Anda di halaman 1dari 8

prosedur yang Dianjurkan

aparat
Alat ini terdiri dari kapal pencernaan , yang terdiri dari silika vitreous wadah ( DIN 12904 ,
!"entuk tinggi ! , tinggi #2$$ , dia$eter %0$$ , kapasitas &%$l , dengan penutup silika
vitreous '
(ahan yang digunakan adalah )
*a$puran pencernaan ) 2 "agian "erat asa$ nitrat ( + 1000g , l -. dan 1 "agian "erat asa$
perklorat ( + 11&0g , l -. '
(ahan re/erensi ) daun 0aitun ( 1lea europaea 1 dan 2era$i powder2 '
(ersihkan teliti dengan asa$ nitrat ( + 1000g , l -. kapal pencernaan dan se$ua peralatan lain
yang akan digunakan untuk penentuan , "ilas hingga "ersih "e"erapa kali dengan air dan kering
pada 120 3 *'
Persiapan sampel
4ntuk $etode pencernaan "asah dala$ siste$ ter"uka , $ene$patkan 200 5 2%0$g "ahan
tana$an air5dried , akurat diti$"ang , dipotong halus dan ho$ogen ca$puran, $en2adi wadah
silika di"ersihkan ' -a$"ahkan 1'0$l dari ca$puran pencernaan , $enutup wadah tanpa
$engerahkan tekanan dan te$patkan dala$ oven dengan suhu terkontrol dan waktu regulator
( dikendalikan ko$puter , 2ika tersedia '
6anaskan perlahan5lahan sa$pai 100 3 * dan $e$pertahankan pada suhu ini sa$pai 7 2a$ 8
ke$udian panas sa$pai 120 3 * dan $e$pertahankan pada suhu ini sela$a 2 2a$ ' 9enaikkan
suhu sangat la$"at sa$pai 240 3 * , $enghindari kerugian aki"at reaksi kekerasan $ungkin
teruta$a pada kisaran suhu 1#05200 3 * , dan $e$pertahankan pada suhu ini sela$a 4 2a$ '
:arutkan residu anorganik kering tersisa dala$ 2,% $l asa$ nitrat ( + 1000g , l -. dan
digunakan untuk penentuan loga$ "erat '
.etiap sa$pel harus diu2i secara paralel dengan kosong '
metode
Isi ti$"al dan kad$iu$ dapat ditentukan dengan volta$etri ter"alik atau dengan
spektro/oto$etri serapan ato$ '
;u$lah $aksi$u$ "erikut dala$ "ahan tana$an kering , yang didasarkan pada nilai5nilai ADI ,
diusulkan )
5 :ead , 10 $g , kg 8
5 <ad$iu$ , 0,7 $g , kg '
1 (*= $aterial re/erensi *=9 No$or #2 *o$$unity (iro =e/erensi, diperoleh dari (*=,
Direktorat ;enderal >11, <o$isi 9asyarakat ?ropa, 200 rue de la :oi, (51049 (russels, (elgia'
2 didapat dari IA?A,@510, (adan ?nergi Ato$ Internasional, <ualitas Analytical ;asa
6engendalian, :a"oratoriu$ Aei"ersdor/, 61 (oB 1C00, A5Dina, Austria'
1E ' 6enentuan $ikroorganis$e
(ahan tana$an o"at "iasanya $e$"awa se2u$lah "esar "akteri dan 2a$ur , sering "erasal dari
tanah ' .e$entara "er"agai $aca$ "akteri dan 2a$ur $e$"entuk $ikro/lora ala$i dari tu$"uh5
tu$"uhan , "akteri pe$"entuk spora aero"ik yang sering $endo$inasi ' 6raktek saat panen ,
penanganan dan produksi dapat $enye"a"kan konta$inasi ta$"ahan dan pertu$"uhan
$ikro"a ' 6enentuan ?scherichia coli dan 2a$ur dapat $enun2ukkan kualitas produksi dan panen
praktek '
9etode untuk dekonta$inasi di"atasi ' .e"agai contoh, penggunaan etilen oksida telah dilarang
di negara5negara 4ni ?ropa ' 6engo"atan dengan iradiasi pengion 2uga dilarang atau
$e$"utuhkan prosedur penda/taran khusus di "e"erapa negara '
.elain itu, ke"eradaan a/latoksin dala$ "ahan tana$an dapat "er"ahaya "agi kesehatan 2ika
diserap "ahkan dala$ 2u$lah yang sangat kecil ' <arena itu, harus ditentukan setelah
$enggunakan prosedur pe$"ersihan yang sesuai '
-es untuk $ikroorganis$e tertentu
<ondisi u2i konta$inasi $ikro"a dirancang untuk $e$ini$alkan konta$inasi dari "ahan yang
diperiksa 8 tindakan pencegahan yang dia$"il tidak harus $e$pengaruhi setiap $ikroorganis$e
yang "isa terungkap '
prosedur yang Dian2urkan
6retreat$ent "ahan yang diperiksa
