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Cromatografa sobre Papel y en Capa Fina


Dugarte Analio
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(1) Laboratorio de Qumica Orgnica I, Departamento de Qumica, Facultad de
Ciencias, Universidad de los Andes, Mrida 5101, Venezuela.
(1) analioj@hotmail.com; analioj@gmail.com
Entregado: 19-01-2012.

Resumen
Se estudi experimentalmente la separacin e identificacin de diversas sustancias orgnicas como los
aminocidos, analgsicos y tintas de los marcadores, mediante la cromatografa de papel y en capa fina, la
cromatografa es una tcnica de separacin de una mezcla de solutos en solucin, donde una fase mvil desplaza los
componentes a travs de una fase estacionaria, que interacciona con los solutos; esta tcnica se utiliza en la qumica
orgnica y en muestras biolgicas. Encontrndose que los marcadores se separaron en sus pigmentos bases, los
aminocidos al reaccionar con la ninhidrina, se tornan de un color morado, los analgsicos se separaron mejor en el
solvente 12.1 Acetato de Etilo-cido Actico, y la muestra A contena cafena, las muestras B y C Acetaminofen.
Palabras Clave: Cromatografa; Aminocidos; Analgsicos; Pigmentos; Fase Estacionaria; Fase Mvil.

Abstract
The separation and identification of various organic substances such as amino acids, analgesics and marker inks
was studied experimentally by paper chromatography and thin layer chromatography, the chromatography is a
technique for separating a mixture of solutes in solution, where a phase mobile moves component through a stationary
phase, that interacts with the solutes; its used in organic chemistry and biological samples. Finding out that the markers
were separated in their pigment bases, the amino acids react with the ninhydrin, they turn a purple color, the
painkillers are better separated for the solvent 12.1 Acetic Acid-ethyl acetate, and the
sample contained caffeine, samples B and C acetaminophen.
Keywords: Chromatography; Amino Acids; Analgesics; Pigments; stationary phase; mobile phase.

Introduccin
La cromatografa es una tcnica de
separacin de una mezcla de solutos en
solucin, basndose en las diferencias relativas
de las velocidades, con que se mueven cada uno
de los componentes de la mezcla, a travs de un
medio slido poroso insoluble, y arrastrados
por un disolvente en movimiento.
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La cromatografa sobre papel es una de
las tcnicas cromatogrficas ms simples y
antiguas, la separacin se realiza sobre tiras u
hojas de papel de filtro, especialmente
elaborado. La fase estacionaria consiste en
molculas de agua absorbidas en las fibras de
papel y la fase mvil es el solvente, por lo
tanto, esta
cromatografa es
una tcnica de
particin lquido-
lquido. La fase
mvil, que se
mueve y arrastra a

los distintos componentes, permite que en el
sistema formado operan dos tipos de fuerzas:
fuerzas propulsoras y retardantes.
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Uno de los aspectos ms importantes de
la cromatografa, es que un sistema
cromatogrfico dado, el movimiento relativo de
un compuesto, con respecto al frente de
solvente, es una propiedad caracterstica y
reproducible. Se expresa como un valor R
f
.
1
El R
f
se define como:




La cromatografa en capa fina es una
tcnica de adsorcin slido-lquido, en donde la
fase estacionaria es slida y la fase mvil es
lquida. Se lleva a cabo sobre una capa delgada
uniforme de adsorbente adecuado, extendido
sobre una lamina de vidrio, y activada por un
calentamiento en un horno de 100 C. Influyen
dos factores, las fuerzas de atraccin entre los
solutos y los adsorbentes y las fuerzas que
tienden a separar todos los solutos.
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Ilustracin 1.
Cromatografa sobre Papel.
Constante de Rf.
1

