Anda di halaman 1dari 22

TUGAS KIMIA ANALITIK Hight performance liquid chromatography (HPLC) dan gas Kromatografi (GC)

Oleh:

Kelompok VII Afrianti Ramadhani Dekna As ita G!snila ati Re"iana er"ita Re#ki $ratama

%URUSAN KIMIA &AKULTAS MAT'MATIKA DAN ILMU $'NG'TA(UAN ALAM UNIV'RSITAS N'G'RI $ADANG )*+*

KROMATOGRA&I A. Pendahuluan Kromato,rafi adalah s!at! metode pemisahan fisik- dimana komponen. komponen /an, dipisahkan didistri0!sikan diantara d!a fasa- salah sat! fasa fasa terse0!t adalah s!at! lapisan stasioner den,an perm!kaan /an, l!as- /an, lainn/a se0a,ai fl!ida /an, men,alir lem0!t di sepan1an, landasan stasioner2 &asa stasioner 0isa 0er!pa padatan ma!p!m 3airan- sedan,kan fasa 0er,erak 0isa 0er!pa 3airan ma!p!n ,as2 %adi sem!a 1enis kromato,rafi /an, diketah!i dior,anisir 1adi sat! dalam empat kate,ori /an, dit!n1!kakan dalam ta0el se0a,ai 0erik!t: &asa stasioner &asa 0er,erak 4ontoh.3ontoh padat 4air ,as Kromato,rafi Kromato,rafi asli ,as.padatTs ett-den,an ata! GS4 lar!tan petrole!meter dan kolom 4a4O5Kromato,rafi pert!karan ion Sel!r!h 0ent!k kromato,rafi terdiri dari fase diam dan fase ,erak2 Dalam sel!r!h 0ent!k kromato,rafi /an, lain- anda akan menem!i fase ,erak adalah 3airan2 Dalam kromato,rafi ,as.3air- fase ,erak adalah ,as seperti heli!m dan fase diam adalah 3airan /an, memp!n/ai titik didih /an, tin,,i diserap pada padatan2 6a,aimana ke3epatan s!at! sen/a a tertent! 0er,erak melal!i mesin- akan ter,ant!n, pada se0erapa lama akt! /an, diha0iskan !nt!k 0er,erak den,an ,as dan se0alikn/a melekat pada 3airan den,an 1alan /an, sama2 Dalam sem!a teknik kromato,rafi- #at.#at terlar/t /an, dipisahkan 0ermi,rasi sepan1an, kolom 7seperti dalam kromato,rafi kertas ata! lapisan tipis- eki"alen fisik kolom8- dasar pemisahan terletak dalam la1! perpindahan /an, 0er0eda !nt!k lar!tan 0er0eda2 La1! perpindahan se0!ah #at terlar!t se0a,ai hasil dari d!a faktor- /an, sat! 3ender!n, men,,erakkan #at terlar!t it!- dan /an, lain menahann/a2 $er0edaan ke3il antara d!a #at terlar!t dalam kek!atan adsor0si dan dalam interaksin/a dalam pelar!t 4air 3air Gas Kromato,raf Kromato,ra i partisi pada fi ,as.3air kolom silika ata! GL4 ,el Kromato,raf i kertas

/an, 0er,erak men1adi dasar pemisahan 0ila #at molek!l.molek!l #at terlar!t it! 0er!lan,kali men/e0ar diantara d!a fasa kesel!r!h pan1an, kolom2 Ada 0e0erapa 3ara !nt!k men,klasifikasi teknik kromato,rafi didasarkan atas tipe penamaan dari fasa 7fasa tetap dan fasa 0er,erak8 seperti ,as.3airan7GL48- ,as.padat 7GS48- 3airan. 3airan7LL48- dan 3airan.padat7LS482 Klasifikasi lain didasarkan pada teknik pen,,!naan 3ontohn/a2 Teori kromato,rafi didasarkan pada kesetim0an,n distri0!si sampel antara fasa /an, ditetapkan oleh konstanta kesetim0an,an K- dise0!t den,an koefisien distri0!si2 Rata.rata konsentrasi men,ik!ti h!k!m distri0!si :

Dimana 4s adalah konsentrasi fasa stasioner dan 4m konsentrasi fasa 0er,erak2 La1! rata.rata perpindahan molek!l ditent!kan oleh : +2 Ke3epatan molek!l pem0a a )2 $er0andin,an "ol!me fasa stasioner den,an fasa 0er,erak 52 Koefisien distri0!s! dari #at terlar!t

