Jurnal

METODE BARU YANG EFISIEN UNTUK JALUR STEM CELL PADA

STROKE ISKEMIK
Diajukan Sebagai Salah Satu Tugas Dalam Menjalani Kepaniteraan Klinik
Senior pada Bagian / SMF Ilmu Penyakit Saraf Fakultas Kedokteran nsyiah
B!D "SD dr# $ainoel %bidin & Banda %'eh
Disusun Oleh :
BENGI MUTHMAINNAH
0807101010055
Pembimbing:
dr. Su!r"#$% S&.S
BAGIAN'SMF ILMU PENYAKIT SARAF
FAKULTAS KEDOKTERAN UNI(ERSITAS SYIAH KUALA
BLUD RSUD Dr. )AINOEL ABIDIN
BANDA ACEH
*01+
P!$!,-.-#$
METODE BARU YANG EFISIEN UNTUK JALUR STEM CELL PADA
STROKE ISKEMIK
L-$/ Gu0
1
, J-#$1!$/ G!
1,2
, S#$ 2#$/
1,2
, Y-$/ )0u
1,2
, 3-#04-#0
2#$/
1,2
danY#05-0$/ 2u
1 *

A67.r#8
P!$/#$.#r
middle 'erebral artery o''lusion (MCAO) tikus, model binatang yang paling
umum digunakan dalam studi stoke iskemik! Dalam model ini, untuk
meningkatkan "umlah stem sel atau obat#obatan yang masuk ke dalam otak setelah
mele$ati "alu aga memasuki atei kaotis intena (%CA), akan tetapi atei
pteygopalatine (PPA) tetutup atau tesumbat! &amun, oklusi PPA adalah
posedu yang memelukan teknis dimana posedu tesebut seing menyebabkan
komplikasi!
M!.0d!
Dalam studi ini, kami mengembangkan sebuah "aum suntik %CA untuk
kemudahan 'asilitasi yang e'isien dai stem sel untuk pendeita stoke iskemik
melalui %CA tanpa membutuhkan oklusi PPA! (ami menyuntikkan methylene
blue dan fluores'en'e dye Dil(labeled )uman Mesen'hymal stem 'ells (Dil#
hM)Cs) ke %CA pada tikus dengan "aum suntik %CA (tanpa ligasi PPA) atau
"aum miko#in"eksi kon*ensional (dengan ligasi PPA) dan dinilai distibusi
meeka!
H#7-,
(etika methylene blue telah disuntikkan, "elas noda biu yang ditemukan di otak
dai sisi yang dibeikan in"eksi khususnya daeah atei seebal tengah (MCA)
tetapi tidak memenuhi aea PPA! Demikian pula, ketika Dil#hM)Cs disuntikkan,
sebagian stem sel#sel besa mun+ul di "aingan MCA# dan memenuhinya, dimana
di"umpai pesamaan dalam hal "umlah "ika dibandingkan dengan in"eksi "aum
miko#in"eksi kon*ensional dengan oklusi PPA! )elain itu, hM)Cs yang disuntik
dengan "aum %CA atau "aum miko#in"eksi dengan +aa yang sama dapat
meningkatkan pemulihan 'ungsional pada otak yang mengalami in'ak!
K!7-"&u,#$
,asil penelitian kami menun"ukkan bah$a "aum suntik %CA mudah digunakan
dan e'isien dalam menyampaikan sel ke "aingan otak yang mengalami iskemik
pada tikus Model MCAO!
K#.# 8u$9-:
)toke, %n'ak seebal akut!
P!$/#$.#r
)toke meupakan penyebab utama kematian dan ke+a+atan! )el induk telah
menun"ukkan potensi besa dalam hal pebaikan dan egeneasi "aingan otak yang
teluka -1.! /'ek teapi sel induk ke ogan yang teluka seing dikaitkan dengan
"umlah pemindahan sel induk! Pada studi sebelumnya bebeapa ute telah
digunakan untuk menyampaikan sel#sel induk pada +edea otak, sepeti in"eksi
inta*ena, in"eksi inta#atei dan administasi inta#seebal! Pendekatan inta#
seebal melibatkan posedu yang umit dan in*asi' sementaa ute inta*askula
lebih aman dan lebih bisa diteapkan! Paadigma inta*askula begantung pada
kemampuan sel induk untuk bemigasi ke aah "aingan yang teluka dengan +aa
yang ditagetkan, dimediasi oleh +hemoatta+tant dan adhesi molekul
endogen! Meskipun pembeian inta*ena adalah yang paling in*asi' dan ute yang
paling nyaman, sebagian besa penyampaian sel#sel induk inta*ena tepeangkap
di pau#pau dan ogan lain sehingga tidak men+apai ogan taget -2#
0.! Administasi %nta#atei bypass 'ilte dai pau#pau dan mem'asilitasi
se"umlah besa sel untuk men+apai ogan taget! Memang, telah menun"ukkan
bah$a in"eksi inta#atei menyebabkan kehadian sel lebih tinggi dan
bekelan"utan di lokasi iskemik dibandingkan dengan pembeian inta*ena -1,2.!
