abstrak Herbal antihipertensi dalam scientification program " jamu " di Indonesia terdapat pegagan ( L. ) Perkotaan .

Daun mengandung beberapa senyawa seperti triterpenoid , flavonoid , phenolic , tanin , dan resin . Total fraksi triterpenic dari C. asiatica bisa mengobati hipertensi vena microangiopathy , sedangkan fraksi etil asetat daun C. asiatica memiliki efek hipotensi pada kucing . Penelitian ini bertujuan untuk memberikan fraksi yang kaya triterpenoid dari daun C. asiatica , untuk menganalisis isi asiaticoside , dan untuk menguji in vivo efek antihipertensi pada fenilefrin diinduksi tikus hipertensi dengan metode tail - manset non - invasif . Hasil penelitian menunjukkan bahwa isi triterpenoid dalam fraksi kloroform C. asiatica ( CFCA ) lebih dominan daripada isi flavonoid / fenolik . Data TLC densitometri menunjukkan bahwa isi asiaticoside dari CFCA adalah 0,402 0,02 % . The CFCA menunjukkan efek antihipertensi pada tikus hipertensi yang diinduksi fenilefrin . Nilai-nilai ED50 , parameter potensi obat , efek ini pada tekanan darah sistolik , tekanan darah diastolik , dan rata-rata tekanan arteri adalah 10,40 0,98 , 9,05 1,95 , dan 9,37 1,69 mg / kg , masing-masing. pendahuluan Peringkat atas risiko global untuk kematian di dunia adalah tekanan darah tinggi ( WHO , 2009). Penelitian kesehatan dasar 2007 yang dilakukan di Indonesia menunjukkan bahwa prevalensi hipertensi berdasarkan pengukuran dan riwayat penyakit adalah 32,2 % . Namun 75,8 % kasus tidak didiagnosis dan mencapai namun oleh sistem perawatan kesehatan . Tujuh dari 10 pasien tidak mendapatkan perawatan yang baik mengakibatkan komplikasi dengan gagal ginjal , stroke , dan penyakit jantung koroner ( Rahajeng dan Tuminah , 2009). Kegagalan ini diperkirakan 4,5% kasus penyakit global ( WHO dan ISH , 2003). Secara empiris , hipertensi dapat diobati dengan obat-obatan tradisional ( Koffi et al . , 2009). Herbal antihipertensi dalam scientification program " jamu " di Indonesia terdapat pegagan ( L. ) daun Perkotaan . Tanaman ini mengandung beberapa senyawa seperti triterpenoid ( asiaticoside , madecassoside , asam Asiatik , asam madecassic ) , glikosida , flavonoid , alkaloid , steroid , minyak atsiri dan lemak ( Subban et al , 2008; . James dan Dubery , 2011) . Secara tradisional , orang menggunakan C. asiatica dalam pengobatan gangguan vena , diuretik , dan pembersih darah ( ( Sudarsono et al . , 2002) . Uji klinis dari C. asiatica ekstrak telah dilakukan untuk insufisiensi vena ( WHO , 1999) , sedangkan total fraksi triterpenic dari C. asiatica efektif dalam hipertensi vena kronis dan dalam melindungi endotelium vena ( Incandela et al . , 2001) . fraksi kloroform ekstrak etanol C. asiatica telah dilaporkan sebagai agen antibakteri ( Rachmawati et al . 2011 ) dan triterpenoid yang bisa meningkatkan fungsi kognitif pada tikus ( Herlina dan Hutasoit , 2011) .

