2.5 ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA.

Mientras que la mayora de las tcnicas espectroscpicas se utilizan para el

estudio y caracterizacin de molculas o iones en su entorno cristalino, la
espectroscopa de emisin y absorcin atmica se usa casi exclusivamente para
el anlisis de tomos. Por consiguiente, la tcnica resulta casi insuperable como
mtodo de anlisis elemental de metales. En principio, la espectroscopa de
emisin puede utilizarse para la identificacin y para la determinacin cuantitativa
de todos los elementos de la tabla peridica.
Cuando la transicin se produce desde el estado fundamental hasta un estado
excitado del tomo mediante la absorcin de radiacin de una determinada
frecuencia (caracterstica para cada tomo), estamos en el caso de las tcnicas
de absorcin. En el caso en que los tomos se lleven previamente a un estado
excitado y se mide la intensidad de la radiacin emitida a la frecuencia
caracterstica correspondiente a la transicin desde el estado excitado al estado
fundamental, hablamos de tcnicas espectrofotomtricas de emisin. A
continuacin se tratan las tcnicas espectrofotomtricas de absorcin atmica, de
fotometra de llama y de emisin por plasma.
Pueden identificarse tres clases diferentes de procesos de emisin que difieren en
cmo la sustancia alcanza el estado excitado previo a la emisin.
a) Emisin a partir de una excitacin electromagntica.
b) Emisin a partir de excitacin trmica.
c) Emisin a partir de excitacin elctrica.
Los tipos ms importantes de espectros de emisin se basan en la utilizacin de
energa no electromagntica para llevar a un tomo o a una molcula al estado
excitado.
La espectroscopia de absorcin atmica (a menudo llamada AA) es un mtodo
instrumental de la qumica analtica que determina una gran variedad de
elementos al estado fundamental como analitos.
Los principios tericos de la absorcin atmica fueron establecidos en 1840 por
Kirchhoff y Bunsen en sus estudios del fenmeno de autoabsorcin en el espectro
de los metales alcalinos y alcalinos trreos.
La base de la espectroscopia de absorcin atmica (EAA) la entreg Kirchhoff al
formular su ley general: cualquier materia que pueda emitir luz a una cierta
longitud de onda tambin absorber luz a esa longitud de onda. El significado
prctico de esto fue recin desarrollado en 1955 por el australiano Walsh,
apareciendo los primeros instrumentos comerciales a principios de 1960.

El tomo consiste de un ncleo y de un nmero determinado de electrones que
llenan ciertos niveles cunticos. La configuracin electrnica ms estable de un
tomo corresponde a la de menor contenido energtico conocido como estado
fundamental.
Si un tomo que se encuentra en un estado fundamental absorbe una
determinada energa, ste experimenta una transicin hacia un estado particular
de mayor energa. Como este estado es inestable, el tomo regresa a su
configuracin inicial, emitiendo una radiacin de una determinada frecuencia.
La frecuencia de la energa radiante emitida corresponde a la diferencia de
energa entre el estado excitado (E1) y el estado fundamental (Eo) como se
encuentra descrito en la ecuacin de Planck:

h = constante de Planck
= frecuencia
c = velocidad de luz
= longitud de onda
Segn la teora atmica, el tomo puede alcanzar diferentes estados (E1, E2,
E3,) y de cada uno de ellos emitir una radiacin (1, 2, 3,) caracterstica,
obtenindose as un espectro atmico, caracterizado por presentar un gran
nmero de lneas discretas. En absorcin atmica es relevante solamente aquella
longitud de onda correspondiente a una transicin entre el estado fundamental de
un tomo y el primer estado excitado y se conoce como longitud de onda de
resonancia.
De la ecuacin de Planck, se tiene que un tomo podr absorber solamente
radiacin de una longitud de onda (frecuencia) especfica. En absorcin atmica
interesa medir la absorcin de esta radiacin de resonancia al hacerla pasar a
travs de una poblacin de tomos libres en estado fundamental. Estos
absorbern parte de la radiacin en forma proporcional a su concentracin
atmica.
La relacin entre absorcin y concentracin se encuentra definida en la Ley de
Lambert-Beer.
Como la trayectoria de la radiacin permanece constante y el coeficiente de
absorcin es caracterstico para cada elemento, la absorbancia es directamente
proporcional a la concentracin de las especies absorbentes.



2.5.1 APLICACIN.
La EAA constituye una de las tcnicas ms empleadas para la determinacin de
ms de 60 elementos, principalmente en el rango de g/ml-ng/ml en una gran
variedad de muestras. Entre algunas de sus mltiples aplicaciones tenemos el
anlisis de: aguas, muestras geolgicas, muestras orgnicas, metales y
aleaciones, petrleo y sus subproductos; y de amplia gama de muestras de
industrias qumicas y farmacuticas.
La espectroscopia de absorcin atmica con llama es el mtodo ms empleado
para la determinacin de metales en una amplia variedad de matrices. Su
popularidad se debe a su especificidad, sensibilidad y facilidad de operacin. En
este mtodo la solucin muestra es directamente aspirada a una llama de flujo
laminar. La llama tiene como funcin generar tomos en su estado fundamental,
de los elementos presentes en la solucin muestra. Temperaturas cercanas a los
1,5003,000C son suficientes para producir la atomizacin de un gran nmero de
elementos, los que absorbern parte de la radiacin proveniente de la fuente
luminosa.
Otros sistemas han sido descritos con el fin de mejorar la eficiencia de la
atomizacin, en los cuales de deposita la muestra slida o como suspensin en
un accesorio especial para introducirlo a la llama (navecilla de tantalio, cubeta de
Delves).
Desde el inicio, en 1955, de la espectroscopia de absorcin atmica como mtodo
de anlisis, hubo un nuevo mpetu de desarrollar sistemas de atomizacin con
llama, adems de existir un inters continuo en conocer el mecanismo mediante
el cual la solucin muestra es convertida a vapor atmico en la llama. El resultado
fue el desarrollo de un quemador con un cabezal de ranura, obtenindose de este
modo un camino ptico alargado a travs de la llama, lo que proporciona una
mayor sensibilidad al mtodo. Estos quemadores emplean generalmente una
cmara de premezclado de combustible/oxidante en combinacin con un sistema
para aspirar la solucin muestra a la llama. En la Figura 4.1. Se observan los
procesos que experimenta una solucin muestra con estos sistemas de
atomizacin en la llama.
Figura 4.1. Diagrama del proceso de atomizacin en una llama