2


Ilustracin 2. Cromatografa en Capa Fina. Separacin de
los Componentes.
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La cromatografa es una de las tcnicas
ms empleadas en las muestras complejas como
las sustancias biolgicas, por separar con una
gran eficiencia mezclas de aminocidos,
analgsicos y muchas molculas orgnicas.
2
Los aminocidos es la unidad bsica de
los pptidos o protenas, es decir, uno de los
componentes ms importantes para el desarrollo
para la vida; consisten en un grupo amino alfa o
beta, a un carboxilato.
2
Los analgsicos son compuestos que
tienen actividad biolgica, que se utilizan para
aliviar o eliminar el dolor en los organismos
vivos.
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Parte Experimental
Reactivos:
N-butanol, cido Actico, Agua
Desionizada, Etanol, Amoniaco, Lisina, cido
Asprtico, Metionina, Leucina, Ninhidrina,
Iodo, Cafena, Acetaminofen, cido
Acetilsalcilico y Acetato de Etilo.
1
Materiales:
Lpiz mongol, 2 escuadras grandes, 1
regla, marcadores negro y de colores, papel
filtro, Cilindro graduado de 250 mL, 2 clips,
tapn, Estufa, pipeta, capilar, Vasos de
precipitado de 800-1000 mL,12 placas de
vidrio, papel aluminio y vidrio de reloj.
1

Procedimiento Experimental:
Cromatografa sobre papel.
Cromatografa ascendente de tinta de
marcador:
a) El papel: maniplelo con mucho cuidado.
Determine la orientacin de la fibra del papel.
Corte una tira de papel de 23 x 2,5 cm (el lado
debe ser paralelo a la direccin de orientacin
de la fibra). Trace a 1 cm de uno de los
extremos una raya paralela al borde, (use lpiz
de grafito).
1
b) La muestra a aplicar: es tinta de marcador
negro. Se aplicar directamente con el
marcador, trazando una lnea de 1 cm de
longitud sobre la raya de grafito, a igual
distancia de los lados. Deje secar la tinta.
1
c) La cmara de desarrollo: (cubeta
cromatogrfica): la constituye un cilindro
graduado de 250 ml con un tapn
monohoradado.
1
d) El disolvente: es la fase orgnica de una
mezcla de n-butanol, cido actico y agua, en la
proporcin 4:1:5 (en volumen).
1

e) Procedimiento: con dos clips, suspenda la
tira de papel del tapn. Ajuste el tapn (con la
tira de papel suspendida) en la boca del cilindro
graduado. Suba o baje uno de los clips hasta
que el extremo de la tira de papel quede lo ms
cerca posible del fondo del cilindro (1 cm).
Retire el tapn con la tira de papel. Coloque el
disolvente en el cilindro procurando no mojar
las paredes, y en cantidad suficiente de manera
que toque ligeramente la tira de papel.
Introduzca la tira de papel y ajuste bien el
tapn. Asegrese que el nivel del disolvente no
est por encima del punto de aplicacin de la
muestra. La tira de papel debe quedar centrada;
evite que se pegue a las paredes del cilindro. Al
cabo de 2 y horas saque el cromatograma.
Marque inmediatamente el frente del
disolvente. Seque el cromatograma.
1
f) Anlisis del cromatograma: marque con un
lpiz el borde de cada mancha que observe a
simple vista. Ilumine el cromatograma con luz
ultravioleta. En caso de que aparezcan nuevas
manchas, delinee stas anotando el color que
presentan.
1
1.2.- Repita la cromatografa anterior, usando
como disolvente una mezcla de n-butanol,
etanol y amonaco 2N, en la proporcin 2:1:2
(en volumen). Analice el cromatograma y
compare los resultados con los obtenidos en el
cromatograma 1.
1
Cromatografa ascendente de aminocidos
a.- El papel: manipule el papel con mucho
cuidado. Evite todo contacto directo de los
dedos con el papel. Determine la orientacin de
3

la fibra y corte una pieza rectangular (22 x 12
cm) de papel. La direccin de la fibra debe ser
paralela al lado de 12 cm. Trace a 1 cm de cada
borde del lado ms grande una raya paralela.
(use lpiz de grafito). Sobre una de las rayas
marque trece puntos, con 1,5 cm de separacin
entre cada uno de ellos; el primero y el ltimo
deben quedar a 2 cm del borde:
1

