En recherche fondamentale
En recherche applique
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Biotechnologie
Ensemble de techniques biologiques, provenant de la recherche fondamentale, qui sont appliques la recherche et au dveloppement de produits.
La biotechnologie recouvre l'emploi de l'ADN recombinant, la fusion cellulaire et les nouveaux procds biotechnologiques.
La biotechnologie vgtale est un domaine prcis dans lequel des techniques scientifiques servent mettre au point de nouvelles varits de plante.
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* Produire de la biomasse
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La culture in vitro
Henri Duhamel du Monceau, des bourgeons apparaissent entre le bois et le cortex quand on enlve lcorce
Scleiden et Schwann: La thorie cellulaire: une cellule vgtale diffrencie peut devenir totipotente
Totipotence: aptitude de la cellule vgtale exprimer la totalit des potentialits du gnome pour donner un organisme entier
Cette totipotentialit cellulaire s'accompagne d'une possibilit de multiplication indfinie que l'on peut observer dans les zones de croissance de la plante : les mristmes, cellules restant dans un tat de ddiffrenciation permanent.
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Enchanement de mitoses donne - une callogense - une organogense - une embryogense somatique
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Les AUXINES
tryptophane
AIA
(photosensible)
La synthse de l'auxine s'effectue dans les apex des tiges, dans les mristmes et dans les jeunes feuilles des bourgeons terminaux.
Le transport de l'auxine s'effectue de faon polarise, de l'apex vers la base dans la tige.
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LES CYTOKININES
Stimule la division cellulaire (nom en relation avec cytokinse ) et lorganogense (caulogense: bourgeon)
Synthse dans les racines puis migrent dans la plante via la sve brute
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Formation de cals
Auxines = Cytokinines
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Le rapport auxines / cytokinines dtermine le devenir des tissus en culture Cytokinines bourgeons
Auxines majoritaires
Cytokinines majoritaires
La transgnse vgtale
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Certaines bactries infectent les cellules vgtales et provoquent des tumeurs ou prolifrations cellulaires chez les plantes infectes
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Smith et Townsend montrent en 1907 que le crown-gall est caus par une bactrie Agrobacterium tumefaciens
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Braun montre en 1943 que les cellules de la tumeur peuvent se multiplier indfiniment en absence de bactries et en absence de substances de croissance (auxines, cytokinines ).
Productions de cals
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Les agrobactries hbergent de trs grands plasmides ncessaires la formation des tumeurs
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Les plasmides Ti
-ADN-T contient des gnes qui permettent - de produire des auxines et des cytokinines do une augmentation anormale des quantits dhormones - la synthse et la scrtion dopines
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Les gnes ncessaires au transfert du T-DNA sont ports par la zone vir (virulence) des plasmides Ti
Plasmide Ti octopine
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Il y aurait 195 ORF: - 20 gnes impliqus dans la conjugaison - 3 gnes de rplication - 7 gnes de modification du plasmide - 22 gnes de pathogense - 38 gnes assurant le transfert de lADN-T - 24 gnes impliqus dans le mtabolisme des opines - 12 gnes assurant des fonctions diverses telles que le transport de ribose, le chimiotactisme - 84 squences non rpertories
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La transcription des gnes vir est induite par des composs phnoliques mis par les cellules blesses ex: actosyringone