Model stoke iskemik tikus telah digunakan se+aa luas untuk menge*aluasi
man'aat sel induk dan untuk mempela"ai mekanisme yang mendasai! )e"ak
stoke iskemik pada pasien sebagian besa disebabkan oleh oklusi atei seebal
tengah (MCA), "ahitan intaluminal MCA oklusi (MCAO) telah men"adi model
yang paling umum digunakan dalam penyelidikan stoke pada he$an
pengeat - 3.! Model MCAO e*esibel telah digunakan se+aa luas kaena
ele*ansi klinis dalam hal itu meniu ekanalisasi kapal MCA yang thombosed
dalam situasi klinis! )el induk atau obat#obatan dapat disuntikkan ke dalam atei
kaotis intena (%CA) untuk pengiiman ditagetkan ke "aingan otak
epe'usi! (aena pteygopalatine atei (PPA) adalah +abang dai %CA, daah di
%CA akan shunt ke $ilayah PPA disediakan! Oleh kaena itu, sebagian besa
peneliti tesumbat A(P ketika meeka tampil in"eksi inta#ateial - 4 .! &amun,
ligasi PAA adalah posedu yang sulit kaena posisi atei ini - 5 .! )elain itu,
oklusi dai PPA untuk $aktu yang lama dapat menyebabkan tombosis dan
menyebabkan konsekuensi beat, sepeti emboli di MCAO epe'usi! Oleh kaena
itu, dihaapkan untuk mengembangkan metode untuk sementaa menutup "alan
PPA ketika sel#sel induk atau obat#obatan yang diseahkan ke %CA!
Dalam studi ini, kami mengembangkan sebuah "aum suntik %CA sesuai dengan
'itu anatomi dai %CA dan PPA! 6aum memiliki u"ung tetutup untuk menutup
"alan PPA dan pembukaan lateal membeikan sel induk men"adi %CA! (ami
mengu"i "aum dengan menyuntikkan methylene blue dan 'luoesensi dye D%%#
belabel sel batang mesen+hymal manusia (hM)Cs) ke %CA pada tikus dan
menilai distibusi meeka! ,asil penelitian kami menun"ukkan bah$a tidak ada
noda biu ditemukan di daeah PPA#disediakan dan "umlah yang sama dai D%%#
hM)Cs mun+ul di "aingan otak MCA#dipasok dibandingkan dengan teknik oklusi
PPA!
M!.0d!
J#ru" 7u$.-8 ICA
6aum suntik %CA miip dengan "aum suntik biasa, namun memiliki bebeapa
modi'ikasi! 6aum pan"ang 7,8#0,8 +m, dengan diamete ekstenal dai 8,7 hingga
8,1 mm! 9"ung "aum tumpul dan tetutup beakhi! Pada 1 mm dai u"ung, ada
pembukaan 23:, yang be'ungsi sebagai pintu kelua bahan disuntikkan melalui
"aum (:amba 1 A)! )egmen depan "aum %CA solid, dan pan"ang dai sisa "aum
miip dengan "aum kon*ensional, sehingga *olume dipetahankan dalam "aum
hampi sama dengan yang di "aum miko#in"eksi kon*ensional! 9kuan "aum
dipilih tegantung pada beat badan tikus! 9ntuk tikus sebeat 218 men"adi sekita
238 gam, pan"ang 7,1 +m dan 8,0#mm diamete "aum ekstenal adalah tepat!
G#"6#r 1. ICA 5#ru" 7u$.-8 d#$ #$#.0"- #r.!r- 8#r0.-7. ;A<Diagam skematik "aum
%CA! ;B< Anatomi atei kaotid umum (CCA), atei kaotid ekstenal (/CA) dan atei
kaotis intena (%CA)! ;C<)etelah menebang u"ung distal dai /CA , taik /CA untuk
membuatnya langsung ke %CA! 6aum suntik %CA dimasukkan dai u"ung distal dai /CA
dan ma"u ke %CA dan pteygopalatine atei (PPA)!
6aum suntik %CA dian+ang bedasakan stuktu anatomi dai %CA dan PPA pada
tikus (:amba 1)M)! Pada tikus, atei kaotid umum tebagi men"adi atei
kaotis ekstenal dan %CA di tingkat kelen"a tioid! Pada sekita 1 mm dai
bi'ukasi, %CA memiliki +abang yang disebut PPA (:amba1 )M)! ;atang dan
+abang dai %CA dan PPA membentuk stuktu bebentuk <=<! (etika "aum suntik
%CA dimasukkan ke dalam %CA, stuktu khusus ini mem'asilitasi "aum beakhi
tetutup untuk dapat dengan mudah ma"u ke PPA untuk sementaa membloki
alian daah! Diamete ekstenal "aum dian+ang aga sesuai dengan diamete
intenal PPA! Pembukaan lateal "aum 1 mm dai u"ung! 6aak ini memungkinkan
penyisipan mendalam "aum ke dalam lumen PPA untuk +ukup menutup "alan
alian daah dan memastikan pembukaan adalah menu"u %CA!