El nmero de tomos generados en su estado fundamental en la etapa de
atomizacin determinar la cantidad de radiacin absorbida.
El quemador del premezclado, que consiste en la combinacin de un nebulizador
con un quemador. En este sistema continuo la solucin muestra es aspirada por
arrastre con el gas comburente a travs de un nebulizador para generar un
aerosol fino dentro de una cmara donde se mezcla con los gases combustible y
comburente auxiliar. Un deflector de flujo, ubicado en la cmara de premezclado,
permite que las gotitas ms grandes impacten contra l, caigan al fondo de la
cmara y se escurran por el tubo de drenaje. El aerosol compuesto por las gotitas
ms finas es transportado hacia el cabezal del quemador, donde ocurre la
combustin y la atomizacin de la muestra. Una entrada de gas oxidante auxiliar
directa a la cmara de premezclado permite que los ajustes del flujo del oxidante
sean efectuados por medio de la lnea auxiliar, mientras que el flujo a travs del
nebulizador permanece constante. De esta forma la velocidad de aspiracin de la
muestra es independiente de las condiciones de la llama.
Los nebulizadores pueden ser regulados para variar la velocidad de aspiracin de
la solucin muestra (14 ml/min). Estos estn hechos de un material resistente a
la corrosin.
Diferentes tipos de cabezales son utilizados dependiendo del tipo de llama a
emplear. Estos se construyen de titanio para darle una resistencia al calor y a la
corrosin, siendo los ms empleados de 10 cm de ranura simple (llama
acetileno/aire), 10 cm de ranura triple para soluciones con alto contenido de
slidos y cabezal de 5 cm (llama acetileno/xido nitroso).
El tiempo necesario para la atomizacin de una muestra depender de la
velocidad de entrada de los gases en la llama y se expresa con altura de la llama,
de modo que la medicin de la absorbancia se debe realizar en una zona en que
la atomizacin sea completa.
La llama debe ser en lo posible transparente, es decir, no debe absorber parte de
la radiacin proveniente de la lmpara. En general, la llama debe poseer una lata
eficiencia en la produccin de tomos libres y sta debe evitar que ocurran
reacciones del elemento a determinar con productos de la combustin de los
gases empleados o con otros componentes de la muestra. Al respecto, la
temperatura de la llama tiene un cierto grado de importancia, siendo a veces ms
valiosas las propiedades reductoras u oxidantes (segn relacin entre gases
combustible/comburente) de ella. La razn ptima combustible/comburente
depender:
del tipo de quemador;
de los gases (combustible/comburente);
del elemento a determinar.

Tabla 4.1. Temperatura mxima (C) de distintas llamas
Combustible Aire Oxgeno
Gas alumbrado 1,700 2,700
Propano 1,930 2,800
Butano 1,900 2,900
Hidrgeno 2,100 2,780
Acetileno 2,300 3,100
Ciangeno 2,300 4,300

La llama aire/acetileno es la ms empleada, debido a que ofrece para muchos
elementos un medio ambiente y temperatura suficientes para la atomizacin. La
llama es completamente transparente y solamente muestra autoabsorcin bajo los
230 nm.
La introduccin de la llama xido nitroso/acetileno (2,900 3,000C) permite la
determinacin de aquellos elementos que nos dejan determinar con llama
aire/acetileno como Al, Si, Ti, etc Como producto de su baja velocidad de
combustin, esta llama energtica ofrece un medio ambiente qumico, trmico y
ptimo favorable, pero posee dos desventajas: numerosos elementos son
ionizados y muestran una emisin relativamente fuerte.
La llama hidrgeno/argn es utilizada en la determinacin de As, Se, Cd y Zn. Su
gran ventaja es su alta transparencia en el ultravioleta ideal para la determinacin
de As y Se. Sin embargo, se debe contar con grandes interferencias, debido a la
menor temperatura de llama.
En espectroscopia de absorcin atmica la concentracin de un elemento en una
muestra se determina por comparacin de la absorbancia de la solucin muestra
con la absorbancia de soluciones estndar de concentracin conocida.
Si cualquier constituyente de la muestra altera uno o ms pasos en el proceso de
formacin de tomos en su estado fundamental en la llama, llevar a un error en
la medicin de la concentracin. Las interferencias que se pueden producir en
espectroscopia de absorcin atmica se clasifican en: fsicas qumicas, de
ionizacin y espectrales.




2.5.2 INSTRUMENTACIN.
Instrumentos de un solo haz
Un instrumento tpico de haz sencillo consiste de una lmpara de ctodo hueco,
una lmpara de deuterio para correccin por absorcin no atmica, un modulador
(chopper), un atomizador, un monocromador y un transductor (ver Figura 50).