b.- Las muestras a aplicar: son soluciones
de 4 aminocidos (3 mg/ml) en etanol-agua
(1:1) y extractos preparados de jugo de limn,
naranja y tomate. Con capilares finos (o
micropipetas) aplique las siguientes muestras:
punto N 1, dos gotas de solucin de lisina
(LYS), punto N 2, dos gotas de solucin de
cido asprtico (ASP), punto N 3, dos gotas de
solucin de metionina (MET) punto N 4, dos
gotas de solucin de leucina (LEU), punto N 5,
dos gotas de cada una de las soluciones de los
cuatro aminocidos, punto N 6, dos gotas de
extracto de jugo de limn, punto N 7, cuatro
gotas de extracto de jugo de limn, punto N 8,
dos gotas de extracto de jugo de naranja, punto
N 9, cuatro gotas de extracto de jugo de
naranja, punto N 10, dos gotas de extracto de
jugo de tomate, punto N 11, cuatro gotas de
extracto de jugo de tomate, punto N 12, tres
gotas de solucin de cada uno de los cuatro
aminocidos y punto N 13, tres gotas de
solucin de cido asprtico. Las manchas
aplicadas no deben tener un dimetro mayor de
2 cm. Deje secar cada gota antes de aplicar la
siguiente. Antes de introducir el papel en el
disolvente las manchas deben estar secas.
1
a. La cmara de desarrollo: La constituye un
vaso de precipitados de 800-1000 ml, el
cual, se cubre con un trozo de papel
aluminio.
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b. El disolvente: es el n-BuOH, AcOH, H
2
O
(4:1:5) usado en la primera cromatografa.
1

c. Procedimiento: En el vaso de precipitados
coloque 10 ml del disolvente y tpelo
hermticamente. Doble la pieza de papel
hasta obtener un cilindro. Una los extremos,
sin que estos se toquen, mediante tres
grapas. Introduzca el cilindro de papel en la
cmara de desarrollo; al cabo de dos horas
aproximadamente, el frente del disolvente
debe alcanzar 11 cm. Saque el
cromatograma e inmediatamente marque
con un lpiz el frente del disolvente. Seque
el cromatograma. Rocelo con la solucin
reveladora (ninhidrina al 0,5% en n-
butanol), y llvelo a la estufa (120 C)
durante 10 minutos. Marque con un lpiz el
borde de cada mancha.
1
d. Anlisis del cromatograma: Calcule el R
f
de
cada mancha. Tabule los resultados,
indicando el color y el R
f
de cada mancha,
as como el disolvente usado y la
temperatura. Por comparacin indique
cuantos aminocidos estn presentes en los
extractos de los jugos e identifique algunos
de ellos.
1

Cromatografa ascendente de varias tintas de
marcadores:
Repita la cromatografa 3. Use el mismo
disolvente. Las muestras a aplicar son tintas de
diferentes colores y marcas. La aplicacin se
hace directamente con el marcador. Analice el
cromatograma. Establezca si en tintas diferentes
de una misma marca hay colorantes iguales.
Establezca si tintas de marcas diferentes tienen
los mismos colorantes.
1
Experimentos de Cromatografa en capa fina.
Preparacin de las placas.
Lave bien con agua y jabn 12 placas de
vidrio (portaobjetos), escrralas y squelas
completamente sobre papel adsorbente. Evite
que a las placas se le pegue residuos del papel.
Adhiera dos placas y sujetndolas por uno de
sus extremos introdzcalas lentamente en una
suspensin de 60 gramos de gel de slice tipo G
en 150 ml de una mezcla de cloroformo -
metanol (2:1). Saque las placas lentamente con
velocidad continua; escurra la suspensin
sobrante en el extremo de la placa apoyando el
borde inferior de las placas en la pared del
envase que contiene la suspensin. Con un
movimiento de los dedos, despegue las placas.
Permita que el solvente se evapore y
proceda a limpiar con la punta del dedo el
exceso de adsorbente que se haya permanecido
en los bordes y en la superficie no cubierta de la
placa. Repita el proceso con las otras 10 placas
4