6aum suntik %CA dimasukkan ke dalam %CA dai atei kaotid
ekstenal! Petama, atei kaotid ekstenal diikat dengan "ahitan nilon dan sobek
pada sudut 01 dea"at! (emudian atei kaotid ekstenal ditaik untuk
membuatnya langsung ke %CA (:amba 2 A)! 6aum dimasukkan ke atei kaotid
ekstenal, kemudian ma"u ke %CA dan selan"utnya ke PPA dan behenti ketika
sebuah pela$anan yang "elas teasa! >igatu ini dipeketat di tunggul atei
kaotid ekstenal sampai hemostasis di+apai! )olusi (sel atau saline) yang diesapi
pelahan melalui "aum! (etika selesai, "aum ditaik dan tunggul atei kaotid
ekstenal diligasi! Atau, "aum %CA dapat dimasukkan ke dalam %CA dai atei
kaotid umum "ika atei kaotid umum ditaik untuk membuatnya langsung ke
%CA (:amba 2 ;)!
G#"6#r * . Du# ru.! &!$=-7-&#$ 5#ru" 7u$.-8 ICA #8#$ d-.#"&-,8#$. ;A< Penyisipan
"aum in"eksi %CA ke dalam atei kaotis intena (%CA) melalui atei kaotid ekstenal
(/CA) tunggul! ?aik /CA untuk membuatnya langsung ke %CA! Masukkan "aum ke
/CA dan mema"ukan "aum ke %CA dan pteygopalatine atei (PPA)! ;B<Penyisipan
"aum in"eksi %CA ke %CA melalui +ommon +aotid atei (CCA)! ?aik CCA untuk
membuatnya langsung ke %CA! Memasukkan "aum ke dalam CCA dan mema"ukan "aum
ke %CA dan PPA!
H!>#$
Peempuan tikus )pague Da$ley#(218#238 g, yang dibeli dai >aboatoium
Pusat ,e$an, Po*insi :uangdong, Cina) yang digunakan dalam penelitian
ini! ?ikus dipetahankan dalam suhu lingkungan yang tekendali (28 @ 1 A C)
dengan akses ke makanan dan ai di seluuh pe+obaan!)emua posedu dilakukan
dengan pesetu"uan dai (omite /tika ,e$an 9ni*esitas ?singhua!
O8,u7- #r.!r- 7!r!6r- d#$ r!&!r1u7- &#d# .-8u7
)etelah anestesi dengan 18B kloal hidat (088 mg C kg, intapeitoneal (ip)
in"eksi, )igma#Aldi+h), tikus men"adi sasaan tansient iskemia 'okal selama 128
menit dengan teknik "ahitan intaluminal sepeti yang di"elaskan
sebelumnya - 18 . dengan obat#obatan! )e+aa singkat, atei kaotis, atei kaotis
ekstenal dan %CA di sisi kii dengan hati#hati tekena melalui insisi se*iks gais
tengah! Atei kaotis ekstenal diligasi dengan 0#8 "ahitan suta (18 mm dai
bi'ukasi), dan atei kaotid umum adalah di"epit dengan klip miko! )ebuah
silikon kaet belapis ound#u"ung benang nilon bedah dimasukkan ke dalam %CA
(sekita 14 mm dai bi'ukasi) dai tunggul atei kaotis ekstenal untuk menutup
"alan asal MCA! )ebuah "ahitan suta sekita atei kaotis ekstenal dipeketat
untuk men+egah pedaahan dai situs tusukan, dan klip itu dihapus! )etelah 128
menit MCAO, epe'usi dilakukan dengan menaik "ahitan!
I$5!87- 6-ru "!.-,!$
?ikus dibagi men"adi tiga kelompok dan masing#masing kelompok memiliki
empat he$an! Pada kelompok 1, A(P diligasi dengan 2#8 "ahitan suta! )ebanyak
288 ml metilen biu (28 mg C 2 ml, 6iangsu 6ump+an Phama+euti+al :oup Co,
>td, (ota ?aiDhou, Cina) disuntik dengan "aum 78: miko#in"eksi (,amilton) ke
dalam atei kaotid umum dengan alian dia$etkan dalam atei kaotid umum
dan %CA! Pada kelompok 2, 288 ml metilen biu disuntik dengan "aum in"eksi
%CA ke atei kaotis intena! 6aum itu dimasukkan ke dalam %CA dai tunggul
atei kaotis ekstenal dan ma"u ke aah kepala tikus, sehingga u"ung "aum +lose#
ended dimasukkan ke dalam PPA untuk menutup "alan PPA, sehingga men+egah
biu metilen memasuki PPA, dan biu metilen disampaikan ke %CA melalui
pembukaan lateal "aum sehingga memudahkan masuknya ke otak!Pada
kelompok 7, %CA itu diikat! )ebanyak 288 ml metilen biu disuntikkan ke PPA
dengan "aum miko#in"eksi! ?ikus s+ai'ied segea setelah in"eksi metilen
biu! (ulit kepala telah dihapus untuk mengamati distibusi metilen biu dalam
"aingan $a"ah! (emudian otak tekena mengamati distibusi metilen
biu! Akhinya, bagian koonal melalui otak dipotong men"adi tu"uh blok sama
spasi (masing#masing 2 mm, temasuk blok +eebellum) untuk memeiksa metilen
biu distibusi di dalam otak!