-ergantung pada si/at dari "ahan tana$an o"at $entah , $enggiling , larut, encer ,
$enangguhkan atau $enge$ulsi "ahan yang diperiksa $enggunakan $etode yang sesuai dan
$enghilangkan si/at anti$ikro"a dengan pengenceran , netralisasi atau penyaringan '
(ahan yang larut dala$ air
:arutkan atau encer 10 g atau 10 $l "ahan tana$an , kecuali dinyatakan khusus dala$ prosedur
pengu2ian untuk "ahan yang "ersangkutan , dala$ kaldu laktosa atau $edia lain yang cocok
ter"ukti $e$iliki aktivitas anti$ikro"a di "awah kondisi pengu2ian, $engatur volu$e untuk
100$l dengan $edia yang sa$a ' ( (e"erapa "ahan $ungkin $e$erlukan penggunaan volu$e
yang le"ih "esar ' ;ika perlu , $engatur pF suspensi sa$pai sekitar & '
Non 5 le$ak "ahan tidak larut dala$ air
.uspend 10g atau 10 $l "ahan , kecuali dinyatakan khusus dala$ prosedur pengu2ian untuk
"ahan yang "ersangkutan , dala$ kaldu laktosa atau $edia lain yang cocok ter"ukti $e$iliki
aktivitas anti$ikro"a di "awah kondisi pengu2ian 8 encerkan sa$pai 100$l dengan $edia yang
sa$a ' ( (e"erapa "ahan $ungkin $e$erlukan penggunaan volu$e yang le"ih "esar ' ;ika
perlu , $e$"agi "ahan yang diperiksa dan $engho$ogenkan suspensi $ekanis ' .ur/aktan yang
cocok, seperti larutan polisor"at
E0 = yang $engandung 1 $g per $l dapat dita$"ahkan ' ;ika perlu , $engatur pF suspensi
sa$pai sekitar & '
"ahan le$ak
9engho$ogenkan 10g atau 10 $l "ahan , kecuali dinyatakan khusus dala$ prosedur pengu2ian
untuk "ahan yang "ersangkutan , dengan %g polisor"at 20= atau polisor"at E0= ' ;ika perlu ,
panas tidak le"ih dari 40 3 *' ( <adang5kadang , $ungkin perlu untuk $e$anaskan sa$pai suhu
hingga 4% 3 * , untuk waktu sesingkat $ungkin ' 9iB hati5hati dengan tetap $en2aga suhu
dala$ air $andi atau oven ' -a$"ahkan E% $l kaldu laktosa atau $edia lain yang cocok ter"ukti
$e$iliki aktivitas anti$ikro"a dala$ kondisi tes , dipanaskan sa$pai tidak le"ih dari 40 3 * 2ika
perlu ' 9e$pertahankan suhu ini untuk waktu singkat diperlukan sa$pai e$ulsi ter"entuk dan ,
dala$ hal apapun , sela$a tidak le"ih dari 70 $enit ' ;ika perlu , $engatur pF e$ulsi untuk
sekitar & '
?ntero"acteriaceae dan "akteri tertentu Ara$ 5 negati/ lainnya
Deteksi "akteri
9engho$ogenkan "ahan pra5perawatan tepat dan $enetaskan pada 7057& 3 * untuk 2angka
waktu yang cukup untuk ke"angkitan dari "akteri tetapi tidak cukup untuk perkalian dari
organis$e ("iasanya 25% 2a$ ' <ocok wadah , 1g pengalihan atau 1$l dari "ahan ho$ogen
untuk 100 $l kaldu pengayaan ?ntero"acteriaceae 5 9ossel dan $enetaskan pada 7%57& 3 *
sela$a 1E54E 2a$ ' .iapkan su"kultur di piring dengan ungu 5 $erah e$pedu agar dengan
glukosa dan laktosa ' Inku"asi pada 7%57& 3 * sela$a 1E54E 2a$ ' 9ateri yang $elewati tes 2ika
tidak ada pertu$"uhan koloni "akteri Ara$ 5 negati/ terdeteksi di piring '
evaluasi kuantitati/
9enyuntik 2u$lah yang sesuai pengayaan ?ntero"acteriaceae kaldu 5 9ossel dengan 2u$lah
"ahan ho$ogen disiapkan seperti yang di2elaskan di "awah ! Deteksi "akteri ! di atas , tepat
diencerkan 2ika perlu , $engandung 1'0g , 0'1g dan 10Gg , atau 1'0$l , 0,1 $l dan 10Gl , dari
"ahan yang diperiksa ' Inku"asi pada 7%57& 3 * sela$a 2454E 2a$ ' .iapkan se"uah su"kultur
dari $asing5$asing "udaya di piring dengan ungu 5 $erah e$pedu agar dengan glukosa dan
laktosa untuk $endapatkan isolasi selekti/ ' Inku"asi pada 7%57& 3 * sela$a 1E524 2a$ '
6ertu$"uhan koloni "erke$"ang dengan "aik , u$u$nya $erah atau ke$erahan dala$ warna ,
