kadar glukosa dan oksigen. Adalah masuk akal bahwa peningkatan fluks glikolitik akan berlanjut untuk beberapa saat setelah eksitasi saraf dihentikan, sehingga akumulasi laktat terdeteksi, sebagaimana telah ditunjukkan oleh Hu dan Wilson [38]. Adalah penting untuk ditekankan bahwa sesuai dengan hipotesis ini satu-satunya rute dimana glukosa dapat dimanfaatkan untuk metabolisme energi oksidatif adalah melalui konversi laktat, bukan piruvat, baik dalam astrosit dan neuron. Perbedaan antara glikolisis astrositik dan neuron hanya kuantitatif dimana astrosit melebihi neuron 10 sampai 1 [71]. Astrositik akan memompa aktifitas Na+ sambil celah sinaps dibersihkan dari glutamat harus terus dilanjutkan kadang-kadang setelah aktifasi neuron berakhir. Pemompaan aktifitas ini akan menyebabkan, setidaknya sebagian, penghentian eksitasi neuronal dan peningkatan laktat ekstraseluler, yang tersedia untuk pemanfaatan aerobik oleh neuron. Hal ini tidak akan meminimalkan pentingnya pompa ion neuronal, yang bertanggung jawab untuk peningkatan kebutuhan energi saraf dan dengan demikian, akan terjadi pemanfaatan mitokondria aerobik laktat. Para kritikus ANLSH yang berpendapat bahwa penggunaan oksigen selama aktivitas saraf in situ meningkat dengan cepat dalam 1 sampai 3 detik dan bahwa kenaikan lambat dalam laktat ekstraseluler mungkin tidak akan mendapat bahan bakar secara cepat. Hu dan Wilson [38] telah menunjukkan dengan sangat jelas bahwa laktat sebagai bahan bakar untuk

respon cepat tersebut. Hertz [6], di sisi lain, mengklaim bahwa meskipun, laktat tidak meningkat pada saat aktifasi, kenaikan ini relatif kecil dan ada ketidakpastian mengenai apa yang menandakannya, peningkatan tingkat laktat secara statis atau peningkatan glikolitik fluks. Namun, jika laktat adalah substrat oksidatif, maka fakta bahwa peningkatan jumlahnya dalam ekstraseluler adalah kecil dan tertinggal dari peningkatan konsumsi oksigen mengindikasikan laktat merupakan substrat yang teroksidasi. Apapun itu, satu yang harus ditemukan dari argumen para kritikus ANLSH bahwa jumlah laktat harus naik bersamaan dengan timbulnya aktifasi agak aneh. Apakah kritikus berharap glukosa atau oksigen jaringan meningkat pada saat aktivasi? Sebaliknya, jumlah kedua substrat tersebut, seperti yang ditunjukkan oleh kritikus sendiri, sebenarnya menurun pada saat aktifasi, yang mereka tafsirkan sebagai tanda peningkatan pemanfaatan. Hu dan Wilson [38] menggambarkan terjadi perubahan bifasik dalam jumlah laktat setelah aktifasi, di mana jumlah ekstraseluler dari monokaarboksilat menurun dalam 10-12 detik pertama aktifasi diikuti dengan overshoot yang berlangsung pada 60 detik terakhir atau lebih. Sebuah makalah terbaru oleh Mangia dkk [72] menggambarkan fenomena yang sama menggunakan
1