P!,#6!,#$ d#$ .r#$7&,#$.#7- 7!, 6#.#$/ "!7!$9="#, "#$u7-#
M)C manusia diisolasi dan ditandai di laboatoium kami sepeti yang di"elaskan
sebelumnya - 11.! )e+aa singkat, poposal penelitian dan posedu pengumpulan
plasenta petama kali disetu"ui oleh (omite /tika Eumah )akit )henDhen
Futian! ?em (74#08 minggu kehamilan) plasenta, yang dinyatakan dibuang,
dikumpulkan dai dono yang sehat dia$at di umah sakit dengan pesetu"uan
tetulis! 6aingan plasenta dipotong men"adi potongan#potongan ke+il dan
enDimatik di+ena ke dalam suspensi sel tunggal, dai mana M)C patuh tehadap
un+oated plastik "aingan piing budaya diisolasi! )el#sel ditumbuhkan dalam
media petumbuhan yang tedii dai (Dulbe++o <s) diubah media /agle ((D)
M/M, )igma#Aldi+h), 18B "anin bo*ine seum (:ib+o) 188 %9 pe ml penisilin
dan 188 mg C ml steptomisin, dan bagian 0 sampai 1 sel digunakan untuk
Genotansplantation untuk tikus! 9ntuk label hM)Cs, hM)Cs monolaye
diinkubasi dengan lipo'ilik 'luoo+home 1,1 <#dio+tade+yl#7, 7,7<, 7<#
tetamethylindo+abo+yanine pekloat (Dii, )igma#Aldi+h) dalam seum dan
'enol bebas (D) M/M pada 73 A C selama 01 menit sepeti yang di"elaskan
sebelumnya - 12 , 17 .! )el#sel kemudian diinkubasi dalam medium petumbuhan
pada 73 A C selama satu "am, di+u+i dengan phosphate#bu''eed saline (P;)) dan
dipanen untuk tansplantasi! Dua "am setelah MCAO, 1 "uta D%%#hM)Cs dalam
188 ml P;) disuntikkan ke dalam %CA dalam dua menit menggunakan tiga
metode: dengan "aum %CA tanpa PPA ligasiH dengan "aum miko#in"eksi dengan
PPA ligasi (metode kon*ensional)H atau dengan "aum miko#in"eksi tanpa PPA
oklusi!
G!$!r#7- 7u7&!$7- 7!, .u$//#,
)egea setelah tansplantasi sel, belahan kii otak tikus telah dihapus dengan hati#
hati dan "aingan otak dipotong men"adi enam sama spasi (2 mm) blok
koonal! 6aingan sega dai blok ketiga ditimbang, tanah di saingan sel dan
di+u+i dengan bu''e pen+enaan (8,1B tipsin#ethylenediaminetetaa+eti+ a+id
(/D?A)) untuk menghasilkan suspensi sel tunggal! Dii#hM)Cs di*isualisasikan di
ba$ah mikoskop 'luoesensi dan "umlah hM)Cs pe 18
0
sel dihitung! ?iga puluh
bidang mikoskopis dipilih se+aa a+ak (18 bidang C goup)!
A$#,-7-7 -7.0,0/-
;elahan kii otak telah dihapus dengan hati#hati pada hai ke 3 setelah
tansplantasi sel dan "aingan otak dipotong men"adi enam sama spasi (2 mm)
blok koonal! ;lok keempat tetap dalam paa'omaldehyde 0B (PFA), tetanam
dalam optimal senya$a suhu pemotongan (Oktobe) dan dipotong men"adi
bebeapa bagian 18#pM#tebal, yang temasuk $ilayah MCA pe'usi! ;agian
"aingan di*isualisasikan di ba$ah mikoskop 'luoesensi untuk kehadian D%%#
hM)Cs dan bidang epesentati' di'oto! 9ntuk kuanti'ikasi D%%#hM)Cs di Dona
batas iskemik, sel#sel positi' untuk D%% pe lapangan mikoskopis (I 288)
dihitung, dan 18 bidang pe bagian "aingan yang dipilih se+aa a+ak! ?iga bagian
"aingan pe sampel dipeiksa (n J 0)!
S80r 8!&#r##$ N!ur0,0/-7
?ikus men"adi sasaan dimodi'ikasi &euologis )e*eity )ko (m&))) tes pada 8,
1, 7, 1, 3, 5, 11 dan 10 hai MCAO sepeti yang di"elaskan
sebelumnya - 10 .! m&)) adalah gabungan dai motoik, sensoik, e'leks dan tes
keseimbangan! Dalam sko kepaahan +edea, satu poin dibeikan untuk
ketidakmampuan untuk melakukan tes atau kuangnya e'leks diu"iH dengan
demikian, semakin tinggi sko, semakin paah adalah +edea!
A$#,-7-7 7.#.-7.-8
)emua data dinyatakan sebagai mean @ standa de*iasi ()D)! ,asil dianalisis
dengan menggunakan satu aah atau langkah#langkah analisis ulang *aians
(A&OKA) dengan *aiabel independen kelompok pelakuan dan hai pengu"ian,
diikuti oleh ;on'eoni tes post#ho+ untuk bebeapa pebandingan antaa
kelompok pelakuan pada setiap titik $aktu! )ebuah pobabilitas*P+ *alue L8,81
dianggap signi'ikan!
