CRIMALDDI: platform teknologi dan target obat anti-malaria baru

Koordinasi, Rasionalisasi, dan Integrasi obat antimalaria Penemuan & Pengembangan Inisiatif
(CRIMALDDI) Konsorsium, didanai oleh Seven Kerangka Program Uni Eropa, telah berusaha, melalui
serangkaian lokakarya interaktif dan difasilitasi, untuk mengembangkan prioritas untuk penelitian
untuk mempercepat penemuan baru anti-malaria. Makalah ini menguraikan rekomendasi untuk
pengembangan teknologi yang memungkinkan dan mengindentifikasi-kation dari target baru.
Sistem penyaringan harus kuat, divalidasi, direproduksi, dan mewakili malaria manusia. Mereka juga
harus hemat biaya. Sementara sistem seperti itu ada untuk menyaring aktivitas terhadap tahap
darah Plasmodium falciparum, mereka kurang untuk spp Plasmodium lainnya. dan tahap lain dari
siklus hidup parasit. Prioritas perlu diberikan untuk mengembangkan-ing layar high-throughput yang
dapat mengidentifikasi aktivitas terhadap hati dan tahap seksual. Hal ini pada gilirannya memerlukan
teknologi yang memungkinkan lainnya untuk dikembangkan untuk memungkinkan studi tahap ini
dan memungkinkan untuk kultur sel-sel hati dan parasit pada semua tahap siklus hidupnya.
Sebagai teknologi yang memungkinkan menjadi tersedia, mereka akan memungkinkan target obat
baru untuk dipelajari. Saat ini obat antimalaria sebagian besar menargetkan tahap darah aseksual
siklus hidup parasit. Ada banyak lainnya yang menarik tar-mendapatkan bahwa perlu untuk
diselidiki. Tahapan hati dan tahap seksual akan menjadi lebih penting sebagai langkah pengendalian
malaria menuju eliminasi malaria. Perkembangan seksual adalah suatu proses yang menawarkan
beberapa sasaran, meskipun mekanisme diferensiasi yang masih belum sepenuhnya dipahami.
Namun, merancang obat yang efek tidak cura-tive tetapi akan digunakan pada pasien tanpa gejala
sulit mengingat batas keselamatan saat ini. Senyawa aktif terhadap skizon hati akan memiliki efek
profilaksis dan Plasmodium vivax eliminasi membutuhkan efektor terhadap hypnozoites hati aktif.
Ini mungkin bahwa obat yang akan digunakan dalam kampanye penghapusan juga akan perlu
memiliki utilitas dalam fase kontrol. Senyawa dengan aktivitas terhadap tahap darah harus diskrining
untuk aktivitas terhadap tahap lainnya.
Produk alami juga harus menjadi sumber berharga senyawa baru. Mereka sering menempati ruang
kimia non-Lipinski dan sebagainya dapat mengungkapkan chemotypes baru yang berharga

Telah ada kemajuan yang signifikan dalam
beberapa tahun terakhir untuk bangsal tujuan
global eliminasi malaria. Namun, laporan
terbaru dari resistensi artemisinin di Asia
Tenggara telah menekankan kebutuhan terus
untuk berbagai anti-malaria dengan perancah
kimia novel dan cara bekerjanya. Hal ini
diperlukan untuk merespon tantangan
terhadap obat-obatan saat ini dan
memperluas gudang senjata untuk aspek-
aspek yang tidak dilayani dengan baik oleh
obat yang ada sekarang (terutama terhadap
Plasmodium vivax malaria dan trans-misi
penyakit). Tujuan utama dari eliminasi
menuntut berbagai obat baru harus dibangun
dengan cepat untuk memenuhi tantangan
yang sangat berbeda dibandingkan dengan
kontrol.
Sebuah tantangan besar bagi sukses
penemuan obat anti-malaria adalah dengan
cepat mengidentifikasi target druggable dan
lead. Hal ini memerlukan metode yang sudah
diperbaiki untuk mempelajari berbagai tahap
siklus hidup parasit (tahap hati dan darah,
bentuk seksual, dan sporozoit midgut)
sehingga untuk menemukan kemungkinan
target obat baru. Beberapa spesies dan / atau
tahapan siklus hidup yang sulit untuk
mempertahankan atau menghasilkan ex vivo.
Penelitian malaria manusia terhambat oleh
kesulitan techno-logis yang membatasi studi
biologi parasit malaria pada semua tahap dan
patogenesis penyakit. Laboratorium khusus
atau infrastruktur 'platform' dengan demikian
kembali quired untuk menyediakan akses ke
tahap siklus hidup tertentu, dan metode ini
harus cukup kuat untuk digunakan dalam
berbagai laboratorium.
Sebagai tujuan pengobatan malaria bergerak
dari kontrol untuk penghapusan, jenis obat
yang diperlukan berubah. Obat yang
menghambat infektivitas bentuk seksual
dewasa dari gametocyte dan atau bentuk hati
dorman (hypnozoites) dari P. vivax akan
menjadi sangat penting. Akan ada pertanyaan
tentang keseimbangan antara lebih
mengeksploitasi target obat yang ada dan
berinvestasi dalam mengidentifikasi potensi
yang baru, mengingat biaya tinggi / risiko yang
terkait dengan penemuan obat baru dan
pengembangan. Pertanyaan yang belum
terjawab lainnya termasuk cara terbaik untuk
mengidentifikasi target obat baru, apakah
target yang umum untuk beberapa tahap
siklus hidup lebih baik dari target-tahap
tertentu, dan cara terbaik untuk mengevaluasi
dan memprioritaskan senyawa kandidat baru.
