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ING.

BIOQUIMICA



MICROBIOLOGIA

PRACTICA: NUMERO MS PROBABLE
PRUEBA PRESUNTIVA
Cruz Pacheco Sarahi Karina
Krasel Pea Erick
Ortega Hernndez Noelia
Snchez Olaya Marco Antonio
Snchez Sandoval Aarn Shamir
Vzquez Carrera Sergio Geovanny


Catedratico: LUCINA LILIA GOMEZ HERNANDEZ


I.INTRODUCCIN:
Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en
muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el
recuento directo por microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados
en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos
slidos o lquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).El mtodo del nmero
ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente
utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero
de microorganismos en muestras de alimentos y aguas.
Sinembargo,se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de
microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y sueloscontamina
dos, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero demicroorganismos en
muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces defermentar
la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estnformados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella.
Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los
animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de
contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termo tolerantes por su capacidad de
soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes
Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del
intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones
adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han
utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como
una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia
indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores
de enfermedades.



II. OBJETIVOS:
Familiarizarse con el metodo de NMP.-Detectar bacterias coliformes totales y fecales.-
analizando y evaluando la calidad del agua(muestra), mediante la identificacin de los
microorganismos mencionados anteriormente y siguiendo la metodologa
correspondiente.

III.- MATERIAL
Muestra: balneario las charras
Medios de cultivo:
-Caldo lactosado (presuntivo)


10 tubos de 18 x 150.
10 tubos de 18 x 150
10 tubos durham.
Autoclave
Gradilla


.PROCEDIMIENTO: DE ACUERDO A LA NOM-112-SSA1-1994
Prueba presuntiva

MEDIO DE CULTIVO
Caldo lactosado o caldo lauril sulfato de sodio.

PREPARACIN:
Se utilizaron 117 ml de caldo lactosado para llenar los 10 tubos con 11.7 ml cada
uno.
La etiqueta del caldo lactosado menciona lo siguiente:
Rehidratar 13 g de medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos.
Calentar agitando frecuentemente para disolucin completa.
Distribuir en tubos de ensayo con campanas de Durham. Esterilizar a 121 C
durante 15 minutos. Verificar que en las campanas no existan bubujas.

CALCULOS:
13 g------------------- 1000 ml
X= ------------------ 117 ml

X= 1.521 g
Se pesan 1.521 g de caldo lactosado para 117 ml de agua destilada.


Inoculacin. Agitar la muestra. Transferir volmenes de 10 ml de muestra a cada
uno de 5 tubos con 20 ml de caldo lactosado de mayor concentracin y 1,0 ml y
0,1 ml de muestra a cada uno de los tubos de las series de 5 respectivamente con
10 ml de caldo lactosado de concentracin sencilla o caldo lauril sulfato triptosa
con prpura de bromocresol.

Incubacin. Incubar los tubos a 35 C. Examinar a las 24 2 h y observar si hay
formacin de gas o la formacin de gas no se observa en este tiempo, incubar por
48 2 h.



RESULTADOS:
Despus de 48 horas horas de incubacin como indica la norma y bajo las condiciones
necesarias se observo la presencia de gas:
Los 3 tubos con dilucin 10
-1

1 tubo con dilucin 10
-2

En los dems tubos no hubo presencia de gas
OBSERVACIONES:
Se verti el medio a los tubos correspondientes, estos a su vez conteniendo dentro los
tubos Durhan, al salir del proceso de esterilizacin se observ la presencia de gas, mas
sin embargo conforme paso, el tiempo y la temperatura se regularizo, este gas disminuyo,
Se realizaron las diluciones en la campana de extraccin.

CONCLUSIONES:
Es importante mencionar que el medio caldo lactosado (presuntivo) inhibe el crecimiento
de los fermentadores de la lactosa distintos de los coliformes y desde luego es de gran
importancia un anlisis en este caso a un lugar de uso pblico, para evitar as mltiples
efectos.
Por otro lado este medio, permite la recuperacin de los microorganismos daados que se
encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como
fuente de carbono.




























