BAB I

PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang
Asam amino adalah sembarang senyawa organik yang memiliki gugus
fungsionalkarboksil (-COOH) dan amina (biasanya -NH2 ). Dalam biokimia
seringkali pengeriannyadipersempi! keduanya erika pada sau aom karbon (C)
yang sama (disebu aom C "alfa" aau #). $ugus karboksil memberikan sifa
asam dan gugus amina memberikan sifa basa.Dalam benuk laruan% asam amino
bersifa amfoerik! &enderung men'adi asam padalaruan basa dan men'adi basa
pada laruan asam. (erilaku ini er'adi karena asam aminomampu men'adi )wier-
ion.Asam amino ermasuk golongan senyawa yang paling banyakdipela'ari karena
salah sau fungsinya sanga pening dalam organisme% yaiu sebagaipenyusun
proein.
*rukur asam amino se&ara umum adalah sau aom C yang mengika
empa gugus!gugus amina (NH2)% gugus karboksil (COOH)% aom hidrogen (H)%
dan sau gugus sisa (+% dari residue ) aau disebu 'uga gugus aau ranai samping
yang membedakan sau asam aminodengan asam amino lainnya.
Aom C pusa ersebu dinamai aom C# ("C-alfa") sesuai dengan
penamaan senyawabergugus karboksil% yaiu aom C yang berikaan langsung
dengan gugus karboksil. Olehkarena gugus amina 'uga erika pada aom C# ini%
senyawa ersebu merupakan asam # -amino.
Asam amino biasanya diklasifikasikan berdasarkan sifa kimia ranai
sampingersebu men'adi empa kelompok. +anai samping dapa membua asam
amino bersifaasam lemah% basa lemah% hidrofilik 'ika polar% dan hidrofobik 'ika
nonpolar
,anfaa Asam Amino
-.(embenukan hormon% en)im dan anibodi.
2.(erumbuhan% perbaikan dan regenerasi sel.
..,emperahankan keseimbangan asam-basa ubuh
/.*anga di perlukan unuk perkembangan anak.
1.2Tujuan
0nuk mengeahui eknik-eknik pemurnian asam amino.
BAB II
PEMBAHASAN
2.1 Asam amino
1aa proein berasal dari proos aau proeos yang berari perama aau
uama.(roein merupakn komponen pening aau komponen uama sel hewan.
Oleh karena sel iumerupakan pembenuk ubuh kia% proein ersusun aas
asam asam amino.Asam amino ialah asam karboksila yang mempunyai
gugus amino. Asam amino yangerdapa sebagai komponen proein
mempunyai gugus NH. pada aom karbon # dari posisi gugus 2 COO-
2.2 Tenik Isolasi !an Pemurnian Asam Amino
Ada beberapa ehnik isolasi dianaranya ! *aling 3n dan *aling
OuDidalam molekul proein erdapa asam amino hidrofilikdan asam amino
hidrofobik.*eelah proein berikaan dalam laruan air% asam amino hidrofobik
biasanya membenukarea perlindungan hidrofobik karena sifanya idak dapa
berikaan dengan air sehingga airidak dapa masuk kedalam area yang
erdapa asam amino hdirofobik% semenara asamamino hidrofilik akan
berikaan dengan molekul sol4en(air) dan memungkinkan proeinunuk
membenuk ikaan hidrogen dengan molekul air di sekiarnya. 5ika pada
permukaanproein erdapa asam amino hidrofilik yang &ukup maka proein
dapa laru dalam air.
1eika konsenrasi garam meningka% sebagian dari molekul-molekul air
akan erarikoleh ion garam% yang kemudian akan mengurangi 'umlah
molekul air yang dapaberineraksi dengan bagian hidrofobi& proein. *ebagai
akiba dari meningkanyaperminaan molekul sol4en % ineraksi anar proein
men'adi lebih kua daripada ineraksianara pelaru dan )a erlaru% Hal ini
akan menyebabkan molekul-molekul proeinmengenal dengan membenuk
ineraksi hidrofobik dengan sau sama lain. (roses inidikenal sebagai saling-
ou.
Dalam pembahasan lain disebukan bahwa saling ou er'adi keika
padakonsenrasi garam yang inggi% garam akan lebih &enderung mengika air
dan menyebabkanagregasi *ehingga molekul proein mengalami
presipiasi.6iasanya dalam air murni proein sukar laru. Dengan adanya
penambahan garam%kelaruan proein akan meningka. Hal ini disebabkan
oleh ion anorganik yang erhidrasisempurna akan mengika permukaan
proein dan men&egah penggabungan ( agrerasi )molekul proein. Hal ini di
sebu saling in.