Paling tersedia saat ini anti-malaria
menargetkan tahap darah aseksual siklus
parasit hidup, satu-satunya tahapan yang ada
kuat, direproduksi, dan tinggi-throughput
dalam metode skrining vitro. Namun, kontrol
dan eliminasi akan membutuhkan kelas baru
obat anti-malaria aktif terhadap semua
tahapan kelima spesies malaria manusia.
Khusus untuk eliminasi, obat baru diperlukan
untuk menghilangkan semua parasit malaria,
termasuk hypnozoites P. vivax untuk
mencegah kekambuhan, dan untuk
mengganggu transmisi malaria dengan
menghilangkan gametosit. Teknik untuk cepat
layar perpustakaan besar senyawa terhadap
target pada semua tahap siklus hidup parasit
dari semua spesies Plasmodium yang relevan
saat ini tidak tersedia.
Seperti dijelaskan di tempat lain, Koordinasi,
Rasionalisasi, dan Integrasi obat antimalaria
Penemuan & Pengembangan Inisiatif
(CRIMALDDI) Konsorsium didirikan untuk
mengembangkan seperangkat prioritas
rekomendasi untuk mempercepat penemuan
obat anti-malaria. Makalah ini merangkum
temuan dua lokakarya Konsorsium yang
diselenggarakan untuk mengembangkan satu
set rekomendasi konsensus mengenai
memungkinkan teknologi dan
mengidentifikasi target baru. Laporan lengkap
mengenai lokakarya dapat ditemukan di situs
web CRIMALDDI dan di koran terkait
menyertai satu ini.
Mengembangkan teknologi yang
memungkinkan
Persyaratan umum untuk metode skrining
Skrining untuk mengidentifikasi senyawa
pengembangan obat yang potensial aktif
terhadap berbagai tahap siklus hidup parasit
Plasmodium dapat dipandang sebagai suatu
proses dua tahap (Gambar 1). Layar utama
harus cukup sederhana untuk digunakan
dengan mudah dalam sistem penyaringan
throughput tinggi (HTS), sedangkan layar
sekunder dapat lebih kompleks dan memiliki
kapasitas throughput menengah saja. Untuk
tahap darah Plasmodium falciparum HTS
positif hit, kebutuhan saat ini adalah untuk
menyaring> 20.000 senyawa dari HTS yang
strukturnya berada dalam domain publik ke
<200 senyawa dipertimbangkan untuk
pengembangan lebih lanjut.
Metode skrining utama harus kuat, divalidasi,
direproduksi, dan mewakili malaria manusia
(Tabel 1). Tes sel Whole adalah cara yang baik
untuk mengidentifikasi chemotypes dengan
sifat permeabilitas selular yang kompatibel
dengan mengakses target mereka di dalam
parasit dalam tahap variabel-ous nya. Sistem
penyaringan harus mengakomodasi strategi
yang melekat untuk meminimalkan hasil
negatif palsu.
Metode terutama dirancang untuk
menentukan modus tindakan chemotype
dapat lebih kompleks dan areimplemented
dalam tahap akhir dari proses pengembangan
obat. Persyaratan tambahan dari skrining
utama harus mencakup:
Efektivitas biaya;
Biologis yang sesuai, yaitu senyawa benar-
benar membunuh parasit (cidal daripada
sitostatik);
Kecil jumlah senyawa yang dibutuhkan untuk
layar;
Pengecualian yang sangat awal senyawa
sitotoksik terhadap inang manusia;
Proses penyaringan harus mencakup model
yang dapat diandalkan untuk semua tahap
siklus hidup parasit;
Senyawa kandidat dapat menjadi
schizonticidal ditambah aktif terhadap tahap
lain, atau hanya aktif terhadap tahap lain.
Obat murni schizonticidal mungkin akan
menjadi kurang menarik sebagai
pengendalian malaria dan eliminasi
berlangsung. Skrining utama harus
mempertimbangkan hal ini. Namun
penyebaran cepat resistensi terhadap arus
obat lini pertama akan memerlukan
penyebaran agen kuratif yang mungkin akan
schizonticidal.
Skrining sekunder hits positif dari layar utama
dapat lebih biologis informasi dan
berhubungan dengan kegiatan yang
diinginkan dari profil sasaran yang dikejar.
Sifat physiochemical dan obat-seperti
(termasuk profil toksikologi dan parameter
farmakokinetik) harus dipertimbangkan
karena mereka harus memungkinkan
terjemahan in vivo model. Skrining sekunder
juga harus mencari aktivitas terhadap obat-
resistan dari Plasmodium dan kapasitas untuk
menahan perlawanan. Saat ini, pemeriksaan
rutin dilakukan terhadap strain parasit yang
jelas tidak mewakili strain yang beredar di
masyarakat. Layar harus memiliki akses awal
untuk isolat dari pasien, khususnya mereka
yang menunjukkan resistensi terhadap agen
penting (seperti derivatif artemisinin), dan
budaya-diadaptasi P. falciparum dan P. vivax
isolat digunakan harus diperbaharui secara
teratur dan segera untuk mencerminkan
perubahan tersebut populasi parasit di
lapangan.
Semua metode skrining perlu divalidasi dan
repro-ducible antara pusat untuk memastikan
komparabilitas re-hasil.