Figura 50. Partes principales de un espectrmetro de absorcin atmica de
un solo haz.
Este instrumento es utilizado y est basado en los mismos principios tericos que
un espectrofotmetro convencional. Primero se aspira el blanco y se ajusta la
lectura a 100%de Transmitancia; posteriormente se aspira la muestra problema y
se hace la lectura de absorbancia o transmitancia.
La radiacin de la lmpara de deuterio pasa en forma alterna con la radiacin de
la lmpara de ctodo hueco, para que el detector perciba alternadamente las dos
seales. El chopper o cortador, consiste de cuadrantes huecos y cuadrantes con
espejos, y es el mecanismo a travs del cual es posible que el detector reciba en
forma alterna la seal de la lmpara de ctodo hueco y la de la lmpara de
deuterio, con respecto al tiempo y compara las dos absorbancias.
Instrumentos de doble haz
En un instrumento de doble haz, la radiacin emitida por la fuente es dividida por
un modulador con espejos. Este consiste de una pieza circular con secciones
alternadas de espejo y partes huecas; esta pieza est girando, de manera que el
haz de la fuente pasa alternadamente por el hueco del modulador y llega a la
llama o choca con una seccin de espejo del mismo y es reflejado.

Estos dos haces son recombinados en un espejo especial (half-silvered mirror)
pasan a travs de un monocromador y finalmente la seal es enviada por medio
de un fotomultiplicador. Esta seal recibida por el sistema de lectura es la relacin
entre la seal de referencia y la seal de la muestra misma. An y cuando no se
encuentre la lmpara de deuterio para correccin por absorcin no atmica, el
instrumento de doble haz la puede contener como accesorio opcional. La Figura
53 es representativa de un instrumento de doble haz.

Figura 51. Sistema de doble haz de un espectrmetro de absorcin atmica
Como se dijo anteriormente los componentes bsicos de un espectrmetro de
absorcin atmica son:
Una fuente de radiacin que emita la lnea espectral del elemento de
inters.
Un sistema de atomizacin, que suministre energa suficiente para la
disociacin del analito y la formacin de tomos libres.
Un monocromador para aislar la lnea espectral medida.
Un detector acoplado con un sistema medidor o de registro de los datos
obtenidos.
Fuentes de radiacin
La parte ms crtica de un instrumento de absorcin atmica es la fuente, ya que
es muy difcil medir con buena exactitud lneas de absorcin tan estrechas como
las que presentan los tomos. El problema se ha resuelto aplicando el principio de
que cada especie qumica es capaz en condiciones adecuadas, de absorber sus
propias radiaciones. Bajo esta premisa se han desarrollado las lmparas de
ctodo hueco y las lmparas de descarga sin electrodos.
Lmparas de ctodo hueco
Consiste en un tubo de vidrio conteniendo argn o nen a baja presin (1-5 torr) y
dos electrodos. El nodo suele ser tungsteno, y el ctodo, de forma cilndrica, est
construido con el metal que se desea determinar (ver Figura 52).


Figura 52. Lmpara de ctodo hueco.
Cuando se aplica una diferencia de potencial suficiente entre los dos electrodos
tiene lugar la ionizacin del gas y los cationes gaseosos son acelerados hacia el
ctodo, adquiriendo la suficiente energa cintica para arrancar algunos tomos
metlicos del material catdico. Algunos de estos tomos metlicos son excitado
al chocar con los iones gaseosos, y al retornar a su estado fundamental emiten
radiacin caracterstica (ver Figura 53).
Al apagar la lmpara, los tomos metlicos vaporizados tienden a depositarse
sobre las paredes del ctodo o sobre las paredes de vidrio del tubo, siendo
mnima la posibilidad, por el diseo cilndrico del ctodo. El hecho de que los
diferentes elementos tengan que ser determinados de uno en uno hace que la
absorcin atmica sea una tcnica de anlisis cuantitativo nos siendo efectiva
para la identificacin de los elementos presentes en una muestra.

Figura 53. Esquema de la emisin de radiacin en el ctodo.
Ordinariamente, para cada elemento se utiliza una lmpara, si bien se han
comercializado lmparas de ctodo hueco multielementales. Estas lmparas se
construyen con aleaciones de diferentes metales procurando que tengan similares
puntos de fusin y volatilidad, como por ejemplo, Ca/Mg, Ag/Au, Cu/Pb/Zn,
Co/Cr/Cu/Fe/Mn/Ni.



Lmparas de descarga sin electrodos
Consisten en un tubo de cuarzo hermticamente cerrado conteniendo unos pocos
miligramos del elemento de inters y un gas inerte a baja presin. La activacin
se lleva a cabo mediante un intenso campo de radiofrecuencias (100 kHz - 100
MHz) o radiacin de microondas (>100 MHz). Cuando opera, el gas noble se
ioniza, y los iones producidos son acelerados por el campo de radiofrecuencia
hasta que adquieren la energa suficiente para excitar a los tomos del metal.
Sistemas de atomizacin
Histricamente la llama ha desempeado un papel importante en absorcin
atmica para la generacin de vapor atmico a partir de disoluciones, o incluso de
muestras slidas. Actualmente, y a pesar de sus limitaciones, todava se utiliza
muy extensamente, debido a su sencillez, bajo coste del equipo y su versatilidad
para varios elementos de diferente naturaleza. En cuanto al quemador el ms
utilizado es el de pre-mezcla, que opera en rgimen laminar y que
esquemticamente se ha representado en la Figura 53.