1. Kromatografi Gas Kromato,rafi ,as.3air 7GL48- ata! kromato,rafi ,as 7G48- mer!pakan 1enis kromato,rafi /an, di,!nakan dalam kimia or,anik !nt!k pemisahan dan analisis2 G4 dapat di,!nakan !nt!k men,!1i kem!rnian dari 0ahan tertent!- ata! memisahkan 0er0a,ai komponen dari 3amp!ran2 Dalam 0e0erapa sit!asi- G4 dapat mem0ant! dalam men,identifikasi se0!ah kompleks2 Dalam kromato,rafi ,as- fase /an, 0er,erak 7ata! 9mo0ile phase98 adalah se0!ah operator ,as- /an, 0iasan/a ,as m!rni seperti heli!m ata! /an, tidak rea3ti"e seperti ,as nitro,en2 Stationar/ ata! fasa diam mer!pakan tahap mikroskopis lapisan 3air ata! polimer /an, mend!k!n, ,as m!rni- di dalam 0a,ian dari sistem pipa.pipa ka3a ata! lo,am /an, dise0!t kolom2 Instr!men /an, di,!nakan !nt!k melak!kan kromato,rafi ,as dise0!t ,as 3hromato,raph 7ata! 9aero,raph9- 9,as pemisah982

sen/a a ,as /an, sedan, dianalisis 0erinteraksi den,an dindin, kolom /an, dilapisi den,an 0er0a,ai tahapan stationar/2 Ini men/e0a0kan setiap kompleks ke el!te di akt! /an, 0er0eda- /an, dikenal se0a,ai in,atan akt! /an, kompleks2 $er0andin,an dari in,atan kali /an, mem0erikan ke,!naan analisis G4.n/a2 Kromato,rafi ,as /an, pada prinsipn/a sama den,an kromato,rafi kolom 7serta /an, lainn/a 0ent!k kromato,rafi- seperti ($L4- TL48- tapi memiliki 0e0erapa per0edaan pentin,2 $ertama- proses memisahkan 3ompo!nds dalam 3amp!ran dilak!kan antara stationar/ fase 3air dan ,as fase 0er,erak- sedan,kan pada kromato,rafi kolom /an, seim0an, adalah tahap /an, solid dan 0er,erak adalah fase 3air2 7%adi- nama len,kap prosed!r adalah 9kromato,rafi ,as.3air9- mer!1!k ke ponsel dan stationar/ tahapan- masin,.masin,28 Ked!a- melal!i kolom /an, lolos tahap ,as terletak di se0!ah o"en dimana temperat!r ,as /an, dapat dikontrol- sedan,kan kromato,rafi kolom 70iasan/a8 tidak memiliki kontrol seperti s!h!2 Keti,akonsentrasi /an, ma1em!k dalam fase ,as adalah han/a salah sat! f!n,si dari tekanan !ap dari ,as2 Kromato,rafi ,as 1!,a mirip den,an pe3ahan pen/!lin,an- karena ked!a proses memisahkan komponen dari 3amp!ran ter!tama 0erdasarkan titik didih 7ata! tekanan !ap8 per0edaan2 Nam!n- pe3ahan pen/!lin,an 0iasan/a di,!nakan !nt!k memisahkan komponen 3amp!ran pada skala 0esar- sedan,kan G4 dapat di,!nakan pada skala /an, le0ih ke3il 7/akni mi3ros3ale82 Kromato,rafi ,as terkadan, 1!,a dikenal se0a,ai !ap.tahap kromato,rafi 7V$48- ata! ,as.3air kromato,rafi partisi 7GL$482 Alternatif nama ini- serta masin,. masin, sin,katan- serin, ditem!kan dalam literat!r ilmiah2 Dia,ram alir kromato,rafi ,as.3air

