Majalah Farmasi dan Farmakologi Vol. 10, No.

3 Nopember 2006

61

UJI EFEK EKSTRAK METANOL BATANG KINCA (Feronia elephantum Corr) TERHADAP AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN M (IgM) dan IMUNOGLOBULIN G (IgG) MENCIT JANTAN (Mus musculus)
Marianti Manggau, Nirwana, Usmar dan Mufidah Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Hasanuddin ABSTRAK Penelitian tentang ji akti!itas im noglob lin M "#gM$ dan im noglob lin % "#g%$ men&it jantan "M s m s& l s$ telah dilak kan. Penelitian ini bert j an nt k menent kan pengar h ekstrak metanol batang kin&a "Feronia elephant m$ terhadap akti!itas #gM dan #g% men&it jantan dengan mengg nakan metode hemagl tinasi. Metode ini dilak kan nt k meningkatkan kadar #g% dalam ser m he'an &oba setelah pemberian ekstrak dan diik ti dengan ind ksi dengan antigen "sel darah merah domba$. (emagl tinasi diamati setelah hari ke)* nt k #gM dan setelah 10 hari pengind ksian nt k #g%, nilai pengen&eran tertinggi +ang masih men nj kkan agl tinasi din+atakan sebagai nilai titer. ,erdasarkan hasil analisis statistika dengan metode -an&angan .&ak /engkap "-./$ dan .nalisis 0idik -agam ".0-$ serta analisis lanj tan dengan metode ji ,eda N+ata 1erke&il ",N1$, memperlihatkan bah'a pemberian ekstrak metanol batang kin&a "Feronia elephant m 2orr$ dengan konsentrasi 0,13, 0,33, dan 0,*3 b4! se&ara signi5ikan dapat meningkatkan akti!itas #gM dan #g%. (asil penelitian men nj kkan bah'a peningkatan konsentrasi akan diik ti dengan peningkatan e5ek. Kata kunci 6 kin&a, im noglob lin, hemagl tinasi PENDAHULUAN Kin a "Feronia elephant m$ meru!akan salah satu "#at tradisi"nal $ang digunakan mas$arakat %ima, Nusa &enggara %arat, $ang memiliki khasiat se#agai "#at diare, !en$akit kulit dan !eluruh haid, !enguat 'an( tung, astringen, !en$akit tengg"r"kan, anti"ksidan dan antitum"r )1,*+, %a( tangn$a mengandung -,-16 . mar( mesin, getah dari #atang dan dahan tanaman mengandung //,0 . ara#i( n"sa dan 1$l"sa, 2*,3 . d(galakt"sa dan asam glukur"nat4 akar kulit ka$u mengandung aura!ten, #erga!ten, is"!im!inellin dan kumarin )/+, Antitum"r sering dihu#ungkan dengan kemam!uan sistem imun tu( #uh melawan tum"r, 5istem imun $ang #er!eran melawan kanker anta( ra lain makr"fag $ang aktif, limf"sit(& dan anti#"di, Penelitian tentang !e( ngaruh ekstrak etan"l #atang kin a )F. elephant m+ terhada! !eningkatan 'umlah limf"sit !ada men it 'antan )M s m s& l s+ telah dilakukan )2+, %erdasarkan hal terse#ut, telah di( lakukan u'i untuk mengetahui efek ekstrak metan"l #atang kin a ter( hada! aktivitas Imun"gl"#ulin M )IgM+ men it 'antan, Imungl"#ulin M adalah kelas imun"gl"#ulin $ang !ertama di#entuk atas rangsangan antigen, teta!i res( !"ns IgM umumn$a !endek $aitu han$a #e#era!a hari untuk kemudian menurun, %iasan$a k"nsentrasi IgM tertinggi !ada hari ke(0 kemudian kadarn$a menurun kem#ali, sedang( kan kadar Ig6 meningkat mulai hari ke(3 )0+, Penelitian ini #ertu'uan untuk mengetahui efek ekstrak metan"l #a( tang kin a )Feronia elephant m+ ter( hada! aktifitas Imun"gl"#ulin M )IgM+ dan Imun"gl"#ulin 6 )Ig6+ !ada men( it 'antan )M s m s& l s+ dengan mengamati !engen eran tertinggi dari