H#7-,
K#r#8.!r-7#7- 5#ru" 7u$.-8 ICA
6aum suntik %CA dengan mudah dimasukkan ke dalam %CA baik dai atei
kaotid ekstenal atau atei kaotid umum, dan kemudian lan+a ma"u ke
PPA! Dalam studi ini, kami memilih untuk memasukkan "aum dai atei kaotis
ekstenal untuk men"aga alian daah pada atei kaotid umum dan di %CA selama
tansplantasi sel induk! )ebagai u"ung "aum itu bulat dan halus, posedu tidak
menyebabkan komplikasi, sepeti pe+ahnya pembuluh daah dan pedaahan!
D-7.r-6u7- "!.-,!$ 6-ru
9ntuk mem*ei'ikasi apakah PPA se+aa e'ekti' tesumbat pada akhi tetutup
dai "aum suntik %CA, biu metilen disuntikkan melalui "aum! 6aingan biu
benoda sebagian besa dite"emahkan ke MCA disediakan daeah otak -lihat 'ile
?ambahan 1 : :amba )1, n J 0., dan tidak ada noda biu yang ditemukan di PPA
bidang temasuk "aingan di sekita mata, hidung dan mulut (:amba
disediakan 7 ;, n J 0)! Pola distibusi pe$ana miip dengan yang pada he$an
diobati dengan diikat PPA dan "aum miko#in"eksi kon*ensional (:amba 7 A, n
J 0)! )ebaliknya, ketika metilen biu disuntikkan ke PPA utuh, noda biu
ditemukan di sisi kii $a"ah temasuk daeah sekita mata, hidung dan mulut,
tetapi tidak ada noda biu yang ditemukan di MCA disediakan daeah otak
(:amba 7 C dan 'ile tambahan 1 : :amba )1)!
G#"6#r ?. D-7.r-6u7- "!.-,!$ 6-ru d#,#" .-/# ru.! -$5!87-. ;A<%n"eksi metilen biu ke
dalam atei kaotis intena dengan "aum miko#in"eksi setelah ligasi pteygopalatine
atei (PPA)! ;B< %n"eksi metilen biu ke dalam atei kaotid intenal dengan "aum suntik
%CA tanpa ligasi PPA;C< %n"eksi metilen biu ke dalam PPA dengan "aum miko#in"eksi!
D-7.r-6u7- MSC7
9ntuk memeiksa lebih lan"ut apakah "aum suntik %CA e'isien bisa membeikan
sel induk untuk otak yang usak tanpa PPA ligasi, kami membandingkan "umlah
D%%#hM)Cs dalam bagian "aingan dai $ilayah MCA#dipasok dai otak pada
tikus dengan MCAO tu"uh hai setelah in"eksi sel ! 6umlah yang sama D%%#hM)Cs
ditemukan di otak tikus yang disuntik dengan miko#"aum kon*ensional
ditambah PPA ligasi atau dengan "aum %CA tanpa PPA ligasi, tapi banyak sedikit
D%%#hM)Cs ditemukan di otak tikus disuntik dengan miko kon*ensional #"aum
tanpa PPA ligasi (:amba 0 A dan ;, P L8,81)! 9ntuk lebih menguku "umlah
D%%#hM)Cs di otak, "umlah yang sama dai "aingan otak sekita in'ak (segea
setelah tansplantasi sel) yang di+ena men"adi suspensi sel tunggal, dan "umlah
sel D%%#positi' dihitung di ba$ah mikoskop 'luoesensi - melihat 'ile tambahan2 :
:amba )2, n J 0.! ,asil ini konsisten dengan temuan di histologi (:amba 0 A
dan ;)!
G#"6#r +. MSC d- 0.#8. ?u"uh hai setelah in"eksi D%%#hM)Cs menggunakan tiga
metode pada tikus dengan MCAO, bagian "aingan otak dipeiksa di ba$ah mikoskop
kemekaan untuk kehadian D%%#hM)Cs (meah)! ;A< Pe$akilan Foto akan
ditampilkan! Mi#&, D%%#hM)Cs disampaikan dengan "aum miko#in"eksi ditambah PPA
ligasiH %CA#&, D%%#hM)Cs disampaikan dengan "aum suntik %CAH C, PPA, D%%#hM)Cs
disampaikan dengan "aum miko#in"eksi tanpa PPA ligasi! &u+lei di$anai dengan
,oe+hst (biu)! ;B< Penghitungan D%%#hM)Cs dalam bagian "aingan sepeti yang
di"elaskan dalam <Metode< (n J 0, * P L8,81) ;C<. M&)) puluhan tikus sebelum dan
setelah meneima bebeda pea$atan di kali sepeti yang ditun"ukkan! hM)Cs disuntik
satu hai pas+a MCAO sebelum e*aluasi m&))! P;), in"eksi *olume yang sama dai
P;) dengan "aum miko#in"eksi ditambah PPA ligasi! * P L8,81! Dii, 1, 1<#dio+tade+yl#7,
7, 7 <, 7<#tetamethylindo+abo+yanine pekloatH Dii#hM)Cs, D%%#belabel sel batang
mesen+hymal manusiaH %CA, atei kaotis intenalH MCAO, oklusi atei seebiH m&)),
dimodi'ikasi sko kepaahan neuologiH PPA, atei pteygopalatine!