restantes. Active 10 de las placas en una estufa
a 120C durante 1 hora.
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Cmaras de desarrollo.
Lave bien y seque completamente los
envases que servirn como cmaras de
desarrollo. Coloque en su interior una banda de
papel de filtro que alcance para cubrir las 2/3
partes de las paredes internas de los envases.
1
En cada uno coloque un volumen de
solvente a usar tal que alcance una altura de
aproximadamente 3 mm sobre el fondo del
envase ( 5 ml). Tape el recipiente con un
crculo de papel aluminio o con un vidrio de
reloj y deje en reposo para permitir que el papel
de filtro interno se impregne completamente
con el solvente. Agregue ms solvente hasta
alcanzar el nivel inicial.
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Cmara de revelado con vapores de yodo.
Use un recipiente, lvelo bien y squelo
completamente. Coloque en su interior unos
cristales de yodo. Tape el envase y djelo en
reposo.
1
Aplicacin de las muestras.
Debe utilizar un capilar fino para cada
una de las soluciones a ser utilizadas. Llene el
capilar con la solucin a cromatografiar,
aplique una pequea cantidad de la solucin,
procurando que la mancha obtenida no tenga un
dimetro superior de 2mm. Evite romper la
capa de adsorbente con la punta del capilar. La
aplicacin debe hacerse a 6 mm
aproximadamente del extremo de la placa.
1

Cuando haya aplicado todas las muestras trace
una raya con un lpiz de grafito de punta fina
en el extremo opuesto de la placa a 3 mm
aproximadamente del borde del adsorbente.
Esto se consigue raspando el absorbente con la
punta del lpiz.
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Cromatografa de varios analgsicos.
Las muestras a analizar son soluciones
de cuatro analgsicos en cloroformo. Aplique
las muestras a intervalos de 5 mm, use un
capilar para cada solucin. Evite en todo
momento confundirlos, de lo contrario
contaminar las soluciones y los resultados
sern impredecibles. Placa N 1: primer punto:
2 gotas de solucin de cafena, segundo punto:
2 gotas de solucin de cido
Acetilsaliclico y tercer punto: 2 gotas de
solucin de Acetaminofen. Desarrolle el
cromatograma usando acetato de etilo como
solvente. Inmediatamente despus de obtenido
el cromatograma, localice las manchas usando
una lmpara Ultravioleta, mrquelas con un
lpiz y luego introduzca la placa en la cmara
de yodo y observe si aparecen nuevas manchas.
Placa N 2. Aplique las mismas soluciones que
us para la placa N 1. Use Heptano como
solvente. Placa N 3 Aplique las mismas
soluciones que us para la placa N 1. Use
Acetato de Etilo-cido Actico 12.1 como
solvente. Placa N 4. Aplique las mismas
soluciones que us para la placa N 1. Use
Acetato de Etilo-Etanol-cido Actico 25.1.1
como solvente. Placa N 5. Aplique las mismas
soluciones que us para la placa N 1.
1
Use une mezcla de como solvente
Acetato de Etilo-Etanol-cido Actico 7.3.1,2.
Placa N 6.
Aplique las siguientes muestras patrones
en una placa grande: primer punto: 2 gotas de
solucin de cido Acetilsaliclico, segundo
punto: 2 gotas de solucin de cafena, tercer
punto 2 gotas de solucin de Acetaminofen,
cuarto punto: 2 gotas de Muestra A, quinto
punto: 2 gotas de Muestra B y sexto Punto 2
gotas muestra C. Use como solvente aquel que
haya desarrollo el mejor cromatograma en las
cinco primeras placas.
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Observaciones Experimentales
Cromatografa de Tinta de Marcador Negro
El marcador negro se aplic sobre el
papel, luego, se sumergi ligeramente sobre el
solvente n-butanol, Acido Actico y amoniaco
4.1.5. Otro papel se meti sobre el solvente n-
butanol, etanol y amoniaco 2.1.2; obtenindose
a los segundos, en ambos casos, una separacin
de color azul sobre la mancha inicial del
marcador por el desplazamiento del solvente; al
final se separaron los colores carne, rojo,
amarillo, verde (solo Solvente 2.1.2), azul y
azul claro.
5

Cromatografa de
Tintas de
Marcadores a
color
Se recort
un papel
rectangular,
marcndose 13
colores diferentes;
al colocarlo en el
solvente se puede
observar la
separacin en
colores como
amarillos, rojo,
azul, azul claro,
rosado y amarillo
por la ascensin del
solvente.
Al aplicarles la
lmpara de UV el
color rosado se
volvi fluorescente.