Metode skrining terhadap parasit tahap darah
Identifikasi cepat dan pengembangan menjadi
obat devel-bangan senyawa aktif terhadap
tahap darah infeksi P. falciparum akut ini
dimungkinkan oleh tersedianya kemampuan
berbagai memadai in vitro tes skrining dan
model hewan. Sebaliknya, ada kesenjangan
yang signifikan dalam platform teknologi yang
diperlukan untuk investigasi gating spesies
lain dari Plasmodium, khususnya P. vivax
(Tabel 2).
Plasmodium falciparum
Seiring dengan layar HTS radioaktif klasik
untuk P. falciparum menggunakan 3H-
hipoksantin, colorimetric (pLDH, HRPII) atau
neon (SybrGreen) tes telah banyak digunakan.
Baru-baru ini menyaring menggunakan parasit
transgenik (GFP, strain reporter luciferase)
telah disesuaikan dengan HTS. Saat ini, ada
sedikit kebutuhan untuk memprioritaskan
metode skrining tambahan untuk P. falcip-
arum. Namun, ada persyaratan untuk terus
meningkatkan tes yang ada. Dengan
munculnya Artemi-sinin perlawanan, senyawa
yang, seperti artemisinin, aktif terhadap tahap
cincin awal siklus erythrocytic atau mereka
yang aktif terhadap strain yang resisten
terhadap artemisinin P. falciparum harus
menjadi prioritas. Sebuah throughput yang
berbasis kelayakan pendekatan assay rendah
yang memungkinkan diskriminasi antara
senyawa berdasarkan modus-of-tindakan
anti-malaria mereka telah dikembangkan [19].
Pekerjaan lebih lanjut diperlukan untuk
mengembangkan layar baru lebih atau
modifikasi lebih lanjut dari metode yang ada.
Dalam model vivo menggunakan spesies
hewan pengerat Plasmodium falciparum atau
P. di immunodeficiency gabungan yang parah
(SCID) tikus atau primata non-manusia (NHP)
yang tersedia untuk studi farmakologi. Model
tikus dapat memberikan jenis hasil skrining
dependen dan spesies Plasmodium begitu
berbeda perlu digunakan di awal model tikus
layar-ing senyawa. Model primata sulit,
ketersediaan terbatas, dan tidak hemat biaya.
Ada kebutuhan untuk mengidentifikasi baik
dalam model vivo untuk malaria se-vere yang
dapat digunakan dalam penyaringan
sekunder. Untuk menemukan model yang
tepat, profil target yang perlu didefinisikan
lebih baik.
Plasmodium vivax

Penemuan obat baru aktif terhadap P. vivax
infeksi tahap darah sedang terganggu karena
kurangnya HTS tes (Tabel 2). Pengembangan
obat tersebut akan menjadi kunci untuk
mencapai pengendalian malaria dan eliminasi.
Tantangan utama adalah kurangnya sistem
kultur in vitro untuk pertumbuhan P. vivax.
Ketersediaan isolat segar bergantung pada
pengumpulan darah manusia yang terinfeksi,
yang perlu diproses dalam waktu enam jam
dari pengumpulan. Akibatnya, fasilitas
laboratorium harus berada di samping pasien
dan di lokasi yang mudah diakses. Selain itu, P
vivax istimewa menyerang retikulosit yang
berumur pendek dan hanya mewakili sekitar
1% dari sel-sel darah merah yang beredar.
Ditingkatkan ex vivo metode baru untuk
isolasi dan kriopreservasi P. vivax isolat dan
darah tali retikulo-cytes terkonsentrasi telah
dikembangkan dan jangka pendek (24 jam)
assay invasi telah dibakukan dan digunakan
untuk kedua tes kepekaan obat dan
proteomik. Namun, uji invasi masih
mengandalkan mikroskopis determin-asi
pematangan skizon dan retikulosit invasi dan
dengan demikian cukup melelahkan dan
membutuhkan tenaga terlatih. Baru-baru ini,
kelompok yang sama mengembangkan
sederhana, lapangan dioptimalkan protokol
menggunakan pewarna fluorescent dan aliran
cytometry untuk menentukan kepekaan obat
antimalaria dalam baru terisolasi P. vivax: ini
menjadi mungkin terutama karena portabel,
cytometers murah menjadi tersedia. Flow
cytometry dapat menjadi layak dan praktis
alter-asli mikroskop, meskipun masalah
budaya jangka panjang dari P. vivax berlanjut
dan merupakan blok kunci untuk kemajuan di
masa depan di sejumlah wilayah P. vivax
penelitian. Pengembangan model tikus SCID
untuk P. vivax bisa dilihat sebagai alternatif.
Hampir semua obat P. falciparum stadium
darah juga aktif terhadap P. vivax, tetapi
tingkat sensitivitas dari masing-masing spesies
terhadap obat mungkin berbeda. Lokakarya
con menyimpulkan bahwa mengembangkan
layar utama yang akan mengambil kegiatan
vivax secara terpisah tidak prioritas. Ini harus
mengembangkan in vivo model sekunder yang
baik, khususnya-larly untuk senyawa yang
memiliki diferensial in vitro ac-tivity terhadap
kedua spesies.
Metode skrining terhadap parasit hati stadium
Sampai saat ini, tes skrining divalidasi untuk
hati stadium P. falciparum dan P. vivax tahap
hati yang hampir tidak ada, dan masih banyak
pekerjaan yang harus dilakukan untuk de-
velop metode divalidasi sesuai (Tabel 3).
