Abstract

Para sitokrom P450 (P450) enzim adalah katalis utama yang terlibat dalam metabolisme obat. Bioavailabilitas dan toksisitas adalah 2 dari hambatan yang paling umum dalam pengembangan obat hari ini, dan P450 dan enzim konjugasi dapat mempengaruhi efek. Toksisitas obat dapat dianggap dalam konteks 5: on-target toksisitas, hipersensitivitas dan imunologi reaksi, off-target farmakologi, bioactivation untuk intermediet reaktif, dan obat istimewa reaksi. Sifat kimia bioactivation cukup baik dipahami, namun mekanisme yang mendasari re biologis - sponses tidak. Dalam artikel kita mempertimbangkan apa fraksi toksisitas obat sebenarnya melibatkan metabolisme, dan kita kaji bagaimana spesies dan variasi interindividual manusia mempengaruhi farmakokinetik dan toksisitas. K EYWORDS: sitokrom P450, metabolisme toksisitas, obat, reaktif metabolit. PENDAHULUAN Review ini akan fokus pada isu-isu dalam pengembangan obat-obatan, terutama metabolisme. Masalah yang melibatkan mekanisme keracunan kimia yang tidak unik ini daerah, mereka juga ditemui dengan bahan kimia karsinogen, toxicants lingkungan, penyalahgunaan obat, dan alkohol. Manusia studi dengan agen farmasi dan bahkan obat kandidat memiliki beberapa keunggulan dalam bahwa ini dikelola ke manusia dalam kondisi yang terkendali dan toksisitas dipantau. Namun, pendekatan eksperimental lainnya juga diperlukan untuk mekanisme defi ne toksisitas obat dan bahan kimia lainnya. Toksisitas kimia Istilah akan digunakan di sini dalam arti luas untuk mencakup obat-obatan, karsinogen, alkohol, penyalahgunaan obat, dan bahan kimia dari masalah dalam lingkungan, dalam arti global. TANTANGAN DALAM METABOLISME OBAT PENGEMBANGAN Angka-angka yang terkait dengan keberhasilan dalam memproduksi obat-obatan baru sangat menantang. Bahkan dengan beberapa diskriminasi dalam pemilihan bahan kimia untuk lead, ~ 10 4 senyawa yang diuji untuk menghasilkan satu senyawa yang mencapai pasar. rata-rata biaya mengambil obat untuk tahap pasar $ 800.000.000 menjadi $ 1 miliar dan hanya 1 dalam 3 obat yang tidak mencapai pasar adalah profi table. Peracikan masalah adalah sosial dan tekanan politik untuk kedua mengurangi biaya obat-obatan dan menyediakan hampir mutlak keamanan. Salah satu strategi yang diterapkan dalam industri farmasi dalam 20 tahun terakhir adalah untuk membuat prospek kimia lebih "druggable". Sebuah siklus biologi (biasanya tes berikan advokasi efisiensi pada hewan) dan kimia (sintesis) telah digunakan di masa lalu. Sayangnya, banyak kandidat yang dikembangkan dengan cara ini memiliki sifat yang sangat baik pada hewan model praklinis tetapi tidak tidak menunjukkan berikan advokasi efisiensi pada manusia. Dua masalah utama memiliki bioavailabilitas telah dan toksisitas, yang keduanya dapat berhubungan setidaknya sebagian untuk metabolisme. Sebuah versi dari saat paradigma umum digunakan dalam kebanyakan perusahaan saat ini melibatkan "subloop" skrining developability disebut dan prediksi, sebagian besar dibuat secara in vitro dengan sistem enzim manusia dari satu jenis atau yang lain (Gambar 1). Isu-isu yang toksikologi, farmasi, dan proses penyerapan, distribusi, metabolisme, dan ekskresi. Tujuannya adalah untuk melakukan pekerjaan yang lebih baik memilih calon obat awal dalam pengembangan Proses (bahkan sebagai bagian dari penemuan) untuk menghindari masalah kemudian dalam uji klinis, sumber daya

ketika lebih (termasuk waktu) telah diinvestasikan, dengan membatasi pembangunan proses untuk senyawa dengan kemungkinan tertinggi untuk sukses.