Ilustracin 5.
Cromatografa sobre
Papel de Marcadores de
Colores



Aminocidos
Las soluciones de aminocidos,
extractos de limn, tomate y naranja son
incoloros. Se colocaron los puntos sobre el
papel, y el solvente 2.1.2 en el vaso de
precipitado; se vea el desplazamiento del
solvente por el papel y la separacin en los
diferentes colores. Se sac el papel cuando el
solvente llego casi al final.
Al aplicarle
Ninhidrina se
formaron
compuestos
coloreados violetas y
blancos.
Ilustracin 6.
Cromatograma sobre
Papel de Aminocidos

Capa Fina de Analgsicos
Se colocaron las manchas de cafena
Acetaminofen y cido Acetilsaliclico sobre las
5 placas y se agreg sobre el solvente; con la
lmpara de UV se observ el desplazamiento de
manchas de color violeta. Luego, se pas a una
cmara de iodo, se vio que una de las manchas
se tornaba de color marrn.
En una placa grande se colocaron 3 muestras
desconocidas, Acetaminofen, cafena y cido
Acetilsalcilico con el solvente que separo
mejor, observndose 3 manchas y otras 2 se
desplazaron la mismas distancias.

Ilustracin 7. Cromatografa
Capa Fina de Analgsicos
Acetaminofen, cafena y cido
Acetilsalcilico. (a) Solvente
Heptano (b) Solvente Acetato
de Etilo-Etanol 12.1 (c)
Acetato de Etilo-Etanol-cido
Actico 25.1.1 (d) Acetato de
Etilo (e) Acetato de Etilo,
Etanol y cido Actico 7.3.1,2.

Ilustracin 8. Capa Fina Analgsicos
Muestras (a) Cafena (b)
Acetaminofen (c) cido
Acetilsalcilico (d) Muestra A (e)
Muestra B (f) Muestra C. (Solvente
Acetato de Etilo-Etanol 12.1)

Resultados
Tabla N 01. Rf Cromatografa sobre Papel Marcador
Negro
Color Rf
Solvente 4.1.5 Solvente 2.1.1
Carne 0,02 0,06
Rojo 0,11 0,19
Naranja 0,27 0,40
Verde - 0,46
Azul 0,36 0,56
Azul Claro 0,54 0,74

Tabla N 02.Cromatografia sobre Papel Tintas de
Marcadores (solvente n-butanol, etanol y amoniaco 2.1.1)
Marcador Color Rf
Naranja Amarillo 0,07
Rosado 0,17
Carne Amarillo 0,04
Rosado Claro 0,17
Gris Amarillo 0,03
Rosado Claro 0,15
Azul Claro 0,52

















6

Morado (Marca
Faber Castell)
Azul 0,51
Rosado
Fosforescente
0,71
Rosado Amarillo 0,04
Rosado Claro 0,16
Rosado
Fosforescente
0,65
Verde

Amarillo 0,05
Azul Claro 0,53
Rojo Amarillo 0,07
Rosado 0,18
Azul Claro Azul Claro 0,52
Azul Azul Claro 0,51
Morado 0,66
Azul 0,7
Morado (Marca
Sharpie)
Rosa
Fosforescente
0,47
Rosado 0,76
Marrn Naranja 0,06
Rosado Claro 0,12
Rosado Oscuro 0,19
Azul Claro 0,52
Amarillo Amarillo 0,07
Negro Carne 0,05
Rosado 0,18
Naranja 0,32
Verde 0,38
Azul 0,53
Azul Claro 0,71