Sebuah prioritas utama untuk tahap hati dari
kedua P. falcip-arum dan P. vivax adalah
untuk mengembangkan sistem kultur
hepatosit direproduksi dan ro-bust yang
sangat rentan terhadap invasi besar-besaran
oleh sporozoit malaria. Ini harus menjamin
perkembangan lengkap parasit dan idealnya
memberikan mesin yang baik untuk
metabolisme obat. Blok lain adalah kurangnya
pasokan kuat sporozo-ites dan metode
cryogenic untuk menyimpan dan mengangkut
mereka.

Plasmodium falciparum

Tes dasar sudah ada untuk tahap hati yang
tidak membentuk hypnozoites: P. falciparum,
Plasmodium yoelii, dan Plasmodium berghei.
Sampai saat ini, hanya hepatosit primer
muncul cocok untuk P. falciparum dan mereka
memiliki permissivity sangat rendah untuk
infeksi. Garis hepatosit stabil dan infectable
dan kondisi standar untuk kultur hepatosit
perlu dikembangkan, karena sel-sel utama
hati manusia yang berkualitas variabel dan
kehilangan diferensiasi mereka dalam budaya.
Ada juga merupakan prioritas untuk
menemukan cara untuk meningkatkan
permissivity hepatosit terhadap infeksi oleh
sporozoit. Penelitian terbaru oleh Bathia dan
rekan yang menggunakan cryopreserved dia-
patocytes (dijelaskan di bawah ini untuk P.
vivax, tetapi juga diterapkan pada P.
falciparum) adalah potensi nilai untuk semua
model hati stadium.
Plasmodium vivax

Situasi dengan skrining untuk aktivitas hati
stadium aktif terhadap infeksi P. vivax adalah
sama seperti untuk P. falcip-arum, dengan
tantangan tambahan (a) mengembangkan
metode untuk mengolah tahap darah seksual
(dan dengan demikian untuk mendapatkan
sporozoit infektif berikut nyamuk pakan) dan
(b) mengembangkan merampas alat untuk
membedakan hypnozoite dari tahap replikasi
skizon. Kliring hypnozoites sangat penting
untuk eliminasi malaria.

Tes seluler untuk tiga langkah kunci biologi
hati-tahap yang demikian diperlukan: infeksi
hepatosit, pembentukan hypno-zoite, dan
reaktivasi untuk skizon hati. Identifikasi
Hypnozoite sulit karena ukurannya yang
relatif kecil, tidak adanya biomarker divalidasi
dan tingkat infeksi rendah. Sebuah sistem
kultur hati-skala kecil untuk P. vivax,
mengandalkan sporozoit cryopreserved telah
mengidentifikasi bentuk-bentuk kecil
primakuin-sensitif. Baru-baru ini, skizon dan
neon uni-nukleasi bertahan bentuk
(menampilkan semua Karakteristik tics dari
hypnozoite-bentuk) dapat ditandai untuk
Plasmodium cynomolgi, parasit simian terkait
dengan P. vivax. Ini diamati setelah infeksi
sporozoite dari Macaca fascicularis hepatosit
primer. Sistem simian ini memberikan
pasokan yang lebih handal dari kedua parasit
dan sel primer serta transgenik parasit
fluores-sen. Studi terbaru lain telah
melaporkan model in vitro yang mengulangi
tahap hati seluruh untuk kedua P. falciparum
dan P. vivax di platform hati hu-man mikro
terdiri dari cryopreserved, hepatosit primer
manusia mikro-bermotif dikelilingi oleh sel
stroma mendukung. Sistem ini memungkinkan
pelepasan merozoit yang terinfeksi dan infeksi
overlay eritromisin cytes, serta pembentukan
bentuk kecil dalam tahap hati akhir P. vivax.
Biomarker yang membedakan hypnozoites
dari skizon hep-ATIC diperlukan untuk
mempercepat bekerja pada na-ture dormansi.
Ada sangat sedikit pemahaman tentang
biologi dari kedua skizon hati dan tahap
hypnozoite infeksi. Pertanyaan mendesak
adalah "apa yang hypnozoite a, bagaimana
fungsinya, dan bagaimana metabolisme
Quies-sen yang ditargetkan?"
Ketersediaan model budaya yang kuat dan
dapat diandalkan dan metode untuk
identifikasi hypnozoite akan memberikan
dasar-dasar untuk memperoleh informasi
penting tentang biologi dan proses reaktivasi
hypnozoite mereka, membuka jalan untuk
tinggi-throughput layar hati stadium
kuantitatif. Setelah layar yang sesuai telah
dikembangkan, senyawa akan diuji terlebih
dahulu untuk aktivitas terhadap semua tahap
hati pada layar utama dan kemudian disaring
sekunder untuk kegiatan hypnozoite.
Metode skrining terhadap tahapan seksual
Transmisi memblokir (melalui tahapan seksual
dan berbasis-nyamuk dari siklus hidup
Plasmodium) akan menjadi lebih penting
sebagai langkah pengendalian malaria menuju
eliminasi malaria. Dikatakan bahwa jumlah
parasit yang perlu dibunuh untuk memutus
siklus penularan lipat kurang dari yang terjadi
dalam mengobati infeksi.
Saat ini tidak ada profil target yang rinci
berlaku umum untuk entitas kimia baru yang
akan bertindak prinsip-yg bersahabat
terhadap tahap seksual. Profil tersebut perlu
dikembangkan sehingga jelas apa yang stage
(s) harus ditargetkan (gametosit, tahap-tahap
peralihan - gamet, zigot, ookinetes, ookista,
atau akhirnya sporozoit). Re-baru ini, kajian
komprehensif pada generasi berikutnya dari
obat antimalaria diperlukan untuk mengontrol
dan menghilangkan malaria telah diterbitkan
dan target kandidat pro-file (TCP) untuk agen
memblokir transmisi telah digariskan.
