Dosen Pembimbing : Drs.

Adib Suyanto,MSi

Disusun Oleh :
1. 2. 3. 4. Fathania Probosiwi Fatikha Ratnawati Galih Ayuningtyas Isna Bekti Pertiwi P07133113059 P07133113060 P07133113061 P07133113063

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PENGUJIAN KUALITAS BAKTERIOLOGI AIR DENGAN MPN COLIFORM METODE TABUNG
Mata Kuliah Kompetensi Semester Tempat Tanggal Praktikum Peserta Praktik Kelas : Mikrobiologi : Pengujian Kualitas Bakteriologi Air Dengan MPN Coliform Metode Tabung. : 1 (satu) : Laboratorium Dasar Mikrobiologi : : Kelompok 5 (4 orang) : Reguler B

I.

TUJUAN Mahasiswa dapat mengetahui jumlah coli tinja coliform per 100 ML sampel. Mahasiswa mampu mengetahui uji kualitas air.

II. DASAR TEORI Dalam metode MPN (Most Probable Number) untuk uji kualitas mikrobiologi air digunakan kelompok koliform sebagai indicator. Kelompok kolifrm mencakup bakteri yang bersifat aerob dan bakteri yang bersifat anaerob fakultatif, batang gram negative dan tidak membentuk spora. Koliform memfermentasi laktosa dengan pembentukan gas dan asam dalam waktu 48 jam pada suhu 35o-37oC. Kelompok koliform dipilah menjadi koliform asal tinja dan bukan tinja (misal tanah). Koliform asal tinja mampu menghasilkan gas media laktosa dalam waktu 24 jam pada suhu 44oC. Metode MPN merupakan uji deretan tabungyang menyuburkan pertumbuhan koliform sehingga diperoleh nilai untuk menduga jumlah koliform dalam sampel yang diuji. Jumlah koliform ini bukan perhitungan yang tepat namun merupakan angka yang mendekati jumlah sebenarnya. Uji ini diawali dengan memasukkan 10ml sampel kedalam medium laktosa broth. Uji awal ini disebut uji duga (presumptive test). Dalam uji ini setiap tabung yang menghasilkan gas dalam masa inkubasi diduga mengandung bakteri koliform. Uji dinyatakan negative bila terlihat gas dalam tabung durham. Tabung yang memperlihatkan pembentukan gas diuji lebih lanjut dengan uji penegasan dan bila diperlukan uji coliform asal tinja. Uji dilakukan untuk penegasan

bahwa gas yang terbentuk disebabakan oleh kerjasama beberapa spesies sehingga menghasilkan gas. Uji coliform asal tinja dilakukan bila ingin mengetahui bahwa kuman koliform yang diperoleh termasuk koliform asal tinja. Untuk uji penegasan digunakan medium Briliant Green Bile Laktosa Broth (BGLB), yang diinokulasi dengan ose, media yang memperlihatkan hasil positif pada uji duga. Kaldu BGLB diinkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam. Untuk uji coliform asal tinja inokulasi dilakukan pada media BGLB yang diinkubasi pada suhu 44o C selama 24jam. Pembentukan gas dalam tabung menunjukkan hasil positif. Uji positif menghasilkan angka indeks, angka ini disesuaikan dengan table MPN untuk menentukan jumlah koliform dalam sampel. Bila diperlukan dapat dilakukan uji lengkap dengan menggunakan medium yang menunjukkan hasil positif pada uji penegasan. III. ALAT DAN BAHAN ALAT 1. Tabung reaksi 2. Rak kayu 3. Lampu spiritus 4. Korek api 5. Tali kenur 6. Incubator 37o C 7. Botol sampel 8. Kruistang 9. Ose tumpul 10. Pipet ukur 11. Kapas BAHAN 1. Spiritus 2. Air sampel (air galon) 3. Alkohol 70 % 4. Media Lactosa Broth 1,5% (Triple streng) 5. Media Lactosa Broth 0,5% (Single streng) 6. Pengencer

IV. 1. 2. 3.

4. 5. 6.

7. 1. 2. 3.

4. 5. 6.

LANGKAH KERJA Tes Perkiraan/Pendugaan Memyusun media LB 1,5 % dan 0,5 % dalam rak tabung dengan ragam 5;1;1 Menulis kode ;tanggal penanaman dan volume sampel Menggojok sempel dan diambil dengan pipet steril, memasukkan 10 Ml ke dalam LB 1,5 % sebanyak 5 tabung.Dan mengambil lagi 1 Ml,kemudian memasukkan dalam LB 0,5 % sebanyak 1 tabung dan 0,1 Ml mengambil lagi dan memasukkan ke dalam LB 0,5 % sebanyak 1 tabung. Menggoyang rak berisi tbug LB tersebut hingga homogen. Mengeramkan pada incubator 37oC selam 2X24 jam Setelah 2X24 jam kemudian membaca pertumbuhan bakteri jika terjadi udara hampa pada tabung durham dan menimbulkan bau serta berarti positif.Jika tidak ada hampa udara pada tabung durham dan tidak berbau serta keruh berarti negative. Mencatat semua tabung yag positif dan melanjutkan tes penegasan. Tes penegasan Menyiapkan BGLB Banyaknya BGLB yang dipakai adalah 2X jumlah LB yang positif. Setelah menulis kode sempel, kemudian memindahkan 1-2 ose penuh dari LB yang positif ke BGLB.Melakukannya sebanyak dua kali.Satu set untuk pemeriksaan coliform dan satu set lagi untuk coli tinja. Mengeramkan pada incubator 37 oC selam 2X24 jam untuk Coliform dan 44oC selama 1X24 jam untuk Coli tinja. Mencatat semua tabung BGLB yang positif . Mencocokkan dengan table MPN COLI tinja maupun Coliform sesuai dengan ragamnya