7ni!ersitas (asan ddin, Makassar

6* kali, 5etelah selesai, P%5 di#uang dan di!er"leh 59M9 1--., lalu ditam#ahkan P%5 dengan v"lume sama ke dalam 59M9 1--. hingga di!er"leh sus!ensi 59M9 0-., 5ediaan antigen $ang akan digunakan disia!kan dengan mengen erkan -,2 ml sus!ensi 59M9 0- . dengan <,6 ml P%5 sehingga di!er"leh 1- ml sus!ensi antigen )59M9 * . v=v+, P&n"#a)an Lar$ an PBS (0) P%5 disia!kan dengan terle#ih mem#uat larutan A $aitu larutan NaH*P>2,H*> 1,/? g=l dan Na8l ?,/ g=l dan larutan % $aitu larutan NaH*P>2 1,2* g=l dan Na8l ?,0 g=l, 5elan'utn$a *?- ml larutan A ditam( #ahkan !ada 3*- ml larutan % untuk menda!atkan larutan P%5 dengan !H 3,*, P&n"#a)an H&1an U2# 9ua #elas ek"r men it 'antan di#agi dalam 2 kel"m!"k, $ang masing masing(masing terdiri atas / ek"r, P&rla%$an T&r!ada) H&1an U2# a, Kel"m!"k I )K"ntr"l+ Hewan di#eri sus!ensi Na8M8 1. dengan v"lume 1 ml=/- g #"#"t #adan se ara "ral setia! hari selama 6 hari, lalu diimunisasi dengan 59M9 *. dengan v"lume -,1 ml se ara intra!erit"nial, Pada hari kelima )untuk IgM+ dan hari kese!uluh )untuk Ig6+ setelah imunisasi, darah diam#il se ara intrakardial, #, Kel"m!"k II Hewan di#eri sus!ensi ekstrak metan"l #atang kin a -,1. #=v se ara "ral dengan v"lume 1 ml=/- g #"#"t #adan se ara "ral setia! hari selama 6 hari, lalu diimunisasi dengan 59M9 *. dengan v"lume -,1 ml se ara intra!erit"nial, Pada hari kelima )IgM+ dan kese!uluh )Ig6+ setelah imuni( sasi, darah diam#il se ara intrakardial, , Kel"m!"k III Hewan di#eri sus!ensi ekstrak metan"l #atang kin a -,/. #=v se ara "ral dengan v"lume 1 ml=/- g #"#"t #adan se ara "ral setia! hari selama 6 hari, lalu diimunisasi dengan 59M9

serum darah men it $ang masih da!at mengaglutinasi sel darah merah d"m#a, PELAKSANAAN PENELITIAN Ala dan Ba!an "ang D#g$na%an Alat(alat $ang digunakan ada( lah #e'ana maserasi, 'arum "ral, 'arum suntik, !engaduk elektrik, sumur mikr"titrasi )8ell plate 96 l bang+, sentrifus )(etti&h+, tim#angan analitik ):ragon)303+, tim#angan );ha ss+, tim#angan hewan ):en!er+, %ahan(#ahan $ang digunakan adalah air suling, metan"l, %etadin 7, larutan k"l"idal Na(8M81., sel darah merah d"m#a )59M9+ *., larutan P%5 "Phospat , 55ered 0aline$. P&nga'(#lan Sa')&l 5am!el #atang kin a )Feronia elephant m 8"rr+ di!er"leh di %ima, Nusa &enggara %arat E%* ra%*# Sa')&l (+) 5e#an$ak 2,0 kg sam!el di( masukkan ke dalam #e'ana maserasi dan direndam dengan !elarut metan"l se#an$ak 1- liter selama 0 hari sam#il sesekali diaduk, :adah maserasi di( tutu! ra!at, disim!an di tem!at $ang tidak terkena sinar matahari langsung, 5etelah 0 hari, ekstrak air dienda!( kan semalam dan dituang tan!a am!asn$a, 5am!el dimaserasi lagi dengan metan"l $ang #aru, Maserasi diulangi sam!ai !elarut tidak #er( warna "klat lagi, ;kstrak metan"l dikum!ulkan, diua!kan dengan r"ta( va!"r sam!ai di!er"leh ekstrak kental, P&n"#a)an SDMD ,-./. (0) 9arah d"m#a ditam!ung di dalam ta#ung #ersih dan kering $ang #erisi ser#uk ;9&A se#agai anti( k"agulan, Untuk 1 ml darah d"m#a, di!erlukan 1 mg ;9&A, 59M9 di( !isahkan dari !lasman$a !ada sen( trifus 10-- r!m, 5elan'utn$a sel darah merah di u i dengan menam#ahkan P%5 dalam 'umlah #esar dan ta#ung #erisi sus!ensi terse#ut di#"lak(#alik #e#era!a kali dan disentrifus kem#ali, Pen u ian dilakukan !aling sedikit /