Monocromadores
La nica finalidad del monocromador es aislar la lnea de resonancia del elemento
de inters. Para la mayor parte de los elementos, el problema suele ser sencillo,
pues las diferentes lneas suelen estar bastante separadas. Ello hace que no sea
necesario un monocromador de alta resolucin, y en consecuencia, no demasiado
costoso, siendo este uno de los factores que han contribuido a que la tcnica sea
muy utilizada en la prctica ordinaria del anlisis.
Las anchuras de rendija juegan un papel importante, al determinar la fraccin del
espectro que incide en el detector. La rendija deber ser lo ms estrecha posible,
con objeto de reducir la cantidad de radiacin emitida por la llama que llega al
detector. Algunos instrumentos comerciales estn provistos de dos tipos de
rendijas, para usarlas con llama o con atomizacin electrotrmica
respectivamente.
Detectores
El detector universalmente usado en absorcin atmica es el tubo
fotomultiplicador, ya que ningn otro sistema ofrece la misma sensibilidad en el
margen de longitudes de onda utilizado en esta tcnica.
Funcin y condiciones de las llamas
La llama tiene tres funciones bsicas: permite pasar la muestra a analizar del
estado lquido a estado gaseoso; descompone los compuestos moleculares del

elemento de inters en tomos individuales o en molculas sencillas y excita
estos tomos o molculas.
Las condiciones que debe cumplir una llama para considerarla satisfactoria es
que tenga la temperatura adecuada y que en ella se forme un ambiente gaseoso
que permita las funciones mencionadas. Adems, el ruido de fondo de la llama no
debe interferir las observaciones a efectuar.
Una llama tpica consta de: cono interno, cono externo y zona entre conos como
podemos observar en la siguiente figura.

El cono interno es la zona en que tiene lugar, generalmente, una combustin
parcial, es decir sin equilibrio trmico. Esta zona se calienta por conduccin y
radiacin a partir de la regin ms caliente que se encuentra sobre ella. En ella se
forman los productos de oxidacin intermedios, se produce una gran emisin de
luz (a partir del combustible y no de la muestra), una elevada ionizacin y una
gran concentracin de radicales libres. Es muy poco utilizada para trabajo
analtico.
Inmediatamente encima de la regin del cono interno se encuentra la zona
interconal Es la llamada parte caliente de la llama y en ella tiene lugar una
combustin completa y se alcanza casi un equilibrio termodinmico. Esta llama es
la que se utiliza prcticamente en anlisis por fotometra de llama y
espectroscopa de absorcin atmica. La altura de esta zona sobre el quemador
vara considerablemente con el tipo de quemador, la naturaleza de los gases
utilizados y su velocidad de flujo.
La regin del cono externo es una zona de combustin secundaria en la que los
productos parcialmente oxidados como el monxido de carbono pueden
completar su combustin. Esta regin se enfra por el aire circundante y es, en
general, una regin poco til.
Fenmenos que tienen lugar en la llama
1. - Se evapora el agua o los otros disolventes dejando como residuo diminutas
partculas de sal seca.
2. - La sal seca se vaporiza, es decir, pasa al estado gaseoso.

3. - Las molculas gaseosas, o una parte de ellas, se disocian progresivamente
dando lugar a tomos neutros o radicales. Estos tomos neutros son las especies
absorbentes en espectroscopa de absorcin atmica y son las especies emisoras
en fotometra de llama.
4. - Parte de los tomos neutros se excitan trmicamente o se ionizan. La fraccin
excitada trmicamente es importante en anlisis por fotometra de llama ya que el
retorno al estado fundamental de los electrones excitados es el responsable de la
emisin de la luz que se mide.
5. - Parte de los tomos neutros o de los radicales que se encuentran en la llama
pueden combinarse para formar nuevos compuestos gaseosos. La formacin de
estos compuestos reduce la poblacin de los tomos neutros en las llamas y
constituye las llamadas interferencias qumicas que se presentan en los mtodos
de anlisis que utilizan llamas.
La eficacia con que las llamas producen tomos neutros tiene mucha importancia.
La llama de xido nitroso-acetileno, que es ms caliente que la de aire acetileno,
parece ser ms efectiva para la formacin de tomos neutros. Los metales
alcalinos son una excepcin, probablemente debido a que la ionizacin es
apreciable en la llama caliente. En cualquier caso, estos dos tipos de llama son
los ms adecuados para fotometra de llama y absorcin atmica.
A las temperaturas ordinarias de llamas es relativamente baja la fraccin de
tomos del estado fundamental que se excita. nicamente si la temperatura de la
llama es muy elevada la fraccin de tomos excitados empieza a ser apreciable.
Este hecho pone de manifiesto la necesidad de controlar la temperatura de la
llama cuidadosamente para fotometra de emisin. Por el contrario, la fraccin de
tomos en el estado fundamental es muy elevada y, por lo tanto, pequeas
fluctuaciones en la temperatura de la llama no son importantes para el anlisis por
absorcin atmica.
La ionizacin que tiene lugar en las llamas produce normalmente la prdida de un
slo electrn y se puede representar:
A = A+ + e-
A = tomo neutro
A+ = su ion positivo
e- = electrn libre
Este proceso de disociacin depende de la concentracin o de la presin, ya que
una especie se disocia en dos. Al aumentar la presin parcial de los tomos en la
llama, el porcentaje de ionizacin disminuye tal como debe esperarse de la
aplicacin de la ley de Le Chtelier.




A la temperatura de la llama acetileno-oxgeno la mayor parte de los elementos se
encuentran apreciablemente ionizados. El grado de ionizacin del elemento a
analizar puede disminuirse por adicin de una elevada concentracin de otro
elemento que sea ms fcilmente ionizable (tampn de radiacin o supresor de
ionizacin).
Es preferible, por lo general, suprimir de este modo la ionizacin a utilizar
temperaturas de llama ms bajas que hacen aumentar las interferencias
qumicas.