CYTOCHROME P450: BACKGROUND

Sitokrom P450 (P450) enzim yang ditemukan di seluruh alam. Untuk tujuan kita, orang-orang yang paling menarik dengan obat (Dan dengan bahan kimia lainnya yang toksisitas adalah masalah) yang 57 manusia enzim (Tabel 1). Banyak dari ini digunakan dalam metabolisme sterol dan vitamin A dan D. 2 Sekitar seperempat dari 57 P450s umumnya dianggap berada di - dilibatkan terutama dalam metabolisme "xenobiotik" kimia (Biasanya tidak dalam tubuh). 3 Berbeda dengan P450s yang terlibat dalam metabolisme sterol, yang penting dalam fisiologi normal, 4 tingkat dari "xenobiotik-metabolisme" P450s dapat bervariasi (Gambar 2), dan individu dapat benar-benar tanpa beberapa karena genetika. The cance signifikan dari variabilitas dalam tingkat dari P450 tunggal ditunjukkan dalam Gambar 3. Dalam hal ini, obat bunga dibersihkan terutama oleh P450 tunggal. Dalam sebagian besar populasi diberikan dosis tertentu dari obat, pola farmakokinetik ditampilkan dalam jejak atas (Metabolizer luas) yang diamati, dengan tingkat obat dalam plasma (dan organ target) dipelihara dalam rentang yang menghasilkan efek farmakologis yang diinginkan. Namun, di panel bawah individu defi koefisien dalam (metabolizer miskin) tertentu P450 menunjukkan sangat terbatas metabolisme dosis obat yang sama, dengan hasil yang setelah beberapa dosis tingkat yang jauh lebih tinggi dari obat akan terakumulasi dalam pasien. Efek samping yang paling jelas yang akan diharapkan akan menjadi farmakologis diperburuk respon. P450s adalah sistem enzim yang paling sering terlibat dalam metabolisme obat (Gambar 4A), dengan kontributor utama lainnya menjadi uridin dinukleotida fosfat (UDP) glucuronosyl transferases dan esterases. 5, 6 Dari P450s, ~ 90% darimetabolisme dapat dipertanggungjawabkan oleh 5 P450s manusia (Gambar 4B). Dengan demikian, studi tentang metabolisme dan toksisitas yang lebih sederhana daripada mereka akan jika semua 57 P450s manusia (Tabel 1) memiliki peran yang sama dalam metabolisme obat. Sejauh ini kita hanya menggunakan "metabolisme" dalam arti luas, menunjukkan semua transformasi dari suatu obat oleh enzim (s). Sebagian besar perubahan menonaktifkan obat atau lainnya xenobiotik, menghaluskan aktivitas biologisnya dan mungkin mempercepat izin nya dari tubuh. Namun, P450s dan enzim lain juga bisa "bioactivate" kimia, mengkonversi mereka ke produk reaktif yang memodifikasi seluler konstituen dan kerusakan produk (vide infra). LAIN ENZIM YANG TERLIBAT DALAM BIOACTIVATION P450s mungkin terlibat dalam proses bioactivation lebih daripada enzim lain karena (1) para P450s kolektif memiliki substrat lebih dari enzim lain, setidaknya antara obat (Gambar 4A), dan (2) beberapa reaksi produk (misalnya, epoksida, hydroquinones) memiliki chemistry reaksi karena ketidakstabilan yang melekat mereka. Namun, P450s tidak enzim hanya terlibat dalam metabolisme obat dan bahan kimia xenobiotik lainnya. beberapa beberapa enzim mengkatalisis konjugasi bahan kimia dengan rendah M r senyawa sudah dalam sel, atau mereka mengkatalisasi hidrolisis reaksi. Enzim ini sering kali secara

kolektif disebut sebagai reaksi fase II (oksidasi P450 dan lainnya menjadi tahap I), meskipun seperti konvensi tidak lagi dipertahankan dan kami berpendapat bahwa itu harus dihilangkan. Generalisasi bahwa konjugasi dan hidrolisis Reaksi yang menawarkan racun sering terlihat dalam literatur, dan beberapa "chemoprevention" strategi yang berfokus pada induksi enzim ini. Tetapi harus diingat bahwa banyak enzim ini juga mengkatalisis bioactivation dari bahan kimia di banyak rangkaian. 