F-,! .#"6##$ *: G#"6#r S* distibusi MSC7.. 18
2
Dii#hM)Cs disuntikkan ke dalam
%CA kii dengan "aum miko#in"eksi ditambah PPA ligasi (Mi#&), "aum in"eksi %CA
tanpa PPA ligasi (%CA#&) atau "aum miko#in"eksi tanpa PPA ligasi (PPA) pada tikus
dengan kii MCAO!)egea setelah tansplantasi sel, blok dai "aingan otak di bagian kii
$ilayah MCA#dipasok pe tikus dipanen dan di+ena ke dalam suspensi sel tunggal, yang
men"adi sasaan analisis di ba$ah mikoskop 'luoesensi untuk kehadian D%%#hM)Cs
(meah) di masing#masing bidang! (A) ;idang mikoskopis pe$akilan dai masing#
masing kelompok akan ditampilkan!&u+lei di$anai dengan ,oe+hst (biu)! (;)
Penghitungan D%%#hM)Cs di suspensi sel tunggal dalam "umlah tetentu "aingan (n J 0)!
H#7-, $!ur0,0/-7
?ingkat kepaahan +a+at neuologis die*aluasi pada tikus dengan MCAO setelah
tansplantasi hM)Cs menggunakan metode yang bebeda! )ebelum MCAO, sko
m&)) menun"ukkan bah$a tidak ada +a+at neuologis di salah satu tikus! )atu
hai setelah MCAO dan sebelum tansplantasi M)C, tidak ada pebedaan
signi'ikan yang ditemukan dalam sko m&)) antaa kelompok#kelompok
(:amba 0 C, P, 8,81, n J 1)! &amun, pada 11 dan 10 hai pas+a MCAO, tikus
yang telah meneima hM)Cs melalui miko#"aum kon*ensional ditambah PPA
ligasi atau "aum %CA menun"ukkan pebaikan yang signi'ikan dalam 'ungsi
neuologis sepeti yang ditun"ukkan oleh m&)) dibandingkan dengan tikus yang
hanya meneima suntikan P;) (:amba 0 C, P L8,81, n J 1)! ?idak ada
pebedaan yang signi'ikan dalam m&)) antaa tikus disuntik dengan miko#"aum
kon*ensional ditambah PPA ligasi dan tikus disuntik dengan "aum %CA
(:amba 0 C, P, 8,81, n J 1)!
D-78u7-
Model tikus MCAO telah men"adi model yang paling umum digunakan dalam
studi stoke! 9ntuk men+apai distibusi maksimum sel induk atau obat#obatan ke
"aingan otak iskemik setelah melahikan ke %CA, A(P tesumbat dalam model,
meskipun oklusi yang saat ini dianggap tidak pelu untuk pembentukan model
MCAO! (aena kesulitan teknis dalam melaksanakan PPA oklusi dan komplikasi
selan"utnya, peneapan model MCAO dalam penelitian telah sangat
tebatas!Dalam studi ini, kami mengembangkan sebuah "aum suntik %CA yang
di'asilitasi pengiiman mudah dan e'isien dai sel#sel induk untuk otak MCAO
melalui %CA tanpa pelu PPA oklusi!
Menuut metode untuk 'ilamen penyisipan dalam model MCAO - 18 , 11 ., kami
mengu"i dua ute untuk penyisipan "aum suntik %CA! )alah satunya dai tunggul
atei kaotid ekstenal, dan yang lain dai atei kaotis! Dai kedua ute, "aum
in"eksi %CA dengan mudah ma"u ke PPA! Dai meeka, penyisipan dai tunggul
atei kaotis ekstenal lebih disukai, kaena alian daah di kedua kaotid umum
dan %CA dapat dipetahankan selama poses tansplantasi sel induk seluuh, dan
hanya atei kaotid ekstenal tetap diikat setelah opeasi! )tudi tebau
menun"ukkan bah$a pelestaian alian daah pada atei kaotid umum dan %CA
menyebabkan peubahan minimal dalam alian daah otak selama in"eksi inta#
%CA dan tidak menyebabkan komplikasi tomboemboli, sehingga sangat
meminimalkan pengauh bedah pada he$an - 4 , 11 , 12 .!
