Manual para el manejo del software Empower Temas: 1. Crear Proyecto 2. Desarrollo de Mtodos 3. Creaci n de un Conjunto de Mtodos !.

. Confi"uraci n del E#uipo y el $oftware Empower %. Creaci n de Mtodos de Proceso %.1 Compro&aci n Manual del Mtodo de Proceso

'. Ela&oraci n del informe

1( Crear Proyecto o Abrir el Software Empower, ingresar usuario ( System) y la contrasea (manager), luego se debe presionar OK.

A continuacin aparecer la siguiente !entana"

)ota: desde a#u$ en el icono Configure System se crea el proyecto y se reali%an las configuraciones pertinentes. o *n"resar a: &onfigure System + 'ile + (ew )ro*ect + +acer clic en ,(e-t. +se debe seleccionar el tamao del proyecto (/01 23) y el enunciado ,'ull Audit 4rail Support. no debe estar seleccionado + +acer clic en ,(e-t. 5 ,)+oto 6iode Array. (seleccionar) + ,Owner Only. (debe estar seleccionada) + +acer clic en ,(e-t. 5 +acer clic en ,(e-t. + ,)ro*ect (ame. (escribir el nombre del proyecto) + ,'inis+. (finali%ar).

)ota: de esta forma el ,proyecto. ya esta creado. 7na !e% creado el proyecto, se debe crear el ,m8todo.. 2( Desarrollo de Mtodos o 9niciar nue!amente sesin en el software ,Empower. (escribiendo el usuario y la cla!e correspondiente)

:uego se debe +acer clic donde dice ,Ad!anced. y selecciono la interface ,;uic< Start. y presiono OK.

Se abrir un cuadro de dialogo (,Select )ro*ect System.), a partir del cual se debe seleccionar el nombre del proyecto #ue fue creado anteriormente y el sistema cromatogr fico #ue es ,6efaul. y seleccionar ,OK..

A continuacin se abrir la !entana de an lisis de la interfa% ,;uic< Start..

o Se debe presionar la pestaa ,=iew 2et+od. y la opcin #ue dice ,9nstrument. y se abrir la !entana ,=iew 2et+od 9nstrument..

)ota: en esta !entana programo todas las condiciones del proyecto, tanto del m8todo instrumental (dibu*o uno encerrado en el c$rculo) como del detector (dibu*o dos encerrado en el c$rculo). :as condiciones se modifican por separado (se debe +acer clic en cada uno). &ondiciones modificadas en" 28todo 9nstrumental" ,eneral: en esta pestaa se debe establecer el rango de la longitud de onda con la cual deseo traba*ar de comien%o a fin (start wa!elengt+ > end wa!elengt+) De"as E-entos .lujo: estable%co el flu*o con el cual !a ir pasando la fas m!il a tra!8s de la columna (ml?min) Temperatura: modifico la temperatura a la cual #uiero #ue se mantenga la columna. $ol-ente: +ay cuatro recuadros (sol!ente A, sol!ente 3, sol!ente &, sol!ente 6) en los cuales debo escribir la composicin de la fase m!il y la proporcin en la #ue se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando mi fase m!il. Canal

6etector" @eneral E!entos &anal A &anal / )ota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior del software (pestaas) al momento de +acer clic sobre cada uno de estos (m8todo instrumental o detector). o 'inalmente se debe presionar donde dice .ile + $a-e as/ + se abrir un cuadro para guardar el m8todo instrumental (colocar el nombre), el cual estar dentro del proyecto #ue se creo anteriormente.

o 7na !e% reali%ado esto, en la barra de estado (parte inferior de la pantalla) deber n aparecer los nombres asignados con el cual se guardo el m8todo (2et+od Set) y el proyecto (9nstrumental 2et+od).

)ota: en el caso #ue el m8todo instrumental ya +aya sido creado (se +ayan establecido todas las condiciones), se debe presionar el icono abrir el m8todo instrumental #ue ya fue creado. (carpeta de color amarillo), para

3( Creaci n de un conjunto de mtodos

)ara crear un con*unto de m8todos se debe +acer clic en la pestaa ,=iew 2et+od. 5 ,2et+od Set. (para poder abrir el con*unto de m8todos).

o En donde dice ,9nstrument 2et+od. (encerrado en el circulo ro*o) debo seleccionar el nombre del m8todo (el cual fue creado

anteriormente). :uego se debe guardar el m8todo con el nombre seleccionado (presionando el dis#uete #ue aparece en la parte superior i%#uierda).

En la pestaa donde dice ,Bun Sample. 5 ,Sample ;ueue. (se deben escribir, todos los par metros de las muestras #ue ser n inyectadas).