ING. BIOQUIMICA



MICROBIOLOGIA

PRACTICA: NUMERO MS PROBABLE
PRUEBA CONFIRMATIVA
Cruz Pacheco Sarahi Karina
Krasel Pea Erick
Ortega Hernndez Noelia
Snchez Olaya Marco Antonio
Snchez Sandoval Aarn Shamir
Vzquez Carrera Sergio Geovanny


Catedratico: LUCINA LILIA GOMEZ HERNANDEZ


OBJETIVO: Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua o alimentos mediante la
bsqueda de microorganismos coliformes totales, coliformes fecales.
INTRODUCCION:
Debido a que un gran nmero de enfermedades son transmitidas por va fecal-oral
utilizando como vehculo los alimentos y el agua, es necesario contar con
microorganismos que funcionen como indicador de contaminacin fecal. Estos deben de
ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una
sobrevivencia similar a la de los patgenos intestinales.
Los coliformes constituyen un grupo heterogneo con hbitat primordialmente intestinal
para la mayora de las especies que involucra, es constante, abundante y casi exclusivo
de la materia fecal, su capacidad de sobrevivencia y multiplicacin fuera del intestino
tambin se observan en aguas potables, por lo que este grupo se utiliza como indicador
de contaminacin fecal en agua; encontrndose que mientras mayor sea el nmero de
coliformes en agua, mayor ser la probabilidad de estar frente a una contaminacin
reciente.
Para su estudio, se dividen en dos grupos. El grupo de bacterias coliformes totales el cual
comprende a todos los bacilos Gram-negativos aerobios o anaerobios facultativos, no
esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de gas en un lapso mximo de 48
h. a 35C 1C. Este grupo est conformado por 4 gneros principalmente: Enterobacter,
Escherichia, Citrobacter y Klebsiella.
El grupo de coliformes fecales, est constituido por bacterias Gram-negativas capaces de
fermentar la lactosa con produccin de gas a las 48 h de incubacin a 44.5 0.1C. Este
grupo no incluye una especie determinada, sin embargo la ms prominente es
Escherichia coli. El mtodo del Nmero ms probable (NMP) (Most probable number -
MPN - en ingls), tambin conocido como el mtodo de los ceros de Poisson, es una
forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir
de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar
densidades de poblacin que se emplea cuando una evaluacin cuantitativa de elementos
individuales no es factible.



MATERIAL, EQUIPO Y SUSTANCIAS:
3 tubos de 18 x 150.
3 tubos durham.
Autoclave.
Gradilla

MEDIO DE CULTIVO
Caldo lactosado bilis verde brillante

PREPARACIN:
Se utilizaron 39 ml de Caldo lactosado bilis verde brillante para llenar los 3 tubos
con 13 ml cada uno.

Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y
distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Preparar adems, el medio a
doble concentracin. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

CALCULOS:

X= 1.44 g de caldo bilis verde brillante


PROCEDIMIENTO:
En cada uno de los tubos en los que hubo presencia de gas en la prueba presuntiva se
siembra por asada directa en los tubos del medio de confirmacin Caldo lactosado bilis
verde brillante.
Los tubos se incubaron a 35
0
C

Examinar a las 24 horas y observar si hay formacin de gas o si la formacin de gas
no se observa en ese tiempo incubar por 48 horas.

RESULTADOS:
Tras las 48 horas hubo presencia de gas en 1 tubo en el cuales la primera serie
de 10 ml y otro tubo en la serie de 1 ml.

Solo se obtuvieron estos resultados

CONCLUSIONES:
Cuando se requiere confirmar una prueba presuntiva sobre la posible presencia de
bacterias coliformes, se contina el anlisis con una prueba confirmativa empleando un
medio selectivo a los microorganismos cultivados en la prueba presuntiva anterior en
medio slido. Con este fin se emplean comnmente el mismo caldo lactosado bilis verde.
El desarrollo de gas en este medio, confirma la presencia de coliformes, si ocurre en
incubacion 48 horas a 32 o 35 C.