fraksi etil asetat dari daun C. asiatica memiliki efek hipotensi pada kucing ( Khuzaimah , 1997) , sedangkan dosis ekstrak 500 mg / kg memiliki aktivitas diuretik ( Roopesh et al . , 2011) . Lebih jauh lagi, efek diuretik dapat menyebabkan efek hipotensi . Namun, senyawa aktif dari C. asiatica yang memiliki efek antihipertensi yang belum diketahui . Berdasarkan fakta-fakta , fraksi kloroform daun C. asiatica ( CFCA ) telah diselidiki untuk in vivo efek antihipertensi dan isinya asiaticoside nya . Dalam fitokimia , metode pemisahan dengan fraksinasi C. asiatica ekstrak etanol dengan kloroform dilakukan untuk memberikan fraksi yang kaya triterpenoid . Berdasarkan farmakope herbal Indonesia , penentuan kadar asiaticoside dilakukan oleh TLC densitometri sebagai standarisasi kualitas ( Badan Pengawas Obat dan Makanan , 2003; Departemen Kesehatan Republik Indonesia , 2008) . Kombinasi TLC dan densitometri adalah metode baru telah dikembangkan untuk menentukan asiaticoside dalam ekstrak mentah dan produk komersial ( Chaisawadi dan De - Eknamkul , 2012 ) , juga untuk menganalisis konsentrasi empat triterpenoid utama dalam bahan segar ( James dan Dubery , 2011 ) . Fenilefrin digunakan untuk meningkatkan tekanan darah akut ( Rordorf et al . , 1997) . Parameter kardiovaskular seperti tekanan darah sistolik ( SBP ) , tekanan darah diastolik ( DBP ) , tekanan arteri rata-rata (MAP ) , dan denyut jantung ( HR ) diukur dengan metode non -invasif tail manset ( Maruyama et al . , 2009 ) . Bahan dan Metode bahan Bahan-bahan yang digunakan sebagai berikut : etanol 70 % , kloroform , phenylephrine - HCl , dan captopril dari Sigma Chemical Co ( St Louis , MO , USA ) , ( kemurnian 98,5 % dari HPLC , Fluka , Swiss ) asiaticoside , ekstrak Dititrasi Centella asiatica ( TECA ) dari Syntex Laboratories (Prancis ) , Liebermann - Burchard ( LB ) , anisaldehide - H2SO4 dan reagen citroboric . hewan Pria tikus Wistar dengan berat 150-300 g diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi , Fakultas Farmasi , Universitas Gadjah Mada , Indonesia . Protokol penanganan hewan penelitian ini adalah sesuai dengan pedoman untuk perawatan hewan laboratorium . Izin etis untuk studi hewan diperoleh dari Komite Etika Penelitian , Penelitian Terpadu dan Laboratorium Penguji Universitas Gadjah Mada , Indonesia (No. 120/KEC-LPPT/X/2013 ) . Ekstraksi dan fraksinasi Daun Centella asiatica dikumpulkan dari Tanaman Obat dan Obat Tradisional Pusat Penelitian dan Pengembangan Tawangmangu , Solo, Indonesia dan telah diidentifikasi oleh seorang ahli botani . Daun ini kemudian dikeringkan dan bubuk . Satu kg bubuk secara maserasi dengan etanol 70 % selama 24 jam . Selanjutnya , residu remacerated empat kali oleh pelarut yang sama , dan ekstrak dicampur ke

yang sebelumnya . Ekstrak dikumpulkan kemudian diuapkan di bawah tekanan dikurangi untuk memberikan ekstrak kental etanol ( EECA ) , kemudian difraksinasi untuk menghasilkan larut ( CFCA ) dan fraksi tidak larut kloroform ( CIF ) , kemudian terkonsentrasi oleh evaporator vakum rotary . Identifikasi Triterpenoid di CFCA Semua sampel ( CFCA , CIF , EECA , TECA , dan asiaticoside ) yang terlihat pada silika gel 60 F254 piring dan dikembangkan dalam kloroform : metanol : air ( 65:25:4 v / v ) , maka sampel disemprot dengan Liebermann - Bourchard dan dipanaskan pada 110oC selama 10 menit atau sampai berwarna band muncul . Tempat tersebut diamati di bawah Visible dan UV366 cahaya , maka HRF ( 100 x Rf ) nilai-nilainya ditentukan . Berdasarkan profil TLC , CFCA akan dibuktikan sebagai fraksi yang kaya triterpenoid dan