"akteri Ara$ 5 negati/ $erupakan hasil yang positi/ ' 6erhatikan 2u$lah terkecil dari $ateri yang
$e$"erikan hasil positi/ ' -entukan 2u$lah ke$ungkinan "akteri $enggunakan -a"el % '
?scherichia coli
9entrans/er kuantitas "ahan ho$ogen dala$ lactose "roth , disiapkan dan diinku"asi seperti
di2elaskan di atas , dan $engandung 1 g atau 1 $l "ahan yang diperiksa , 100 $l kaldu
9ac*onkey dan $enetaskan pada 4754% 3 * sela$a 1E524 2a$ '
tabel 5
Penentuan Enterobacteriaceae dan bakteri tertentu Gram-negatif lainnya
Hasil untuk masing-masing
kuantitas atau volume
Kemungkinan jumlah
bakteri per g bahan
1! g atau
1! ml
!"1g atau
!1 ml
!!1 g atau
!!1 ml
#
#
#
$ebih dari 1!%
#
#
-
Kurang dari 1!% tetapi lebih dari 1!
&iapkan subkultur di piring dengan agar 'ac(onkey dan menetaskan pada )*-)5 + ( selama
1,-%) jam " Pertumbuhan merah umumnya koloni non - berlendir batang Gram -negatif
kadang-kadang dikelilingi oleh -ona kemerahan presipitasi menunjukkan kemungkinan adanya
E" coli " Hal ini dapat dibuktikan dengan pembentukan indole pada )*5-))5 + ( atau dengan
reaksi biokimia lainnya " 'ateri yang mele.ati uji jika tidak ada koloni tersebut terdeteksi atau
jika reaksi biokimia konfirmasi negatif "
&almonella spp "
'enetaskan solusi suspensi atau emulsi dari bahan pra-pera.atan disiapkan seperti yang
dijelaskan di atas pada *5-*/ + ( selama 5-%) jam yang sesuai untuk pengayaan "
tes primer
0ransfer 1! ml dari budaya pengayaan sampai 1!! ml empedu 0etrathionate kaldu hijau brilian
dan menetaskan pada )%-)* + ( selama 1,-%) jam " &iapkan subkultur pada setidaknya dua
dari tiga berikut media agar 1 deoksikolat citrate agar 2 3ylose lisin agar deoksikolat 2 dan
brilian hijau agar" 4nkubasi pada *5-*/ + ( selama %)-), jam " 'elaksanakan uji sekunder jika
ada koloni diproduksi yang sesuai dengan deskripsi yang diberikan dalam 0abel 5 "
tabel 5
6eskripsi &almonella koloni muncul di media kultur yang berbeda
medium
6eskripsi koloni
6eo3ycholate citrate agar
7erkembang dengan baik tidak ber.arna
8ylose lisin
deo3ycholate agar
7erkembang dengan baik merah dengan atau tanpa pusat hitam deo3ycholate agar
9gar hijau 7rilliant
Kecil transparan dan tidak ber.arna atau buram merah muda atau putih :sering dikelilingi
oleh pink ke -ona merah;
uji sekunder
&iapkan sebuah subkultur dari setiap koloni menunjukkan karakteristik yang dijelaskan dalam
0abel 5 pada permukaan tiga gula agar besi menggunakan teknik inokulasi yang mendalam "
Hal ini dapat dicapai dengan terlebih dahulu inokulasi permukaan miring dari media kultur diikuti
oleh budaya menusuk dengan jarum inokulasi yang sama dan inkubasi pada *5-*/ + ( selama
1,-%) jam " 0es ini positif untuk kehadiran &almonella spp " jika perubahan .arna dari merah ke
kuning diamati dalam budaya dalam : tapi tidak dalam budaya permukaan ; biasanya dengan
pembentukan gas dengan atau tanpa produksi hidrogen sulfida dalam agar-agar " Konfirmasi
diperoleh dengan tes biokimia dan serologis yang tepat "
7ahan yang diperiksa mele.ati uji jika budaya dari tipe yang diuraikan tidak muncul dalam tes
utama atau jika konfirmasi tes biokimia dan serologi dalam uji sekunder negatif "
Pseudomonas aeruginosa
Pretreat materi yang diperiksa seperti yang dijelaskan pada halaman 5)-55 tetapi
menggunakan buffered natrium klorida - pepton pH /! atau media lain yang cocok
ditampilkan tidak memiliki aktivitas antimikroba di ba.ah kondisi pengujian di tempat kaldu
laktosa " 'enyuntik 1!! ml kedelai - kasein mencerna media dengan kuantitas larutan suspensi