Majalah Farmasi dan Farmakologi Vol. 10, No. 3 Nopember 2006

6/

*. dengan v"lume -,1 ml se ara intra!erit"nial, Pada hari kelima )IgM+ dan kese!uluh )Ig6+ setelah imuni( sasi, darah diam#il se ara intrakardial, d, Kel"m!"k I@ hewan di#eri sus!ensi ekstrak metan"l #atang kin a -,0. #=v se ara "ral dengan v"lume 1 ml=/- g #"#"t #adan se ara "ral setia! hari selama 6 hari, lalu diimunisasi dengan 59M9 *. dengan v"lume -,1 ml se ara intra!erit"nial, Pada hari kelima )IgM+ dan kese!uluh )Ig6+ setelah imuni( sasi, darah diam#il se ara intrakardial, P&nga'(#lan Sa')&l Dara! H&1an U2# (0) 5am!el darah $ang diam#il !ada hari kelima dan kese!uluh setelah imunisasi di#iarkan mem#eku atau menggum!al !ada suhu kamar selama 1 A * 'am lalu selan'utn$a disentrifus dengan ke e!atan /--r!m selama 1- menit dan diam#il serumn$a )su!ernatan+, U2# !&'agl$ #na*# (0) 5erum dien erkan se ara #er( tingkat men'adi 1=2, 1=?, 1=16, 1=/*, 1=62, 1=1*?, 1=*06, 1=01* dengan P%5, se#an$ak 0- Bl untuk setia! sumur !ada !iring mikr"titrasi )'heel plate+, selan'utn$a ke dalam tia! sumur ditam#ahkan 0- Bl sus!ensi 59M9 *.v=v lalu diaduk rata )dig"$ang(g"$ang+ selama 0 menit, selan'utn$a diinku#asi !ada /3"8 selama 6- menit dan didiamkan semalam !ada suhu kamar, Peng( amatan dilakukan untuk melihat !eng( en eran tertinggi dari serum darah men it $ang masih da!at meng( aglutinasi sel darah merah, HASIL DAN PEMBAHASAN Ha*#l P&n&l# #an 9ata u'i aktivitas immun"( gl"#ulin M )IgM+ setelah !em#erian ekstrak metan"l #atang kin a -,1., -,/., dan -,0. #erdasarkan titer imun"gl"#ulin M )IgM+ !ada men it

'antan 0 hari setelah di#erikan 59M9 *.v=v tersa'i !ada &a#el 1, 5edang( kan data u'i aktivitas immun"gl"#ulin 6 )Ig6+ setelah !em#erian ekstrak metan"l #atang kin a -,1., -,/., dan -,0. #erdasarkan titer imun"( gl"#ulin 6 )Ig6+ !ada men it 'antan 1- hari setelah di#erikan 59M9 *.v=v disa'ikan !ada &a#el *, P&'(a!a*an Masukn$a suatu #ahan $ang da!at merangsang sistem imun $ang #iasa dise#ut antigen akan merang( sang !r"duksi anti#"di dan #ereaksi dengan anti#"di terse#ut, Anti#"di adalah !r"tein gl"#ulin sehingga dise#ut 'uga imun"gl"#ulin )1+, Imun"gl"#ulin meru!akan su#stansi !ertama $ang diidentifikasi se#agai m"lekul dalam serum $ang mam!u menetralkan se'umlah mikr""rganis( me !en$e#a# infeksi, M"lekul ini di( #entuk "leh sel % dalam * #entuk $ang #er#eda, $aitu se#agai rese!t"r !ermukaan untuk antigen, dan se#a( gai anti#"di $ang disekresikan ke dalam airan ekstraseluler, Anti#"di $ang disekresikan da!at #erfungsi se( #agai ada!t"r $ang mengikat antigen melalui binding)sites $ang s!esifik, sekaligus meru!akan 'em#atan $ang menghu#ungkan antigen dengan sel( sel sistem imun atau mengaktivasi k"m!lemen, )0+
&a#el 1, 9ata u'i aktivitas immun"gl"#ulin M &iter Imun"gl"#ulin M )IgM+ Perlakuan K"ntr" Kin a Kin a Kin a l -,1. -,/. -,0. Ce!likasi 1 1=? 1=/* 1=62 1=1*? Ce!likasi * 1=16 1=/* 1=62 1=1*? Ce!likasi / 1=16 1=/* 1=62 1=1*? &a#el *, 9ata u'i aktivitas immun"gl"#ulin 6 &iter Imun"gl"#ulin 6 )Ig6+ Perlakuan K"ntr" Kin a Kin a Kin a l -,1. -,/. -,0. Ce!likasi 1 1=16 1=/* 1=62 1=1*? Ce!likasi * 1=16 1=/* 1=1*? 1=*06 Ce!likasi / 1=16 1=/* 1=1*? 1=*06

