PENDAHULUAN
A. Tujuan Praktikum
1. Mengetahui cara pemeriksaan air
2. Mengetahui jenis pemeriksaaan air semi kuantitatif dengan metode
MPN (Most Probable Number)
3. Mengetahui langkah-langkah pemeriksaan air dengan metode .1.1
!. Mengetahui cara membaca hasil pemeriksaan air dengan metode .1.1
. Mengetahui tingkat pencemaran total koliform
B. Manfaat Praktikum
1. Mengetahui perbedaan cara pemeriksaan air
2. "apat mengaplikasikan cara pemeriksaan air dengan metode MPN
(Most Probable Number)
3. "apat melaksanakan pemeriksaan air dengan metode .1.1
!. "apat membaca hasil pemeriksaan air dengan metode .1.1
. "apat mengetahui sampel tercemar koliform atau tidak
1
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Pemeriksaan Air
Pemeriksaan air secara mikrobiologis sangat penting dan dapat
dilakukan terhadap semua jenis air #ang ada$ terutama dilakukan untuk
menentukan standar kualitas air. Mengingat bah%a air merupakan sumber
kehidupan #ang utama bagi semua makhluk hidup. Pencemar biologis #ang
mungkin terdapat dalam air$ minuman atau makanan$ terutama adalah
mikroorganisme pen#ebab pen#akit (patogen)$ penghasil racun atau #ang
dikenal sebagai pencemar. Pemeriksaan air secara mikrobiologis baik
secara kualitatif maupun secara kuantitatif dapat dipakai sebagai pengukur
derajat pencemaran. &elain adan#a mikroorganisme dalam air$ juga adan#a
bahan organic perlu mendapat perhatian sebab jumlah bahan organik #ang
mencemari air sangat mempengaruhi kesuburan pertumbuhan
mikroorganisme.
'akteri golongan coliform din#atakan sebagai bakteri indikator
pencemaran air. (ehadirann#a dalam air terutama air sumber M)( sangat
tidak diharapkan. "alam pemeriksaan bakteri golongan coliform ada dua
macam$ #aitu bakteri golongan coliform non fekal dan bakteri coliform fekal.
)oliform non fekal berasal dari he%an atau tanaman #ang sudah mati$
misaln#a Enterobacter aerogenes. &edangkan coliform fekal berasal dari
kotoran manusia dan he%an$ misaln#a Escherichia coli. *ntuk mengetahui
jumlah coliform dalam suatu sampel dapat digunakan metode +umlah
perkiraan terdekat (+P,) bakteri coliform.
Prinsip dari metode ini adalah fermentasi laktosa selama 2! jam oleh
bakteri coliform #ang akan menghasilkan asam dan gas #ang tertangkap
oleh tabung "urham dalam tabung uji. 'akteri coliform memilki kemampuan
menguraikan laktosa sebagai sumber karbonsedangkan kelompok mikroba
usus #ang lain tidak. &ebagai indikator adan#a proses penguraian laktosa
menjadi asam$ maka ke dalam medium ditambahkan indikator bromcressol
purple ('cp) #ang ber%arna ungu dalam keadaan netral dan ber%arna
2
kuning dalam suasana asam. *ji kualitatif coliform secara lengkap terdiri
dari tiga tahap$ #aitu uji penduga$ uji penguat$ dan uji lengkap. -asil
pengujian uji lengkap$ selain membuktikan uji pertama juga dapat
menentukan jenis bakteri coliform #ang terdapat dalam sampel.
1
B. Pemeriksaan Air dengan Metde MPN !Mst Pr"a"#e Num"er$
Most Probable Number dalam bidang kesehatan mas#arakat dari
mikrobiologi pangan$ dipergunakan secara luas untuk menghitung jumlah
bakteri #ang ada dalam bahan pangan. Media ini ban#ak digunakan untuk
menghitung bakteri patogenik dalam jumlah sedikit #ang terdapat dalam
bahan pangan. Metoda ini berdasarkan atas pengenceran. .pabila suatu
larutan #ang mengandung sel-sel mikroorganisme diencerkan terus-
menerus$ akhirn#a akan diperoleh suatu larutan dimana tidak dijumpai sel
lagi #aitu dikatakan steril.
2
Metode MPN digunakan medium cair di dalam tabung reaksi$ dimana
perhitungan dilakukan berdasarkan pada jumlah tabung #ang positif #aitu
#ang ditumbuhi oleh jasad renik setelah inkubasi pada suhu dan %aktu
tertentu. Pengamatan tabung #ang positif dapat dilihat dengan mengamati
timbuln#a kekeruhan$ atau timbuln#a gas di dalam tabung kecil (tabung
"urham) #ang diletakkan pada posisi terbalik$ #aitu untuk jasad renik
pembentukan gas. *ntuk setiap pengenceran pada umumn#a digunakan
tiga atau lima seri tabung. /ebih ban#ak tabung #ang digunakan
menunjukkan ketelitian #ang lebih tinggi$ tetapi alat gelas #ang digunakan
juga lebih ban#ak.