2.5.3 TCNICAS ANALTICAS.
La espectrometra atmica, en trminos generales, est basada en la absorcin,
emisin o fluorescencia por tomos o iones elementales. Hay dos regiones del
espectro que dan informacin atmica: la ultravioleta/visible y la de rayos X. En la
primera regin tienen su fundamento los instrumentos disponibles en el Servicio
de Espectrometra Atmica de los Servicios de Investigacin.
Los espectros atmicos ultravioleta y visible se obtienen mediante un adecuado
tratamiento trmico que convierte los componentes de una muestra en tomos o
iones elementales gaseosos. La emisin, absorcin o fluorescencia de la mezcla
gaseosa resultante sirve a continuacin para la determinacin cualitativa y
cuantitativa de uno o varios de los elementos presentes en la muestra.


El espectrmetro de absorcin atmica con cmara de grafito (GFAAS) permite
trabajar con muestras de volumen muy reducido (inferior a 100 L) o directamente
sobre muestras orgnicas lquidas. Habitualmente se analizan muestras de

material biolgico de origen clnico (sangre, suero, orina, biopsias hepticas, etc.).
Por su elevada sensibilidad (niveles de ppb), la tcnica se aplica en la deteccin
de metales en productos de alta pureza, como por ejemplo frmacos, alimentos
(peces y carne) y productos industriales, y tambin en aguas de bebida y de
acuferos (determinacin de la presencia de Cu, Cd, Pb, As, Hg, etc.).
El espectrmetro de absorcin atmica de llama (FAAS) permite la deteccin y
determinacin de metales en cualquier tipo de muestra industrial siempre y
cuando pueda ser solubilizada. Los lmites de deteccin en este caso son del
orden de la ppm (partes por milln).
Esta tcnica analtica est especialmente indicada para determinar elementos
alcalinos, alcalinotrreos y metales pesados presentes en cualquier tipo de
muestra susceptible de ser disuelta. Los niveles de concentracin que se pueden
analizar van desde % hasta ppb (partes por billn 1 mg/Tm).
Actualmente se dispone de un equipo de absorcin atmica de ltima generacin
modelo AAnalyst 800 de la firma Perkin-Elmer cuyas caractersticas principales
son:
Doble sistema de atomizacin con intercambio totalmente automatizado.
Mechero para atomizacin por llama.
Horno de grafito para atomizacin electrotrmica.
Horno de grafito de calentamiento transversal con tecnologa de
estabilizacin de temperatura.
Correccin de fondo por efecto Zeeman para la atomizacin electrotrmica.
Correcin de deuterio para la atomizacin por llama.
Automuestreador.
Detector de fotodiodos en fila segmentados.
De pendiendo de las disponibilidades de lmparas de ctodo hueco y de la
naturaleza de las muestras, se pueden desarrollar metodologas de anlisis que
permiten la determinacin, en unl rango que va desde las ppm (mg/kg) a las ppb
(g/Kg) de un gran nmero de elementos del sistema peridico:
Ag, Al, As, Au, B, Ba, Be, Bi, Ca, Cd, Co, Cr, Cs, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Ge,
Hg, Ho, In, Ir, K, La, Li, Lu, Mg, Mn, Mo, Na, Nd, Ni, P, Pb, Pd, Pr, Pt, Rb, Rh, Ru,
Sb, Se, Si, Sm, Sn, Sr, Te, Ti, Tl, Tm, U, V, Y, Yb, Zn.










Interferencias:
Se llaman interferencias a la influencia que ejerce uno o ms elementos presentes
en la muestra sobre el elemento que se pretende analizar. La clasificacin de los
distintos tipos de interferencias se muestra a continuacin:
Interferencias fsicas: Efectos causados por las propiedades fsicas de la
muestra en disolucin.
Interferencias espectrales: Producida por radiaciones que alcanzan al detector a
una longitud de onda muy prxima del elemento que se investiga.
Interferencias qumicas: Influencia que ejercen unos elementos sobre otros por
formar, entre ambos, compuestos estables.
Interferencia por efecto de matriz: Debidas a la influencia que tiene el entorno
que rodea a los tomos en estado fundamental que se pretende analizar.
Interferencias por absorcin inespecficas: Se presenta un aumento de la
seal originado por la dispersin de las radiaciones de la lmpara.
Interferencias por ionizacin: Debida a que parte de los tomos pasan al estado
excitado. Para evitar al mximo estas interferencias habr que optimizar el equipo
eligiendo las condiciones ms adecuadas para cada elemento.
Mtodos:
Para el anlisis de una muestra, lo primero que habr que hacer ser poner las
condiciones especficas del elemento que vamos a analizar. Estas condiciones
vienen especificadas por el fabricante. Una vez elegidas las condiciones de
trabajo para el elemento en cuestin habr que calibrar el aparato. Parta ello se
pueden seguir dos procedimientos, la realizacin de una curva de calibrado o bien
el mtodo de adicin.
Curva de calibrado.
Se utilizan soluciones patrones, que contienen el elemento a determinar de
concentraciones conocidas. Se representan la absorbancia de cada solucin
patrn frente a la concentracin. Se procura trabajar en el intervalo lineal de la
curva. Una vez obtenida la curva patrn, se atomiza la muestra problema y se

mide la absorcin de la misma, utilizando idnticas condiciones a las usadas
cuando se prepar la curva patrn. De la medida de la absorbancia del problema
se puede determinar su concentracin a partir de la curva de calibrado por
extrapolacin.
Mtodo de adicin.
Este mtodo se emplea cuando existen interferencias. El mtodo consiste en
aadir un volumen conocido de la muestra problema a cuatro matraces aforados.
Al primer matraz no se le aade nada. Al segundo se le aade por ejemplo 1ppm.
Al tercer matraz se le aade un volumen doble del mismo patrn, de forma que
contenga una concentracin aadida de 2ppm. Y al cuarto matraz se le aade
3ppm.

