1

Buku Petunjuk Praktikum Biologi Oral II Tahun 2013-2014

PRAKTIKUM I

ISOLASI DNA RM


Tujuan :
1. Memahami definisi,aspek dari isolasi dan ekstraksi /isolasi DNA RM
2. Memahami Peran RM sebagai sources dari specimen pemeriksaan DNA
3. Melakukan ekstraksi dan isolasi DNA sederhana

Metode dan Cara Kerja :

1. METODE ISOLASI DNA DENGAN DNAZOL DARI SAMPEL SALIVA
a. Sampel saliva dimasukkan kedalam tabung sentrifus
b. Sampel disentrifus dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit
c. Supernatan hasil pemusingan dibuang
d. Endapan / pellet ditambah dengan DNAZol 1 cc kemudian divortex
e. Inkubasi selama 15 menit
f. Tambahkan chloroform 0,2 cc kemudian divortex
g. Centifuge 8000 rpm selama 15 menit
h. Ambil supernatan dengan hati-hati, lalu dimasukkan kedalam eppendorf tube
baru
i. Tambahkan isopropanol 0,5 cc, dihomogenkan dengan cara dibolak balik
dengan pelan.
j. Inkubasi 15 menit
k. Centrifuge 12.000 rpm selama 10 menit
l. Buang supernatan
m. Cuci pellet dengan etanol 70 % sebanyak 0,5 cc
n. Centrifuge 12.000 rpm selama 5 menit
o. Buang supernatan.
p. Pellet ditambah aquadest steril sebanyak 50 l.
2
Buku Petunjuk Praktikum Biologi Oral II Tahun 2013-2014





2. METODE ISOLASI DENGAN DNAZOL DARI SAMPEL DARAH
a. Ambil tabung sentrifus 15 cc dan masukkan reagen DNAZOL sebanyak 1 cc
b. Tambahkan darah 0,5 cc dan vortex dengan segera
c. Inkubasi selama 15 menit
d. Tambahkan chloroform 0,2 cc dan vortex
e. Inkubasi selama 15 menit
f. Sentrifus 8000 rpm selama 15 menit
g. Ambil supernatan dengan hati-hati, masukkan dalam tabung eppendorf baru
h. Tambahkan isopropanol 0,5 cc inkubasi selama 5 menit, kemudian bolak-balik
dengan pelan
i. Sentrifus 12.000 rpm selama 10 menit
j. Buang supernatan
k. Cuci pellet dengan ethanol 70% sebanyak 0,5 cc
l. Sentrifus 12.000 rpm selama 5 menit
m. Buang supernatan
n. Pellet ditambah DW sebanyak 50 ul.





3
Buku Petunjuk Praktikum Biologi Oral II Tahun 2013-2014
Pertanyaan :
1. Apakah yang dimaksud dengan isolasi dan ekstraksi DNA ?
2. Mengapa saliva dapat digunakan sebagai sampel DNA ?
3. Selain saliva, spesimen apa saja di Rongga Mulut yang dapat digunakan
sebagai bahan pemeriksaan DNA ?
4. Bagaimana prinsip dasar isolasi dan ekstraksi DNA ?
5. Jelaskan secara singkat metode ekstraksi DNA dalam praktikum ini beserta
alasan penggunaan bahan-bahan yang ada !

Hasil Praktikum dan Rangkuman :