Anda di halaman 1dari 5

Pengumpulan dan pengolahan sampel Sampel dari kembang kol ( Brassica oleracea L.

) , tumbuh di Faisalabad , Pakistan tanpa aplikasi pestisida , pada lahan pertanian yang sama , dipanen secara acak . Sampel segar yang dikumpulkan dicuci dua kali dengan air keran . Air yang tersisa telah dihapus oleh udara bertiup diikuti dengan memotong sampel menjadi kecil potongan / irisan (sekitar 1 x 1 cm ) dengan menggunakan helikopter baja. Pengeringan sampel Bahan sayuran cincang dibagi menjadi tiga bagian ( masing-masing 500 g ) kering oleh proses pengeringan yang berbeda . Satu porsi ( kondisi ambient , 10 hari ) - udara kering , bagian lain yang dijemur ( 7 hari ) dan sebagian ketiga dikeringkan dengan oven pada 40 oC ( 3 hari ) . Semua sampel tanah dan materi yang melewati 80 - mesh digunakan untuk tujuan ekstraksi . Ekstraksi komponen antioksidan Antioksidan diekstraksi ( dalam rangkap tiga ) dari bahan kembang kol kering ( 20,0 g ) menggunakan etanol : air ( 80:20 ) , 100 % etanol , metanol : air ( 80:20 ) dan 100 % metanol ( 200 mL ) . Ekstraksi dilakukan oleh orbital shaker selama 24 jam pada suhu kamar dan kemudian ekstrak disaring melalui kertas saring ( Whatman No 1 ) . Residu reextracted dengan lebih lanjut dua aliquot pelarut segar mengikuti prosedur yang sama . Ekstrak gabungan diuapkan sampai kering dengan menggunakan rotary evaporator ( EYELA , SB - 651 , Co Ltd Rikakikai Tokyo , Jepang ) . Ekstrak kasar terkonsentrasi ditimbang dan disimpan pada suhu 4oC . Penentuan isi total fenolik ( TPC ) TPC masing-masing ekstrak ditentukan secara spektrofotometri menggunakan uji Folin - Ciocalteu ( Chaovanalikit dan Wrolstad , 2004) dan dalam rangkap tiga . Secara singkat , 50,0 mg ekstrak mentah dicampur dengan Folin - Ciocalteu reagen ( 0,5 mL ) dan air deionisasi ( 7,5 mL ) . Setelah 10 menit pada suhu kamar , 1,5 mL dari 20 % natrium karbonat ( w / v ) ditambahkan . Campuran dipanaskan dalam bak air pada 40 oC selama 20 menit dan kemudian didinginkan dalam penangas es . Absorbansi diukur pada 755 nm menggunakan UV / Visible spektrofotometer ( U -2001 , Hitachi Instruments Inc , Tokyo , Jepang ) . Standar asam galat dalam kisaran 10-100 ppm diperlakukan dengan cara yang sama untuk menghasilkan kurva kalibrasi ( r2 = 0,9986 ) . TPC dari ekstrak dinyatakan sebagai setara asam galat ( GAE ) g/100 g berat kering . DPPH assay pemulungan Kegiatan radikal bebas dari ekstrak diukur menggunakan metode yang dijelaskan oleh Iqbal et al . (2005) . Secara singkat , sampai 1,0 mL ekstrak kembang kol ( ekstrak kasar 25g dalam 1,0 mL methanol ) , 5.0 mL baru disiapkan larutan metanol DPPH ( 0,025 g / L ) ditambahkan . Ekstrak yang mengurangi konsentrasi awal DPPH sebesar 50 % ditentukan ( 25 mg ekstrak kasar dalam 1,0 mL methanol ) dan kemudian digunakan untuk pengujian tersebut. Waktu yang optimal untuk merekam penurunan

