TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus,

producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen
cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes,
temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por
cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y
libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando
una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de
las bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su
estudio y observacin son de enorme inters.
FUNDAMENTO
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores
ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el
microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.
2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y s
lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.
REALIZACIN
Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las
esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener unos resultados
satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.
1. Preparar los frotis bacterianos indicados.
2. Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la
llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min.
Nota: evitar que la muestra hierva. Aadir ms
colorante si ste se evapora; es importante que
la muestra no se seque.
3. Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.
4. Teir con safranina 1 min.
5. Lavar con abundante agua el exceso de
colorante.
6. Secar la preparacin.
7. Observar la preparacin al microscopio.
Anotar la disposicin y la morfologa de las tres
especies del gnero Bacillus.


INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria
constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un mismo
gnero.



Las tres bacterias empleadas en esta prctica difieren en la disposicin y morfologa de las
endosporas. B. sphaericusposee una endospora esfrica con localizacin terminal y
deformante de la clula vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de
tambor". B. thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la clula
vegetativa, lo que provoca un abombamiento caracterstico denominado "en huso". B.
subtilis forma una espora cilndrica subterminal no deformante.
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