e!anisme !er"a GC #n"e!si sampel Se1!mlah ke3il sampel /an, akan dianalisis diin1eksikan pada mesin men,,!nakan semprit ke3il2 %ar!m semprit menem0!s lempen,an karet te0al 7Lempen,an karet ini dise0!t sept!m8 /an, mana akan men,!0ah 0ent!kn/a kem0ali se3ara otomatis ketika semprit ditarik kel!ar dari lempen,an karet terse0!t2 In1ektor 0erada dalam o"en /an, mana temperat!rn/a dapat dikontrol2 O"en terse0!t 3!k!p panas sehin,,a sampel dapat mendidih dan dian,k!t ke kolom oleh ,as pem0a a misaln/a heli!m ata! ,as lainn/a2 Ada d!a tipe !tama kolom dalam kromato,rafi ,as.3air2 Tipe pertama- t!0e pan1an, dan tipis 0erisi material padatan: Tipe ked!a- le0ih tipis dan memiliki fase diam /an, 0erikatan den,an pada 0a,ian terdalam perm!kaann/a2 Kolom 0iasan/a di0!at dari 0a1a tak 0erkarat den,an pan1an, antara + sampai ; meter- den,an diameter internal sampai ; mm2 Kolom di,!l!n, sehin,,a dapat dises!akan den,an o"en /an, terkontrol se3ara termostatis2Kolom dipadatkan den,an tanah diatomae- /an, mer!pakan 0at! /an, san,at 0erpori2 Tanah ini dilapisis den,an 3airan 0ertitik didih tin,,i- 0iasan/a polimer lilin2 Komponen dalam kromato,rafi ,as : +2 Gas pem0a a dan pemas!kan sampel &ase 0er,erak dalam kromato,rafi ini adalah ,as- /an, palin, la#im adalah heli!m- hidro,en- ata! nitro,en2 Kompenen pilihan ,as spem0a a ter!tama ter,ant!n, pada karakteristik detektor2 Kromato,rafi ,as komersial 0iasan/a men/ediakan kat!p pen,at!r tam0ahan !nt!k pen,endalian tekanan /an, 0aik pada inlet kolom2 Dekat inlet kolom ada s!at! alat dimana sampel.sampel dapat dimas!!kan kedalam aliran ,as

pem0a a2 Sampel.sampel terse0!t 0isa 0er!pa ,as ata! 3airan /an, m!dah men,!ap2 L!0an, in1eksi dipanaskan a,ar sampel 3air ter!apkan den,an 3epat2 )2 Kolom Aliran ,as selan1!tn/a menem!i kolom /an, diletakkan dalam o"en 0ertemperat!r konstan2 Ini adalah 1ant!n, instr!men tese0!t- tempat dimana proses kromart,rafi dasar 0erlan,s!n,2 Kolom memilki "ariasi dalam hal !k!ran dan 0ahan isian2 Ta0!n, diisi den,an 0ahan padat hal!s den,an l!as perm!kaan 0esar /an, relatif inert2 $adatan iit! se0enarn/a han/a se0!ah pen/an,,a mekanik !nt!k 3airan- se0el!m diisi kedalam kolom- padatan terse0!t diimpre,nasi den,an 3airan /an, diin,inkan /an, 0erpareran se0a,ai fasa stasioner ses!n,,!hn/a2 4airan ini har!s sta0il dan nonfolatil pada temperat!r kolompemisahan tertent!2 52 Detektor Setelah m!n3!l dari kolom it!- aliran ,as le at melal!i sis lain detektor2 Maka el!si #at terlar!t dari kolom it! men,at!r ketidakseim0an,an antarad!a sisi detektor /an, direkam se3ara elektrik2 La1! aliran ,as pem0a a adalah hal /an, san,at pentin,- dan 0iasan/a pen,!k!r aliran !nt!k it! tersedia2 Se3ara normal ,as.,as /an, m!n3!l dialirkan kel!ar pada tekanan atmosfir2 Karena peker1a la0oratori!m se3ara ter!s mener!s terpapar oleh !ap sen/a a.sen/a a /an, terkromato,afi /an, m!n,kin tak 0aik ala!p!n kadarn/a 0iasan/a ke3il maka "entilasi pada kel!aran instr!men har!s diperhatikan2 Ketent!an 0isa di0!at !nt!k men1e0ak #at terlar!t /an, dipisahkan setelah m!n3!l dari kolom 1ika hal ini di0!t!hkan !nt!k pen/elidikan le0ih lan1!t2 Penerapan !romatografi gas +2 Unt!k identifikasi sen/a a Den,an s!at! kolom tertent! dan den,an sem!a faria0eln/a seperti temperat!r dan la1! alir- dikendalikan se3ara 3ermatakt! retensi ata! "ol!me retensi s!at! #at terlar!t mer!pakan s!at! 0esaran dari #at terlar!t terse0!t- seperti haln/a titk didih ata! haln/a indek 0ias adalah 0esaran2 Ini pemisahan dan har!s ses!ai !nt!k

men!n1!kkan 0ah a sifat retensi dapat di,!nakan !nt!k men,etah!i s!at! sen/a a2 )2 Analisis k!antitatif Den,an G4 ter,ant!n, pada h!0!n,an antara 1!mlah s!at! #at terlar!t dan !k!ran dari pita el!si /an, dihasilkan2 Se3ara !m!m den,an detektor diferensial- !k!ran 1!mlah #at terlar!t /an, palin, 0aik adalah l!as di0a ah pita el!si2 %!mlah #at terlar!t < faktor kali0rasi = l!as di0a ah pita el!si2 Keter0asan G4 adalah "olatilitas sampel it! har!s memp!n/ai tekanan !ap /an, 3!k!p pada temperat!r kolom terse0!t- dan ini se,era men,hilan,kan 0an/ak 1enis sampel2 S!at! perhit!n,an /an, akt!al tidak m!n,kin dilak!kan tetapi har!s diperkirakan 0ah a sekitar )*> sen/a a kimia /an, diketah!i k!ran, 3!k!p "olatil2ke0an/akan sampel or,anik tidak 3!k!p "olatil !nt!k mem!n,kinkan penerapan lan,s!n, dari G42