M)C adalah sel induk multipoten mampu membedakan ke#dan mesodem
"aingan nonmesodem dituunkan - 17 , 13 # 15 .! Meeka telah diidenti'ikasi
dalam bebagai "aingan dan +endeung untuk bepatisipasi dalam pemelihaaan
elung sel induk dan homeostasis "aingan - 28 , 21 .!?ansplantasi M)C telah
ditun"ukkan untuk meningkatkan pebaikan dan egeneasi dai bebagai "aingan,
temasuk meeka yang tekena dampak stoke - 1 , 22 .! )elain itu, M)C memiliki
imunogenisitas endah dan menun"ukkan si'at peatuan kekebalan
tubuh - 27 .! 9ntuk alasan ini, M)C mun+ul sebagai agen teapi yang sangat
men"an"ikan untuk bebagai penyakit! Dalam studi ini, kita dengan mudah
disuntikkan hM)Cs ke %CA pada tikus dengan MCAO dan epe'usi
menggunakan "aum suntik %CA yang dibloki sementaa alian daah ke PPA,
sehingga memudahkan masuknya maksimum dai sel induk ke dalam otak yang
usak! Memang, kami menemukan "umlah yang sama D%%#hM)Cs di otak tikus
yang meneima D%%#hM)Cs disuntik dengan "aum suntik %CA tanpa PPA ligasi
yang behubungan dengan pebaikan seupa dalam 'ungsi neuologis
dibandingkan dengan tikus yang meneima D%%#hM)Cs disuntik dengan miko#
in"eksi "aum ditambah PPA ligasi! Pada pinsip yang sama, banyak "enis lain sel,
sepeti sel#sel induk saa', dan obat#obatan dapat disampaikan dengan "aum ini
sehingga memungkinkan distibusi ditagetkan dai meeka ke otak usak! )elain
itu, sebagai "aum suntik %CA tidak membloki alian daah di %CA, dapat
digunakan untuk membeikan sel atau obat#obatan ke dalam pembuluh daah otak
tanpa menyebabkan iskemia otak!
K!7-"&u,#$
Dalam studi ini, kami mengembangkan sebuah "aum suntik %CA sesuai dengan
'itu anatomi dai %CA dan PPA! 6aum memiliki u"ung tetutup untuk menutup
"alan PPA dan pembukaan lateal membeikan sel induk men"adi %CA! Data kami
menun"ukkan bah$a "aum mem'asilitasi pengiiman mudah dan e'isien dai sel
induk men"adi %CA dan selan"utnya ke daeah MCA#dipasok dai otak tanpa pelu
PPA ligasi, sehingga menghindai kesulitan teknis dan komplikasi dilihat dengan
PPA ligasi!
S-$/8#.#$
(D) M/M: (Dulbe++o <s) diubah menengah /agleH CCA: atei kaotis umumH Dii:
1, 1<#dio+tade+yl#7, 7, 7 <, 7<#tetamethylindo+abo+yanine pekloatH Dii#hM)Cs:
D%%#belabel sel batang mesen+hymal manusiaH /CA: atei kaotis
ekstenalH %CA: atei kaotis intenalH MCA: atei seebal ?engahH MCAO:
oklusi atei seebal ?engahH m&)): Modi'ikasi neuologis )e*eity )koH M)Cs:
sel induk Mesen+hymalH P;): Fos'at#bu''eed salineH PPA: atei pteygopalatine!
B!r7#-$/ 8!&!$.-$/#$
Paa penulis menyatakan meeka tidak memiliki kepentingan besaing!
P!$u,-7 K0$.r-6u7-
>: disusun dan dian+ang penelitian, menyiapkan model MCAO dan suntikan,
membeikan pea$atan he$an dan melakukan akuisisi data, analisis dan penulisan
naskah dan e*isi! 6F: membeikan pea$atan he$an dan melakukan akuisisi
data! )M dilakukan isolasi dan ekspansi M)C! =N dan OOM dilakukan pesiapan
sampel, enti data dan menulis naskah! Penelitian dilakukan di laboatoium =6M
dan dia betanggung "a$ab untuk penga$asan penelitian dan naskah penulisan
dan e*isi! )emua penulis memba+a dan menyetu"ui naskah akhi!
U9#&#$ T!r-"# K#7-
(aya ini didukung oleh dana dai =ayasan %lmu Pengetahuan Alam China (&o
78431237, 78531052, 91872887), yang <427 Poyek <dai Depatemen %lmu dan
?eknologi PE China (&o! 2811AA828114) dan %no*asi )henDhen )ains dan
?eknologi (omite (6C281881248153A, :6,N28128210150211523 dan
6C=628178082101882753) ke = Mu!
R!1!r!$7-
1! 9++elli A, >aoni A, Feedman M): Mesen+hymal stem +ells 'o the
teatment o' multiple s+leosis and othe neuologi+al diseases! >an+et
&euol 2811, 18:205P212!
2! >ee E,, Pulin AA, )eo M6, (ota D6, =lostalo 6, >ason ;>, )empun#
Pieto >, Dela'ontaine P, Po+kop D6: %nta*enous hM)Cs impo*e
myo+adial in'a+tion in mi+e be+ause +ells emboliDed in lung ae
a+ti*ated to se+ete the anti#in'lammatoy potein ?):#2! Cell )tem Cell
2885, 1:10P27!
7! ?oma C, Magne ME, ;o$y ), )+h$atD A, Killanue*a F: Fate o'
+ultueeGpanded mesen+hymal stem +ells in the mi+o*as+ulatue! Ci+
Ees 2885, 180:754P082!