Una vez hecho esto, se procede a realizar las medidas de absorbancia de cada
matraz. El primer matraz dar una lectura, el segundo matraz dar la misma
lectura que el anterior ms la seal propia de 1ppm. Extrapolando sobre el eje
negativo de las X se encuentra el valor de la concentracin de la muestra
desconocida. Para que este mtodo sea vlido se debe obtener una curva de
calibrado perfectamente recta.


2.6 ESPECTROMETRA DE MASAS.

La Espectrometra de Masas es una poderosa tcnica microanaltica usada para
identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos conocidos, y
para elucidar la estructura y propiedades qumicas de molculas. La deteccin de
compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades realmente pequeas
(algunos pmoles) de muestra y obtener informacin caracterstica como el peso y
algunas veces la estructura del analito.


En todos los casos, alguna forma de energa es transferida a las molculas a
analizar para afectar la ionizacin. En la tcnica clsica de impacto electrnico
(electron ionization EI), algunas de las molculas ionizadas del analito explotan
en una variedad de fragmentos ionizados, el patrn de fragmentacin resultante
as como los iones residuales constituyen el espectro de masas.
En principio, el espectro de masas de cada compuesto es nico y puede ser
usado como se huella qumica para caracterizar el analito.
LOS INICIOS DE LA ESPECTROSCOPIA DE MASAS
Corra el ao 1912 cuando el cientfico J. J. Thomson (Premio Nobel en 1906)
empujado por su afn de descubrir los secretos ms profundos de la qumica, se
las ingeni para crear el primer espectrmetro de masa y obtener de l los
primeros espectros de elementos como O2, N2, CO y COCl2.
Pero el mrito no fue solo de l, ya que la espectrometra de masas comenz a
ver la luz en el ao 1886 cuando Goldstein descubri los iones positivos, sigui
cogiendo forma con W. Wien que consigu analizarlos por defleccin magntica
en 1898 y que dio un paso definitivo cuando W. Kaufmam consgui analizar los
rayos catdicos usando campos elctricos y magnticos paralelos en 1901. Todos
estos avances permitieron a la
privilegiada mente de J. J. Thomson idear el primer espectrmetro de masas
(Skoog, Hiller, Nieman, 2000, 182).
A partir de ese da se comenz a usar en los laboratorios de qumica para separar
iones atmicos y moleculares en funcin del cociente masa/carga con la unidad
Thomson (Th) como unidad fundamental. Y aunque su avance era firme, su uso
para analizar macromolculas no fue posible hasta la dcada de los 80, cuando el
profesor J. B. Fenn utiliz el mtodo de ionizacin por electropulverizacin
("electrospray") de una solucin acuosa de protenas. De esta forma consigui
producir pequeas gotas de una muestra que se reducen de tamao al
evaporarse el agua que las transporta, mientras los iones de protenas
permanecen en forma de suspensin libre. La relacin masa/carga de los iones
as obtenidos permite su anlisis en cualquier espectrmetro de masas. Bilogos

y qumicos pueden ahora rpidamente identificar las protenas y obtener su
imagen tridimensional (Rubinson, Rubinson, 2000, pg. 289).
La espectrometra de masas atmicas es una herramienta muy verstil y util para
identificar los elementos presentes en una muestra y determinar las
concentraciones de cada una de las materias que la componen. Esta tcnica nos
permite determinar prcticamente todos los elementos del sistema peridico.

Esta tcnica ofrece numerosas ventajas frente a las tcnicas espectofotomtricas
ya que:
Los lmites de deteccin que son, para muchos elementos, tres rdenes de
magnitud ms sensibles frente a los mtodos pticos.
Espectros notablemente ms sencillos, generalmente nicos y con
frecuencia fcilmente interpretables.
Capacidad para medir relaciones isotpicas atmicas.
En cambio, tambin tienen una serie de desventajas que no podemos
obviar como:
El coste del instrumento es de dos a tres veces el de los instrumentos
pticos atmicos.
La deriva del instrumento puede ser del orden del 5 o 10%/hora.
Contiene unas determinadas interferencias.
Con la espectrometra de masas somos capaces de proporcionar informacin
acerca de:
La composicin elemental de las muestras: de esta se encarga la
espectrometra de masas atmico.
De la composicin de las molculas inorgnicas, orgnicas y biolgicas.
De la composicin cualitativa y cuantitativa de mezclas complejas.
De la estructura y composicin de superficies slidas.
De las relaciones isotpicas de tomos en las muestras.
Hoy en da se contina avanzando y cabe citar al cientfico japons K. Tanaka,
que bombardeando muestras de macromolculas biolgicas en estado slido o
viscoso con rayos lser, consigui su dispersin en porciones ionizadas de
pequesimo tamao, aptas para su anlisis por espectrometra de masas. Un
mtodo para determinar la masa de macromolculas en espectrometra es
acelerarlas en una cmara de vaco y medir su "tiempo de vuelo". Los blancos del
espectrmetro son alcanzados por las molculas en un orden determinado por
sus unidades Thomson. Las ms rpidas son las ms ligeras y de mayor carga
(Rubinson, Rubinson, 2000, pg.291)

Estos mtodos poseen muchas aplicaciones como son el desarrollo de productos
farmacuticos, control de sustancias nutritivas y diagnsticos precoces de
enfermedades como la malaria, cncer de mama, cncer de prstata, etc.