7ni!ersitas (asan ddin, Makassar

62 Hal ini dilakukan karena reaksi aglu( tinasi di#antu "leh suhu $ang tinggi )/3(06"8+ dan "leh gerakan, $ang menam#ah k"ntak antigen dan anti( #"di )1-+, Peningkatan aktivitas anti#"di diduga meru!akan efek mit"gen dari #atang kin a, 'uga telah di!ertegas "leh !enelitian se#elumn$a )2+ $ang mem!erlihatkan adan$a !eningkatan 'umlah limf"sit tan!a se#elumn$a mengimunisasikan antigen )59M9+, Mit"gen terli#at dalam !r"liferasi dan diferensiasi sel % men'adi sel !lasma $ang meru!akan !enghasil anti#"di, Hasil !engamatan titer agluti( nasi menun'ukkan !eningkatan aktiv( itas imun"gl"#ulin M )IgM+, Hal ini da!at dilihat !ada kel"m!"k !er( lakuan !em#erian ekstrak metan"l #atang kin a dengan k"nsentrasi -,1. dan -,/. #=v dan -,0 ., titer imun"gl"#ulin rata(rata masing( masing se#esar 1=/* dan 1=62 dan 1=1*?, 9engan demikian da!at disim( !ulkan #ahwa semakin tinggi k"nsen( trasi maka efek $ang dihasilkan 'uga semakin meningkat, 9ata !engamatan titer agluti( nasi menun'ukkan ter'adin$a !ening( katan aktivitas imun"gl"#ulin 6 )Ig6+ setelah !em#erian ekstrak metan"l #atang kin a )Feronia elephant m 8"rr+ $aitu ekstrak metan"l -,1. #=v da!at mengaglutinasi sel darah merah !ada !engen eran 1=62, k"nsentrasi -,/ . #=v mengaglutinasi !ada !eng( en eran 1=1*? dan k"nsentrasi -,0. #=v mengaglutinasi !ada !engen eran 1=*06, Hal ini #erarti !eningkatan k"nsentrasi akan disertai dengan !eningkatan efek, Analisis statistika dengan ran( angan a ak lengka! mem!erlihatkan #ahwa !em#erian ekstrak metan"l #atang kin a mem#erikan !engaruh $ang sangat n$ata terhada! !ening( katan aktivitas IgM dan Ig6, $ang da!at dilihat dari nilai Fhitung $ang le#ih #esar dari Fta#el !ada taraf 1., Analisis antar !erlakuan dengan u'i #eda n$ata terke il )%N&+