$emperatur !olom Temperat!r kolom dapat 0er"ariasi antara ?* o4 sampai )?* o42 Temperat!r kolom le0ih rendah daripada ,er0an, in1eksi pada o"en- sehin,,a 0e0erapa komponen 3amp!ran dapat 0erkondensasi pada a al kolom2 Kolom mem!lai pada temperat!r rendah dan kem!dian ter!s mener!s men1adi le0ih panas di0a ah pen,a asan komp!ter saat analisis 0erlan,s!n,2 Proses pemisahan pada !olom Ada ti,a hal /an, dapat 0erlan,s!n, pada molek!l tertent! dalam 3amp!ran /an, diin1eksikan pada kolom: Molek!l dapat 0erkondensasi pada fase diam2 Molek!l dapat lar!t dalam 3airan pada perm!kaan fase diam Molek!l dapat tetap pada fase ,as

Dari keti,a kem!n,kinan it!- tak sat!p!n /an, 0ersifat permanen2Sen/a a /an, memp!n/ai titik didih /an, le0ih tin,,i dari temperat!r kolom se3ara 1elas 3ender!n, akan 0erkondensasi pada 0a,ian a al kolom2 Nam!n- 0e0erapa 0a,ian dari sen/a a terse0!t akan men,!ap kem0ali den,an den,an 1alan /an, sama seperti air /an, men,!ap saat !dara panas- meskip!n temperat!r di0a ah +** *42 $el!an,n/a akan 0erkondensasi le0ih sedikit selama 0erada didalam kolom2 Sama haln/a !nt!k 0e0erapa molek!l dapat lar!t dalam fase diam 3air2 6e0erapa sen/a a akan le0ih m!dah lar!t dalam 3airan di0andin, /an, lainn/a2 Sen/a a /an, le0ih m!dah lar!t akan men,ha0iskan 0an/ak dalam fase ,as2 $roses dimana #at mem0a,i dirin/a men1adi d!a pelar!t /an, tidak 0er3amp!rkan karena per0edaan kelar!tan- dimana kelar!tan dalam sat! pelar!t sat! le0ih m!dah di0andin, den,an pelar!t lainn/a dise0!t se0a,ai partisi2 Sekaran,- anda 0isa 0eralasan !nt!k memperde0atkan 0ah a ,as seperti heli!m tidak dapat di1elaskan se0a,ai pelar!t2 Tetapi- istilah partisi masih dapat di,!nakan dalam kromato,rafi ,as.3air2 S!0stansi antara fase diam 3air dan ,as2 6e0erapa molek!l dalam s!0stansi men,ha0iskan %a!tu retensi @akt! /an, di,!nakan oleh sen/a a tertent! !nt!k 0er,erak melal!i kolom men!1! ke detektor dise0!t se0a,i akt! retensi2 @akt! ini di!k!r 0erdasarkan akt! dari saat sampel diin1eksikan pada titik dimana tampilan men!n!1!kkan tin,,i p!n3ak maksim!m !nt!k sen/a a it!2 Setiap sen/a a memiliki akt! retensi /an, 0er0eda2 Unt!k sen/a a tertent!akt! retensi san,at 0er"ariasi dan 0er,ant!n, pada: Titik didih sen/a a2 Sen/a a /an, mendidih pada temperat!r /an, le0ih tin,,i daripada temperat!r kolom- akan men,ha0iskan hampir sel!r!h /an, lama2 Kelar!tan dalam fase 3air2 Sen/a a /an, le0ih m!dah lar!t dalam fase 3airakan memp!n/ai akt! le0ih sin,kat !nt!k di0a a oleh ,as pem0a a22 Kelar!tan /an, tin,,i dalam fase 3air 0erarti memiiki akt! retensi /an, lama2 akt!n/a !nt!k 0erkondensasi se0a,ai 3airan pada akt! retensi a al kolom2 Den,an demikian- titik didih /an, tin,,i akan memiliki akt! !nt!k lar!t dalam 3airan dan 0e0erapa lainn/a men,ha0iskan akt! !nt!k 0er,erak 0ersama.sama den,an ,as2 akt!n/a !nt!k diserap pada akt!n/a le0ih fase diam: sedan,kan sen/a a /an, s!ka lar!t akan men,ha0iskan