2." Elektro#oresis
keras memisahkan asam-Amino ,eode yang paling sederhana unuk
memisahkan asam amino adalah elekroforesiskeras.
*eees laruan dari &ampuran asam amino diempakan pada selembar keras
filer sudah dibasahi oleh buffer pada pH erenu.
,edan lisrik dengan egangan inggidiberikan pada keras ersebu.
1arena perbedaan nilai p1% asam amino akan bermigrasimenu'u arah yang
berbeda dan pada ke&epaan yang berbeda disepan'ang keras%erganung pada
pH sisem buffer dan egangan lisrik yang dipergunakan. *ebagai
&onoh%pada pH -%7% hisidin% arginin% dan lisin mempunyai muaan 82 dan
bergerak lebuh &epamenu'u kaoda bermuaan negaif dibandingakn asam
amino lainnya% yang mempunyaimuaan8-. (ada pH 9%7% sebaliknya% asam
amino bermuaan posiif (lisin% arginin% hisidin)bergerak menu'u kaoda dan
asam amino bermuaan negaif (asam aspara dan asamgluama) menu'u
anoda. *emua asam amino lain akan inggal pada% aau deka iik asal%karena
senyawa ini idak mempunyai gugus mengion selain dari gugus 2amino dan 2
karboksil% dan karenanya% mempunyai iik isoelekrik yang ampir sama
seperi dapadienukan dari nilai p1- dan p12 pada abel :./. 0nuk
meneapkan leak asam amino padakeras% dilakukan pengeringan dan
penyemproan dengan ninhidrin dan pemanansan. *poberwarna biru dan
ungu% masing-masing menun'ukan adanya asam amino% akan mun&ulpada
keras. Asam-asam amino ynag dikeahui% diperlakukan serupa% dengan
kondisi yang sama% sebagai ;marker< nuk menenukan leak spesifiknya
2.$ %romatogra#i
(enukar 3on1romaografi penukar ion merupakan meoda yng paling
banyak dipergunakanunuk memisahkan% mengidenifikasi% dan menghiung
'umlah iap-iap asam amino didalam suau &ampuran. ,eoda ini 'uga
memanfaakan perbedaan ingkah laku asam-basadari asam amino% eapi
erdapa fakor ambahan yang menyebabkan prosedur ini efekif.1olom
kromaografi erdiri dari abung pan'ang yang diisi oleh granula resin sineik
yangmengandung gugus yang bermuaan eap. +esin dengan gugus anion
erenu disebu resinpenukar kaion= resin dengan gugus kaion erenu
disebu resin penukar anion. Dalambenuk kromaografi penukar ion ynag
paling sederhana% asam amino dapa dipisahkanpada kolom resin penukar
kaion. Dalam hal ini% gugus anion erikanya% gugus asammisalnya gugus
asam sulfona (-*O.-)% perama-ama diberikan bermuaan dengan
Na8.>aruan asam (pH .%7) dari &ampuran asam amino yang akan dianalisa
diuang ke dalamkolom dan dibiarkan ersaring se&ara perlahan-lahan. (ada
pH .%7 sebagian besar asamamino berbenuk kaion dengan muaan oal
posiif% eapi senyawa-senyawa ini berbedadi dalam ingka mengionnya.
(ada saa &ampuran mengalir melalui kolom% asam aminobermuaan posiif
akan menukar ion Na8% yang berikaan dengan gugus eap 2*O.-
padaparikel resin. (ada pH .%7 asam amino ynag bermuan paling posiif
(lisin% arginin% danhisidin) akan menukar Na8% perama-ama dari resin% yang
lalu akan rika paling kua padaresin
2.& %romatogra#i #iltarasi gel
?eknik permeasi aau @ilrasi adalah suau eknik yang menguraikan
&ampuran )a-)a sesuai dengan ukuran molekulnya. ?eknik ini didasari aas
inklusi dan eksklusi suau )aerlaru melalui suau fase diam yang erbua
dari gel polimer yang erika silang ddanberpori heerogen.
Dalam kromaografi eksklusi &air-pada pemisahan eradi anara 4ase&air
di dalam parike gel dan &airan di luar mengelilingi parikel gel.*ebagai
penun'ang fase diam dalam pemisahan ini biasanya digunakan Aerogel-
Aerogel. Berogel adalah suau gel organik yang dapa bersifa hidrofilik (yaiu
! agar dandeksran yang erika silang pada poliakrilamida) aaupun
hidrofobik (poisirena). Berogel-Aerogel ini ersedia di pasaran dengan nama
dagang biogel p-2 (poliakrilamida)%sepadeA $--7-277 (deksran) 'uga
syrogel (gel polisirena yang dimodifikasi) dan agarose.1olom yang
digunakan adalah kolom biaya pengelusi (luen) dibiarkan mengalirkarena
grafiasinya. >a'u aliran akan berambah dengan berambahnya ukuran
parikelseperi kromaografi perukaran ion% la'u aliran 'uga dapa dipengaruhi
oleh 4ariasi porosiasgel.