10 Beberapa contoh termasuk penting peran hidrolase epoksida dalam aktivasi keseluruhan dari hidrokarbon polisiklik benzo [a] pyrene dan 7,12 - dimetilbenz [a] antrasena, 11, 12 konversi pestisida etilen dibromida ke ion half-mustard/episulfonium oleh transferases glutathione, 13 dan modifi kasi dari aril hydroxylamines dan alkohol benzilik oleh sulfonylation untuk menghasilkan kelompok yang baik dan meninggalkan nitrenium bentuk reaktif ion dan karbokation. KENAPA NARKOBA TOXIC? Tantangan pengembangan obat tanpa efek samping toksik telah disebutkan di atas. Kami sekarang akan mempertimbangkan alasan toksisitas, karena mengetahui alasan ini dapat membantu perusahaan farmasi berusaha untuk memproduksi obat yang menghindari jenis efek samping. Penting untuk diingat bahwa hampir semua obat akan menunjukkan beberapa reaksi yang merugikan pada dosis yang sangat tinggi, dan kecelakaan overdosis umumnya dianggap masalah tersendiri dalam pengembangan obat. Secara umum, US Food and Drug Administration (FDA) fi nds terjadinya dari beberapa jenis toksisitas (pada hewan percobaan model) pada dosis tinggi yang berguna, dalam parameter yang ditetapkan untuk mencari titik akhir dari toksisitas pada dosis yang khas. Baru-baru ini kami menyarankan 5 konteks keracunan obat (Tabel 2). ini klasifi kasi tidak bersifat mutlak, dan alternatif sistem tentu bisa diusulkan. On-target toksisitas didasarkan pada mekanisme obat 's interaksi dengan target yang dimaksudkan. Contohnya adalah statin. Sebagai kelas, obat ini sudah sangat aman, dan hampir semua dari toksisitas telah didokumentasikan hasil dari penghambatan dari target enzim 3-hidroksimetil glutaryl CoA reduktase dalam otot bukan hati. Hipersensitivitas dan imunologi reaksi terkait dengan penisilin dan lainnya? -Lactum antibiotik. Reaksi senyawa ini dengan protein dapat menyebabkan autoimun tanggapan, di mana tubuh sistem kekebalan tubuh mulai menanggapi senyawa sebagai entitas asing. Fenomena ini merupakan dasar dari "hapten" dan "bahaya" hipotesis, di yang cukup beban memicu tanggapan negatif. Off-target farmakologi adalah obat 's interaksi dengan sistem selain itu untuk yang dimaksudkan. Salah satu contoh adalah terfenadine, yang dapat menumpuk dan memblokir eter-a-go-go manusia (HERG) saluran di samping target H 1 (histamin) reseptor 19-21 (contoh ini juga melibatkan metabolisme, dalam arti bahwa akumulasi obat induk terfenadine dikaitkan dengan gangguan metabolisme fexofenadine, yang merupakan beredar yang normal produk 22). Konteks keempat toksisitas melibatkan bioactivation dari obat untuk intermediet reaktif yang mengikat secara kovalen dengan makromolekul, sebuah konsep yang telah diperkenalkan. Aspek ini akan dibahas secara lebih rinci nanti. Jalur relevan dengan bioactivation acetaminophen, klasik Misalnya, ditunjukkan pada Gambar 5. The seperlima fi dan fi nal klasifi kasi adalah reaksi obat istimewa. Ini adalah lebih sporadis (~ 1/10 4 kasus) dan sering diulang, ternyata dosis-independen, dan sangat bermasalah dalam prediksi yang telah diffi kultus dan ini masalah tidak muncul sampai uji klinis terlambat atau setelah obat memasuki pasar. Seperti nama mereka menyiratkan, sifat toksisitas aneh tidak dimengerti. Karena semakin pengetahuan berkembang,

banyak dari toksisitas harus fit ke 4 konteks lain toksisitas obat. Sebagai contoh, hepatitis terlihat dengan dihydralazine mungkin melibatkan bioactivation dan komponen kekebalan tubuh (Gambar 6). Meskipun istimewa toksisitas sering dianggap dosis-independen, data untuk mendukung pandangan ini sangat terbatas dan titik telah dibuat dengan benar bahwa sangat sedikit dari masalah ini terjadi dengan obat iklan melayani pada dosis harian 20 mg atau kurang. BIOACTIVATION Prinsip Dasar Beberapa prinsip yang terlibat dalam spesies reaktif dan toksisitas.15, 25 kimia ini cukup dipahami dengan baik, meskipun tidak sepenuhnya. Reaksi dasar diatur oleh 2 kimiaReaksi: (1) reaksi dari sebuah elektrofil (terbentuk dari obat) dan nukleofil (dalam jaringan), dan (2) radikal bebas propagasi. Produk reaktif awal terbentuk (dalam kimia atau reaksi enzimatik) mungkin bukan salah satu yang mengalami reaksi dengan nukleofil tersebut. Stabilitas dan reaktivitas spesies reaktif dapat bervariasi, bahkan di kalangan epoksida, 7 setengah-hidup dalam air dapat berkisar dari 1 detik untuk beberapa jam untuk spesies yang diketahui terlibat dalam biologi kerusakan. Sebagai konsekuensi, kerusakan dengan beberapa bahan kimia mungkin terbatas