Untuk mendapatkan gen insulin sebagai obat atau hormon sebagai pengatur kadar glukosa dalam darah kita

harus melakukan Rekayasa Genetik (Genetic Engineering). Sebelum melakukan tahapan Rekayasa Genetik, harus menentukan vektor yang akan digunakan sebagai pembawa kloning gen insulin yang diinginkan. ektor yang digunakan sebagai pembawa kloning gen insulin ini adalah vektor yang bersi!at non"virus serta mikroorganisme #enis eukariot. $ikroorganisme eukariot yang digunakan mengandung plasmid dan gen preproinsulin manusia. Setelah menentukan vektor yang akan digunakan, dilakukan penentuan sekuen atau !ragmen c%&' untuk memastikan !ragmen c%&' yang diisolasi adalah gen target sesuai dengan kehendak kita. cDNA yang didapatkan untuk membuat kloning gen insulin didapat dari sintesis protein
mRNA. Untuk mengubah mRNA menjadi homolog cDNA

Fragmen DNA yang Pemotongan DNA sumber gen dan vektor kloning menggunakan enzim restriksi . !enyisipkan potongan DNA sumber gen ke dalam vektor kloning yang telah dipotong dan disambung dengan bantuan enzim DNA ligase ". #asil DNA rekombinan kemudian ditrans$ormasi ke dalam sel inang %biasanya sel bakteri& misalnya strain '.coli (alaupun sel jenis lain dapat di gunakan) untuk diproduksi lebih banyak. *. +elanjutnya dilakukan proses pra ,nkubasi& dimana sel '.coli calon penerima plasmid dipaparkan kepada ion positi$ kalsium klorida %-a-l.). Perlakuan ini dilakukan agar membran sel dan dinding sel bakteri '.coli menjadi permeable terhadap plasmid donor. +ehingga sel bakteri '.coli akan menjadi /kompeten0 untuk dapat menerima plasmid. 1. Pada proses inkubasi plasmid ditambahkan ke dalam suspensi sel '.coli kompeten. +uspensi sel '.coli kompeten lainnya yang tidak ditambah plasmid sebagai kontrol. 2. +el kompeten %baik yang diberi plasmid maupun sebagai kontrol) dipaparkan sejenak selama 34 detik pada suhu ".o-. 5angkah ini dilakukan dengan tujuan untuk dapat memaksimumkan masuknya plasmid menembus membran dan dinding sel. 6. +elanjutnya adalah proses penyembuhan %Recovery). +el7sel kompeten %baik yang diberi plasmid maupun sebagai kontrol) ditumbuhkan dalam sebuah medium kaya nutrisi untuk memberi kesempatan proses penyembuhan pada sel bakteri setelah mengalami cekaman dan kejutan. !asa penyembuhan berlangsung satu (aktu generasi %untuk '. coli berkisar antara 4 hingga "* menit) 3. Di dalam sel inang& vektor melakukan replikasi yang dapat menghasilkan banyak turunan identik& baik vektornya sendiri maupun gen yang diba(anya %gen target). 84. 9etika sel inang melakukan pembelahan& salinan molekul DNA rekombinan di(ariskan pada progeni dan terjadi proses replikasi vektor selanjutnya. 88. +etelah terjadi sejumlah besar pembelahan sel& maka akan dihasilkan koloni atau klon sel inang yang identik. 8.. +etiap sel dalam klon mengandung satu salinan atau lebih molekul DNA rekombinan: sehingga dapat dikatakan bah(a gen yang diba(a oleh molekul DNA rekombinan telah diklon. 8 . ;en target yang ada di dalam sel inang jika diekspresikan akan menghasilkan produk gen yang kita inginkan