)ar metros #ue se deben tener en consideracin" :ista de modos" 0un 1nly

 2ial: se completa de acuerdo a la posicin #ue ocupa la muestra. $ample )ame: se completa con el nombre de las muestras #ue se !an a ainyectar. *nj 2ol: se completa con el !olumen de inyeccin correspondiente a la muestra. .unction: Se debe seleccionar dependiendo si es un est ndar (Standards), se asume #ue la concentracin es conocida, o si es muestra (se debe seleccionar la opcin ,desconocido. ya #ue no se en #ue concentracin se encuentra). Met3od $et: selecciono el nombre con el cual se creo el m8todo. 0un Time: tiempo de corrida total #ue dura la muestra.

o )ara reali%ar la ad#uisicin de datos se debe comprobar de #ue la pestaa ,=iew Ac#uisition. este seleccionada (de color naran*o)

!( Confi"uraci n del E#uipo y el $oftware Empower

o Se debe encender, el detector y la pantalla del m8todo instrumental y presionar en la pantalla, donde dice ,2enu?Status. (todos los par metros aparecen en cero).

,Esta es la !entana de an lisis de muestra..

o 7na !e% encendido el e#uipo, y el software ubicado en la pestaa ,Bun Sample. se debe presionar el icono de ,E#uilibrado del sistema?monitori%acin de la l$nea base., para abrir el cuadro de dialogo de configuracin del e#uilibrado del sistema?monitori%acin de la l$nea de base (Setup E#uilibrate?System 2onitor).

o 6onde dice ,9nstrument 2et+od. debo seleccionar de la lista el m8todo #ue se +a creado al comien%o y a continuacin +acer clic en ,Setup. ,E#uilibrate?2onitor.. &uando comien%a el e#uilibrado, aparecer la l$nea base en el panel de !isuali%acin en tiempo real. o Al e#uilibrar el monitor, los datos #ue fueron guardados en el ,28todo 9nstrumental. (flu*o, temperatura de la columna, sol!ente) deber n aparecer en la pantalla del e#uipo. )ota: :a temperatura de la columna ira aumentando poco a poco, +asta alcan%ar la programada y cuando esta aun no es alcan%ada, en la pantalla del e#uipo aparecer un mensa*e de alerta, se debe presionar ,clear. cada !e% #ue apare%ca para eliminar el mensa*e. )ota: )ara poder obser!ar la l$nea base, se debe +acer clic en la pestaa ,Bun Sample. 5 ,&ontrol )anel. (se podr obser!ar la corrida de la l$nea base). o 2ientras se esta estabili%ando la linea base, ubico el mouse sobre el cromatograma y presiono con el botn derec+o, en donde aparecer n !arias opciones entre ellas" ,'ull!iew. (!ol!er al tamao original una !e% #ue +ago %oom al cromatograma), ,&ustomi%e &+annels. (en la cual debo escribir las tres longitudes de onda especificas a la cual #uiero medir y estas deben estar ticadas), tambi8n se puede configurar si deseo !er los cromatogramas *untos (,o!erlay in single plot.) o por separado (,separate plots.).

o &uando la l$nea base ya se +aya estabili%ado, se debe +acer clic en la +erramienta (detener monitori%acin).

)ota: 6ebido a #ue el software a*usta autom ticamente la escala del grafico en tiempo real, la l$nea de base puede aparecer con ruido. o 7na !e% #ue se detiene el proceso de monitori%acin, se debe +acer clic en el icono #ue dice ,&orrida de la muestra., es decir, se le dar partida a las inyecciones. 7na !e% #ue doy la partida aparece un cuadro en el cual debo especificar el nom&re de la muestra (la #ue comen%ara a correr) y luego se presiona ,Bun..

o Al +acer clic en el icono ,9nyeccin de muestra. se abrir el cuadro de dialogo de configuracin de los par metros de inyeccin Cnica (Specify Single 9n*ect )arameters).

)1T4: 7(A =ED ;7E :AS 9(EE&&9O(ES FA( S96O @BA3A6AS E &O29E(DA :A &OBB96A E: 49E2)O 6E &OBB96A 6E :A 27ES4BA (O SE )7E6E &A239AB.