3
(euntungan dari metode MPN ini adalah
2
0
1. "apat dibuat sangat peka dengan penggunaan 1olume inokulum contoh
#ang lebih besar dari 1$2 m/3tabung.
2. 'ahan - bahan dapat dipersiapkan untuk tugas lapangan.
3. Media pertumbuhan selektif dapat digunakan untuk menghitung jenis
mikroorganisme #ang diharapkan di antara jenis-jenis lainn#a #ang ada
dalam bahan pangan tersebut.
3
(erugiann#a adalah dibutuhkann#a ban#ak ulangan untuk diperoleh
hasil #ang teliti dan sehubungan dengan hal tersebut ban#ak bia#a dan
%aktu #ang dibutuhkan untuk persiapann#a.
2
4ambar 1. Metode MPN (Most Probable Number)
&umber 0 google.com
%. Pemeriksaan Air dengan MPN !Mst Pr"a"#e Num"er$ Metde &.'.'
*ji kualitatif koliform secara lengkap terdiri dari 3 tahap$ #aitu uji dugaan$ uji
penetapan dan uji pelengkap.
!
Me!tode pengujian #ang digunakan adalah
metode MPN (Most Probable Number) atau +umlah Perkiraan ,erbatas
(+P,).
&alah satu metode MPN (Most Probable Number) #ang ada dalah dengan
metode 1 1$ #aitu metode MPN #ag menggunakan 5 tabung reaksi
dengan ketentuan 0
1. tabung reaksi diisi /' 6 durham dengan 12 cc sampel
2. 1 tabung reaksi diisi /' 6 duham dengan 1 cc sampel
3. 1 tabung reaksi diisi /' 6 duham dengan 2$1 cc sampel
4
D. Bakteri K#ifrm
(oliform merupakan suatu grup bakteri #ang digunakan sebagai
indikator adan#a polusi kotoran dan kondisi #ang tidak baik terhadap air$
makanan$ susu dan produk susu. (oliform sebagai suatu kelompok
dicirikan sebagai bakteri berbentuk batang$ 4ram negatif$ tidak membentuk
spora$ aerobic dan anaerobic fakultatif #ang memfermentasikan laktosa
dengan menghasilkan asam dan gas dalam %aktu !7 jam pada suhu 3
2
).
.dan#a bakteri koliform di dalam makanan atau minuman menunjukkan
kemungkinan adan#a mikroba bersifat enteropatogenik dan atau toksigenik
#ang berbaha#a bagi kesehatan. 'akteri koliform dapat dibedakan menjadi
2 grup$ #aitu 0
1. (oliform fekal$ misaln#a E.coli #ang bila terdapat di dalam air minum
menunjukkan bah%a air minum itu pernah terkontaminasi feses
manusia dan mungkin dapat mengandung patogen usus.
2. (oliform non fekal$ misaln#a Enterobacter aerogenes #ang biasan#a
ditemukan pada he%an atau tanaman-tanaman #ang telah mati.
*ntuk mengetahui jumlah koliform dapat digunakan metode MPN (Most
Probable Number). Pemeriksaan kehadiran bakteri coli dari air dilakukan
berdasarkan penggunaan medium kaldu laktosa #ang ditempatkan di dalam
tabung reaksi #ang berisi durham. *ji kualitatif koliform secara lengkap
terdiri atas 3 tahap$ #aitu 0
1. *ji Penduga (Presumptive Test)
*ji pendugaan adalah uji khas bakteri coliform dengan menggunakan
media laktosa$ di mana bakteri mampu menggunakan laktosa sebagai
sumber karbon ditandai dengan terbentukn#a asam dan gas #ang dapat
dideteksi dengan indikator tertentu$ sedangkan untuk mendeteksi
adan#a gas digunakan tabung durham terbalik$ hasil positif #ang
ditandai dengan terbentukn#a asam dan gas.
2. *ji Penguat (Confirmed Test)
-asil uji dugaan dilanjutkan dengan uji ketetapan. "ari tabung #ang
positif terbentuk asam dan gas terutama pada masa inkubasi 1 8 2!
jam$ suspense ditanamkan pada media 9osin Meth#len 'iru .gar
(9M'.) secara aseptic dengan menggunakan jarum inokulasi. (oloni
5
bakteri 9.coli tumbuh be%arna merah kehijauan dengan kilat metalik
atau koloni be%arna merah muda dengan lender untuk kelompok
koliform lainn#a.
3. *ji Pelengkap (Completed Test)
"ari koloni #ang be%arna pada uji ketetapan diinokulasikan ke dalam
medium kaldu laktosa dan medium agar miring Nutrient .gar (N.)
dengan jarum inokulasi secara aseptic. "iinkubasi pada suhu 35
2
)
selama 1 8 2! jam. 'ila hasiln#a positif terbentuk asam dan gas pada
kaldu laktosa$ maka sampel positif mengandung E.coli. "ari media N.
dibuat pe%arnaan 4ram di mana E.coli menunjukkan 4ram negatif$
berbentuk batang pendek.
!. *ji :dentifikasi
"engan melakukan reaksi :M;:) (:ndole$ Meth#l <ed$ ;oges
Proskauer$ )itrat).