absorbansi dari DPPH solusi pada penambahan ekstrak antioksidan ditentukan dengan memantau absorbansi ( menggunakan Hitachi Spectrophotometer U - 2001) pada interval ( 0 , 0,5 , 1 , 2 , 5 reguler dan 10 menit ) . Setelah 5 menit absorbansi stabil dan tidak berubah dan kali ini digunakan untuk merekam absorbansi untuk semua ekstrak pada panjang gelombang 515 nm. The % DPPH Kegiatan dihitung dengan menggunakan rumus % DPPH aktivitas = ( A kosong - sampel A / A kosong ) 100 A kosong = Absorbansi DPPH solusi ( yang berisi semua reagen kecuali sampel uji ) Sampel A = Absorbansi DPPH solusi , 5 menit setelah menambahkan ekstrak kembang kol . Penentuan aktivitas antioksidan dalam sistem asam linoleat Aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar ditentukan dengan mengukur penghambatan oksidasi asam linoleat ( Iqbal et al . , 2005). Ekstrak kasar ( 5,0 mg ) ditambahkan ke dalam larutan asam linoleat ( 0,13 mL ) , 99,8 % etanol ( 10,0 mL ) dan 0,2 M natrium fosfat penyangga ( 10,0 mL , pH 7 ) . Campuran dibuat hingga 25,0 mL dengan air suling dan diinkubasi pada suhu 40oC selama 360 jam . Tingkat oksidasi asam linoleat diukur dengan menggunakan metode tiosianat dijelaskan oleh Yen et al . (2000) . Secara singkat , etanol ( 10,0 mL , 75 % v / v ) , larutan amonium tiosianat ( 0,2 mL , 30 % b / v ) , diinkubasi sampel ( 0,2 mL ) dan larutan klorida besi ( 0,2 mL , 20 mM dalam 3,5 % HCl ; v / v ) ditambahkan secara berurutan . Setelah 3 menit pengadukan , nilai absorbansi diukur pada 500 nm menggunakan spektrofotometer ( U 2001 , Hitachi Instruments Inc , Tokyo , Jepang ) dan dijadikan isi peroksida . Sebuah kontrol yang berisi semua reagen kecuali ekstrak juga disiapkan dan absorbansi yang direkam . Antioksidan sintetik BHT digunakan sebagai kontrol positif . Persentase penghambatan oksidasi asam linoleat dihitung dengan menggunakan persamaan : 100 - [ ( peningkatan absorbansi sampel pada 360 h / peningkatan absorbansi kontrol pada 360 h) 100 ] Penentuan mengurangi daya Kekuatan mengurangi masing-masing ekstrak di empat konsentrasi yang berbeda ditentukan menurut prosedur yang telah dijelaskan oleh Oyaizu ( 1978 ) dengan sedikit modifikasi . Bagian dari masingmasing ekstrak kasar ( 2,5, 5,0 , 7,5 dan 10,0 mg ) dicampur dengan penyangga natrium fosfat ( 5,0 mL , 0,2 M , pH 6.6 ) dan kalium ferricyanide ( 5,0 mL , 1,0 % ) . Campuran diinkubasi pada 50oC selama 20 menit . Kemudian 5 ml asam trikloroasetat 10% ditambahkan dan campuran disentrifugasi pada 980 g selama 10 menit pada 5 C ( CHM - 17; KOKUSAN Denki , Tokyo , Jepang ) . Lapisan atas dari solusi ( 5.0 mL ) didekantasi , dicampur dengan 5.0 mL air suling dan ferric chloride ( 1,0 mL , 0,1 % ) dan absorbansi tercatat sebesar 700 nm menggunakan spektrofotometer ( U - 2001 , Hitachi Instruments Inc , Tokyo , Jepang ) . Aanalysis statistik

Semua percobaan dianalisis dengan menggunakan analisis varians ( ANOVA ) dengan menggunakan SPSS ( versi 18 ) . Varians yang sama antar perlakuan diukur dengan menggunakan uji Levene dan di mana mereka ditemukan untuk menjadi tidak setara transformasi log dilakukan . B uji jarak berganda Tukey dilakukan untuk mengidentifikasi pengobatan yang optimal ( P < 0,05 ) .Reagen dan standar Semua reagen yang digunakan selama penelitian adalah kelas analitis , dan diperoleh baik dari Merck ( Darmstadt , Jerman ) atau Sigma Chemical Co ( St Louis , MO , USA ) kecuali dinyatakan lain . 1,1- difenil 2 - pikrilhidrazil radikal ( DPPH ) ( 90,0 % ) , asam linoleat , food grade antioksidan sintetik BHT ( 99,0 % ) , Folin - Ciocalteu reagen fenol ( 2 N ) yang dibeli dari Sigma Chemicals Co ( St , Louis , MO , USA ) .