Temperat!r kolom2 Temperat!r tin,,i men/e0akan per,erakan molek!l. molek!l dalam fase ,as: 0aik karena molek!l.molek!l le0ih m!dah men,!ap- ata! karena ener,i atraksi /an, tin,,i 3airan dan oleh karena it! tidak lama tertam0atkan2 Temperat!r kolom /an, tin,,i mempersin,kat di dalam kolom2 Unt!k mem0erikan sampel dan kolom- tidak ada 0an/ak /an, 0isa diker1akan men,,!nakan titik didih sen/a a ata! kelar!tann/a dalam fase 3air- tetapi anda dapat memp!n/ai pen,at!r temperat!r2 Semakin rendah temperat!r kolom semakin 0aik pemisahan /an, akan anda dapatkan- tetapi akan memakan akt! /an, lama !nt!k mendapatkan sen/a a karena kondensasi /an, lama pada 0a,ian a al kolom2 Den,an kata lain- men,,!nakan temperat!r tin,,i- se,ala ses!at!n/a akan melal!i kolom le0ih 3epat- tetapi pemisihann/a k!ran, 0aik2 %ika se,ala ses!at!n/a melal!i kolom dalam akt! /an, san,at sin,kat- tidak akan terdapat 1arak antara p!n3ak.p!n3ak dalam kromato,ram2 %a a0ann/a dim!lai den,an kolom den,an s!h! /an, rendah kem!dian perlahan.lahan se3ara terat!r temperat!rn/a dinaikkan2 $ada a aln/a- sen/a a /an, men,ha0iskan le0ih 0an/ak akt!n/a dalam fase ,as akan melal!i kolom se3ara 3epat dan dapat dideteksi2 Den,an adan/a sedikit pertam0ahan temperat!r akan memper1elas perlekatan sen/a a2 $enin,katan temperat!r masih dapat le0ih AmelekatanA molek!l.molek!l fase diam melal!i kolom2 &ete!tor Ada 0e0erapa tipe detektor /an, 0iasa di,!nakan2 Detektor ionisasi n/ala di1elaskan pada 0a,ian 0a ah pen1elasan ini- mer!pakan detektor /an, !m!m dan le0ih m!dah !nt!k di1elaskan daripada detektor alternatif lainn/a2 Detektor ionisasi n/ala akt! retensi !nt!k se,ala ses!at!n/a

Dalam mekanisme reaksi- pem0akaran sen/a a or,anik mer!pakan hal /an, san,at kompleks2 Selama proses- se1!mlah ion.ion dan elektron.elektron dihasilkan dalam n/ala2 Kehadiran ion dan elektron dapat dideteksi2 Sel!r!h detektor dit!t!p dalam o"en /an, le0ih panas di0andin, den,an temperat!r kolom2 (al it! men,hentikan kondensasi dalam detektor2 %ika tidak terdapat sen/a a or,anik datan, dari kolom- anda han/a memiliki n/ala hidro,en /an, ter0akar dalam air2 Sekaran,- an,,aplah 0ah a sat! sen/a a dalam 3amp!ran anda analisa m!lai mas!k ke dalam detektor2 Ketika di0akar- it! akan men,hasilkan se1!mlah ion.ion dan elektron.elektron dalam n/ala2 Ion positif akan 0eratraksi pada katoda silinder2 Ion.ion ne,atif dan elektron.elektron akan 0eratraksi pan3arann/a masin,.masin, /an, mana mer!pakan anoda2(al ini ser!pa den,an apa /an, ter1adi selama elektrolisis normal2 $ada katoda- ion positif akan mendatan,i elektron.elektron dari katoda dan men1adi netral2 $ada anoda- 0e0erapa elektron dalam n/ala akan dipindahkan pada elektroda positif: ion.ion ne,atif akan mem0erikan elektron.elektronn/a pada elektroda dan men1adi netral2 Kehilan,am elektron.elektron dari sat! elektroda dan perolehan dari elektroda lain- akan men,hasilkan aliran elektron.elektron dalam sirk!it eksternal dari anoda ke katoda2 Den,an kata lain- anda akan memperoleh ar!s listrik2

