Anda di halaman 1dari 6

Nama : Tryan Fernandes

No.Bp : 1110412030

Tugas Bioteknologi
Jurnal : Cloning, Characterization and Heterologous Expression of the Indolocarbazole
Biosynthetic Gene Cluster from Marine-Derived Streptomyces sanyensis FMA
1. Isolasi gen Jelaskan dengan skema
Spora strain FMA pertama
diinokulasi ke 50 mL medium benih dalam botol 250 mL
diinkubasi pada suhu 28 C, 220 rpm selama 2 hari
Kultur benih
digunakan untuk menyuntik media produksi
(5 mL dalam 50 mL medium dalam botol mL 250 untuk analisis
produksi atau 20 mL ke dalam 200 mL dalam 1 L termos untuk
isolasi)
diinkubasi pada suhu 28 C, 220 rpm selama 5 hari
Kultur fermentasi
dipanen dengan sentrifugasi
Supernatan
diekstraksi dua kali dengan volume yang sama dari etil asetat
EtOAc extracts
dipekatkan dalam vakum untuk membeli residu coklat
miselia diekstraksi dua kali dengan aseton
Ekstrak aseton gabungan dipekatkan dalam vakum
Gabungan Ekstrak EtOAc
dilarutkan dalam MeOH
disaring melalui 0,2 m filter dan dikenakan HPLC



DNA Sequence






Primer yang digunakan :


2. Plasmid yang digunakan : pUM-T vector (Bioteke, Beijing,
China) and then sequenced, revealing a DNA fragment with the size of 596 bp
pUM-T Map and multiple cloning sites:







3. Berapa bp DNA hasil PCR ?



Gambar S1. Inaktivasi SPCC. (A) Pembangunan gen inaktivasi SPCC mutan.
(B) PCR konfirmasi silang ganda mutan. M: DNA marker, W: S. sanyensis
FMA liar jenis strain; Mutan: gen inaktivasi SPCC mutan.


Gambar Inaktivasi S2. Dari SPCI. (A) Pembangunan gen inaktivasi SPCI mutan. (B)
PCR
konfirmasi silang ganda mutan. M: DNA marker, W: S. sanyensis FMA liar
jenis strain; Mutan: SPCI gen mutan inaktivasi.





Gambar S3. Inaktivasi SPCR. (A) Pembangunan gen inaktivasi SPCR mutan.
(B) PCR konfirmasi silang ganda mutan. M: DNA marker, W: S. sanyensis
FMA liar jenis strain; Mutan: gen inaktivasi SPCR mutan















Strain bakteri dan plasmid yang digunakan :