pada sel di mana aktivasi terjadi, tapi bahan kimia dapat didistribusikan ke organ lain yang merupakan target karena kurangnya perbaikan dan sebagainya. Dalam sistem vitro adalah model sering baik untuk mempelajari bioactivation dan sangat penting untuk membangun mekanisme dasar. Intinya harus dilakukan, bagaimanapun, bahwa tidak semua hasil akan berlaku di vivo. Dosisnya adalah masalah, dan berkali-kali itu adalah masalah toksisitas, aksioma akan kembali 500 tahun untuk Paracelsus. Tingkat pengikatan kovalen obat atau lainnya kimia untuk makromolekul jaringan dapat digunakan sebagai ukuran dari potensi toksisitas,, 27 28 namun banyak terdapat pengecualian. Untuk Misalnya, 3-hydroxyacetanilide relatif tidak beracun, tetapi hasil sebagai mengikat kovalen sebanyak 4-hydroxyacetanilide (acetaminophen). 29, 30 The modifi ed protein berbeda untuk 2 senyawa, tetapi penjelasan mekanis untuk memuaskan toksisitas diferensial masih belum tersedia. Masalah lainnya dalam toksisitas adalah reseptor-dimediasi dan peristiwa sinyal, sel proliferasi, perbaikan, dan respon imun. Sebuah pandangan kompleksitas yang terlibat dalam peristiwa toksisitas sel disajikan pada Gambar 7. Stres oksidatif Literatur tentang stres oksidatif melimpah dan tidak bisa akan dibahas secara rinci di sini. Jelas, stres oksidatif merupakan masalah besar dengan obat yang mampu bersepeda redoks (misalnya, daunorubisin). Selain ini, banyak peneliti telah mengusulkan bahwa stres oksidatif merupakan komponen penting dari toksisitas yang disebabkan oleh bahan kimia yang paling yang diaktifkan untuk elektrofil. Dalam skema yang ditunjukkan pada Gambar 7, elektrofil juga menguras glutathione berkurang, salah satu pertahanan terhadap kerusakan dari spesies oksigen reaktif seperti hidroperoksida. Bahkan lebih halus perubahan redoks keseimbangan sel mungkin penting, dalam transkripsi banyak faktor dan sistem sinyal lainnya dikendalikan oleh redoks peristiwa. Masalah apakah P450s berkontribusi terhadap stres oksidatif adalah kompleks. H 2 O 2 dan O 2 terbentuk dalam reaksi uncoupled dikatalisasi oleh mikrosom dan ed purifi P450s. Induksi dan ekspresi heterolog dari P450s mamalia mengarah terhadap kerusakan oksidatif dalam sistem kultur sel. 32, 33 Ditingkatkan peroksidasi lipid dikaitkan dengan beberapa substrat P450 namun dicegah oleh orang lain. Sebuah

pertanyaan besar adalah apa yang terjadi in vivo, atau bahkan di organ perfusi. Tingkat oksigen pengurangan yang sangat cepat in vitro, dan pertanyaan dapat dibangkitkan, apakah ini realistis in vivo. beberapa studi telah mencoba untuk menghubungkan indikator stres oksidatif dengan P450s di vivo, dan beberapa kemungkinan yang ada dengan biomarker, NAPDHNADPH P450 reduktase-defi koefisien tikus transgenik, 34, 35 dan seterusnya. Contoh Bioactivation AFL atoxin B 1 AFL atoxin B 1 (AFB 1), sebuah mikotoksin hepatocarcinogenic, menyediakan sejarah kasus metabolit reaktif dan perannya dalam konteks enzim dan reaktivitas (Gambar 8). 36 The Produk kritis AFB 1 adalah epoksida exo. Semua oksidasi lainnya produk dibentuk oleh P450s, termasuk endo 8,9 - epoksida, setidaknya sebagian produk detoxicated. Itu exo epoksida memiliki pada 1/2 dari hanya 1 detik dalam air netral penyangga, 37 tetapi mengikat dan interkalasi dalam DNA begitu efisiensi koefisien bahwa hasil yang tinggi dari DNA adduct diperoleh. 38 Dengan demikian, bahkan dengan di 1/2 dari 1 detik, produk stabil cukup untuk bermigrasi dari retikulum endoplasma ke DNA dalam nukleus. Epoksida juga dapat enzimatis terkonjugasi dengan glutathione (GSH) (Gambar 8). Produk hidrolisis (dihydrodiol) tidak stabil dan mengalami basa-katalis penataan ulang ke dialdehyde reaktif, yang tampaknya menjadi spesies utama yang terlibat dalam reaksi dengan protein (tapi bukan DNA). 36 Rute lain dari detoxication adalah pengurangan yang dialdehyde. 39 Trichloroethylene Meskipun trichloroethylene (TCE) telah digunakan sebagai obat bius, Penggunaan utamanya adalah sebagai pelarut dan agen degreasing. TCE merupakan salah satu bahan kimia yang paling umum ditemukan di dump air situs, 40, 41 dan isu-isu utama yang berkaitan dengan itu adalah kontaminasi air minum dan beberapa efek kesehatan yang mungkin. 