bahan tanaman Bagian udara dari Anethum graveolens L. tanaman dikumpulkan selama bulan September 2011 dari wilayah Abu-Al-Khaseeb (selatan Basra), Irak. Tanaman ini botanikal dikonfirmasi dan voucher spesimen yang disimpan di Herbarium of Basra (Irak, Basra, College of Science, University of Basra). Tanaman ini udara-dikeringkan di bawah naungan pada suhu kamar selama 3 hari, setelah itu digiling menjadi bubuk yang seragam. Persiapan ekstrak Ekstrak air Anethum graveolens L. Anethum graveolens L. bubuk (100 g) yang dihilangkan seluruh lemaknya dengan petroleum eter (40-60 C) pada suhu kamar selama 24 jam. Kemudian, sisa lemaknya direfluks dengan air selama 24 jam. Residu telah dihapus oleh filtrasi, dan filtrat adalah konsentrasi di bawah vakum , oleh beku kering untuk membeli 8.25g . Ekstrak alkaloid dari Anethum graveolens L. Lima puluh gram tanah defatted dari Anethum graveolens L. bagian udara tersebut diekstraksi dengan metanol ( 100 mL ) dalam alat Soxhlet selama 3 jam , dan kemudian diuapkan sampai 0.5ml dalam vakum. Residu metanol diangkat dalam 10 mL dari 2,5 % asam klorida dan disaring . Larutan asam berair disesuaikan dengan pH = 8 dengan amonium hidroksida pekat dan diekstraksi dengan diklorometana ( 3 x 10 ml ) . Ekstrak dikeringkan dengan magnesium sulfat dan pelarut diuapkan untuk membeli 0.97g minyak mentah ekstrak alkaloid ( Maiza - Benabdesselam et al . , 2007) . Isolasi komponen alkaloid ekstrak Kromatografi kolom dilakukan untuk pemisahan komponen alkaloid A ( Spot dengan tinggi Rf = 0,86 ) dari alkaloid ekstrak . Ukuran kolom gelas ( 3 60 cm ) adalah pasang turun ke bawah dengan glass wool kecil , kemudian dikemas dengan HCl - dicuci silika gel (mesh 230-400 m ) . Bubur ini dibuat dengan melarutkan 125g silika gel dalam 200ml dari C6H6 : Ethanol ( 9:1) sebagai eluen . Residu padat kemudian dimuat ke atas kolom dan fraksi 5 mL dikumpulkan dan dipantau oleh TLC . Fraksi dengan Rf yang sama dikumpulkan dan dikeringkan pada suhu kamar ( Rispail et al . , 2005). skrining fitokimia dari Anethum graveolens L. Tes fitokimia yang berbeda dilakukan dengan menggunakan teknik laboratorium standar . Alkaloid , karbohidrat , glikosida (uji Salkowski ) dan saponin ( buih test) diidentifikasi mengikuti metode Sofowora

, ( 1993) . The terpenoid keberadaan, steroid , flavonoid dan tanin diuji dengan menggunakan metode Trease dan Evans , ( 1989 ) . Identifikasi karbohidrat dan protein adalah dengan metode Khandelwal (2005) . Kromatografi lapis tipis ( TLC ) Hal tersebut di atas disiapkan ekstrak alkaloid dan senyawa alkaloid dari A Anethum graveolens L. diuji untuk kromatografi lapis tipis ( TLC ) . Sebuah volume dikenal ( pada tetes ) ekstrak ini ( 1mg/1mL ) yang terlihat pada pelat KLT silika gel ( 2 10 cm ) menggunakan C6H6 : Ethanol ( 9:1) sebagai sistem pelarut . Setelah 15 menit , lempeng dikeringkan menggunakan rambut kering dan diperiksa di bawah panjang gelombang 366nm ultraviolet .. Lempeng juga diwarnai dengan Dragendorff itu , Mayer dan reagen Wagner ( Harborne , 1991) .