H-NMR pada manusia. Para penulis menafsirkan hasil mereka bahwa penggunaan

awal laktat sebagai tujuan mengganti glukosa ketika glukosa tidak tersedia dalam jumlah yang cukup. Namun, para penulis masih berpendapat bahwa setelah aliran darah meningkat, neuron dapat menggunakan glukosa sebagai substrat metabolik utama. Asumsi bahwa konsentrasi glukosa kurang dari cukup, dibandingkan dengan laktat dalam otak normal sebelum aktifasi, tidak sesuai dengan konsentrasi normal istirahat otak kedua substrat tersebut. Lebih mungkin, laktat merupakan substrat yang nyata baik selama tahap awal aktifasi dan pada tahap kemudian; apapun itu konsumsi glukosa harus menghasilkan produksi laktat tambahan dan oksidasi, seperti yang ditunjukkan oleh Hu dan Wilson [38]. Penurunan awal dalam konsentrasi laktat dapat dijelaskan dengan alasan sederhana, yaitu konsumsi lebih tinggi dari produksi monokarboksilat ini. Seperti masalah peningkatan kadar substrat, ada banyak contoh dari peningkatan kadar glukosa jaringan otak pasca aktifasi atau pasca-trauma akibat penurunan pemanfaatannya [38,73-75]. Hal ini masuk akal untuk mengasumsikan

bahwa setiap kenaikan jumlah laktat pasca aktifasi menunjukkan bahwa jumlah produksi laktat melebihi laju pemanfaatannya. Sebagai tambahan, ketika jumlah laktat meningkat secara signifikan, seperti dalam kasus periode anaerob [28-30,76] atau pada stimulasi terus menerus [38], laktat dapat menjadi substrat oksidatif pilihan selama reoksigenasi atau penghentian stimulasi. Selain itu, dalam sebuah makalah baru-baru ini, Kasischke dkk [77], menggunakan pengukuran fluoresensi NADH di irisan otak, telah menunjukkan bahwa setelah aktifasi jaringan saraf ada metabolisme oksidatif awal, seperti ditunjukkan secara singkat (~10 detik) menurun pada fluoresensi NADH terlokalisasi di saraf dendrit, diikuti oleh peningkatan pada fluoresensi NADH terlokalisasi di astrosit dan peningkatan aktifitas produksi glikolitik laktat berlangsung selama ~60 detik. Penurunan awal yang diamati pada konsentrasi laktat dan NADH [38,71,77] berhubungan erat dengan jumlah oksigen pada saat aktifasi seperti dilansir Malonek dan Grinvald [78] dan Hu dan Wilson [38]. Semua pengamatan ini secara sederhana dapat menjelaskan hipotesis yang diajukan di sini. Laporan oleh Kasischke dkk [77] membuat Pellerin dan Magistretti untuk merevisi ANLSH [79]. Oleh karena itu, peningkatan kebutuhan energi pada saat aktifasi neuron didukung oleh pemanfaatan laktat oksidatif saraf, ditandai dengan penurunan dentritik mitokondria NADH [77] dan jumlah laktat ekstraseluler [38] diikuti oleh peningkatan astrositik NADH dan konsentrasi laktat. Oleh karena itu, sekarang jelas bahwa gagasan asli ANLSH ini, mendalilkan bahwa pengambilan glutamat astrositik sebagai sinyal aktivitas neuron untuk mengonsumsi glukosa dan metabolisme energi meningkat, adalah salah. Hal ini lebih mungkin bahwa gerakan ion neuronal adalah sinyal yang menginduksi peningkatan substrat oksidasi mitokondria dendritik (penurunan oksigen, laktat dan NADH) yang diikuti elevasi dalam konsumsi glukosa astrositik (peningkatan laktat dan NADH). Hertz, kritikus lain ANLSH tersebut, menolak gagasan bahwa laktat umumnya merupakan substrat energi oksidatif saraf [6]. Untuk mendukung klaimnya, ia mengerjaka beberapa studi di mana baik [14C] atau [13C] diberi label glukosa atau laktat. Kemudian, Itoh dkk [80] menemukan bahwa glukosa tidak berlabel tidak

menghambat produksi 14 CO2 dari laktat berlabel dalam neuron kortikal. Namun, baik Itoh dkk [80] dan Bouzier-Sore dkk [43] telah menunjukkan bahwa laktat tidak berlabel sangat mengurangi produksi
14