)ota: se debe completar con el nombre de la muestra, la funcin (en el caso #ue sea est ndar o muestra lo #ue se este inyectando), nombre del m8todo, ubicacin de la muestra en el !ial, !olumen de inyeccin, tiempo de corrida de la muestra y finalmente presionar ,9n*ect.. EL ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO LAS UESTRAS UNA A UNA Y ASI E!ITO CO PLETAR LA TA"LA QUE APARECE AL PRESIONAR LA PESTA#A RUN SA PLE $!ENTANA DE ANALISIS DE UESTRA% YA QUE LA CO PLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR !ARIAS UESTRAS Y LAS ESCRI"O TODAS DE UNA SOLA !E&' )ota: Es a#u$ donde se reali%a la ad#uisicin de los datos, para luego poder procesarlos. 0) Creaci n de Mtodos de Proceso ( 9ntegrar los datos > &alibrar los patrones > &uantificar las muestras)

o Facer clic en la pestaa ,3rowse )ro*ect. (en donde estar n todas las inyecciones reali%adas). En la parte superior de esta pestaa, e-isten subpestaas (Sample Sets G 9n*ections > &+annels > 2et+ods > Besult Sets > Besults > Sign Offs > &ur!es).

En la subpestaa ,simple set. aparece el nombre con #ue guarde las muestras inyectadas y en la pestaa ,9n*ections. aparecer n cada una de las inyecciones #ue fueron guardadas con el nom&re de la muestra. 7na !e% ubicada en la pestaa ,Sample Set. ubico el mouse sobre el nombre de las muestras inyectadas (#uedara de color negro), luego se debe presionar el icono #ue dice ,Be!iew 6ata. + )rocess + E-traer cromatograma (a#u$ se debe cambiar la longitud de onda (presionar enter) a la cual #uiero medir el compuesto de inter8s (cromatograma en la parte superior), para !er con mayor claridad el compuesto en la muestra inyectada (cromatograma en la parte inferior) Facer clic en el icono #ue dice ,)rocessing )arameters Hi%ard. + OK (cuadro de procesamiento de m8todo wi%ard) + OK (cuadro de dialogo" nue!o m8todo de proceso).

o :uego se deba +acer clic en (e-t (cuadro de dialogo" 9ntegration pea< deteccin A) + (e-t + Seleccionar donde dice ,m$nima rea. y +acer ,clic. en el ,pic. de inter8s (una !e% #ue el rea m$nima +aya sido seleccionada, se le debe borrar el ultimo decimal y +acer clic en ,4est. + (e-t + (e-t (aparecer un cuadro con el nombre del ,pic. #ue +a sido seleccionado *unto con el tiempo de retencin de este).

)ota: Facer clic con el botn derec+o del ratn en el gr fico para tener acceso a las opciones de %oom ('ull =iew?7n%oom) del menC conte-tual'

:uego presiono donde dice" (cuadro de dialogo" 9ntegration )ea< detection /) + (e-t

Aparecer un cuadro de dialogo" regin de integracin" se debe definir el rea del ,pic. del compuesto de inter8s desde donde comien%a (start) +asta donde termina (end) + (e-t

)ota: en este cuadro de dialogo, las reas de los ,pic. ya est n seleccionadas (l$neas de color ro*o, obser!adas en la l$nea base). o En esta pantalla de rec+a%o de picos (9ntegration G )ea< Be*ection) contiene los resultados de la integracin de la pantalla precedente. Si se +an integrado adecuadamente los picos de inter8s, continuar con el paso siguiente. 6e lo contrario, utili%ar las opciones Minimum 4rea ( rea m$nima) y Minimum 5ei"3t (altura m$nima) para continuar definiendo la integracin.

)ota:

Facer clic sobre un pico para el #ue se desee definir el rea m$nima o la altura m$nima. El pico aparecer marcado de color ro*o. Facer clic en Minimum 4rea o Minimum 5ei"3t. El campo o campos se rellenan autom ticamente con un nCmero #ue representa el I0J de la altura o rea real del pico. :as opciones 2inimum Area y 2inimum Feig+t in+iben la integracin de los picos con reas y alturas iguales o inferiores a los !alores introducidos. &omo alternati!a, introducir los !alores en estos campos de forma manual. Nota: Cuan(o se intro(u)en *os +a*ores en estos )am,os (e forma manua*- se a)ti+a e* .ot/n Test y se ,ue(e 0a)er )*i) en 1* ,ara +isua*i2ar *os resu*ta(os o.teni(os )on *os +a*ores intro(u)i(os' Si e* soft3are (etermina *os +a*ores- e* .ot/n Test se (esa)ti+a y *a ,rue.a se rea*i2a autom4ti)amente' Cuando se o&ten"a una inte"raci n satisfactoria6 3acer clic en )e7t. o Se abrir la pantalla general de calibrado (&alibration > @eneral)

)ota: se debe aceptar lo #ue ya esta predeterminado y +acer clic en ,(e-t.. o Aparecer un cuadro de dialogo de ,;uic< Start. y se debe presionar Ees.

o o o o o o o o o o o o Se abrir la pantalla de nombres y tiempos de retencin (&alibration > (ames and Betention 4imes).