Tabla N 03. Cromatografa sobre Papel Aminocido
(solvente n-butanol, etanol y amoniaco 2.1.1)
Compuesto Asignacin Rf Color
Lisina Lisina 0,25 Morado
Acido
Asprtico (2
gotas)
cido Asprtico 0,1 Morado
Acido
Asprtico (4
gotas)
cido Asprtico 0,11 Morado
Metionina Metionina 0,5 Morado
Leucina Leucina 0,59 Morado
Mezcla de
Aminocidos
(2 gotas)
Lisina 0,11 Morado
cido Asprtico 0,28 Morado
Metionina 0,5 Morado
Leucina 0,62 Morado
Mezcla de
Aminocidos
(4 gotas)
Lisina 0,11 Morado
cido Asprtico 0,27 Morado
Metionina 0,5 Morado
Leucina 0,65 Morado
Extracto de
Limn (2
gotas)
cido
Asprtico/Prolina
0,1 Blanco
- 0,16 Morado
- 0,33 Morado
Extracto de
Limn (4
cido
Asprtico/Prolina
0,1 Blanco
gotas) - 0,16 Morado
- 0,31 Morado
Extracto de
Naranja (2
gotas)
Prolina 0,05 Blanco
cido Asprtico 0,11 Morado
Lisina 0,26 Morado
Extracto de
Naranja (4
gotas)
Prolina 0,06 Blanco
cido Asprtico 0,26 Morado
Lisina 0,26 Morado
Extracto de
Tomate (2
gotas)
Prolina 0,04 Blanco
cido Asprtico 0,10 Morado
- 0,22 Morado
- 0,32 Morado
Extracto de
Tomate (4
gotas)
Prolina 0,04 Blanco
cido Asprtico 0,11 Morado
- 0,21 Morado
- 0,33 Morado

Tabla N 04. Cromatografa Capa Fina de Analgsicos
Solvente Asignacin Rf Color
Heptano Acetaminofen,
Cafena y
cido
Acetilsaliclico
0 Violeta(UV)
Marrn (I)
Acetato
de Etilo
Acetaminofen 0,80 Violeta(UV)/
Marrn (I)
Cafena y
cido
Acetilsaliclico
0,46 Violeta (UV)
Acetato
de Etilo-
Etanol-
Acido
Actico
7.3.1,2
Acetaminofen 0,82 Violeta(UV)/
Marrn (I)
Cafena y
cido
Acetilsaliclico
0,55 Violeta (UV)
Acetato
de Etilo-
Etanol
12.1
Acetaminofen 0,33 Violeta(UV)/
Marrn (I)
cido
Acetilsaliclico
0,76 Violeta (UV)
Cafena 0,98 Violeta (UV)
Acetato
de Etilo-
Etanol-
Acido
Actico
25.1.1
Acetaminofen 0,75 Violeta(UV)/
Marrn (I)
Cafena y
cido
Acetilsaliclico
0,49 Violeta (UV)

Tabla N 05. Cromatografa Capa Fina de Analgsicos
Muestras A, B y C. (solvente n-butanol, etanol y
amoniaco 2.1.1)
Compuesto Asignacin Rf Color
Cafena Cafena 0,97 Violeta (UV)
Acido
Acetilsaliclico
Acido
Acetilsaliclico
0,94 Violeta (UV)
Acetaminofen Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/
Marrn (I)
7

Muestra A Cafena 0,97 Violeta (UV)
Muestra B Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/
Marrn (I)
Muestra C Acetaminofen 0,23 Violeta(UV)/
Marrn (I)