Kebanyakan skizontisida darah mungkin
konvensional akan memblokir transisi dari
tahap aseksual ke seksual, sehingga skrining
untuk obat yang menghalangi transisi ini
bukan prioritas pertama. Namun, gametosit
dewasa yang berumur panjang dan bahkan
pasien pada pengobatan dapat terus
menularkan malaria selama berminggu-
minggu setelah clearance parasit aseksual.
Ada data yang menunjukkan bahwa beberapa
obat anti-malaria sebenarnya bisa
menginduksi gametocytogenesis. Obat yang
akan membunuh berumur panjang gametosit
tahap V dan/atau tahap parasit ekstra-
erythrocytic diperlukan untuk
mempertahankan fase eliminasi. Selama
beberapa tahun terakhir, upaya telah
dilakukan untuk mengembangkan metode
direproduksi dan kuat untuk memproduksi
gametosit in vitro, dan mempertahankan
mereka diferensiasi in vitro sampai V. tahap
akhir tahan lama Selain itu, tes baru untuk
gametocytocidal ac-tivity telah dikembangkan
dan saat ini digunakan untuk senyawa besar
screening (Tabel 4). Tes ini jatuh ke dalam tiga
kategori utama:
1. Pengukuran kandungan DNA parasit
menggunakan pewarna fluorescent (seperti
hydroethidine) untuk aliran cytometry.
Sensitivitas baik tetapi throughput yang cukup
rendah. Tes skrining kandungan tinggi untuk
stadium gametosit IV-V berada di bawah
pembangunan.

2. Pengukuran aktivitas metabolik / redoks P.
falciparum gametosit, menggunakan
bioluminescence assay ATP untuk gametosit
tahap akhir, yang fluorimetric Alamar uji biru,
atau uji kolorimetri dengan pLDH. Keuntungan
dari semua tes ini adalah bahwa mereka
dapat digunakan dengan strain laboratorium
umum atau bahkan bidang isolat karena
mereka tidak memerlukan transgenesis

3. Transgenesis telah diterapkan dengan
sukses untuk menghasilkan P. falciparum garis
mengekspresikan GFP atau gen reporter GFP-
Luc aktif di berbagai tahap pematangan gam-
etocyte. Mereka telah digunakan untuk
mengidentifikasi senyawa aktif pada awal (I-
II), tengah (III) atau akhir (IV-V) gametosit
panggung. The GFP garis transgenik telah
digunakan dengan flow cytometry. Alat tes
menggunakan GFP atau GFP-Luc gen reporter
tampaknya cukup sensitif, kuat, dengan sig-
nal untuk rasio kebisingan baik.
Prioritas untuk pengembangan teknologi
memungkinkan
tahap darah
Memahami masalah teknis di balik
pengembangan sistem kultur tahap darah P.
vivax dan mengatasi mereka.
Pengembangan tahap darah model tikus P.
vivax.
tahap hati
Pengembangan sistem sel hepatosit yang kuat
untuk memungkinkan studi tahap hati vivax P.
falciparum & P..
Pengembangan sistem budaya standar dan
ditingkatkan untuk studi tahap hati P.
falciparum & P. vivax.
Pemahaman tentang sifat dan biologi
hypnozoites dengan tujuan mengidentifikasi
biomarker untuk kegiatan obat terhadap
tahap infeksi P. vivax.
Pengembangan pasokan yang kuat dan dapat
diandalkan falciparum dan vivax sporozoit dan
metode untuk aman mengangkut mereka
antara laboratorium.
Menyelidiki kemungkinan menggunakan hati
skizon sistem assay sebagai pengganti untuk
aktivitas terhadap hypnozoites dalam
penyaringan utama untuk novel obat anti-
vivax.
tahap Seksual
Pengembangan profil produk target untuk
obat untuk menargetkan tahap seksual dari P.
falciparum.
Pengembangan metode skrining yang kuat
untuk gametosit stadium IV-V P. falciparum
Pengembangan P. falciparum (dan P. vivax)
assay ookinete untuk melengkapi saat uji P
berghei.
Pengembangan tes aktivasi gamet jantan dan
betina
Pengembangan MTS / HTS untuk SMFA assay
Mengidentifikasi target baru
Ada kebutuhan yang jelas untuk identifikasi
dan pembangunan kelas baru anti-malaria,
yaitu milik seri kimia baru dan dengan mode
novel tindakan. Realitas saat ini adalah bahwa
banyak penemuan obat masih terfokus pada
sejumlah target bersejarah (terutama folat
dan hemoglobin jalur degradasi), dan
terutama pada tahap darah siklus hidup
parasit. Ada banyak target yang belum
dimanfaatkan di berbagai proteomes tahap
developmental yang mungkin menargetkan.

Database pada gen dan jalur metabolik
menawarkan kesempatan untuk
mengidentifikasi kemungkinan baru
berdasarkan target pendekatan-pendekatan.
Korelasi silang informasi ini bisa menjadi filter
yang sangat berharga (misalnya,
mengidentifikasi gen yang aktif di kedua
gametosit dan pada tahap darah). Skrining
Orthology berbasis antara spesies
Plasmodium juga dapat memberikan
wawasan berharga menjanjikan baru tar-
mendapat. Tingginya tingkat konservasi
antara P. falcip-arum dan P. vivax genom
menunjukkan bahwa target baru untuk vivax
bisa dibentuk dari target falciparum terbukti.