Antigen $ang digunakan untuk induksi !r"duksi anti#"di adalah sus!ensi sel darah merah d"m#a )59M9+ $ang meru!akan antigen ter#aik untuk !engu'ian !r"duksi anti#"di !ada hewan !er "#aan )?+, 5us!ensi 59M9 diin'eksikan ke tu#uh men it !ada hari ketu'uh setelah !em#erian sam!el ekstrak metan"l #atang kin a selama 6 hari #erturut( turut, Men it di#iarkan tan!a !erlaku( an hingga hari kese!uluh setelah 59M9 diin'eksikan dengan asumsi #ahwa selama selang waktu terse#ut telah ter'adi sensitasi terhada! sel % sehingga mem#entuk sel !lasma dan sel mem"ri $ang akan #erdiferensiasi mem#entuk anti#"di, Pada hari kelima dan kese!uluh setelah in'eksi, darah men it diam#il se ara intrakardial, 9arah diam#il !ada hari kese!uluh karena kadar IgM men a!ai !un ak !ada hari kelima dan kadar Ig6 men a!ai !un ak !ada hari 1- A 12 setelah !ema!aran antigen, Pengukuran !ada serum darah men it dilakukan dengan menam#ahkan antigen $ang sama, Infeksi #erulang memfungsikan sel mem"ri $ang mengenali antigen dan segera ditangka! "leh anti#"di, Inter( aksi antara antigen dan anti#"di ini men$e#a#kan aglutinasi se#a# anti( gen meru!akan !artikel(!artikel ke il $ang meru!akan #ahan tidak larut )1+, 6um!alan $ang ter#entuk antara antigen dan antiserum s!esifik akan #ersatu dan mengenda! sehingga mudah terlihat dengan airan di atasn$a teta! 'ernih, Hal ini ter'adi karena !ada umumn$a anti#"di memi( liki le#ih dari satu rese!t"r !engikat antigen sehingga anti#"di #ereaksi dengan m"lekul antigen lain $ang mungkin sudah #erikatan dengan salah satu m"lekul anti#"di dan ter#entuklah gum!alan )?+, Pen am!uran serum dengan antigen di#uat dalam !elarut P%5 dan memerlukan !engadukan serta inku( #asi selama 1 'am se#elum di#iarkan selama 1 1 *2 'am !ada suhu kamar,

Majalah Farmasi dan Farmakologi Vol. 10, No. 3 Nopember 2006

60

antara !erlakuan k"ntr"l negatif dan kel"m!"k !erlakuan dengan !em#eri( an ekstrak metan"l #atang kin a menun'ukkan !er#edaan $ang n$ata antara k"ntr"l negatif )Na(8M8+ dengan ekstrak -,1., sedangkan antara k"ntr"l negatif )Na(8M8+ dengan ekstrak -,/. dan -,0. menun'ukkan !er#edaan $ang sangat n$ata, KESIMPULAN Pem#erian ekstrak metan"l #atang kin a )Feronia elephant m 8"rr+ dengan k"nsentrasi -,1., -,/., dan -,0. #=v se ara signifikan da!at meningkatkan aktivitas IgM dan Ig6, Hasil !enelitian menun'ukkan #ahwa !eningkatan k"nsentrasi akan diikuti dengan !eningkatan efek, DAFTAR PUSTAKA 1, He$ne, K,, 1<?3, 1anaman ,erg na #ndonesia, Jilid II, %adan Dit#ang, 9e!artemen Kehutanan, Jakarta, 1-?2 *, M"rt"n, J, 1<?3, 8ood .pple. #n6 Fr its o5 8arm 2limates , Miami, Fl"rida, www,h"rt,!urdue,edu=new r"!=m"rt"n=w""d(a!!le,html, diak( ses !ada tanggal *- Januari *--0. /, Hasanuddin, *--6, U'i ;fek ;kstrak ;tan"l %atang Kin a

"Feronia elephant m$ &erhada! Per#an$ak(an Jumlah Dimf"sit 9arah Men it Jantan "M s m s& l s$, 0kripsi, Fakultas MIPA Universitas Hasa(nuddin, Makassar 2, A#as, KA dan Di htman, AH, *--0, 2ell lar and Mole& lar #mm nolog+, 0th ;diti"n, ;lsevier 5aunders, 0, 9irekt"rat Jenderal P>M, 1<?6, 0ediaan %alenik, 9e!artemen Kesehatan Ce!u#lik Ind"nesia, Jakarta, 11 6, :inarn", M, *---, Penelitian .kti!)itas ,iologik #n5 s ,enal 1he "0& r lla atrop rp rea %I, 9anser$ terhadap akti!itas 0istem #m n Men&it. www,kal#efarma, "m=files= edk=files=-6PenelitianAktivitas %i"l"( gikInfus%enalu&eh1*3,!df=-6Penelit ianAktivitas%il"gikInfus%enalu&eh1* 3,html, diakses !ada tanggal *0 N"vem#er *--0 3, MaEat, 5, *--2, Penelitian dan Pengembangan Prod k Fito5armaka dari :a n <amb ,iji "Psidi m g aja!a /.$ nt k 1erapi :emam ,erdarah :eng e ,erdasarkan :ata Preklinik, 1oksisitas dan Per&obaan =linik, Universitas Airlangga, 5ura#a$a, 1-1, 10-(10*

7ni!ersitas (asan ddin, Makassar

66