Anlisis de Resultados
Los marcadores estn compuestos por
muchos pigmentos, pueden ser acuosos, es
decir, el solvente utilizado para disolver los
pigmentos es agua. Al aplicar el marcador
negro sobre papel, los pigmentos, al ser
solubles en agua, se sitan sobre la humedad
del papel. Despus, cuando el solvente orgnico
comienza a subir por el efecto de capilaridad, se
forma sobre la humedad una capa u otra fase
lquida del solvente, es decir, se constituye una
particin liquido-liquido, donde una de las
fases, es el agua, que contiene los pigmentos, y
la otra, consiste en el solvente.
3,1
Los pigmentos son compuestos
orgnicos generalmente con anillos aromticos
fusionados con grupos funcionales polares, por
lo cual, tienen solubilidad en solventes
orgnicos y en medios acuosos. Entonces, en la
particin lquida-lquida debe existir una
competencia entre las dos fases, por los solutos,
por lo cual, se repartirn de acuerdo con la ley
de reparto, y a medida que el solvente va
subiendo por el papel, va desplazndolos, de
acuerdo a la estructura de dichos compuestos,
regenerando una nueva capa de solvente puro.
Por tal razn, se pueden ver como los
pigmentos ms afines al solvente orgnico
tienen un mayor Rf, ya que son arrastrados ms
fcilmente por el solvente.
4,1
Al comparar el solvente n-butanol,
Acido actico y agua 4.1.5 con el solvente n-
butanol, etanol y amoniaco 2.1.2, se pudo
observar una mejor separacin de los
pigmentos, con el solvente 2.1.2, por tener
mayores valores de Rf de los distintos
compuestos e incluso una mayor diferencia (ver
Tabla N 01). Esto ocurre, ya que los pigmentos
poseen distintas estructuras, ms afines a los
compuestos orgnicos, es decir, se desplazan
con mejor eficiencia en el solvente ms apolar.
Adems, las pequeas diferencias de grupos
funcionales polares entre los pigmentos,
permite que el solvente tenga una mayor
sensibilidad a la estructura del compuesto,
dando lugar a una mayor separacin de los
componentes. Demostrado por la separacin
del color verde (Solvente 2.1.2), que en el
solvente 4.1.5 no se observa.
Luego, al estudiar la cromatografa de
marcadores de distintos colores, se pudo ver
que estn compuestos por mezcla de los
mismos pigmentos (Principalmente rojo, azul
claro y amarillo), corroborndose por los
valores de Rf semejantes entre ellos (ver Tabla
N 02). Los distintos colores se forman por la
variacin en la concentracin de los
componentes, o el uso de otro pigmento de
diferente color.
3,1

El marcador morado (marca sharpie) no
posee como solvente agua, sino un solvente
orgnico; porque se desplaz la mancha de los
pigmentos con el frente de solvente, por lo
tanto, se puede decir que no se forma la
particin lquido-lquido entre la humedad del
papel, con los solutos, y el solvente. Los
pigmentos del Marcador Sharpie no son iguales
al marcador Faber Castell, por tener valores de
Rf distintos (Ver Tabla N 02) y colores
diferentes.
Se separ mediante la cromatografa
sobre papel, una mezcla de 4 aminocidos, de
cido asprtico, metionina, lisina y leucina,
comparndolos con muestras patrones. Se
encontr para la Lisina un valor de Rf de 0,28,
el Acido Asprtico 0,11, la Metionina 0,5 y la
Leucina 0,62, con respecto a los patrones son
resultados exactos. El valor mayor de Rf fue
para la leucina, y el menor el acido asprtico;
esto ocurri por la polaridad del solvente, es
poco polar, y los aminocidos estudiados como
la leucina poseen una estructura mas apolar,
con el grupo isobutilo, por lo tanto, se desplaza
mejor en el solvente que la metionina, lisina y
acido asprtico. En cambio, la metionina tiene
un tomo de azufre en el grupo R, la lisina un
grupo amino y el cido asprtico un grupo
carboxilato, que le dan cierta polaridad.
Entonces, como el grupo carboxilato es mas
polar se desplaza menos en el solvente, por tal,
su valor bajo de Rf.
5
8

Ilustracin 10. Aminocidos estudiados.
El extracto de limn contena cido
asprtico, de acuerdo al valor de Rf de 0,11
encontrado, y Prolina por la formacin con
ninhidrina de un complejo de color blanco.
6
En
el extracto de naranja se encontr la presencia
de Prolina, cido asprtico y lisina, con valores
de Rf del cido Asprtico de 0,11, lisina 0,26 y
el complejo blanco con ninhidrina, al
compararlo con los patrones tomados, son
resultados muy exactos.
7
El extracto de tomate
est compuesto por Prolina y acido asprtico,
por obtenerse un valor de Rf de 0,11 acido
asprtico y color blanco del primer punto,
caracterstico de la Prolina.
8