memastikan untuk dipisahkan dari CIF yang kaya flavonoid . Analisis KLT - densitometri Sebuah CAMAG III TLC sistem ( Linomat , Swiss ) , dilengkapi dengan TLC sampler otomatis , scanner TLC dan software CATS , digunakan . Kedua CFCA ( 50 mg ) dan solusi asiaticoside standar ( 0,1; 0,4 , dan 0,8 mg) yang terlihat pada silika gel 60 F254 piring dan dikembangkan dalam kloroform : metanol : air ( 65:25:4 v / v ) , kemudian disemprot dengan anisaldehida - asam sulfat ( AS ) reagen dan dipanaskan pada 110oC selama 10 menit . Setelah itu , pelat TLC scan menggunakan panjang gelombang 506 nm sesuai dengan farmakope herbal Indonesia ( Departemen Kesehatan Republik Indonesia , 2008) . Dalam studi antihipertensi vivo Sebanyak 40 tikus Wistar jantan dikelompokkan menjadi 8 kelompok perlakuan , masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus . Kelompok 1 , adalah kontrol normal ( 0,5 % per lisan CMC - Na . ) , Kelompok 2 adalah kontrol negatif ( fenilefrin 0,9 mg / kg subkutan ) , dan kelompok 3 adalah kontrol positif ( kaptopril 2,5 mg / kg per oral). Grup 4 sampai 8 diberikan per oral dengan dosis CFCA masing-masing 5 , 10 , 15 , 20 mg / kg , dan EECA dosis 400 mg / kg . Grup 2 sampai 8 juga diberi injeksi subkutan fenilefrin dosis 0,9 mg / kg pada 30 menit setelah pemberian dosis tunggal per pengobatan oral . Tikus tekanan darah diukur dan dicatat dengan metode tail - manset non - invasif . Tekanan darah sistolik ( SBP ) sebelum disebabkan oleh phenylephrine dinyatakan sebagai tekanan darah basal ( BP0 ) . Jika SBP0 130 mmHg atau tekanan darah normal , tikus diberi pengobatan segera , kemudian 30 menit kemudian diinduksi oleh fenilefrin . Tekanan darah ini diukur lagi setelah mencapai onset ( BP1 ) dan durasi efek fenilefrin ( BP2 ) . Analisis data dan statistik Data-data yang disajikan sebagai rata-rata standard error mean ( SEM ) . Dalam penelitian in vivo , tanggapan dinyatakan sebagai persentase kapasitas

antihipertensi ( AHCP ) yang dirumuskan sebagai berikut : penjelasan : Pphe : perbedaan tekanan darah pada kelompok kontrol negatif Ptre : perbedaan tekanan darah pada kelompok perlakuan Pnor : perbedaan tekanan darah pada kelompok kontrol normal Selanjutnya, nilai ED50 ditentukan dengan analisis regresi non - linear dari logaritma kurva dosis - respon dengan formula ini ( Kenakin , 1997) : --- = 12121XXxYY50Y Eq . ( 2 ) penjelasan : X1 : Logaritma dosis dengan respon persis di bawah 50 % X2 : Logaritma dosis dengan respon tepat atas 50 % Y1 : respon % persis di bawah 50 % Y2 : % respon tepat atas 50 % Data parameter kardiovaskular dianalisis secara statistik menggunakan analisis satu arah varians ( ANOVA ) diikuti oleh sedikitnya perbedaan yang signifikan ( LSD ) test. P - nilai kurang dari 0,05 dianggap signifikan . Hasil dan Diskusi Pemisahan triterpenoid dari senyawa lain Hasil ekstraksi menghasilkan 206,56 g ekstrak etanol dari 1 kg C. asiatica daun bubuk kering dengan 20,66 % rendemen . Hasil fraksinasi menghasilkan fraksi kloroform yang kental , warna hijau tua , dan jumlah 7,14 g atau 8 % rendemen dihitung dari ekstrak etanol . Rendemen CFCA adalah kurang dari kloroform fraksi larut ( 87,81 % ) karena senyawa non polar di C. asiatica daun yang lebih kecil daripada senyawa polar ( Harwoko et al . , 2012 ) . Kolom dikemas dengan resin HPD100 mengungkapkan kemampuan yang baik untuk memisahkan asiaticoside , madecassoside , dan saponin triterpen lainnya dari bahan baku herbal ( Jia dan Lu , 2008) . Tetapi penelitian ini dipisahkan triterpen dari komponen lain di piring gel silika oleh TLC normal ( Chivapat et al . , 