Sebagai upaya melawan malaria bergerak dari
fase kontrol untuk penghapusan, bagian dari
siklus hidup parasit yang sebelah sana-tahap
darah perlu ditargetkan. Tahap hati,
gametosit dan sporozoit yang disorot dalam
Workshop sebagai berpotensi penting untuk
fase eliminasi.
Penargetan skizogoni erythrocytic
Dalam fase kontrol, fokusnya adalah pada
pengobatan pasien bergejala, yaitu,
mengobati darah tahap aseksual.
Mengidentifikasi target baru
Ada kebutuhan yang jelas untuk identifikasi
dan pembangunan kelas baru anti-malaria,
yaitu milik seri kimia baru dan dengan mode
novel tindakan. Realitas saat ini adalah bahwa
banyak penemuan obat masih terfokus pada
sejumlah target bersejarah (terutama folat
dan hemoglobin jalur degradasi), dan
terutama pada tahap darah siklus hidup
parasit. Ada banyak target yang belum
dimanfaatkan di berbagai proteomes tahap
devel-opmental yang mungkin menargetkan.
Database pada gen dan jalur metabolik
menawarkan kesempatan untuk
mengidentifikasi kemungkinan baru
berdasarkan target pendekatan-pendekatan.
Korelasi silang informasi ini bisa menjadi filter
yang sangat berharga (misalnya,
mengidentifikasi gen yang aktif di kedua
gametosit dan pada tahap darah). Skrining
Orthology berbasis antara spesies
Plasmodium juga dapat memberikan
wawasan berharga menjanjikan baru tar-
mendapat. Tingginya tingkat konservasi
antara P. falcip-arum dan P. vivax genom
menunjukkan bahwa target baru untuk vivax
bisa dibentuk dari target falciparum terbukti.
Sebagai upaya melawan malaria bergerak dari
fase kontrol untuk penghapusan, bagian dari
siklus hidup parasit yang sebelah sana-tahap
darah perlu ditargetkan. Tahap hati,
gametosit dan sporozoit yang disorot dalam
Workshop sebagai berpotensi penting untuk
fase eliminasi.
Penargetan skizogoni erythrocytic
Dalam fase kontrol, fokusnya adalah pada
pengobatan pasien bergejala, yaitu,
mengobati darah tahap aseksual.
Mencari kelas obat baru
Salah satu pendekatan adalah pertambangan
database genom untuk target baru iDEN-tify
(lihat di bawah), diikuti dengan skrining
perpustakaan keragaman kimia tinggi pada
target tersebut. Strategi lain terdiri dari
pertama menggunakan perpustakaan
tersebut (termasuk perpustakaan produk
alami) di layar fenotipik untuk membentuk
apa yang disebut "kotak malaria", dan
kemudian mengidentifikasi di layar sekunder
target molekul senyawa dengan aktivitas
parasiticidal. Beberapa juta entitas kimia telah
disaring untuk anti-malaria ac-tivity,
berdasarkan layar seluruh sel P. falciparum.
Layar telah dimasukkan sepenuhnya sintetis
(dari propri-etary sumber baik com-tersedia
secara komersial dan industri farmasi) dan
perpustakaan produk alami. Lebih dari 20.000
senyawa sekarang tersedia yang diketahui
memiliki aktivitas parasiticidal selektif, tetapi
target yang molekul tidak diketahui. Banyak
dari ini cenderung bertindak melalui
pharmacophores baru pada target molekul
baru. Sebuah jangkauan yang lebih luas
perpustakaan harus diselidiki, termasuk bank
senyawa dari perusahaan agrokimia. Kertas
menyertai menguraikan saran-saran yang
CRIMALDDI Konsorsium untuk mempercepat
penggunaan sumber berharga informasi.
Menemukan target baru
Ciri-ciri target yang baik harus mencakup: -
"Harus memiliki" karakteristik:
Senyawa harus mampu membunuh parasit
(menjadi "cidal") dalam waktu kurang dari 48
jam baik melalui penghambatan target atau
interaksi senyawa dengan target;
Targetnya harus divalidasi baik kimia atau
genetik, baik in vitro dan in vivo;
Target harus druggable, yaitu harus setuju
untuk pengobatan dengan molekul kecil pada
konsentrasi rendah;
Perlu ada uji fungsional yang dapat diandalkan
dari target.
"Baik untuk memiliki" karakteristik:
Kurangnya orthology dari target pada
manusia;
Assay seluler efek senyawa pada target;
Sebuah struktur kristal dari target.
Pertimbangan tentang berbagai tahapan
dalam skizogoni erythrocytic
Persyaratan utama di sebagian besar profil
produk target berlangsung cepat membunuh
parasit. Tindakan speed-of-dari artemisinin
adalah pada kontribusi terhadap aktivitas
mereka di seluruh tahap erythrocytic
(sebaliknya, sebagian besar obat antimalaria
lain yang hanya aktif dalam tahap trofozoit).
Demikian pula, mengganggu tahap skizon dan
mengganggu pelepasan merozoit strategi
berpotensi menjanjikan tapi asri.
Proses lainnya diidentifikasi untuk selanjutnya
biologis under-standing yang dapat
mengakibatkan target baru nilai yang paling
untuk penemuan obat adalah: -
Tahap cincin terutama berfokus pada invasi
merozoit : pembentukan vakuola
parasitophorous dan jalur transportasi yang
terkait.
Tahap trofozoit: karakterisasi jalur metabolik
dalam trofozoit (termasuk degradasi
hemoglobin) dan remodeling sel inang.
Skizon: divisi nuklir, merozoit ontogeni,
mekanisme jalan keluar.