La adicin de un exceso de la muestra a
cromatografiar, afecta ligeramente a los valores
de Rf, ya que la mancha es ms grande y puede
perder ms fcilmente la forma, lo cual dificulta
tomar la distancia de la mancha, por
consiguiente, el valor de Rf no es muy exacto.
La cromatografa de capa fina permite
determinar con mucha mayor precisin los
componentes de las muestras, al aplicar la
muestra sobre la placa, ocurre una interaccin
entre los compuestos y el adsorbente
denominada adsorcin, se forma una particin
slido-lquido. Cuando el solvente sube, los
compuestos comienzan a ser desplazados,
dependiendo de la fuerza de adsorcin y la
solubilidad de los solutos, siendo liberados
hacia el flujo de solvente.
1

El solvente que mejor separa la mezcla
de analgsicos, cafena, acido Acetilsalcilico y
Acetaminofen, fue el Acetato de Etilo-Etanol
12.1, por poseer una polaridad determinada,
necesaria para solubilizar diferencialmente a los
3 compuestos, los cuales, son polares.
1
Ilustracin
11.
Analgsicos
Estudiados.


La muestra A es la cafena, ya que posee
un valor de Rf de 0,97. Mientras, la muestra C
y B eran Acetaminofen, por el valor de 0,23 de
Rf; al compararlas con los patrones estudiados.
(Ver Tabla N 05). Al aplicarles radiacin UV a
las placas, los orbitales moleculares de la
muestras interaccionan con la radiacin, por
tener grupos cromforos (carbonilos, aminas) y
enlaces , ocurriendo la transicin electrnica

*
, que se transforma en la liberacin de
energa, en forma de luz violeta. Luego, al
introducirlas en la cmara de iodo, las muestras
reaccionan formando complejos con iodo
coloreados.
Conclusin
La cromatografa sobre papel se basa en
la separacin en una particin lquido-lquido,
mientras la cromatografa en capa fina consiste
en una particin slido-lquida. Los marcadores
estn compuestos por una serie de pigmentos,
los cuales, son compuestos aromticos, que se
separan mejor en un solvente apolar. Los
extractos de tomate y limn contienen cido
Asprtico y Prolina, en cambio el extracto de
naranja posee cido Asprtico, Prolina y
Leucina. Los aminocidos al reaccionar con la
ninhidrina se forman complejos violetas, a
excepcin de la Prolina que se torna blanco.
Las frutas contienen aminocidos entre sus
componentes principales. La muestra A
contiene Cafena, la muestra B y C
Acetaminofen.
Referencias Bibliogrficas
1) Uzcategui N. Manual de Laboratorio de
Qumica Orgnica IA. Mrida, Venezuela.
Cromatografa sobre Papel y Capa Fina.
2) Mathews Christopher. Bioqumica. Madrid,
Espaa. Introduccin a las Protenas. Editorial
Pearson/Addison Wesley. (2002)
3) Tintas de Marcadores.
http://www.quiminet.com/pr4/TINTA%2BPAR
A%2BMARCADORES.htm
4) Pigmentos.
http://es.wikipedia.org/wiki/Pigmento
5) Laguna, J. Bioqumica. (1968). Segunda
Edicin. Editorial Fournier S.A. Mxico D.F.
6) Aminocidos del Limn.
http://alimentos.org.es/aminoacidos-limon
7) Aminocidos de la Naranja.
http://alimentos.org.es/aminoacidos-naranja
8) Aminocidos del Tomate.
http://alimentos.org.es/aminoacidos-tomate
9) Analgsicos.
http://es.wikipedia.org/wiki/Analg%C3%A9sico
O
NH
2
C H
3
CH
3
OH
Leucine (Leu)
O
NH
2
S
C H
3
OH
Methionine (Met)
Lysine (Lys)
O
NH
2
N H
2
OH OH
O H
NH
2
O
O
Aspartic
Acid (Asp)
O O
CH
3
O OH
cido Acetilsalcilico
CH
3
C H
3
CH
3
O
O
N N
N
N
Cafena
O H
NH O
CH
3
Acetaminofen