atau emulsi yang diperoleh mengandung 1g atau 1 ml bahan yang diperiksa " (ampur dan
menetaskan pada *5-*/ + ( selama %)-), jam " &iapkan subkultur pada sepiring setrimid agar
dan inkubasi pada *5-*/ + ( selama %)-), jam " <ika tidak ada pertumbuhan mikroorganisme
terdeteksi bahan mele.ati tes " <ika pertumbuhan koloni batang Gram - negatif terjadi
biasanya dengan fluoresensi kehijauan menerapkan tes oksidase dan uji pertumbuhan kedelai
- kasein mencerna media pada )% + (" 'etode berikut dapat digunakan " 0empatkan % atau *
tetes baru disiapkan !!1 g = ml larutan > > > ? >? - tetrametil - p - phenylenediamine
dihidroklorida @ pada filter - kertas dan menerapkan smear yang dicurigai koloni 2 tes ini positif
jika .arna ungu diproduksi dalam .aktu 5-1! detik " 'ateri yang mele.ati uji jika budaya dari
tipe yang diuraikan tidak muncul atau jika tes biokimia konfirmasi negatif "
&taphylococcus aureus
&iapkan budaya pengayaan seperti yang dijelaskan untuk Pseudomonas aeruginosa " &iapkan
subkultur pada media yang cocok seperti 7aird - Parker agar" 4nkubasi pada *5-*/ + ( selama
%)-), jam " 'ateri yang mele.ati tes jika tidak ada pertumbuhan mikroorganisme terdeteksi "
Koloni Hitam kokus Gram - positif sering dikelilingi oleh -ona yang jelas dapat menunjukkan
adanya &taphylococcus aureus " Antuk kokus katalase - positif konfirmasi dapat diperoleh
misalnya dengan koagulase dan deoksiribonuklease tes " 'ateri yang mele.ati uji jika budaya
dari tipe yang diuraikan tidak muncul atau jika tes biokimia konfirmasi negatif "
Balidasi tes untuk mikroorganisme tertentu
<ika perlu tumbuh secara terpisah strain uji yang tercantum dalam 0abel / pada media kultur
ditunjukkan pada *!-*5 + ( selama 1,-%) jam " Encerkan bagian dari masing-masing budaya
menggunakan buffered natrium klorida - pepton solusi pH /! sehingga suspensi uji
mengandung sekitar 1!* 2 mikroorganisme per ml " (ampur volume yang sama
masing-masing suspensi dan menggunakan !) ml :sekitar 1!% mikroorganisme masing-masing
strain; sebagai inokulum dalam tes untuk Escherichia coli &almonella spp" Pseudomonas
aeruginosa dan &taphylococcus aureus di hadapan dan tidak adanya bahan yang diperiksa
jika perlu" 'etode uji harus memberikan hasil yang positif untuk strain masing-masing
mikroorganisme"
tabel 7
.train -est dan $edia kultur untuk digunakan dala$ $e$validasi tes untuk $ikroorganis$e
tertentu
$ikroorganis$e
saring nu$"era
$ediu$
?scherichia coli
$isalnya N*I9( E%4%
(A-** E&79, *I6 %7,12#
lactose "roth
6seudo$onas aeruginosa
$isalnya N*I9( E#2#
(A-** 902&, *I6 E2,11E
kedelai5kasein dicerna $edia
.al$onella typhi$uriu$
-idak ada no$or regangan dian2urkan' .pesies tidak patogen "agi $anusia, seperti .al$onella
a"ony (N*-* #01&, *I6 E0,79, dapat digunakan
lactose "roth
.taphylococcus aureus
$isalnya N*I9( E#2%
(A-** #%7E 6, *I6 %7,1%# atau N*I9( 9%1E
(A-** #%7E, *I6 4'E7
kedelai5kasein dicerna $edia
(agian A.?? 20, hala$an &E'
<umlah total aerobik yang layak
0otal layak count aerobik dari bahan yang diperiksa ditentukan sebagaimana ditentukan dalam
prosedur pengujian untuk bahan tanaman yang bersangkutan menggunakan salah satu
metode berikut 1 membran filtrasi plate count atau pengenceran serial"
Pretreatment bahan yang diperiksa
Pretreat materi seperti yang dijelaskan dalam C0est untuk mikroorganisme tertentu C halaman
5) tetapi di tempat penggunaan lactose broth buffered natrium klorida - pepton solusi pH /!