FUNDAMENTOS TERICO- TCNICOS DE E.M.
Hoy en da, esta tcnica contina teniendo los mismos fundamentos que en su
origen, aunque el espectrmetro de hoy en da poco tenga que ver con su
predecesor.
La espectrometra de masas se fundamenta en la separacin de partculas
moleculares o atmicas por su diferente masa.
El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas:
Ionizacin de la muestra.
Aceleracin de los iones por un campo elctrico.
Dispersin de los iones segn su masa/carga.
Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

Fig.1: Esquematizacin del paso de una muestra por los principales
componentes de un instrumento de espectroscopia de masas.
Ionizacin de la muestra (Oriol, 1998, 312-313)






2.6.1 CONCEPTO DE: ESPECTRO DE MASAS, ION MOLECULAR O
PROGENITOR DE PICO BASE.
Espectro de masas: Un espectro de masas es una grfica de intensidad relativa
del ion como funcin de la relacin masa/carga (m/z). El espectro de masas es
frecuentemente representado como un histograma simple. Esta forma de registro
de iones y sus intensidades sirven para establecer el peso molecular y estructura
del compuesto a ser analizado. Debido a que ocurre la fragmentacin del analito,
las fracciones del ion aparecen en el espectro a valores m/z menores que la
molcula completa ionizada (ion molecular) a partir de estos datos se deduce la
estructura y peso molecular de la molcula completa.

Ion molecular: El ion molecular resulta de la ionizacin de la molcula a analizar.
Este ion representa la molcula intacta y es el ltimo precursor de todos los iones
fragmentados que componen el espectro de masas. El pico del ion molecular
aparece a un valor m/z numricamente igual al peso molecular del compuesto.

Pico base: Es el pico ms intenso en el espectro de masas. Es usado como base
para normalizar las intensidades de los otros picos. Al pico base se le asigna una
intensidad relativa de 100%.

Relacin masa/carga: Esta expresin, abreviada m/z, es la relacin del nmero
de masa (m) de una partcula dada entre el nmero (z) de unidades cargadas
electrostticamente (e) que posee la partcula. As, m/z es una relacin
adimensional que es el parmetro medido por el analizador de masas. La masa
de una partcula dada es igual a la suma de sus masas atmicas (en Daltons) de
todos los elementos que componen la partcula. El smbolo para las unidad de
masa es u, y corresponde a 1/12 de la masa del 12C, al que se la ha asignado un
valor de 12.000000 por convencin.


Iones doblemente cargados: Es posible para una molcula perder dos
electrones durante el proceso de ionizacin. Estos iones que estn doblemente
cargados producirn un pico en el espectro de masas en un valor m/z
numricamente igual a la mitad de la masa molecular del ion. Los iones
doblemente cargados son insignificantes en el espectro de masa para la mayora
de los compuestos. Sin embargo, para aquellas molculas que los produzcan en
forma estable, los picos correspondientes en el espectro de masas pueden ser
usados en la interpretacin de datos.

Intensidad relativa: La intensidad relativa de un pico representa su intensidad en
comparacin con el pico base. Se representa como % respecto al pico base que
es 100%. Por convencin, este dato se indica en la izquierda del espectro de
masas.

Porcentaje total de ionizacin: Este trmino expresa la abundancia de un ion
individual comparado con la suma de las abundancias de todos los iones en un
rango de masa especifico. La escala de porcentaje total de ionizacin esta
representada a la derecha del espectro de masas con el smbolo (%Sn), este dato
puede ser utilizado para comparar diferentes espectros de masas de diferentes
compuestos.
2.6.2 PARTES FUNDAMENTALES DE UN ESPECTRO DE MASAS.
Bsicamente un espectrmetro de masas costa esencialmente de las siguientes
partes:
Sistema de entrada de muestras.
Cmara de ionizacin.
Acelerador.
Analizadores.
Detector.
Sistema de entrada de muestras.
En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se
convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce
lentamente en la cmara de ionizacin.
La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra
representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco. En los
espectrmetros de masas ms modernos encontramos diferentes tipos de
sistemas de entrada:

Sistemas indirectos de entrada: es el sistema ms clsico y el ms simple, en el
cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de
ionizacin que esta a baja presin. El sistema de entrada es normalmente de
vidrio para evitar posibles prdidas por adsorcin.
Entrada por sonda indirecta: los lquidos y los slidos no voltiles se pueden
introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el
cual se inserta a travs de un cierre de vaco. El sistema de cierre se utiliza para
controlar la cantidad de aire que entra despus de la insercin de la sonda en la
regin de ionizacin. Las sondas tambin se usan cuando la cantidad de muestra
es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad.
Sistemas de entrada cromatrogrficos y de electroforesis capilar 1: es un tipo de
sistema de entrada especial, esta indicado su uso cuando al espectrmetro de
masa va acoplado un sistema de cromatrografa de gases o de lquidos de alta
eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y
determinacin de los componentes de mezclas complejas (Mtodos, 2006)
Cmara de ionizacin
Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas
caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas
transforman los componentes de una muestra en iones.
En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en
un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o
negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior
del analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador.(Skoog,
Hiller, Hieman, 2000, 212).
La formacin de iones del analito es el punto de arranque de arranque de un
anlisis por espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para
distintas especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado
para la formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos
categoras:
Fuentes de fase gaseosa: en estas primero se volatiliza la muestra y luego se
ioniza.
Estn generalmente restringidas a compuestos trmicamente estables que tengan
puntos de ebullicin menores de unos 500C. En la mayora de los casos, estos
requerimientos limitan la utilizacin de las fuentes de fase gaseosa a compuestos
con pesos moleculares menores de unos 103 Daltons.
Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002,
486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios
que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes.

Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 1000
Daltons.
Fuentes de desorcin 2: es estas la muestra en estado slido o lquido, se
transforman directamente en iones gaseosos.
Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002,
486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios
que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes.
Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 100000
Daltons.
Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes
blandas.
Fuentes duras: comunican suficiente energa a las molculas para que estn en
un estado de energa altamente excitado. La relajacin posterior, implica la rotura
de las uniones produciendo iones fragmentados. Su espectro da lugar a muchos
picos y nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e
informacin estructural de los analitos.
Fuentes blandas: dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro
con muy pocos picos dndonos informacin til ya que nos permite la
determinacin exacta del peso molecular de la molcula o molculas
TIPO NOMBRE Y ACRNIMO AGENTE IONIZANTE
Impacto de electrones (EI) electrones energticos
Fase
Gaseosa
Ionizacin qumica (CI) iones gaseosos
reactivos
Ionizacin por campo (FI) electrodo de elevado
potencial
Desorcin por campo (FD) electrodo de elevado
potencial
Ionizacin por electronebulizacin
(ESI)
campo elctrico
elevado
Desorcin/ionizacin asistida por una
matriz (MALDI)
haz de lser
Desorcin Desorcin por plasma (PD) fragmentos de fisin
del 252Cf
Bombardeo con tomos rpidos (FAB) haz de tomos
energticos
Espectrometra de masas de iones
secundarios (SIMS)
haz de iones
energticos
Ionizacin por termonebulizacin (TS) elevada temperatura


Fig. 1: Clasificacin de los distintos tipos de camaras de ionizacin,
indicando
sus nombres y acrnimos y especificando cada sus agentes ionizantes.
Sistema acelerador.
En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los
electrones son obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una
pequea diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe
una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partculas su velocidad
final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de partculas.


Analizadores de masa.
Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios
dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre
diferencias muy pequeas de masa. Adems, los analizadores deberan de
permitir el paso del nmero suficiente para producir corrientes inicas fciles de
medir. Al igual que sucede con los monocromadores 4 pticos, a los que los
analizadores son anlogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe
de llegar a un equilibrio que esta regido por la resolucin del espectrmetro de
masa (Skoog D., Holler J., Nieman T., 2000, pg. 412).
Existen diferentes tipos de analizadores de masas:
Analizadores de sector magntico: los analizadores de sector magntico
utilizan un imn permanente o un electroimn para hacer que el haz procedente
de la fuente de iones se desplace con una trayectoria circular de 180, 90 o 60.
Estos analizadores tambin son llamados de enfoque simple.

Fig.3: Diagrama esquemtico de un analizador de masas de sector

magntico equivalente a los utilizados en espectrometra de masas,
recalcar la ubicacin del sector magntico (laminated magnet).
Espectrmetros de doble enfoque: este trmino se usa en los espectrmetros
en los cuales las aberraciones direccionales y las aberraciones de energa de una
poblacin de iones se minimizan simultneamente. El doble enfoque se consigue
utilizando combinaciones de campos magnticos y electrostticos
cuidadosamente seleccionados.
Espectrmetro de masa cuadrupolar: son normalmente menos caros y ms
robustos que los de sector magntico, adems tambin ofrecen la ventaja de
emplear tiempos de barrido pequeos (<100ms), lo cual es particularmente til
para realizar barridos de picos cromatrogrficos en tiempo real. Son, con
diferencia los ms utilizados hoy en da (Plasencia, 2003, 15).

Fig.4: Diagrama de un espectrmetro de masa cuadrupolar,
que es uno de los tipos de analizadores de masa ms utilizados en
espectrometria de masas dado su bajo precio y robustez.
Analizadores de masas de tiempo de vuelo (TOF): en estos aparatos se
producen los iones positivos peridicamente por bombardeo de la muestra con
impulsos de electrones, de iones secundarios o de fotones generados por lser.
Los iones producidos de esta forma son acelerados en un tubo analizador libre de
campo mediante un campo elctrico pulsante de 103 a 104 V. La separacin de
los iones en funcin de la masa se produce durante su recorrido hacia el detector,
situado al final del tubo. Estos aparatos presentan ventajas como la robustez,
simplicidad, fcil acceso a las fuentes de iones y el virtualmente ilimitado intervalo
de masas, pero tienen no obstante una sensibilidad y una resolucin limitadas.
Analizadores de trampa de iones: es un dispositivo en el que los cationes o
aniones gaseosos pueden formarse y quedar confinados durante largos periodos
de tiempo por la accin de campos elctricos y/o magnticos. Los espectrmetros

de trampa de iones son ms robustos, compactos y ms econmicos que los
anteriores.
Transformada de Fourier (FT): Como sucede con los instrumentos de infrarrojo
y de resonancia magntica nuclear, los espectrmetros de masas de
transformada de Fourier proporcionan mejores relaciones seal/ruido, velocidades
mayores y sensibilidad y resolucin ms elevadas.
La parte fundamental de un instrumento de transformada de Fourier es una
trampa de iones en la cual los iones circulan en rbitas bien definidas durante
largos periodos. Tales cavidades se construyen aprovechando el fenmeno de
resonancia inica ciclotrnica.

La resolucin es espectrometra de masas de transformada de Fourier est
limitada por la precisin en la medida de la frecuencia ms que por las rendijas o
las medidas de campo (Plasencia, 2003, 16-17).
Es posible alcanzar una resolucin extremadamente elevada (superior a 106)
dado que las medidas de frecuencia se pueden realizar con elevada precisin.

Detectores.
Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual
generalmente esta constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto
producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son
acelerados hacia un dnodo el cual emite varios electrones ms al recibir el
impacto de cada electrn. Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse
una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente
fuertemente amplificada, por un procedimiento muy similar al que se utiliza en los
tubos fotomultiplicadores. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por
procedimientos electrnicos y se lleva a un sistema registrador.



2.6.3 DETERMINACIN DEL PESO MOLECULAR Y DE LA FORMULA
MOLECULAR POR ESPECTROMETRA DE MASAS.