Anda di halaman 1dari 4

Metode Novel untuk Mempersiapkan Slides Histologi Tanpa

Sebuah Mikrotom
Ringkasan
Sebuah penelitian dilakukan untuk menentukan apakah itu mungkin untuk
mempersiapkan bagian jaringan pada slide tanpa menggunakan penanaman paraffin, penyayatan
dengan mikrotom, atau penyayatan jaringan beku yang melibatkan peralatan dan pelatihan yang
tidak selalu tersedia untuk para sarjana atau profesional yang ingin memeriksa jaringan
mikroskopis.
Setelah mengevaluasi berbagai reagen yang berbeda, peralatan untuk memotong dan
dukungan yang solid, kami mengembangkan metode yang melibatkan penerapan lem super ke
slide, diikuti sebuah sayatan jaringan itu, pemotongan jaringan dengan sekali pakai pisau
mikrotom, pewarnaan jaringan dan menghapus super-lem dengan produk yang tersedia secara
komersial. Bagian ini mirip dengan yang dipotong pada mikrotom, tapi waktu dan kualitasnya
tidak sama. Namun, struktur preparat yang diawetkan dan morfologi sel individu biasanya baik.
Kami menyimpulkan bahwa ini adalah metode yang layak untuk mempersiapkan jaringan
histology tanpa menggunakan menggunakan mikrotom atau jaringan beku, sesuatu yang dulu
dianggap mustahil. Kami telah dijuluki metode 'RAMP' (cepat Prosedur Adhesive-Mediated).
Pengantar
Penanaman parafin dan penyayatan jaringan dengan mikrotom adalah proses panjang
yang melibatkan peralatan mahal dan membutuhkan pelatihan khusus (Lillie dan Fullmer, 1976;
Sheehan dan Hrapchak, 1980). Penukar jaringan otomatis secara rutin digunakan untuk
melakukan dehidrasi, penjernihan dan penanaman parafin, dan waktu yang dibutuhkan biasanya
lebih dari 12 jam. Mikrotom kemudian digunakan untuk membuat sayatan jaringan dengan tebal
4-10 m, yang diikuti dengan slide kaca. Pendekatan lain penyayatan jaringan beku - jauh lebih
cepat tetapi juga membutuhkan peralatan yang mahal dan personil terlatih.
Ada saatnya ketika itu akan berguna untuk mempersiapkan histologi slide, tetapi biaya
dan waktu yang terlibat dengan metode tradisional tersebut tidak dapat dibenarkan. Laporan ini
rincian pembangunan dari metode baru, sederhana, cepat dan murah untuk persiapan slide
histologi tanpa penanaman paraffin dan penyayatan dengan mikrotom.
Bahan dan Metode
Setelah mencoba prosedur menggunakan berbagai perekat yang berbeda, pisau dan
mendukung padat, metode yang sangat sederhana muncul. Sebuah kelompok dari perekat super
yang transparan (misalnya Quicktite Super Glue, Locktite Corp, Rocky Hill, CT, USA) disikat
pada kaca obyek yang bersih, yang dengan cepat terbalik dan lembut jaringan diletakkan pada
blok tipis (tebal 1-2 cm) (Gambar 1a, b). Setelah memegang slide yang kokoh di ujung jaringan
selama 10 detik ditempatkan tegak dan dibiarkan kering selama 2-3 menit (Gambar 1c). Sebuah
alat pemotong, yang terdiri daripisau mikrotom yang dipakai melesat ke bilah pisau dempul
(Gambar 1d) dilewatkan sepanjang permukaan perekat sekitar 20 (Gambar 1e), mengakibatkan
jaringan tipis (10-20 m) yang tersisa pada slide. Langkah ini membutuhkan beberapa latihan.
Slide ditempatkan pada blok ditinggikan sehingga kepala baut melampirkan pisau sekali pakai
tidak mengganggu memotong. Proses pemotongan dapat diulang jika bagian tampak terlalu tebal
(ketebalan yang tepat menghasilkan pucat, spesimen dipotong tipis sehingga sulit untuk
membedakan dari perekat)
Slide kemudian biasanya diwarnai dengan dimodifikasi (disingkat) (H & E) metode
hematoksilin dan eosin (Gambar 1f) yang memanfaatkan dimodifikasi Mayer hematoksilin
(Hematoksilin QS; Vector, Burlingame, CA, USA) yang memperpendek waktu pewarnaan untuk
langkah hematoksilin sampai 40 detik atau kurang dan tidak memerlukan langkah bluing
berikutnya. Setelah bilas dengan air, slide ditempatkan dalam etanol 80% selama 1 menit, dalam
asam eosin Y (Fisher, Pittsburgh, USA) selama 1 menit diikuti oleh dua immersions 1-min
masing-masing dalam 90% dan etanol 100%. Untuk mencegah hilangnya sayatan selama
langkah berikutnya, klip pengikat kecil diikat di atas akhir slide sehingga ujung atasnya dijepit di
tepi jaringan untuk menahannya di tempat aman (Gambar 1g). Atau, coverslip plastik sekali
pakai dapat ditempatkan di atas bagian tersebut dan diadakan di tempat oleh klip kertas. Hal ini
kemudian direndam dalam wadah dari superglue remover (Perintis Teknologi, Rancho
Cucamonga, CA) selama 5-10 menit. Slide ini kemudian dibersihkan sebentar di Propar (A
zylene pengganti non-toksik yang tersedia dari Anatech, Ltd, Battle Creek, Michigan, USA), klip
pengikat yang lembut dilepas (saat ini bagian jaringan tidak berpegang pada slide), setetes media
pemasangan seperti Permount (Fisher) adalah ditempatkan pada jaringan diikuti oleh coverslip.