Ar!s /an, diperoleh tidak 0esar- tetapi dapat diperk!at2 %ika sen/a a.sen/a a or,anik le0ih 0an/ak dalam n/ala- maka akan 0an/ak 1!,a dihasilkan ion.ion- dan den,an demikian akan ter1adi ar!s listrik /an, le0ih k!at2 Ini adalah pendekatan /an, 0eralasan- kh!s!sn/a 1ka anda 0er0i3ara tentan, sen/a a.sen/a a /an, ser!pa- ar!s /an, anda !k!r se0andin, den,an 1!mlah sen/a a dalam n/ala2 Kek!ran,an !tama dari detektor ini adalah pen,r!sakan setiap hasil /an, kel!ar dari kolom se0a,aimana /an, terdeteksi2 %ika anda akan men,rimkan hasil ke spektrometer massa- misaln/a !nt!k analisa lan1!t- anda tidak dapat men,,!nakan detektor tipe ini2 Pener"emahan hasil dari dete!tor (asil akan direkam se0a,ai !r!tan p!n3ak.p!n3ak: setiap p!n3ak me akili sat! sen/a a dalam 3amp!ran /an, melal!i detektor2 Sepan1an, anda men,ontrol se3ara hati.hati kondisi dalam kolom- anda dapat men,,!nakan akt! retensi !nt!k mem0ant! men,identifikasi sen/a a /an, tampak.tent! sa1a anda ata! seseoran, lain telah men,analisa sen/a a m!rni dari 0er0a,ai sen/a a pada kondisi /an, sama2

Area di0a ah p!n3ak se0andin, den,an 1!mlah setiap sen/a a /an, telah mele ati detektor- dan area ini dapat dihit!n, se3ara otomatis melal!i komp!ter /an, dih!0!n,kan den,an monitor2 Area /an, akan di!k!r tampak se0a,ai 0a,ian /an, 0er arna hi1a! dalam ,am0ar /an, disederhanakan2 $erl! di3atat 0ah a tin,,i p!n3ak tidak mer!pakan masalah- tetapi total area di0a ah p!n3ak2 Dalam 0e0erapa 3ontoh tertent!- 0a,ian kiri ,am0ar adalah p!n3ak tertin,,i dan memiliki area /an, palin, l!as2 (al ini tidak selal! mer!pakan hal sehar!sn/a22

M!n,kin sa1a se1!mlah 0esar sat! sen/a a dapat tampak- tetapi dapat ter0!kti dari kolom dalam 1!mlah relatif sedikit melal!i 1!mlah /an, lama2 $en,!k!ran area selain tin,,i p!n3ak dapat diper,!nakan dalam hal ini2 Perang!aian !romatogram gas pada spe!trometer massa (al ini tidak dapat dillak!kan men,,!nakan detektor ionisasi n/ala- karena detektor dapat mer!sak sen/a a /an, melal!in/a2 An,,aplah anda men,,!nakan detektor /an, tidak mer!sak2 Sen/a aKetika detektor men!n1!kkan p!n3ak- 0e0erapa diantaran/a melal!i detektor dan pada akt! it! dapat di0elokkan pada spektrometer massa2 (al ini akan mem0erikan pola fra,mentasi /an, dapat di0andin,kan den,an data dasar sen/a a /an, telah diketah!i se0el!mn/a pada komp!ter2 It! 0erarti 0ah a identitas sen/a a. sen/a a dalam 1!mlah 0esar dapat dihasilkan tanpa har!s men,etah!i retensin/a2 ). HPLC( Hight Performance Liquid Chromatography) ($L4 se3ara mendasar mer!pakan perkem0an,an tin,kat tin,,i dari kromato,rafi kolom2 Selain dari pelar!t /an, menetes melal!i kolom di0a ah ,rafitasi- did!k!n, melal!i tekanan tin,,i sampai den,an ;** atm2 Ini mem0!atn/a le0ih 3epat2 ($L4 memper0olehkan pen,,!naan partikel /an, 0er!k!ran san,at ke3il !nt!k material terpadatkan dalam kolom /an, mana akan mem0eri l!as perm!kaan /an, le0ih 0esar 0erinteraksi antara fase diam dan molek!l.molek!l /an, melintasin/a2 (al ini mem!n,kinkan pemisahan /an, le0ih 0aik dari komponen. komponen dalam 3amp!ran2 $erkem0an,an /an, le0ih l!as melal!i kromato,rafi kolom mempertim0an,kan metode pendeteksian /an, dapat di,!nakan2 Metode.metode ini san,at otomatis dan san,at peka2 Ada d!a fase ($L4: 'ase normal HPLC Kolom diisi den,an partikel silika /an, san,at ke3il dan pelar!t non polar misaln/a heksan2 Se0!ah kolom sederhana memiliki diameter internal ;2B mm 7dan m!n,kin k!ran, dari nilai ini8 den,an pan1an, +?* sampai )?* mm2 akt!