Induction par pH extracellulaire trs bas (5 - 5,5) inhibition de la croissance bactrienne donc favorise le transfert de lADN-T
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autophosphorylation
VirG, faible expression constitutive, interagit avec boites vir dans rgion promotrice des oprons (12pb conserves), autorgulation de virG
Souche hypervirulente = forte quantit de virG (quand croissance libre, peu de virG)
coupures
Vir D2 Vir D2
Vir D2
Ici coupure simple brin do intermdiaire ADN-T simple brin, on peut avoir des coupures double brin et un intermdiaire ADN-T double brin, dpend des souches
Vir D2
VIR D2
Vir D2
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Agrobactrie
Membrane cellulaire
cytosol
Cellule vgtale
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Des gnes du plasmide Ti de lagrobactrie possdent les lments de rgulation de la transcription par Pol II
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BG
BD
gne exprimer
ADN-T
pNos
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Cal
AUXINES = CYTOKININES
Racine
Bourgeon
AUXINES>>CYTOKININES
CYTOKININES>>AUXINES
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n o i t a m r fo s n tra
ou OGM ou PGM
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Applications fondamentales
-par complmentation ou par modification de leur expression (surexpression ou sous-expression (RNAi prochain cours) ) -Par tude de mutants perte de fonction, production de mutants dinsertion
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BLANC
BLEU
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1) tude de lactivit dun promoteur - Dtails de la construction 5 UTR Sq codante GUS UTR 3 ATG STOP
Promoteur tudier
- Observations
Promoteur actif lors de la division cellulaire Promoteur mristme spcifique Promoteur nervure spcifique
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Promoteur tudier
PROTEINE GFP
Absorbtion
mission Fluorophore
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Absorbtion 395 nm
mission 508 nm Marquage des noyaux avec une fusion NLS-GFP dans une plante transgnique
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(0,1 3%)
Plusieurs dizaines de milliers de transformants indpendants, donc dinsertions situes diffrents emplacements dans le gnome
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Gene X
BD
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ADN gnomique
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Recherche dhomologie entre la squence flanquant la bordure du T-DNA (FST) et le gnome dArabidopsis
gne X
T-DNA
FST
acaaatttct ttattattaa ttgattaaaa aatagttaat ctttaaaatt aattaagaaa ttcctccctc atacagatta aatcggacgg AGGAGCTCGT AAGTAGCCAT tccgaatttt tttttgtttt TCTCGTAGAG AAGCTTACCG CGTGGTAAGA ACCAAATCTG ttcttctatt tgattcatag ggttcagcag tgtgcttacc GTGATGATGC ATATGACTAG aggcagatca tttcagGTCA GATTCAGCAA CTTCAAGGAT CTGAGTGACT TCGGAGATGA ACATCTATGC CCTGATGATA atcacaacct GAAGACACTT ATAGATGATA CAACCAAAGC tacgaaatct gctatgggtc TGAAGACTCG GGAGAATGCA CGTCATTAGT tgtatttctt cggaaaagtt agagaagaaa ttagtgcatc aaagggattt gcaaccaaag gacttcgata ttgcaggtga
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atattcaatc attgttaaat tcataagtaa ttactacatg gtaaaaccat aaggaataaa gatataccaa gagagatcga ATGGAGGATC CTCCGTAACA AACATCTGTA tttgcaagta GTCAAAGTAC AGGGAATCGA TGAGGTCAAG AAGGGTTTTG CCACGAGTTC tatatatata agttatgcaa cttagcttac ttacagAGGA TCTGCTTATG TCTGTGgtga tgtgtctact TCAACGAAAT GCAGTTTAAT TCTCCTTGAG GCAACAGCAA TGTGATTGAA CAGTGATCAC TGAAACTGGA tatatctcac TGATAGTGTT GAACATTATT AGAAAAGgtt ttcatcaaaa TGATAAGTTC CTCCATCCAC ATCTCAAGAA TTGTTGGTTA tttttttttg ttttattagt atcatatata gtagtttata ccaaatatga aaggaaatga aacaatacat gaaaaacggg
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AT1G01010 BD
Dr. Jonas Salk, developer of the polio vaccine, established the Salk Institute for Biological Studies more than 40 years ago.