0! Mu =, Nhao EC: ?he ole o' +hemokines in mesen+hymal stem +ell
homing to myo+adium! )tem Cell Ee* 2812, 4:207P218!
1! Pendhaka AK, Chua 6=, Andes E,, Mang &, :aeta O, Mang ,, De A,
Choi E, Chen ), Eutt ;(, :ambhi )), :uDman E: ;iodistibution o'
neual stem +ells a'te inta*as+ula theapy 'o hypoGi+#is+hemia! )toke
2818, 01:2820P2838!
2! Mal+Dak P, Nhang 6, :ilad AA, (edDioek DA, EuiD#Cabello 6, =oung
E:, Pittenge MF, *an Ni"l PC, ,uang 6, ;ulte 6M: Dual#modality
monitoing o' tageted intaateial deli*ey o' mesen+hymal stem +ells
a'te tansient is+hemia! )toke 2884, 75:1125P1130!
3! >iu F, M+Cullough >D: Middle +eebal atey o++lusion model in
odents: methods and potential pit'alls! 6 ;iomed ;iote+hnol 2811,
2811:020381!
4! Chua 6=, Pendhaka AK, Mang &, Choi E, Andes E,, :aeta O, Nhang
6, Moseley M/, :uDman E: %nta#ateial in"e+tion o' neual stem +ells
using a mi+oneedle te+hniQue does not +ause mi+oemboli+ stokes! 6
Ceeb;lood Flo$ Metab 2811, 71:1227P1231!
5! Chen =, %to A, ?akai (, )aito &: ;lo+king pteygopalatine ateial blood
'lo$ de+eases in'a+t *olume *aiability in a mouse model o' intaluminal
sutue middle +eebal atey o++lusion! 6 &euos+i Methods 2884,
130:14P20!
18! >onga /N, Meinstein PE, Calson ), Cummins E: Ee*esible middle
+eebal atey o++lusion $ithout +anie+tomy in ats! )toke 1545, 28:40P
51!
11! >i N, >iu C, Oie N, )ong P, Nhao EC, :uo >, >iu N, Mu =: /pigeneti+
dysegulation in mesen+hymal stem +ell aging and spontaneous
di''eentiation! P>o) One 2811, 2:e28122!
12! Mu =, %p 6/, ,uang 6, Nhang >, Matsushita (, >ie$ CC, Patt E/, DDau
K6:/ssential ole o' %CAM#1CCD14 in mediating /PC e+uitment,
angiogenesis, and epai to the in'a+ted myo+adium! Ci+ Ees 2882,
55:711P722!
17! Mu =, Chen >, )+ott P:, ?edget //: Mesen+hymal stem +ells enhan+e
$ound healing though di''eentiation and angiogenesis! )tem Cells 2883,
21:2204P2215!
10! >i =, Chen 6, Mang >, >u M, Chopp M: ?eatment o' stoke in at $ith
inta+aotid administation o' mao$ stomal +ells! &euology 2881,
12:1222P1232!
11! Mitkai ;, (ekela /, &ystedt 6, (ohonen M, Mikkonen K, ,uhtala ?,
6olkkonen 6: %nta#ateial in'usion o' human bone mao$#dei*ed
mesen+hymal stem +ells esults in tansient lo+aliDation in the bain a'te
+eebal is+hemia in ats! /Gp &euol 2812, 275C:114P122!
12! 12! >undbeg 6, )odesten /, )undstom /, >e ;lan+ (, Andesson ?,
,emanson O, ,olmin ): ?ageted inta#ateial tansplantation o' stem
+ells to the in"ued C&) is moe e''e+ti*e than inta*enous administation:
enga'tment is dependent on +ell type and adhesion mole+ule eGpession!
Cell ?ansplant 2812, 21:777P707!
13! Po+kop D6: Mao$ stomal +ells as stem +ells 'o nonhematopoieti+
tissues! )+ien+e 1553, 232:31P30!
14! Pittenge MF, Ma+kay AM, ;e+k )C, 6ais$al E(, Douglas E, Mos+a 6D,
Mooman MA, )imonetti DM, Caig ), Mashak DE: Multilineage
potential o' adult human mesen+hymal stem +ells! )+ien+e 1555, 240:107P
103!
15! Moodbuy D, )+h$aD /6, Po+kop D6, ;la+k %;: Adult at and human
bone mao$ stomal +ells di''eentiate into neuons! 6 &euos+i Ees 2888,
21:720P738!
28! Chambelain :, FoG 6, Ashton ;, Middleton 6: Con+ise e*ie$:
mesen+hymal stem +ells: thei phenotype, di''eentiation +apa+ity,
immunologi+al 'eatues, and potential 'o homing! )tem Cells 2883,
21:2375P2305!
21! (eating A: Mesen+hymal stomal +ells: ne$ die+tions! Cell )tem Cell
2812, 18:385P312!
22! Mu =, Nhao EC, ?edget //: Con+ise e*ie$: bone mao$#dei*ed stem
pogenito +ells in +utaneous epai and egeneation! )tem Cells 2818,
24:581P511!27! 9++elli A, Moetta >, Pistoia K: Mesen+hymal stem +ells
in health and disease! &at Ee* %mmunol 2884, 4:322P372!