CO2 dari glukosa berlabel. Itoh dkk [80]

menjelaskan hasil mereka dengan asumsi bahwa konversi laktat menjadi piruvat juga mengurangi NAD+ menjadi NADH, meminimalkan ketersediaan sisa untuk oksidasi gliseraldehida-3-fosfat selama glikolisis. Hertz [6] berpendapat bahwa jika ini adalah mekanisme di mana laktat menghambat penggunaan glukosa glikolitik, kemudian piruvat, yang tidak terlibat dalam reaksi oksidasi-reduksi NAD+ / NADH, seharusnya kurang efisien sebagai penghambat produksi
14

CO2 dari glukosa berlabel

dibandingkan laktat. Meskipun demikian, hasil ini dapat membantah penjelasan yang diberikan oleh Itoh dkk [80] untuk kemungkinan mekanisme penghambatan produksi
14

CO2 dari glukosa berlabel, eksperimen Hertz sangat memberikan dukungan yang

kuat untuk hipotesis ini, yaitu bahwa laktat (dan piruvat), bila diaktifkan secara eksogen, merupakan substrat oksidatif untuk mitokondria siklus TCA. Akibatnya, pasokan eksogen melimpah baik laktat atau piruvat yang diharapkan menghambat pemanfaatan glikolitik glukosa, sejak pemanfaatan oksidatif salah satu hasil monokarboksilat dalam produksi ~15 mol ATP per mol monokarboksilat tanpa perlu investasi ATP ketika glukosa sebagai substrat. Selain itu, tidak adanya kekurangan NAD+ diharapkan terjadi ketika laktat sebagai substrat, sejak enzim yang mengoksidasinya menjadi piruvat bukanlah glikolitik LDH (5), melainkan adalah LDH mitokondria (1). Sangat menarik bahwa mereka yang mengabaikan laktat sebagai substrat energi oksidatif dengan alasan bahwa jumlahnya tidak cukup banyak untuk mendukung kebutuhan energi untuk aktifitas neuron, tidak seperti piruvat: tidak ada kritikus ANLSH mengharapkan tingkat piruvat meningkat secara signifikan selama aktifasi meskipun menurut gagasan utama mereka, piruvat merupakan produk glikolisis aerobik dan dengan demikian jumlahnya juga harus banyak jika ingin mendukung tuntutan energi yang lebih tinggi. Meskipun demikian, harus ditekankan bahwa hipotesis 'laktat sebagai substrat energi utama oksidatif' tidak dibuat hanya untuk mendukung atau menolak ANLSH

tersebut. Hipotesis ini bertujuan sebagai kerangka untuk menjelaskan hasil dari berbagai penelitian dari dua dekade terakhir mengenai metabolisme energi otak (dan jaringan lainnya) yang telah menantang salah satu dari dogma yang paling abadi dalam biokimia.

Kesimpulan Ada banyak persamaan antara otak dan jaringan otot rangka. Dalam keduanya, setidaknya ada dua jenis sel tetangga yang saling mempengaruhi, terutama selama aktifitas tinggi, neuron dan astrosit di otak dan serat tipe I dan II dalam otot rangka. Banyak penggambaran dari serat otot rangka, begitu elegan diuraikan oleh Brooks [52,57,58], penyidik pertama untuk istilah lactate shuttle,dan Van Balai [59], dapat dengan mudah diterapkan untuk jaringan otak. Hipotesis yang diajukan di sini mendalilkan laktat yang merupakan produk glikolitik utama di otak (dan jaringan lainnya), baik dalam kondisi aerobik atau anaerobik, dalam neuron atau astrosit. Ini menyediakan jembatan yang diperlukan antara dua faksi dalam perdebatan tentang mana yang lebih penting, glukosa atau laktat, untuk metabolisme energi oksidatif. Dengan demikian, keduanya: glukosa sebagai substrat dari jalur glikolisis dan laktat sebagai substrat dari mitokondria siklus TCA.