2011) . Profil TLC menunjukkan bahwa CFCA tempat memiliki nilai HRF sebagai 24 ( ungu ) , 70 ( biru - ungu ) , dan 80 ( biru - ungu ) yang menunjukkan senyawa triterpenoid . Hasil ini mirip dengan sastra oleh Wagner dan Bladt ( 1996) dengan asiaticoside Rf adalah 0,2-0,35 ( brown -violet ) , sedangkan aglikon yang terlihat biru di Rf 0,85 . James dan Dubery ( 2011) juga melaporkan Rf 0,45 adalah asiaticoside dan 0,55 adalah madecassoside , sementara tempat di Rf 0,94 dan 0,97 adalah asam Asiatik dan asam madecassic , masing-masing. Sathiyanarayanan et al . ( 2010 ) juga melaporkan bahwa nilai RF 0,26 diperoleh untuk asiaticoside . Jadi , bintik-bintik CFCA di HRF 24 , 70 , dan 80 diidentifikasi sebagai asiaticoside , asam Asiatik , dan asam madecassic ,

sedangkan bercak coklat di HRF 16 diduga sebagai madecassoside ( Gambar 1 ) . Berdasarkan profil TLC , fraksi tidak larut kloroform mengandung flavonoid pada HRF 40-70 yang kuning fluoresensi dan intensitas yang lebih tinggi setelah disemprot dengan citroboric menjadi kuning kecoklatan ( Gambar 2 ) . Namun, pada kisaran HRF ini , CFCA tempat tidak tampak , tetapi hanya satu tempat di HRF 71 yang kemungkinan kotoran . Dengan demikian , CFCA tidak mengandung banyak flavonoid seperti dilansir Rachmawati et al . ( 2011) bahwa fraksi kloroform ekstrak etanol C. asiatica mengandung terpenoid dan senyawa fenol , tapi tidak mengandung flavonoid . kuantifikasi asiaticoside Kurva standar merencanakan konsentrasi asiaticoside dibandingkan area di bawah kurva ( AUC ) adalah Y = 0,8233 + 0.965X dengan koefisien korelasi ( r ) 0,99597 . Nilai-nilai AUC digunakan untuk menghitung konten asiaticoside di CFCA . Hal ini dapat dilihat bahwa CFCA mengandung 0,402 0,02 % dari asiaticoside ( Tabel 1 ) . Hasil ini lebih besar dari asiaticoside di C. asiatica ekstrak dari Karanganyar hanya 0,21 % ( Pramono dan Ajiastuti , 2004) , tetapi lebih kecil dari yang ditentukan oleh Bermawie et al . ( 2008) dengan HPLC adalah 0,71% . Metode densitometri TLC telah dikembangkan untuk menentukan isi triterpenoid karena sensitivitas dan selektivitas mereka , juga presisi dan akurasi yang baik ( James dan Dubery , 2011; Chaisawadi dan De - Eknamkul , 2012 ) . Tikus hipertensi yang diinduksi fenilefrin Profil fenilefrin dalam meningkatkan tekanan darah tikus dari percobaan pendahuluan menunjukkan bahwa timbulnya fenilefrin adalah 15 - 30 menit dan durasi efek adalah 1 jam . Hasil ini sejalan dengan data farmakokinetik fenilefrin hidroklorida , agonis reseptor 1 - adrenergik , yang memiliki 10 - 15 menit onset dan durasi 1 jam di injeksi subkutan ( Nugroho et al , 2008; Lacy et al , 2013. ). . Kelompok kontrol negatif yang fenilefrin diinduksi dinyatakan sebagai model tikus hipertensi dengan peningkatan rata-rata SBP ( 25 mmHg ) , DBP ( 15-20 mmHg ) , dan MAP ( 18 - 22 mmHg ) . Kenaikan ini sama seperti dalam dua ginjal satu klip tikus hipertensi ( 20 mmHg ) atau L - NAME diinduksi tikus Model ( 5 - 25 mmHg ) ( Monassier et al , 2006. ) . Kelompok kontrol normal yang diberi 0,5 % CMC - Na menunjukkan bahwa rata-rata perubahan SBP ( -1,6 hingga 2,4 mmHg ) , DBP ( 0,2-1,8 mmHg ) , dan MAP ( -0,2 menjadi 2,2 mmHg ) yang dinyatakan sebagai kelompok normotensif . Dampak pengobatan terhadap parameter kardiovaskular Perubahan tekanan darah disajikan pada Gambar 3 menunjukkan bahwa perlakuan maupun kelompok kontrol normal berbeda secara signifikan dibandingkan dengan kontrol negatif . Namun, dalam pengobatan dosis CFCA dari 5 dan 10 mg / kg , perubahan DBP tidak signifikan berbeda dengan kontrol negatif ( p > 0,05 ) .