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CLON SALK_074723.37.35.x[seq] [About & Citation] [analysis] [Order from ABRC] [Order from NASC] TYPE SALK T-DNA CHRO chr1 EVAL 1e-41 COOR C/4101-4298
HITS At1g01010[Seq] [Transcriptome] [RiceGE] [GO] [NCBI] [NCBI Map] [TAIR] [MIPS] [MPSS] [AMPDB] [KEGG] TYPE Gene TITL no apical meristem (NAM) family protein similar to NAC domain protein NAM GB: AAD17313 GI:4325282 from [Arabidopsis thaliana]; go_function: transcription factor activity [goid 0003700]; go_process: development [goid 0007275] LOCN Intron COOR W/3760-3913,3996-4276,4486-4605,4706-5095,5174-5326,5439-5630
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1 acaaatttct acagaggatg atattcaatc 61 ttattattaa atctttttta attgttaaat 121 ttgattaaaa ttctaaacca tcataagtaa 181 aatagttaat actactcggt ttactacatg 241 ctttaaaatt gttaggaccg gtaaaaccat 301 aattaagaaa ataaaaataa aaggaataaa 361 ttcctccctc caaattatta gatataccaa 421 atacagatta cagagagcga gagagatcga 481 aatcggacgg tttagtgaaa ATGGAGGATC 541 AGGAGCTCGT TGGTCACTAT CTCCGTAACA 601 AAGTAGCCAT CAGCGAGGTC AACATCTGTA 661 tccgaatttt ctgaatttca tttgcaagta 721 tttttgtttt gaacagTCCA GTCAAAGTAC 781 TCTCGTAGAG AAAACAACAA AGGGAATCGA 841 AAGCTTACCG GAGAATCTGT TGAGGTCAAG 901 CGTGGTAAGA TTGGTCATAA AAGGGTTTTG 961 ACCAAATCTG ATTGGGTTAT CCACGAGTTC 1021 ttcttctatt c atatatata tatatatata cacggttcac tggtttaaat aaaataatat aaatttcata accaattaaa ttgtcttatt accagagaaa cggcgaagct AAGTTGGGTT AAATCGAAGG GCTACGATCC atcgatttag AAATCGAGAG CAGAGCAGGA GACCAGTGGG GTGTTCCTCG CACTACGACC tatgtggata ccaaaccgat tttataaaat ctgaactctg tttacttaca gattaagact aataaatctt ccatcaattg ttttaataat ccggagatcc atattaattt taaacgctga cttcactgtc acaaatacat aatcggagaa ctttacccgg aaaccattga TGGGTTCCGT CCGAACGACG AAACACTAGC CGCGACGTTG TTGGAACTTG CGCTgtaagt gtttttgatt ttagggtttt ATGCTATGTG GTACTTCTTC CAACGGTTTC TGGTAAATGG GATTTTGTAG TGAGGGCTTT ATGGAAGATA CCCTGACAAA TCTTACCAGA ACATCAGgtt tatatatatg tggtttctgc
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autofcondation
T2 Sauvage Htrozygotes
autofcondation
T1 SELECTION
Sauvage
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Agriculture
Agroalimentaire
Industries
Environnement
Sant-pharmacie
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Agriculture
Rsistance la pyrale
Par endotoxine (insecticide naturel) de Bacillus thuriengensis (Bt) contre larve de lpidoptre (Pyrale)
-protoxine clive dans lintestin de linsecte par protase + pH alcalin -Toxine active qui se fixe des sites de lintestin -ulcration, perte dapptit -Rupture des cellules, mort des larves
Moins dinsecticides chimiques, mas, tomate, pomme de terre, coton, laitue, peuplier,
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Agriculture
Agroalimentaire
Riz dor (golden rice) carence en vitamine A (antioxydant), 400 millions de personnes (ccits, sensibilit accrue aux infections) Introduction de 4 gnes synthse de B-carotne (prcurseur de la Vit A)
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Mas
Rsistance aux insectes, Tolrance aux herbicides (Afrique du Sud, Argentine, Canada, Etats-Unis d'Amrique, Union europenne, Argentine, Canada, EtatsUnis d'Amrique, Union europenne)
Soja
Tolrance aux herbicides (Afrique du Sud, Argentine, Canada, Etats-Unis d'Amrique, Union europenne (pour la transformation seulement)
Colza
Pomme de Terre Rsistance aux insectes / tolrance aux herbicides (Canada, Etats-Unis)
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Industries
Industrie papetire, papier partir de cellulose du bois, Prsence de lignine, impermable et inextensible trs coteux liminer et source de pollution (utilisation de chlore et consomme une trs grande quantit d'eau) Diminution du taux de lignine par transgnse
Coton gntiquement modifies pour obtenir des vtements en fibres naturelles moins froissables ou des cotons colors qui viteront l'utilisation de teintures ncessitant de nombreux contrles et des systmes d'puration des eaux uses des teintureries lourds et coteux mettre en place.