atau media lain yang cocok ditampilkan tidak memiliki aktivitas antimikroba di ba.ah kondisi
pengujian "
membran filtrasi
Gunakan filter membran dengan ukuran pori nominal tidak lebih besar dari !)5 m efektivitas
yang pada bakteri mempertahankan telah ditetapkan " &ebagai contoh filter selulosa nitrat
digunakan untuk larutan berair berminyak dan lemah beralkohol dan selulosa asetat filter
untuk solusi sangat beralkohol " 0eknik yang dijelaskan menggunakan filter discs sekitar 5!mm
diameter " Antuk filter dengan diameter yang berbeda menyesuaikan volume pengenceran dan
pencucian sesuai" 'ensterilkan alat filtrasi dan membran dengan cara yang tepat " mereka
adalah
dirancang untuk $e$ungkinkan solusi yang diperiksa untuk diperkenalkan dan disaring dala$
kondisi aseptik , dan $e$"ran akan ditrans/er ke $edia kultur '
9entrans/er 10$l atau larutan yang $engandung 1 gra$ "ahan untuk $asing5$asing dua /ilter
$e$"ran dan $enyaring segera ' ;ika perlu , encerkan "ahan pra5perawatan untuk $endapatkan
2u$lah koloni yang diharapkan dari 105100 ' *uci setiap $e$"ran , $enyaring tiga atau le"ih
"erturut5turut 2u$lah sekitar 100 $l cairan yang cocok seperti "u//er natriu$ klorida 5 pepton ,
pF &,0 ' 4ntuk "ahan le$ak , sur/aktan yang cocok dapat dita$"ahkan , seperti polisor"at 20=
atau polisor"at E0= ' 9entrans/er salah satu /ilter $e$"ran , ditu2ukan teruta$a untuk
penghitungan "akteri , ke per$ukaan piring dengan kasein 5 kedelai $encerna agar dan yang
lainnya , teruta$a ditu2ukan untuk pencacahan 2a$ur , ke per$ukaan piring dengan glukosa
.a"ouraud agar dengan anti"iotik ' 9enetaskan piring sela$a % hari , kecuali 2u$lah le"ih
handal dapat diperoleh se"aliknya , pada 7057% 3 * untuk $endeteksi "akteri dan pada 2052% 3 *
untuk $endeteksi 2a$ur ' Fitung 2u$lah koloni yang ter"entuk ' Fitung 2u$lah $ikroorganis$e
per g atau per $l dari "ahan yang diu2i , 2ika perlu $enghitung "akteri dan 2a$ur secara
terpisah '
plate count
4ntuk "akteri ' Aunakan piring 6etri 9510 c$ ' 4ntuk salah satu hidangan $ena$"ahkan
ca$puran 1 $l "ahan pra5perawatan dan sekitar 1% $l cair kasein 5 kedelai $encerna agar pada
suhu tidak $ele"ihi 4% 3 *' Atau , $enye"arkan $ateri pra5perawatan di per$ukaan $edia
dipadatkan dala$ cawan 6etri ' ;ika perlu , encerkan "ahan pretreat$ent seperti di2elaskan di
atas untuk $endapatkan 2u$lah koloni yang diharapkan tidak le"ih dari 700 ' .iapkan setidaknya
dua piring $enggunakan pengenceran yang sa$a dan $enetaskan $ereka pada 7057% 3 * sela$a
% hari , kecuali 2u$lah le"ih dapat diandalkan adalah diperoleh dala$ waktu yang le"ih singkat '
Fitung 2u$lah koloni yang ter"entuk dan $enghitung hasil $enggunakan piring dengan 2u$lah
ter"esar dari koloni , sa$pai $aksi$u$ 700 '