42-44 Oksidasi P450 dari TCE menghasilkan kloral, obat penenang, dalam reaksi yang melibatkan migrasi 1,2-klorida 45 (Gambar 9). A produk oksidasi kecil adalah oksida TCE, yang memiliki pada 1/2 dari 12 detik di H 2 O pada pH netral. 45 Namun, oksida TCE tidak tidak muncul untuk bereaksi secara langsung dengan protein, setidaknya tidak untuk menghasilkan adduct stabil. Sebuah penataan ulang memberi klorida glioksal, yang dapat bereaksi dengan protein lysines melalui salah satu dari 2 jalur (A, b) untuk menghasilkan 1 diamati - dan 2-karbon konjugasi. Klorida Dichloroacetyl juga bereaksi untuk membentuk sepertiga produk. 46 Mekanisme serupa telah dijelaskan untuk tribromoethylene. 47 Secara historis, tes mengikat paling kovalen telah menggunakan radioaktivitas dan relatif lambat metode. Dengan munculnya spektrometri massa, menjadi mungkin untuk memulai reaksi dari elektrofil reaktif dengan protein (kecil) dan menganalisis mengikat dengan menit. Contoh dengan oksida TCE dan hormon oligopeptide adrenocorticotrophic dari hipofisis Kelenjar (ACTH) ditunjukkan pada Gambar 10. Dengan pengetahuan dari jenis adduct yang terbentuk (Gambar 9) dan asumsi bahwa respon dari bentuk ed modifi ACTH adalah serupa di elektrospray spektrometri massa, jumlah mengikat kovalen dapat diperkirakan setelah integrasi puncak (Gambar 10B). Aspek lain yang menarik dari pekerjaan ini dengan oksida TCE adalah bahwa pengobatan singkat modifi ed ACTH dengan ringan basa (pH 12) dihapus sebagian besar dari adduct (Gambar 10C). Adduct juga hilang lebih lambat (t 1/2 ~ 1 jam) pada pH netral. 48 Hasil ini ditafsirkan bahwa banyak adduct adalah ester, amida tidak lisin. Studi dengan enzim model memiliki serin sensitif, tirosin, dan kelompok sistein menunjukkan

pemulihan aktivitas katalitik (T 1/2) setelah inaktivasi parsial dengan oksida TCE atau Model reaksi asilasi agen. 48 Hasil ini menunjukkan bahwa protein dapat modifi ed transiently. Jelas, seperti mengikat mungkin telah terlewati dengan metode yang lebih tua. Hasil dapat ditafsirkan dalam 2 cara. Salah satu pandangan adalah bahwa beberapa protein mengikat adalah tidak begitu serius seperti pemikiran, dalam fungsi yang dapat dipulihkan dengan waktu. Sebuah pandangan yang berlawanan adalah bahwa tingkat adduct diperkirakan dengan metode yang menggunakan tes lambat mungkin meremehkan tingkat sebenarnya dari protein modifi kasi, dan bahwa periode transien modifi kasi tinggi dapat memberikan jendela untuk ekspresi biologis kerusakan. Akhirnya, sebuah studi dengan perkloroetilena (tetrachlorethylene) oksida menunjukkan bahwa ia memiliki mekanisme kimia yang mirip denga mereka diidentifi kasi untuk TCE. 49 Penelitian ini juga menemukan bahwa oksalil klorida, produk penataan ulang yang berasal dari perkloroetilena oksida, tidak hanya bereaksi dengan protein, tetapi juga dengan fosfat. Produk, oksalil fosfat, relatif stabil dan dapat diisolasi (t 1/2 ~ 100 menit), tetapi tidak bereaksi dengan protein. 49 Hasil yang menarik mengingat besar sejumlah studi bioactivation yang telah dilakukan dengan menggunakan tinggi konsentrasi buffer fosfat (misalnya, 100 mM). Pertimbangan Variabilitas Spesies Variasi Satu masalah yang melekat dalam toksikologi semua, termasuk keselamatan penilaian dalam industri farmasi, adalah bahwa percobaa harus dilakukan dalam sistem hewan dan diekstrapolasi manusia. Pemilihan spesies hewan yang paling tepat sangat penting, dan bahkan dalam situasi yang terbaik sebagai ekstrapolatornya tidak sepele. Salah satu contoh masalah dalam ekstrapolasi - dari sistem yang relatif baik defi ned - disajikan di sini. Banyak amina heterosiklik, yang terbentuk dalam daging selama pirolisis, yang diaktifkan oleh P450 1A2katalis hidroksilasi N-, termasuk 2-amino-1-metil-6-phenylimidazo [4,5 - b] piridin (PhIP) and2-amino-3 ,8-dimethylimidazo [4,5 - f] quinoxaline (MeIQx).

