3.1. Material o Amonium Sulfat o Aquadest o Biuret o Blender o Etanol o Fenoftaftalein (PP) o Formalin o Inkubator o Katak 2 ekor (25gr) o Larutan Biuret o Larutan Dapar Fosfat PBS 5 mM ph 6.8 o Larutan Kalium Biftalat o Larutan Kasein o Larutan Natrium Hidroksida o Mikropipet o Olive Oil o Selofan o Spektrofotometer UV-Visible
3.2. Method o Ekstraksi Ekstraksi dilakukan cara yang digunakan adalah menghaluskan katak dengan menggunakan blender, ditambahkan sedikit larutan dapar PBS untuk memudahkan proses penghalusan, setelah itu ekstrak disaring untuk memisahkan bagian tubuh yang udah tidak bias dihaluskan lagi. Ditambahkan larutan dapar PBS sampai 80 ml. o Fraksinasi Fraksinasi dilakukan berdasarkan prinsip salting out, yaitu dengan menambahkan garam Amonium Sulfat dengan 2 kadar yang berbeda yaitu 40% dan 80%, protein kemudian mengendap, endapan protein tersebut selanjutnya di dialisis dengan menggunakan kantong selofan dengan pelarut PBS selama 2 jam, setiap 1 jam larutan PBS diganti. o Uji Aktivitas Lipase Uji aktivitas lipase dilakukan dengan metode titrasi alkalimetri, menguji aktivitas enzim lipase yang ada pada fraksi terhadap emulsi olive oil yang merupakan minyak, yang kemudian dititrasi dengan menggunakan pentiter NaOH. NaOH sebelumnya dibakukan dngan Kalium Biftalat. Dihitung berapa mol asam lemak yang terbentuk o Uji Aktivitas Protease Uji aktivitas protease dilakukan dengan metode titrasi formol, yaitu menguji aktivitas enzim protease pada ekstrak yang ada pada fraksi terhadap substrat Kasein, yang kemudian diukur kadarnya dengan menambahkan Etanol dan Formalin, yang selanjutnya dititrasi dengan NaOH. Dihitung aktivitas proteasenya dengan menggunakan rumus: (V1 V2) x 1.63 o Kadar Protein Total Kadar Protein Total dihitung dengan menggunakan metode Biuret. Kedalam setiap fraksi ditambahkan 8 ml larutan biuret, serta 1 ml aquadest, kemudian diukur absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang 209nm yang sebelumnya telah diukur panjang gelombang maksimum serta kurva kalibrasinya dengan menggunakan Kasein