4ntuk 2a$ur ' Aunakan piring 6etri 9510 c$ ' 4ntuk salah satu hidangan $ena$"ahkan
ca$puran 1 $l "ahan pra5perawatan dan sekitar 1% $l agar glukosa .a"ouraud cair dengan
anti"iotik pada suhu tidak $ele"ihi 4% 3 *' Atau , $enye"arkan $ateri pra5perawatan di
per$ukaan $edia dipadatkan dala$ cawan 6etri ' ;ika perlu , encerkan "ahan pretreat$ent
seperti di2elaskan di atas untuk $endapatkan 2u$lah koloni yang diharapkan tidak le"ih dari
100 ' .iapkan setidaknya dua piring $enggunakan pengenceran yang sa$a dan $enetaskan
$ereka pada 2052% 3 * sela$a % hari , kecuali 2u$lah le"ih dapat diandalkan adalah diperoleh
dala$ waktu yang le"ih singkat ' Fitung 2u$lah koloni yang ter"entuk dan $enghitung hasil
$enggunakan piring dengan tidak le"ih dari 100 koloni '
.erial pengenceran
.iapkan 12 seri ta"ung $asing5$asing "erisi 9 5 10$l kedelai 5 kasein dicerna $e 5 diu$ ' 4ntuk
$asing5$asing dari tiga ta"ung ta$"ahkan 1 $l dari pengenceran 1)10 terlarut , "ahan ho$ogen
disiapkan seperti yang di2elaskan pada hala$an #45#% ' 4ntuk tiga ta"ung "erikutnya ta$"ahkan
1 $l dari pengenceran 1)100 $aterial dan tiga ta"ung "erikutnya ta$"ahkan 1 $l dari
pengenceran 1)1000 $aterial' 4ntuk tiga ta"ung terakhir ta$"ahkan 1 $l pengencer ' Inku"asi
ta"ung pada 7057% 3 * sela$a setidaknya % hari ' -idak ada pertu$"uhan $ikro"a
akan muncul dalam tiga tabung terakhir" <ika pembacaan hasil sulit atau tidak pasti karena sifat
bahan yang diperiksa siapkan subkultur dalam cairan atau medium padat dan mengevaluasi
hasil setelah jangka .aktu inkubasi" 0entukan jumlah yang paling mungkin dari mikroorganisme
per g atau ml dari material menggunakan 0abel ,"
<ika untuk kolom pertama jumlah tabung yang menunjukkan pertumbuhan mikroba adalah dua
atau kurang jumlah yang paling mungkin dari mikroorganisme per g atau per ml kurang dari
1!!"
?/ektivitas $edia kultur dan validitas $etode penghitungan
.train "erikut "iasanya digunakan (lihat 2uga "agian 20)
.taphylococcus aureus N*I9( E#2% (A-** #%7E56, *I6 %7,1%# atau N*I9( 9%1E (A-**
#%7E, *I6 4'E7
(acillus su"tilis N*I9( E0%4 (A-** ##77, *I6 %2,#2
?scherichia coli N*I9( E%4% (A-** E&79, *I6 %7,12#
*andida al"icans A-** 2091 (*I6 11E0,&9 atau A-** 10 271 (N*6H 71&9, *I6 4E'&2
(iarkan strain u2i untuk tu$"uh secara terpisah dala$ ta"ung yang "erisi kedelai5kasein
$encerna $edia pada 7057% 3 * sela$a 1E524 2a$, kecuali untuk *andida al"icans yang
$e$"utuhkan suhu 2052% 3 * sela$a 4E 2a$'
?ncerkan "agian dari $asing5$asing "udaya $enggunakan "u//ered natriu$ klorida5pepton
solusi pF &,0 untuk $endapatkan suspensi u2i yang $engandung sekitar 100 $ikroorganis$e
yang layak per $l' Aunakan suspensi $asing5$asing $ikroorganis$e secara terpisah se"agai
kontrol $etode penghitungan, di hadapan dan tidak adanya "ahan yang diperiksa, 2ika perlu'