Sen/a a.sen/a a polar dalam 3amp!ran melal!i kolom akan melekat le0ih lama pada silika /an, polar di0andin, de,an sen/a a.sen/a a non polar2 Oleh karena it!- sen/a a /an, non polar kem!dian akan le0ih 3epat mele ati kolom2 'ase (ali! HPLC Dalam kas!s ini- !k!ran kolom sama- tetapi silika dimodifikasi men1adi non polar melal!i pelekatan rantai.rantai hidrokar0on pan1an, pada perm!kaann/a se3ara sederhana 0aik 0er!pa atom kar0on C ata! +C2 Se0a,ai 3ontoh- pelar!t polar di,!nakan 0er!pa 3amp!ran air dan alkohol seperti metanol2 Dalam kas!s ini- akan terdapat atraksi /an, k!at antara pelar!t polar dan molek!l polar dalam 3amp!ran /an, melal!i kolom2 Atraksi /an, ter1adi tidak akan sek!at atraksi antara rantai.rantai hidrokar0on /an, 0erlekatan pada silika 7fase diam8 dan molek!l.molek!l polar dalam lar!tan2 Oleh karena it!- molek!l.molek!l polar dalam 3amp!ran akan men,ha0iskan pelar!t2 Sen/a a.sen/a a non polar dalam 3amp!ran akan 3ender!n, mem0ent!k atraksi den,an ,!,!s hidrokar0on karena adan/a dispersi ,a/a "an der @aals2 Sen/a a.sen/a a ini 1!,a akan k!ran, lar!t dalam pelar!t karena mem0!t!hkan pem!t!san ikatan h/dro,en se0a,aimana haln/a sen/a a.sen/a a terse0!t 0erada dalam molek!l.molek!l air ata! metanol misaln/a2 Oleh karenan/a- sen/a a. sen/a a ini akan men,ha0iskan akt! dalam lar!tan dan akan 0er,erak lam0at dalam kolom2Ini 0erarti 0ah a molek!l.molek!l polar akan 0er,erak le0ih 3epat melal!i kolom2 &ase 0alik ($L4 adalah 0ent!k /an, 0iasa di,!nakan dalam ($L42Melihat sel!r!h proses akt!n/a !nt!k 0er,erak 0ersama den,an

&iagram alir HPLC

#n"e!si sampel In1eksi sample sel!r!hn/a otomatis dan anda tidak akan men,harapkan 0a,aimana men,etah!i apa /an, ter1adi pada tin,kat dasar2 Karena proses ini melip!ti tekanantidak sama haln/a den,an kromato,rafi ,as 71ika anda telah mempela1arin/a82 %a!tu retensi @akt! /an, di0!t!hkan oleh sen/a a !nt!k 0er,erak melal!i kolom men!1! detektor dise0!t se0a,ai maksim!m dari sen/a a it!2 Sen/a a.sen/a a /an, 0er0eda memiliki akt! retensi /an, 0er0eda2 Unt!k 0e0erapa sen/a a- akt! retensi akan san,at 0er"ariasi dan 0er,ant!n, pada: Tekanan /an, di,!nakan 7karena it! akan 0erpen,ar!h pada la1! alir dari pelar!t8 Kondisi dari fase diam 7tidak han/a ter0!at dari material apa- tetapi 1!,a pada !k!ran partikel8 Komposisi /an, tepat dari pelar!t Temperat!r pada kolom akt! retensi2 @akt! retensi di!k!r 0erdasarkan akt! dimana sampel diin1eksikan sampai sampel men!n1!kkan ketin,,ian p!n3ak /an,

It! 0erarti 0ah a kondisi har!s dikontrol se3ara hati.hati- 1ika anda men,,!nakan akt! retensi se0a,ai sarana !nt!k men,identifikasi sen/a a.sen/a a2 &ete!tor

Ada 0e0erapa 3ara !nt!k mendeteksi s!0stansi /an, telah mele ati kolom2 Metode !m!m /an, m!dah dipakai !nt!k men1elaskan /ait! pen,,!naan serapan !ltra."iolet2 6an/ak sen/a a.sen/a a or,anik men/erap sinar UV dari 0e0erapa pan1an, ,elom0an,2 %ika anda men/inarkan sinar UV pada lar!tan /an, kel!ar melal!i kolom dan se0!ah detektor pada sisi /an, 0erla anan- anda akan mendapatkan pem0a3aan lan,s!n, 0erapa 0esar sinar /an, diserap2