)ota: donde dice ,(ame. se puede escribir el nombre espec$fico correspondiente a cada pic (compuesto de inter8s). o Facer clic en )e7t. Se abrir la pantalla de cantidades predeterminadas (&alibration 6efault Amounts) con los nombres de los nue!os componentes

introducidos en la tabla. Fabr una fila para cada uno de los picos integrados !isuali%ados en el cromatograma

)ota: las cantidades (Amount) y las unidades (7nits) se deben escribir de forma manual. o Facer clic en (e-t y se abrir la pantalla de patrones internos de calibrado (&alibration > 9nternal Standards).

)ota: Aceptar la seleccin predeterminada de E7ternal $tandard Cali&ration (calibrado con patrones e-ternos). o A continuacin, +acer clic en )e7t. Se abrir la pantalla del nombre del m8todo de proceso ()rocessing 2et+od (ame).

)ota" Se debe escribir el nombre del m8todo correspondiente y luego +acer clic en ,'inis+.. o El software Empower integrar el cromatograma aplicando los par metros configurados, calibrar el patrn y arc+i!ar el nue!o m8todo de proceso. =ol!er a aparecer la !entana de !isuali%acin de datos (=iew 6ata) con la pantalla principal de re!isin acti!a (Be!iew 2ain) y con el nombre del m8todo de proceso en la barra de estado.

)ota: Facer clic en la pestaa Pea8s para !isuali%ar los resultados de la integracin, como nombres de los picos, tiempos de retencin, cantidades, etc. '.1 Compro&aci n Manual del Mtodo de Proceso o o 7na !e% #ue se reali%aron todas las inyecciones, se deben de integran y cuantificar los cromatogramas, en donde se especifican las reas, tiempo de retencin y concentracin de cada ,pic<.. Se debe pinc+ar el icono #ue dice ,=iew 6ata., en esta !entana aparecer n todas las inyecciones reali%adas. Facer clic en Facer clic en Facer clic en (integrar) para integrar el cromatograma. (calibrar) para calibrar el cromatograma. (cuantificar) para cuantificar el cromatograma.

o o o

)ota: )ara !isuali%ar los resultados del proceso de datos manual, +acer clic en el icono (icono de proceso) de la barra de +erramientas. Se abrir la !entana de re!isin de datos (Be!iew). o o o En la !entana ,=iew 6ata., al +acer clic, me aparecer n todas las inyecciones reali%adas al lado i%#uierdo y al lado derec+o me aparecer n los cromatogramas. En la parte inferior en la !entana /6 &+annels, y selecciono la l$nea, !oy a .ile + $a-e + Cali&ration (!oy guardando cada uno de mis puntos para luego poder +acer la cur!a de calibracin). 7na !e% #ue tengo los puntos guardados, presiono donde dice ,&aliration &ur!e. , #ue es donde !oy !iendo mi cur!a de calibracin (concentracin conocida) con los puntos #ue fueron guardados anteriormente. A#u$ se !a creando la cur!a de cada uno de los componentes de inter8s. )ota: A cada una de las concentraciones #ue !oy guardando le !oy colocando un nombre. o o :uego presiono el icono donde dice ,Be!iew 2ain Hindow., para regresar al cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno de los compuestos identificados con sus nombres). En el caso #ue se este inyectando muestra (no se conoce la concentracin), en la parte inferior en la !entana /6 &+annels, y selecciono la l$nea, !oy a .ile + $a-e + 0esult (!oy guardando cada uno de los compuestos #ue ya est n integrados).

'( Ela&oraci n del *nforme )ara generar un informe una !e% #ue se +an ad#uirido y procesado los datos (integracin)"

o o o

Facer clic en 9rowse Project, en la barra de na!egacin. Aparecer la !entana del e-aminador de proyectos (3rowse )ro*ect). En la pare superior aparecen !arias pestaas (9nyections, Besults, Samples Sets, &+annels, etc.) En la pestaa *njections6 aparece el listado de todas las inyecciones reali%adas. Facer clic en la pestaa 0esults y, a continuacin, en el botn :pdate para actuali%ar la !isuali%acin en pantalla. Seleccionar el resultado #ue se #uiere !isuali%ar (#uedara seleccionado de color negro) y +acer clic en el icono para !isuali%ar el cromatograma (se abrir una pestaa, se debe presionar OK), luego se debe ir guardando cada uno de los cromatogramas, presionando el icono