Enzim utama yang terlibat dalam aktivasi (hati) pada tikus dan manusia adalah 1A2 P450, meskipun titik harus dibuat bahwa 2 protein 75% identik. Sementara tikus dan manusia 1A2 P450 memiliki aktivitas katalitik hampir identik dengan Model substrat 7-methoxyresorufi n, 1A2 P450 manusia memiliki 10 kali lipat lebih tinggi katalitik efisiensi siensi dibandingkan 1A2 tikus P450 dalam mengaktifkan baik PhIP dan MeIQx. 50 Tingkat 1A2 P450 bervariasi jauh di antara manusia. Ketika genotoxicity dari MeIQx diuji dalam sampel hati berbagai mikrosomal, beberapa manusia ditemukan memiliki bioactivation jauh lebih tinggi daripada tikus di yang 1A2 P450 telah diinduksi dengan 3-methylcholanthrene atau polychlorinated biphenyls (Gambar 11). Hasil ini kepentingan karena bioassay tikus kanker dilakukan dengan "Diobati" tikus dan digunakan untuk ekstrapolasi penilaian risiko untuk manusia. Salah satu cara untuk mengatasi perbedaan antara spesies adalah dengan menggunakan farmakokinetik modeling. Sebuah pendekatan yang lebih tua melibatkan alometrik scaling, berdasarkan pada ukuran tubuh. Namun, penting jalur yang terlibat dalam bioactivation dan detoxication menunjukkan sedikit

hubungan dengan berat badan. Sebuah pendekatan yang lebih populer melibatkan fisiologis berdasarkan farmakokinetik (PBPK) model. Dasar dari pendekatan ini adalah bahwa sebagian besar fisik aspek distribusi dapat dibentuk pada spesies yang berbeda (Misalnya, darah fl ow, ekstraksi jaringan). Yang penting adalah kation diidentifi dari jalur yang paling penting yang terlibat dalam bioactivation dan detoxication dan karakterisasi mereka dalam hal parameter kuantitatif, umumnya di dalam pengaturan vitro. Dengan pengetahuan ini, prediksi yang tepat dapat dibuat untuk manusia. Contoh upaya dari laboratorium kami, berkolaborasi dengan Dow Chemical Co, melibatkan konversi CH 2 Cl 2 ke spesies genotoksik oleh glutation transferase. 51 Dalam pekerjaan ini, tingkat konjugasi pada manusia yang ditemukan mirip dengan yang pada tikus dan hamster, dan jauh lebih lambat dibandingkan mereka untuk tikus. 51 Dari spesies hewan, tumor telah ditemukan pada tikus saja, dan kesimpulannya adalah bahwa manusia adalah beresiko lebih rendah dari sebelumnya diasumsikan. interindividual Variasi Variasi tingkat P450s manusia individu telah disebutkan (Gambar 2), bersama dengan relevansi dalam metabolisme vivo (Gambar 3). Variabilitas di antara manusia juga terlihat dalam tes genotoxicity MeIQx disajikan dalam Gambar 11. Pendekatan pemodelan PBPK telah disebutkan untuk ekstrapolasi dari hewan ke manusia. Pada awal PBPK bekerja konsep umum adalah untuk ekstrapolasi dari hewan model ke manusia "ratarata" untuk benar mengevaluasi risiko. Namun, konsep manusia rata-rata tidak terlalu memuaskan, sebagaimana dibuktikan oleh Gambar 2 dan 11. sebuah alternatif Pendekatan PBPK adalah dengan menggunakan in vitro (atau mungkin in vivo, jika tes dapat dilakukan) parameter manusia untuk memperkirakan kisaran dari data yang diharapkan bagi manusia in vivo. Pendekatan lain adalah untuk memperkirakan variasi yang diharapkan dalam populasi manusia dengan "faktor ketidakpastian" dalam vivo parameter yang berkaitan dengan enzim individu. Contoh telah dipublikasikan untuk P450 2D6 dan 3A4. 