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CUESTIONARIO DE CROMATOGRAFA

1. A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?


R= Carotenoides y xantofilas.
2. A qu se debe que estos compuestos sean coloridos?
R= Carotenoides: son los responsables de la gran mayora de los colores amarillos, anaranjados y rojos
presentes en los alimentos vegetales. Entre mayor sea la intensidad del color, mayor ser el contenido de
carotenoides.
Xantofilas: son compuestos qumicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o ms
tomos de oxgeno en su estructura. Se encuentran de forma natural en muchas plantas y presentan tambin
accin fotosinttica. Estos pigmentos, ms resistentes a la oxidacin que las clorofilas, proporcionan sus tonos
amarillentos y parduzcos a las hojas secas.
3. Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin.
R= Cromatografa de particin: La mayora de las sustancias tendrn distinta solubilidad en diferentes
solventes. Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre s, se distribuir
entre los dos solventes en relacin a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de particin a la distribucin
de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el lquido que es atrapado por el
medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le
llama fase mvil.
Cromatografa de adsorcin: La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de
cromatografa de lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la
superficie de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la
superficie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografa son el carbn mineral, el gel de
slice, y la almina.
4. Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin con la
cromatografa en columna?
R= Cromatografa en columna: Las separaciones en la cromatografa en columna pueden realizarse por
reparto, adsorcin o intercambio inico. El estado fsico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el
empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a travs de ella.
Cromatografa en capa fina: Cromatografa en papel y electro cromatografa. En todos los casos se emplea
una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre una
superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por
capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la actualidad la
cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms rpida, tiene mejor resolucin y es
ms sensible que su alternativa en papel.
5. Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografa en capa delgada y el de
columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad.
R= En columna: Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la celulosa, gel de slice,
almina oxido de magnesio, oxido de clcico y carbn activo (para separaciones por adsorcin y de
intercambio inico). Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala
preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La
eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de la columna
por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin (cromatografa flash). La columna se prepara
mezclando el soporte con disolvente.
Capa delgada:
Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
xido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica)
Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
Poliamidas
Estos adsorbentes deben tener las siguientes caractersticas:
Tamao de partcula pequeo
Dimetro de poro grande
rea superficial grande
Homogeneidad
Alta pureza

6. Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en cromatografa en columna y capa delgada en
orden creciente de polaridad.
Hexano
ter de petrleo
Benceno
Tolueno
ter etlico
Cloroformo
Acetato de etilo
Cloruro de metilo
Dicloroetano
Acetona
Etanol
Metanol

7. Lista de la capacidad de adsorcin de los grps. funcionales de los compuestos orgnicos.
R=
7.1. Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en una capa
cromatogrfica?
R= Un alqueno, por su polaridad.
8. Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca?
R= Se le aplica calor para as poder romperlo cuidando que quede un orificio no muy grande.
9. Por qu es necesario que la cmara de elusin est saturada con los vapores del eluyente?
R= Por que as ser ms fcil el arrastre de los pigmentos y no se secar la placa.
10. Explique cada uno de los siguientes trminos:
Eluyente: solvente que se usa en tcnicas de cromatografa para extraer un compuesto que se quiere
separar de otra fase.
Eluato: la sustancia que se separa o sale de la columna despus de cada extraccin.
Elucin fraccionada: Aparato de elucin fraccionada electrofortico tiene una columna con una rotacin
conjunta de sello en el que un delgado chorro de elucin bfer es dirigido a travs de la luz de la
columna electrofortica en una direccin perpendicular a la de migracin electrofortica. El contenido
de la columna se gira en relacin con el jet estacionario o se gira el jet con respecto a la columna. El
sistema puede emplear electroforesis en solucin libre o en columnas empaquetadas.
Adsorcin: Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en la
superficie de otra sustancia o material.
Particin: La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en
las fases estacionaria y mvil.
Elucin: se produce por el flujo de una fase mvil a travs de la fase estacionaria.
Adsorbente: es un slido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente
presente en corrientes lquidas o gaseosas. Se caracteriza por una alta superficie especfica y por su
inercia qumica frente al medio en el que se va a utilizar.
Actividad del adsorbente: El nivel de actividad de la adsorcin depende de la concentracin de la
sustancia en la solucin, la temperatura y la polaridad de la sustancia.
Afinidad por el adsorbente: es que la sustancia ceda a la capacidad de capilaridad del adsorbente y
eluya a travs de l.

11. Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?