Dengan tidak adanya sistem budaya yang kuat
itu adalah alasan-bisa pada tahap ini untuk
mengasumsikan P. falciparum akan menjadi
model jas-mampu untuk infeksi tahap darah
P. vivax dalam banyak kasus. Namun,
pekerjaan tambahan diperlukan untuk
sepenuhnya valid-makan asumsi ini pada hit
dengan dasar hit.
Tuan rumah target sel
Penelitian terbaru telah mengidentifikasi
peran penting untuk enzim tuan eritrosit
dalam pengembangan parasit [51,52].
Sejumlah senyawa parasiticidal dapat
menargetkan enzim sel inang daripada
molekul dikodekan oleh parasit. Penargetan
sel inang (eritromisin cyte atau hepatosit)
enzim yang diperlukan untuk kelangsungan
hidup parasit adalah, belum dieksploitasi,
strategi terapi tambahan. Penelitian terbaru
menunjukkan bahwa target sel inang tersebut
potensial termasuk enzim yang merupakan
target mapan dalam patologi lain (misalnya,
protein kinase pada kanker). A "piggy-back"
pendekatan mungkin dilaksanakan yang jauh
akan mempercepat penemuan/
pengembangan. Penelitian fundamental
tambahan harus dilakukan untuk memvalidasi
pendekatan ini.
Penargetan tahap hati
Prioritas tertinggi di daerah ini adalah untuk
memahami biologi parasit hati stadium,
terutama hypnozoites yang bertindak sebagai
reservoir untuk P. vivax. Aktivitas obat
terhadap hypnozoites akan menjadi penting
selama eliminasi. Saat ini bahkan definisi yang
tepat dari hypnozoite yang tidak jelas. Tanpa
pemahaman seperti itu, teknik skrining praktis
tidak dapat dikembangkan dan mode tindakan
akan kurang dipahami. Sebuah prioritas tinggi
adalah untuk mengembangkan penanda
sederhana untuk mengidentifikasi
hypnozoites dari, hepatosit yang terinfeksi
aktif (terutama di sel-sel hati manusia). Ini
akan menjadi langkah kunci untuk
mengembangkan layar melawan tahap aktif.
Prioritas juga harus diberikan kepada aspek-
aspek berikut dari hepatosit yang terinfeksi:
Reaktivasi hypnozoites dalam model in vitro
untuk memungkinkan pengujian senyawa
yang menghambat reaktivasi atau membunuh
sel-sel aktif;
Penyebab dormansi dan alasan untuk parasit
hati stadium untuk "memilih" antara negara
yang aktif dan tidak aktif.
Beberapa wawasan atau arahan yang
mungkin titik awal untuk penelitian
diidentifikasi: -

Dikenal kemanjuran 8-aminoquinolines
(primakuin dan tafenoquine) terhadap
hypnozoites;

Penggunaan bio-informatika untuk
mengidentifikasi gen yang berpotensi amat
penting dan jalur metabolik;
Sasaran non-haem dalam tahap darah;
Pengaruh antibiotik pra-pengobatan
apicoplasts.
Target perkembangan seksual dan sporogoni
Gametosit merupakan hal yang menarik untuk
mengganggu trans-misi parasit. Ini bisa
menjadi salah satu-satunya ac-tivity atau
kegiatan tambahan dari suatu senyawa yang
bertindak di tempat lain dalam siklus hidup.
Akan ada beberapa masalah etika dan praktis:
obat anti-gametocyte murni tidak akan
langsung menguntungkan pasien dan
sehingga akan memberlakukan persyaratan
keselamatan yang tinggi pada senyawa. Di sisi
lain, obat menargetkan gametosit eksklusif
(tapi tidak mempengaruhi tahap aseksual)
akan menjadi aset berharga dalam mencegah
keluarnya genotipe yang memberikan
resistensi terhadap obat anti-aseksual:
demikian salah satu manfaat utama dari obat
transmisi-blocking akan untuk melindungi
obat kuratif co-diberikan terhadap menahan-
Ance pengembangan dan penyebaran.
Mekanisme ac-tion, tahap darah, senyawa
aktif yang ada terhadap gametosit harus
diselidiki.
Penelitian terbaru telah mengidentifikasi
peran penting bagi beberapa enzim dalam
perkembangan seksual. Kemungkinan proses
sasaran untuk menyerang gametosit meliputi:
Gametocytogenesis: proses dengan banyak
proses metabolisme aktif dan sehingga
menawarkan beberapa poin untuk
mengganggu parasit;
Jalan keluar dan gametogenesis selanjutnya
mekanisme (terutama protease, protein
kinase, dan metabolisme lipid);
Modus aksi primakuin terhadap gametosit
dan apakah ia memiliki target biokimia umum
pada semua tahap siklus hidup parasit.
Demikian pula, obat yang memiliki aktivitas
terhadap sporozoit mungkin nilai. Senyawa
sporozoite-aktif akan bertindak dalam banyak
hal seperti penolak parasit. Profil produk
target harus menjelaskan bagaimana jenis
kegiatan akan menjadi nilai dibuktikan di
lapangan. Ini akan digunakan untuk layar-ful
terhadap sporozoit semua penemuan screen-
ing saat ini untuk melihat apakah ada kegiatan
tambahan untuk itu melawan darah dan /
atau tahap hati.
produk alami
Keragaman kimia yang berasal dari produk
alami yang luar biasa. Produk alami adalah
"indah" sumber obat baru seperti Alam telah
disaring lipat senyawa lebih dari telah
dimungkinkan dengan HTS. Banyak anti-
malaria saat ini berasal sebagai alam prod-
produk. Namun dalam beberapa tahun
terakhir tidak ada senyawa dalam
pembangunan berasal langsung dari produk
alami. Banyak produk alami telah
menunjukkan efek antiplasmodial potensial
tapi belum berkembang. Terbaru
mengembangkan-dokumen (seperti
ketersediaan seluruh genom parasit)
menjamin re-visit dari rute produk alami dari
penemuan obat vis--vis identifikasi sasaran.