Dengan demikian , dosis rendah CFCA tidak bisa menghambat DBP meningkat bahwa disebabkan oleh fenilefrin - diinduksi . Namun, semua resimen dosis CFCA dipamerkan efek hipotensi pada SBP dan MAP . Fenilefrin agak menurunkan denyut jantung ( 6 % ) , sedangkan CFCA dan EECA dapat meningkatkan denyut jantung ( 5 - 15 % ) . Namun dosis tinggi CFCA agak menurunkan denyut jantung serta captopril (12 - 19% ) . Persentase penurunan tekanan darah menunjukkan respon atau efek untuk setiap kelompok perlakuan ( Tabel 2 ) . Persentase ini untuk CFCA pada SBP dan MAP pada dosis 5 mg / kg berbeda nyata dengan kaptopril 2,5 mg / kg . Tapi itu tidak berbeda nyata untuk CFCA pada dosis 10 , 15 , 20 mg / kg , dan EEDP dosis 400 mg / kg untuk semua parameter tekanan darah . Meskipun pada menit ke-30 setelah menyuntik fenilefrin , CFCA dosis 20 mg / kg memiliki efek hipotensi pada DBP lebih tinggi dan berbeda nyata dengan captopril ( p < 0,05 ) . Hasil studi ini dapat membuktikan bahwa triterpenoid di CFCA yang mengandung 0,4 % dari asiaticoside memiliki potensi dan khasiat sebagai antihipertensi . Efek hipotensif dari CFCA dimulai pada dosis 5 sampai 20 mg / kg dengan respon bertahap . Nilai ED50 dari CFCA efek hipotensi pada SBP ( 10,40 0,98 mg / kg ) sebagai mirip sebagai efeknya pada DBP ( 9,05 1,95 mg / kg ) dan MAP ( 9,37 1,69 mg / kg ) . Dosis ini setara dengan 85-100 mg dalam 60 kg manusia ( Laurence dan Bacharach , 1964) atau 1/ 100 kali dari dosis yang mematikan pada tikus ( Chivapat et al , 2011. ) . Beberapa tindakan dari total fraksi triterpenic dari C. asiatica dalam penyakit pembuluh darah membuat penggunaan senyawa ini sangat menarik dalam vena dan arteri masalah ( Incandela et al . , 2001) . Khuzaimah ( 1997) melaporkan bahwa fraksi etil asetat dari daun C. asiatica diduga mengandung triterpen / saponin bisa menurunkan tekanan darah sistemik pada kucing . Kabarnya , ekstrak kaya triterpenoid dari serutan bambu dapat mengurangi SBP pada tikus hipertensi spontan ( Jiao et al . , 2007) . Selain itu, total fraksi triterpenic dari C. asiatica bisa mengobati hipertensi vena microangiopathy ( Incandela et al . , 2001) , meningkatkan mikrosirkulasi dan permeabilitas kapiler ( Belcaro et al . , 1990) . Centella asiatica ekstrak juga menunjukkan aktivitas diuretik kuat ( Jamil et al , 2007; . . Roopesh et al , 2011) dan aktivitas antioksidan vivo ( Hussin et al , 2007. ). Indonesia adalah negara keanekaragaman hayati terbesar kedua yang menyediakan obat-obatan tradisional untuk berbagai penyakit . Namun, data ilmiah masih terbatas sehingga pemerintah Indonesia menyatakan program berjudul " Bukti pembangunan berbasis Jamu " atau " Scientification Jamu " . Program ini telah mengembangkan formula antihipertensi yang berisi daun C. asiatica . Di Indonesia , tanaman ini dikenal sebagai herba pegagan atau kaki kuda dan digunakan untuk makanan , sayur atau obat tradisional .

Centella asiatica ( L. ) Perkotaan . ( Apiaceae ) banyak digunakan dalam obatobatan herbal sebagai senyawa industri jamu atau bahan baku ekstrak . Fitofarmaka , salah satu kriteria obat herbal Indonesia , memiliki efek menurunkan tekanan darah pada kucing , baik dengan normal atau hipertensi dengan epinefrin yang diinduksi ( Djatmiko et al . , 2001) . Ekstrak dimurnikan dari fraksi adalah potensi untuk mengembangkan sebagai agen antihipertensi ( Nugroho et al . , 2013 ) . Penelitian ini melaporkan bahwa fraksi yang kaya triterpenoid dari C. asiatica memiliki in vivo efek antihipertensi pada tikus hipertensi yang diinduksi fenilefrin . Selain itu, mekanisme rinci dan dampak jangka panjang dari efek antihipertensi dari tanaman ini perlu dikaji . kesimpulan Fraksi yang kaya triterpenoid ( CFCA ) dapat dipisahkan dari fraksi flavonoid dengan fraksinasi dengan kloroform . Data TLC - densitometri menunjukkan bahwa isi asiaticoside dari CFCA adalah 0,402 0,02 % . Fraksi kaya triterpenoid menunjukkan efek antihipertensi pada tikus hipertensi yang diinduksi fenilefrin . Nilai-nilai ED50 , parameter potensi obat , efek ini pada SBP , DBP , dan MAP adalah 10,40 0,98 , 9,05 1,95 , dan 9,37 1,69 mg / kg , masing-masing.