Maurcio Oliveira Coelho Marques

RELATRIO DE AULA PRTICA: MTODO DE COLORAO DE GRAM

Belm PA 2011

Introduo No dia 29 de setembro de 2011, a turma LB 2 da instituio Centro Universitrio do Par, do curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas realizou no laboratrio de microbiologia, junto com a professora Patrcia Fagundes que administra a matria de Vrus e Bactrias um experimento para a visualizao de bactrias com o mtodo de colorao de Gram. O experimento consistia em identificar quais as morfologias encontradas e se elas apresentavam a colorao roxa (Gram-positiva) ou a colorao vermelha (Gram-negativa). Objetivo O objetivo da aula prtica observar a morfologia bacteriana e identificar se a bactria Gram-positiva ou Gram-negativa. Metodologia A colorao de Gram (em homenagem a quem descobriu, Hans Christian Gram,1884) diferencia bactrias em Gram-positivas e Gram-negativas. Os microorganismos Gram-positivos e Gram-negativos se diferenciam drasticamente na organizao das estruturas externas a membrana plasmtica. As solues corantes que so utilizadas para o experimento so a violeta de Genciana ou Cristal violtea; soluo de lugol que mordente, ou seja, ela capaz de sensibilizar a clula a receber o corante; lcool-acetona ou lcool a 95 e a fucsina fenicada diluda que serve para o corante de fundo ou para dar contraste. A tcnica consistia primeiramente em flambar o esfregao, em seguida cobri-lo com soluo violeta de genciana ou cristal violeta, aguardar um minuto e desprezar o excesso de corante. Em seguida, cobrir o esfregao com lugol para Gram e aguardar mais um minuto e desprezar o excesso de corante, depois lavar em gua corrente, depois se deve inclinar a lmina e gotejar com lcool-acetona ou lcool etlico a 95, at que no haja desprendimento de corante e ter ateno para no exceder 30 segundos, depois lavar a lmina rapidamente em gua corrente e cobrir o esfregao com fucsina de Gram ou soluo de safranina, aguardar 30 segundos e lavar em gua corrente. A partir da, s deixar secar e observar em microscpio com objetivoa de 100X. Resultados Depois de focalizar com objetiva de menor aumento (10x) e depois focalizar em imerso (1000x) foi possvel fazer a observao e identificao das bactrias. O tipo de morfologia mais encontrado no esfregao foi coco e a colorao da bactria foram bactrias Gram-positivas (roxo).