Naturaleza de fase
estacionaria
Clasificacin
Naturaleza de
fase mvil
Lquido
Lquido-lquido: particin
Lquido-slido: adsorcin, cambio inico, exclusin, afinidad.
Gas
Gas-lquido (CGL)
Gas-slido (CGS)

12. Cul es la funcin de la fase mvil y como se lleva a cabo la separacin en la cromatografa de
adsorcin?
R= Su funcin es eluir los componentes de la mezcla a separar a travs de la fase estacionaria. La
cromatografa de adsorcin se lleva a cabo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observar la
elucin de los componentes de la mezcla, los cuales sern eluidos por el disolvente, que es la fase mvil.
13. Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?, por lo menos dos mtodos.
R= Se machaca con ayuda de un mortero y pistilo hasta hacer polvo la slica, luego se aade el disolvente.
Tambin se puede hacer en un vaso de precipitados y con una varilla de vidrio, agitando constantemente
hasta formar la papilla.
14. Cundo es conveniente activar una placa y cmo se activa?
R= Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que acta
como una impureza y evita una buena separacin. La magnitud de calor depende del tipo de separacin que
se requiere para compuestos hidrfilos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son
generalmente suficiente; para los compuestos hidrofbicos o no polares es necesario un calentamiento ms
intenso. Las placas de xido de aluminio y de gel de slice con adhesivo requieren ser secadas al aire durante
aproximadamente 30 min. Y despus ser activadas en un horno a 100C alrededor de 30 min. Las placas de
celulosa debern secarse al aire libre durante 30 min. y activarse al horno durante 10 min. a 105C.
15. Qu espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D.?
R= No debe ser espesa ni muy aguada, debe deslizarse solo por la placa al momento de prepararla.
16. Al comparar los R
F
de dos componentes se encontr que eran iguales, podra pensarse que se trata del
mismo compuesto? Explique brevemente.
R= Si, esto se concluye debido a que si ambos componentes eluyen de la misma manera, significa que tienen
una polaridad muy semejante, por lo tanto podra inferirse que se trata del mismo componente.
17. Explique brevemente si existe una relacin entre la cantidad de adsorbente y las dimensiones de la
columna para una mezcla.
R= Entre ms grande sea una columna, ms adsorbente se necesitar, esto para observar mejor la
separacin de los componentes; adems de necesitar ms disolvente para continuar la elucin y evitar la
sequedad del sistema.
18. Cmo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar una columna?
R= La polaridad del eluyente debe ser mayor
19. Con relacin al R
x
:
19.1 Cundo se usa el R
x
en cromatografa en capa delgada?
R= Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad conocida, y por lo tanto elusin conocida, que se
pueda usar como referencia en la C.C.D.
19.2 Qu significa la obtencin de R
x
igual a uno?
R= Que el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso hasta mayor la de este ltimo.
19. Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografa en columna?
R= En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las
molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene ms afinidad por la fase
estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A.
Hexano
ter de petrleo
Benceno
Tolueno
ter etlico
Cloroformo
Acetato de etilo
Cloruro de metilo
Dicloroetano
Acetona
Etanol
Metanol
20. A qu se le llama frente del eluyente en cromatografa en capa delgada? Demustrelo en una placa.
R= Es la lnea donde acaba la elusin, si se rebasa
dicha lnea se corre el riesgo de que los componentes
separados se esparzan a lo largo de la parte posterior
de la placa.

21. Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa en columna?
R= Se controla con la llave de la bureta, se va colocando los distintos pigmentos en tubos de ensayo, a los
que se les denominar como fracciones.
22. Por qu no debe dejarse secar la columna cromatografa? En caso de que se fracture qu se
recomienda hacer?
R= Porque de no ser as la fase estacionaria se contraera y agrietara. Se debe rehidratar con ms eluyente
si esto ocurre.
23. Por qu es importante que las muestras a separar por cromatografa deban estar lo ms secas posible?
R= Para que no interfiera el agua con la elucin, por medio del disolvente, de los componentes de la muestra.
24. Por qu al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mnima cantidad de disolvente?
R= Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de 3 a 4mL/min. en una columna de
40 cm de altura aprox.
25. Qu pH presenta la almina? Mencione los tres casos.
R= Presenta tres pH: almina cida pH de 4.5, almina bsica pH de 10.0 y almina neutra pH de 8.0.
26. Por qu cuando se usa almina como adsorbente no se recomienda usar acetona como eluyente?
R= Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna.
27. Cules son los pasos a seguir para la preparacin de una placa preparativa?
R= Las separaciones en capa fina caractersticas se realizan en placas de vidrio o plstico que se recubren
con una capa delgada y adherente de partculas finamente divididas, esta capa constituye Ia fase
estacionaria. Las partculas son semejantes a Ias de Ia cromatografa en columna. Las capas finas
preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas simplemente.
28. Cul es la aplicacin de la cromatografa en placa preparativa?
R= La eleccin de un eluyente ideal para cromatografa en columna.
29. Qu diferencia existe entre cromatografa en capa delgada analtica y cromatografa en placa
preparativa?
R= La preparativa se emplea generalmente para elegir un eluyente o mezcla de eluyentes ideal para
cromatografa en columna. La analtica ya cuenta con un eluyente ideal y registra R
x
, es decir, se analiza la
elusin de los componentes para arrojar un valor numrico final.
30. Cmo se clasifican los reveladores en forma general?
R= Qumicos y fsicos.
31. Cuando una sustancia orgnica no se revela con I
2
o luz UV, qu otros reveladores pueden usarse para
observar la sustancia?
R= Con reveladores qumicos especficos para los componentes separados.