54, 55 Menariknya, faktor-faktor ketidakpastian yang jauh lebih tinggi pada anak-anak dibandingkan pada orang dewasa (~ 4 kali lipat). Juga, ketidakpastian dengan Kelompok P450 2D6 miskin metabolizer fenotipik jauh lebih tinggi dari itu untuk kelompok metabolizer luas. Itu faktor ketidakpastian untuk pembersihan obat individual ditemukan meningkat secara eksponensial sebagai fungsi dari fraksi metabolisme disebabkan oleh P450 tunggal enzim. 55 Untuk alasan ini, strategi umum dalam farmasi industri adalah untuk mencoba untuk memilih obat yang beberapa P450s (atau enzim lainnya) "berbagi" metabolisme senyawa, untuk menghindari masalah pada individu yang mungkin akan defi koefisien di salah satu enzim. Seberapa Penting Apakah Metabolisme Isu dalam Keracunan Obat? Metabolit reaktif Banyak yang telah ditulis tentang cance signifikan dari reaktif metabolit dan mengikat kovalen dalam toksisitas. Tapi apa sebagian kecil dari masalah toksisitas obat manusia yang disebabkan fenomena ini? Sebuah siensi defi dalam analisis adalah bahwa setiap kita tidak telah menunjukkan hubungan sebabakibat, yaitu, bukti masih sangat korelatif karena banyak peristiwa yang terjadi, selain mengikat kovalen (dari beberapa protein) (Gambar 7).

Salah satu analisis baru-baru oleh kelompok zer PFI adalah kepentingan. Of set 6 dari obat ditarik dari pasaran (dalam kerangka waktudiperiksa), 5 (benoxaprofen, iproniazid, nefazodone, tienilic asam, dan troglitazone) diketahui memiliki produk reaktif. Lain 15 obat dengan peringatan "kotak hitam", 8 (dacarbazine, dantrolene, felbamate, fl utamide, isoniazid, ketoconazole, tolcapone, dan asam valproat) memiliki metabolit reaktif. Dengan demikian, 62% dari obat masalah dalam kelompok ini melibatkan metabolisme produk reaktif dan. Adalah 62% realistis? Mungkin. Namun, peringatan adalah bahwa ini Analisis didasarkan pada obat yang mencapai pasar. Itu fraksi mungkin jauh lebih rendah jika dilihat dengan calon obat yang gagal sebelum masuk ke atau melalui uji klinis dan penilaian keamanan. Persis apa fraksi mungkin adalah mungkin untuk memperkirakan secara akurat. Salah satu masalah adalah bahwa sebagian besar data adalah proprietary, dan setiap analisis yang mencapai literatur terbuka mungkin akan didasarkan pada pengalaman dalam satu perusahaan. Sebuah fraksi besar dari kegagalan karena masalah toksisitas mungkin disebabkan (uncharacterized) off-target farmakologi (Tabel 2) atau bahkan sebelumnya belum diakui merugikan efek downregulation dari Target utama itu sendiri (on-target, Tabel 2). Masalah dalam analisis adalah bahwa dalam banyak kasus mekanisme yang tidak ditentukan; lead hanya dibuang, dan tidak ada insentif untuk membangun mekanisme, setidaknya dalam jangka pendek. Untuk kembali ke masalah ini, ada lagi daftar obat dengan reaktif produk yang memiliki peringatan untuk hepatotoksisitas: asetaminofen (Gambar 5), carbamazepine, clozapine, diklofenak, disulfi ram, halothane, lefl unomide, metildopa, rifampisin, tacrine, tamoxifen, terbinafi ne, tiklopidin, dan zileuton. 56 Daftar lain dalam referensi yang sama termasuk obat dengan metabolit reaktif yang digunakan di negara lain tetapi tidak pernah disetujui di Amerika Menyatakan: alpidem, amineptine, amodiaquine, cinchophen, dihydralazine (Gambar 6), dilevalol, ebrotidine, glafenine, ibufenac, isoxicam, niperotidine, perhexiline, pirprofen, dan tilbroquinol. Intinya telah dibuat beberapa kali bahwa obat terkait dengan rupanya reaksi idiosyncratic tidak benarbenar dosis-independen. Pola ini juga konsisten dengan hipotesis bahwa aktivasi untuk produk reaktif menyebabkan protein kerusakan (dan juga stres oksidatif), yang memiliki selanjutnya efek biologis, dan mengurangi tingkat kovalen Kerusakan merupakan pendekatan yang efektif untuk menghindari toksisitas. Itu sarana untuk mencapai tujuan ini adalah mengubah kimia molekul baik untuk meningkatkan efisiensi berikan advokasi biologis (sehingga mengurangi Dosis yang diperlukan) atau untuk memblokir aktivasi enzim. Metabolit Stabil Sejauh diskusi telah berpusat pada metabolit reaktif dan potensi mereka untuk menyebabkan keracunan. Namun, FDA baru-baru ini menyatakan keprihatinan tentang metabolit yang stabil, terutama mereka yang unik untuk manusia (dibandingkan dengan tes hewan). 57 FDA telah mengusulkan bahwa manusia yang unik metabolit obat diuji pada tingkat yang sama sebagai obat itu sendiri. Metabolit yang stabil dibedakan dari metabolit reaktif dalam beberapa cara. Metabolit yang stabil dapat diisolasi dan ditandai. Mereka juga dapat disintesis, setidaknya pada prinsipnya (Meskipun biaya mungkin jauh lebih tinggi daripada orangtua narkoba). Dengan metabolit reaktif, struktur kimia hanya

dapat disimpulkan dari produk terperangkap. Meskipun metabolit reaktif dapat disintesis, mereka umumnya stabil hanya dalam pelarut aprotik dan biasanya tidak dapat diberikan dengan hewan. Salah satu masalah dengan rancangan FDA adalah bahwa 4 contoh yang diberikan semua metabolit reaktif, meskipun tujuannya adalah untuk berurusan dengan metabolit yang stabil. Lain masalah adalah bahwa rancangan ini didasarkan pada fraksi orangtua obat dikonversi ke metabolit unik dan tidak total jumlah, daerah di bawah kurva, dan sebagainya. Satu dapat mengangkat isu tentang bagaimana berbahaya metabolit yang stabil sebenarnya. Metabolit Kebanyakan dilemahkan biologi efek terhadap target yang sama dengan obat induk, dengan beberapa (Prodrugs) menunjukkan peningkatan aktivitas setelah metabolisme. Namun, ada beberapa contoh yang baik dari obat yang berubah untuk produk dengan farmakologi yang sama sekali berbeda. Beberapa contoh adalah di luar bidang obat-obatan, misalnya, konversi TCE pelarut (dan anestesi) kepada penenang kloral (Gambar 9) dan oksidasi dari pestisida methoxychlor ke estrogen. 58 Meskipun transformasi tersebut untuk produk dengan aktivitas biologis yang unik yang dibayangkan, peristiwa ini akan jarang di antara obat, menurut Informasi saat ini. Hal lain adalah bahwa pemberian suatu metabolit untuk binatang, bahkan jika metabolit stabil, mungkin tidak menghasilkan distribusi jaringan relevan dengan obat induk. KESIMPULAN Memprediksi toksisitas merupakan isu penting dalam pengembangan obat-obatan - seperti yang dengan karsinogen, lingkungan polutan, dan penyalahgunaan obat. New fi ndings dalam biologi menyoroti kompleksitas mekanisme yang kimia mengerahkan efek beracun. Banyak bahan kimia yang inert kecuali dikonversi menjadi metabolit oleh P450s atau enzim lainnya. Elektrofil reaktif yang dihasilkan dengan cara ini jelas penting dalam toksisitas, seperti yang ditunjukkan oleh contoh acetaminophen. Namun, apa fraksi obat toksisitas merupakan hasil dari proses ini tidak jelas. Stabil Metabolit hipotetis dapat terlibat dalam toksisitas obat, tetapi beberapa contoh dari hal ini telah didokumentasikan.

UCAPAN TERIMA KASIH Penulis mengakui dukungan parsial dari Amerika Serikat Masyarakat Layanan hibah Kesehatan P30 ES00267, R01 CA90426, dan R01 ES10546. Terima kasih dalam rangka K. Trisler untuk bantuan dalam penyusunan naskah.