%!mlah 3aha/a /an, diserap akan 0er,ant!n, pada 1!mlah sen/a a tertent! /an, mele ati melal!i 0erkas pada akt! it!2 Anda akan heran men,apa pelar!t /an, di,!nakan tidak men,a0sor0si sinar UV2 $elar!t men/erapn/aD Tetapi 0er0edasen/a a.sen/a a akan men/erap den,an san,at k!at 0a,ian.0a,ian /an, 0er0eda dari spe3ktr!m UV2 Misaln/a- metanol- men/erap pada pan1an, ,elom0an, di0a ah )*? nm dan air pada ,elom0an, di0a ah +E* nm2 %ika anda men,,!nakan 3amp!ran metanol.air se0a,ai pelar!t- anda se0aikn/a men,,!nakan pan1an, ,elom0an, /an, le0ih 0esar dari )*? nm !nt!k men3e,ah pem0a3aan /an, salah dari pelar!t2 #nterpretasi output dari dete!tor O!tp!t akan direkam se0a,ai ran,kaian p!n3ak.p!n3ak- dimana masin,. masin, p!n3ak me akili sat! sen/a a dalam 3amp!ran /an, melal!i detektor dan menerap sinar UV2 Sepan1an, anda men,ontrol kondisi kolom- anda dapat men,,!nakan akt! retensi !nt!k mem0ant! men,identifikasi sen/a a /an, diperoleh- tent!n/a- anda 7ata! oran, lain8 s!dah men,!k!r sen/a a.sen/a a m!rnin/a dari 0er0a,ai sen/a a pada kondisi /an, sama2

Anda 1!,a dapat men,,!nakan p!n3ak se0a,ai 1alan !nt!k men,!k!r k!antitas dari sen/a a /an, dihasilkan2 Mari 0eran,,apan 0ah a tertarik dalam sen/a a tertent!- F2 %ika anda men,in1eksi s!at! lar!tan /an, men,and!n, sen/a a m!rni F /an, telah diketah!i 1!mlahn/a pada instr!men- anda tidak han/a dapat merekam sen/a a F den,an p!n3ak dari sen/a a /an, dihasilkan2 akt! retensi dari sen/a a terse0!t- tetapi anda 1!,a dapat men,h!0!n,kan 1!mlah dari

Area /an, 0erada di0a ah p!n3ak se0andin, den,an 1!mlah F /an, melal!i detektor- dan area ini dapat dihit!n, se3ara otomatis melal!i la/ar komp!ter2 Area dihit!n, se0a,ai 0a,ian /an, 0er arna hi1a! dalam ,am0ar 7san,at sederhana82 %ika lar!tan F k!ran, pekat- area di0a ah p!n3ak akan 0erk!ran, meskip!n akt! retensi akan sama2 Misaln/a-

Ini 0erarti dim!n,kinkan men,kali0rasi instr!men sehin,,a dapat di,!nakan !nt!k men,etah! 0erapa 1!mlah s!0stansi /an, dihasilkan meskip!n dalam 1!mlah ke3il2 Meskip!n demikian- har!s 0erhati.hati2 %ika anda memp!n/ai d!a s!0stansi /an, 0er0eda dalam se0!ah 3amp!ran 7F dan G8- dapatkah anda men,atakan 1!mlah relatifn/aH Anda tidak dapat men,atakann/a 1ika anda men,,!nakan serapan UV se0a,ai metode pendeteksin/a2 Dalam ,am0ar- area di 0a ah p!n3ak G le0ih ke3il di0andin, den,an area di0a ah p!n3ak F2 Ini m!n,kin dise0a0kan oleh karena G le0ih sedikit dari F- tetapi dapat sama karena G men,a0sor0si sinar UV pada pan1an, ,elom0an, le0ih sedikit

di0andin, den,an F2 Ini m!n,kin ada 1!mlah 0esar G /an, tampak- tetapi 1ika diserap lemah- ini akan han/a mem0erikan p!n3ak /an, ke3il2

An ($L42 &rom left to ri,ht: A p!mpin, de"i3e ,eneratin, a ,radient of t o different sol"ents- a steel enfor3ed 3ol!mn and an apparat!s for meas!rin, the a0sor0an3e2

Picture of an HPLC instrument

Gam0ar peralatan ($L4

DA&TAR $USTAKA R2A2Da/ dan Under ood2)**). Analisis kimia kuantitatif2 %akarta: 'rlan,,a $e3sok and LD Shields2+EIB2 Modern Methods of Chemical Analysis2USA 2 ikipedia2or, - diakses + maret )*+* Http)**+++.edu,---.org*portal*inde.. dia!ses 1 maret ,-1http:JJ 2o3.praktik!m2deJidJarKromato,rafi 7($L482diakses +* maret )*+*

http)**+++.chem/is/try.org*materi0!imia*instrumen0analisis*!romat.dia!ses +* maret )*+*