Pewarnaan sayatan, sekarang diawetkan secara permanen, dapat dilihat langsung. Pemasangan di
Permount atau pemasangan organik lain agen sangat penting untuk mendapatkan resolusi yang
baik di bawah mikroskop. Lamanya waktu yang dibutuhkan untuk seluruh prosedur untuk satu
slide dari jaringan tetap ke pewarnaan, adalah 30-35 menit.
Pewarna lain juga dapat digunakan, kami telah menggunakan metilen biru, metilen hijau,
toluidin biru dan tersedia secara komersial Teknik Schiff asam periodik (Sigma, St Louis,
Missouri, USA). Namun, H & E tampaknya unggul daripada ini.
Jaringan kami telah berhasil dipotong termasuk jantung normal, paru-paru, trakea,
kelenjar adrenal, usus kecil, esofagus, kelenjar ludah rahang bawah, kelenjar ludah parotis, hati,
pankreas, kulit, ginjal, testis, kelenjar getah bening, limpa, timus dan sumsum tulang belakang.
Sebagian besar bagian dibuat dari jaringan diawetkan dalam 10% buffer netral formalin (BNF)
untuk dari D.L Troyer 12 jam sampai beberapa hari, dan beberapa diambil dari spesimen
dibalsem dengan 10% BNF tanpa fiksasi lanjut. Namun, kami juga telah menyiapkan slide segar,
jaringan tidak tetap dan telah menemukan mereka untuk menjadi sebanding jika jaringan pertama
kali dibilas phosphate-buffered saline beberapa kali dan dihapuskan dengan jaringan kertas
sebelum mengikuti slide. Bagian tersebut kemudian postfixed dalam 10% BNF selama 30 menit.
Sebuah pendekatan alternatif yang diteliti terlibat membuat bagian pada strip dipotong
dari lembaran asetat atau lainnya permukaan transparan serupa. Namun, kualitas jaringan tidak
sebagus dengan metode yang dijelaskan di atas, terutama karena langkah perekat-removal warna
atau sebagian terlarut lembar asetat.
Hasil dan Pembahasan
Angka 2, 3 dan 4 menggambarkan pelestarian histoarchitecture jaringan dan morfologi
sel dalam slide jaringan normal disiapkan menggunakan prosedur perekat-dimediasi cepat
(RAMP) dijelaskan di sini. Gambar 2 adalah fotomikrograf dari babi yang normal paru-paru.
Alveoli dan alveolar septae dapat dilihat serta saluran alveolar. Gambar 3 adalah dari hati yang
normal menunjukkan hati lobulus klasik dengan vena sentral dan lamina hepatosit dipisahkan
oleh sinusoid. Sel Kuppfer dapat dilihat melapisi sinusoid dan hepatosit menunjukkan familiar
bentuk poligonal dengan inti vesikuler. Gambar 4 diambil dari pars convoluta dari ginjal anjing
korteks diwarnai dengan metilen biru. Bagian silang dan longitudinal proksimal tubulus berbelit-
belit menunjukkan sel-sel kuboid lapisan. Menariknya, beberapa tubulus proksimal (panah)
menunjukkan convolutions yang jarang terlihat di pars convoluta disiapkan pada mikrotom. Hal
ini mungkin karena kompresi sedikit selama langkah pertama ketika jaringan dipotong pada
slide.
Teknik ini dapat digunakan dalam beberapa pengaturan. Dalam gross laboratorium
anatomi, misalnya, organ belajar makroskopik bisa segera dipotong dan divisualisasikan
mikroskopis untuk integrasi cepat kotor dan mikroskopis anatomi. Dalam skenario yang sama,
jika ada keraguan tentang identitas struktur bruto tertentu metode akan menawarkan cara cepat
untuk mengatasi masalah tersebut. Prosedur bisa dibayangkan juga dapat digunakan di tingkat
sekolah menengah untuk menumbuhkan kecintaan untuk belajar dengan membuka jendela ke
dunia mikroskopis di dalam organ dibedah selama pelajaran biologi. Ini bisa digunakan untuk
mempersiapkan slide histologi didunia di mana mikrotom dan peralatan embedding
tidak tersedia. Meskipun fokus penelitian saat ini adalah jaringan normal, prosedur bisa
menawarkan mekanisme untuk dokter hewan dan kesehatan lainnya profesi- juga untuk
mengevaluasi jaringan abnormal, seperti tumor. Digital kamera di mikroskop dapat digunakan
untuk menangkap gambar dan mereka bisa dikirim secara elektronik ke laboratorium diagnostik
untuk evaluasi cepat.
Meskipun kami belum diuji prosedur untuk kegunaannya dalam prosedur seperti
imunohistokimia (Troyer et al., 1986), hibridisasi in situ (Bucana et al., 1993), atau in situ
polymerase chain reaction (Zhang et al., 1997) ini mungkin aplikasi masa depan. Ini juga bisa
menjadi cara cepat untuk mengevaluasi jaringan dari hewan transgenik yang membawa gen
reporter tersebut sebagai galaktosidase atau protein fluorescent hijau.
Seperti halnya untuk teknik apapun, metode ini bekerja lebih baik dalam tangan beberapa
orang dari yang lain dan memerlukan beberapa praktek. Kekuatan dari metode ini adalah biaya
rendah, kesederhanaan dan kecepatan, dan fakta bahwa ia menyediakan, untuk pertama kalinya,
mekanisme penyusunan bagian jaringan yang melestarikan histoarchitecture tanpa menggunakan
mikrotom.