2.'.Elektro#oresis SDS (PA)E
*D*-(A$C aau *odium Dode&yl *ulfae 2(olyA&rylamide $el
Cle&rophoresisadalah eknik sederhana yang umum digunakan unuk menganalisa
ukuran proein. 6agiAnda yang pernah melakukannya enu ahu bahwa salah sau
ahapan kriis analisa iniadalah pada saa pembuaan gel *D*-(A$C-nya% kurang
&erma bisa menyebabkankebo&oran sehingga gel yang erbenuk idak
sempurna.?u'uan dari meode elekroforesis *D*-(A$C ini adalah unuk
memisahkanproein berdasarkan ukurannya. *e&ara singka% eknik dasarnya
adalah sebagai beriku!*D* akan membua proein men'adi erdenaurasi sehingga
berbenuk srukur primer(meman'ang)
BAB III
PENUTUP
".1 %esim*ulan
(emurnian asam amino dapa dilakukan dengan eknik saling in dan
saling ou% Clekroforesis keras memisahkan asam-Amino% 1romaografi
(enukar 3on% 1romaografifilarasi gel% elekroforesis *D*
2 (A$C
1eika konsenrasi garam meningka% sebagian dari molekul-molekul air
akan erarikoleh ion garam% yang kemudian akan mengurangi 'umlah
molekul air yang dapaberineraksi dengan bagian hidrofobi& proein. *ebagai
akiba dari meningkanyaperminaan molekul sol4en % ineraksi anar proein
men'adi lebih kua daripada ineraksianara pelaru dan )a erlaru% Hal ini
akan menyebabkan molekul-molekul proeinmengenal dengan membenuk
ineraksi hidrofobik dengan sau sama lain. (roses inidikenal sebagai saling-
ou.6iasanya dalam air murni proein sukar laru. Dengan adanya
penambahan garam%kelaruan proein akan meningka. Hal ini disebabkan
oleh ion anorganik yang erhidrasisempurna akan mengika permukaan
proein dan men&egah penggabungan ( agrerasi )molekul proein. Hal ini di
sebu
saling in.
(roses pemisahan berikunya adalah proses elekroforesis dengan
menggunakanbanuan lisrik% dengan perbedaan nilai p1 asam amino akan
bermigrasi menu'u arah yangberbeda dan pada ke&epaan yang berbeda
disepan'ang keras% erganung pada pH sisembuffer dan egangan lisrik
yang dipergunakan.1romaografi penukar ion merupakan meoda yng paling
banyak dipergunakanunuk memisahkan% mengidenifikasi% dan menghiung
'umlah iap-iap asam amino didalam suau &ampuran. ,eoda ini 'uga
memanfaakan perbedaan ingkah laku asam-basadari asam amino% eapi
erdapa fakor ambahan yang menyebabkan prosedur ini efekif.?eknik
permeasi aau @ilrasi adalah suau eknik yang menguraikan &ampuran )a-
)a sesuai dengan ukuran molekulnya. ?eknik ini didasari aas inklusi dan
eksklusi suau )aerlaru melalui suau fase diam yang erbua dari gel
polimer yang erika silang ddanberpori heerogen. Dalam kromaografi
eksklusi &air-pada pemisahan eradi anara 4ase&air di dalam parike gel dan
&airan di luar mengelilingi parikel gel.
DA+TA, PUSTA%A
>ehninger.>.A% -DEE.Dasar- dasar 6iokima 'ilid -% er'emahan ,aggy
henawid'a'a%Crlangga 'akara.
(oed'iadi.A% -DD/.Dasar 2 dasar 6iokimia% 03 2(ress% 'akara
Anonim A.%hp!FFwww.sGuidoo.&omFdenaurasi-proein-saling-in-saling-ou-
dan-)wier-ion
Anonim 6.hp!FFwww.&hem-is-ry.orgFmaeriHkimiaFkimia-indusriFuilias-
pabrikFpenukar-ionF
Anonim C.hp!FFs&ien&ebioe&h.neFrik-sds-pageFImore--:JD
Anonim D.hp!FFproein-G.blogspo.&omF27-7F7-Felekroforesis-sds-page.hml