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Industries
Biocarburants
Huile de Colza
De nouvelles varits de colza ont t obtenues par transgnse pour diminuer la viscosit et augmenter l'indice d'octane du diester.
Actuellement les huiles reprsentent seulement 43 % de la masse des graines de colza. Des recherches sont menes pour accrotre ce rendement. Le gne qui code l'enzyme intervenant dans la dernire synthse de l'huile a t isol. Des copies supplmentaires de ce gne ont t introduites dans du colza. Certaines graines ont ainsi produit une quantit d'huile correspondant plus de 75 % de leur masse.
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Sant-pharmacie
Plante alternative intressante compare aux microorganismes ou aux cellules des mammifres
Les protines humaines subissent des modifications post traductionnelles (glycosylation, carboxylation, lipidation) ncessaire leur activit biologique
Ces modifications possibles chez les plantes, difficiles voir impossible chez les bactries ou levures
Plantes non porteuses des agents pathognes couramment associs aux infections humaines (virus, bactries)
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Leur contenu cellulaire, hormis la protine recombinante, connu de lhomme par son utilisation dans lalimentation, en cosmtique et en pharmacie.
- Stockage stable des protines recombines dans des endroits stratgiques de la plante (tubercule, feuilles, graines, fruits)
-Si protine recombinante administre par voie orale, consommation directe de la plante possible
Leur production grande chelle ou en conditions contrles fait partie du patrimoine culturel de toutes les nations
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Sant-pharmacie
Molcules plasmatiques, albumine humaine (HSA) Remplacement d'lments sanguins (sang "artificiel"), cot de production 5 fois moins lev que si albumine purifie partir du plasma, pas de contaminations
Hmoglobine humaine produite partir de tabac transgnique l'hmoglobine (des biologistes franais ont dpos une demande de brevet)
Lactoferrine Humaine: protine multifonctionnelle du lait activits antibactrienne, anti-fongique et anti-virale. (attente dautorisation de mise sur le march)
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Sant-pharmacie
Collagne, phase de dveloppement, soigner l'arthrose et aider la rparation des tissus en cas de chirurgie ou traumatismes
Hirudine, puissant inhibiteur de la thrombine utilise comme anticoagulant, source naturelle la sangsue, production dans graines de colza transgnique,
Production de vaccins
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Sant-pharmacie
Production de vaccins
La prochaine pandmie (pidmie plantaire) pourrait tre dorigine aviaire (si virus de la grippe aviaire H5N1 mut trs contagieux pour lhomme)
Vaccin bas sur linoculation du virus de la grippe humaine dans des ufs fertiliss ou embryonns, puis purification du virus et inactivation
pour fabriquer 1,2 milliard de doses, il est ncessaire de disposer de... 4 milliards doeufs embryonns et dau moins six mois au minimum.
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Production de ("VLP") Virus-Like Particle dans des plants de tabac pour faire un vaccin contre le virus H5N1
Expression transitoire pour production grande chelle en utilisant des agrobactries infiltres dans les feuilles de tabac