Produk alami umumnya span ruang kimia
yang berbeda dari senyawa sintetik. Selain itu,
produk alami dapat bio-tersedia dengan sifat
luar ruang Lipinski konvensional dan mereka
telah berevolusi untuk berinteraksi dengan
molekul biologis. Oleh karena itu, skrining
produk alami di tes sel seluruh bernilai
berpotensi besar dalam mengidentifikasi-ing
target druggable baru yang akan ditolak jika
aturan Lipinski yang membabi buta diikuti.
Mereka juga akan menjadi nilai dalam
mengidentifikasi mode polypharmacological
tindakan. Aktivitas metabolik diidentifikasi
dengan alam prod-produk juga dapat
digunakan untuk menentukan target empiris
tanpa awalnya menetapkan target protein.
Protein / tar-get dapat ditentukan kemudian
dalam proses pembangunan. Alami
"perpustakaan" dari produk alami tidak boleh
diabaikan, baik dalam mencari kelas kimia
baru dan sebagai alat untuk mengidentifikasi
target baru. Mereka mungkin memiliki
kesempatan yang lebih baik untuk
menghasilkan hits dalam skrining obat karena
mereka telah berevolusi untuk berinteraksi
dengan target biologis. Pendekatan lain
dimana produk alami mungkin berguna dalam
identifikasi target druggable adalah berbasis
aktivitas protein profiling. Protein / enzim
diidentifikasi dengan cara ini kemudian dapat
diselidiki lebih lanjut sebagai potensi terapi
tar-mendapat oleh kedua mekanisme klasik
studi tindakan atau re-ayat farmakologi.
Leluhur bersama dari apicoplexans dan
ganggang menunjukkan bahwa baru
"tanaman-seperti" target ada di luar
apicoplast tersebut. Ini mungkin nilai dalam
mengidentifikasi lead kurang meta-bolically
aktif tahapan dalam siklus hidup parasit
(misalnya, gametosit, hypnozoites). Masalah
jalur peraturan dengan campuran produk
alami tercatat. Dorongan untuk obat murah
juga masalah bagi produk alami, yang sering
molekul kompleks dan memiliki biaya yang
berpotensi tinggi manufaktur. Namun,
pendekatan yang lebih baik semisintetik
(seperti yang digunakan untuk arte-misinin)
dapat mengurangi masalah ini.
kesimpulan
Target ambisius eliminasi malaria hanya akan
dicapai dengan pengembangan obat baru
dengan hati-hati ditargetkan pada tantangan
utama yang ada untuk kedua kontrol dan
eliminasi. The CRIMALDDI Proyek bertujuan
untuk mengidentifikasi pendekatan yang
paling penting yang harus diadopsi, sebagai
panduan untuk para pembuat kebijakan
berbagai organisasi, penyandang dana, dan
peneliti di mana untuk memprioritaskan
upaya mereka.
Hal ini jelas dari rekomendasi dari dua
Lokakarya dijelaskan dalam makalah ini
bahwa kebutuhan yang sangat mendesak
adalah untuk mengembangkan teknologi yang
memungkinkan-nologies baru dan lebih baik
yang memungkinkan obat baru dengan profil
tepat sasaran untuk diidentifikasi dengan
cepat. Teknologi-teknologi baru yang sering
dilupakan dalam drive dimengerti terhadap
pengembangan obat-obatan baru. Pada saat
sumber daya yang terbatas, adalah penting
bahwa upaya penemuan obat jelas difokuskan
pada daerah yang paling membutuhkan dan /
atau yang menunjukkan probabilitas terbesar
keberhasilan. Teknologi yang memungkinkan
lebih baik akan membantu dalam prioritas ini,
serta membantu untuk mengidentifikasi
pendekatan baru dan enab-ling mereka untuk
dipelajari secara lebih efektif.
Menjelajahi berbagai lebih beragam dari
target obat yang potensial adalah prioritas. Ini
mungkin lebih mampu untuk mengatasi
kekurangan dari kisaran saat antimalaria.
Sebuah pendekatan yang lebih luas yang
mengeksplorasi siklus hidup seluruh parasit
dianjurkan, karena hal ini memegang janji
kedua mengatasi tantangan saat ini dan
memenuhi persyaratan obat-obatan untuk
eliminasi.
Pekerjaan Proyek CRIMALDDI dijelaskan di sini
dan dalam makalah terkait diharapkan akan
memberikan beberapa panduan untuk
pembuat kebijakan, penyandang dana, dan
peneliti dalam memprioritaskan malaria
upaya penemuan obat mereka. Hal ini juga
dapat menarik perhatian pada pentingnya
interaksi antara keberadaan teknologi baru
dan kemampuan masyarakat malaria untuk
bergerak melampaui portofolio saat ini
ditandai dengan baik dan mempelajari target.
Ini harus menambah diskusi global mengenai
bagaimana cara terbaik untuk
memprioritaskan sumber daya yang langka,
terutama karena masyarakat bergerak ke
periode Development Goal pasca Millennium
dan global Rencana Aksi Malaria diperbarui
sedang dikembangkan.