UNAH | FACULTAD DE CIENCIAS | ESCUELA DE MICROBIOLOGA

2014
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AGENTES
NEMATFAGOS
EVALUADOS
Pochonia chlamydosporia
Lecanicillium psalliotae

NEMTODOS UTILIZADOS
Meloidogyne mayaguensis

FORMAS DE CULTIVO & AISLAMIENTO (CONDICIONES Y RESULTADOS)

A. OBTENCIN DE HONGOS NEMATFAGOS DEL SUELO

TCNICA: AISLAMIENTO A PARTR DE HUEVOS (Carneiro et al., 2001; Kerry & Crump, 1977; De Leij & Kerry, 1991)

MEDIOS:
1. Solucin de Agar [0.5%],
2. Agar Agua [12%][50 mg Sulfato de Estreptomicina, Cloranfenicol, Clortetraciclina],
3. Agar Maiz [17%],
4. Medio semi-selectivo P. chlamydosporia

MUESTRA: Muestras de suelo y races infectadas (profundidad 10 cm) de Guava comercial (planta)

FORMA DE SIEMBRA:
1. 50 masas de huevos de Meloidogyne mayaguensis se mezclaron en 1 mL solucin de Agar [0.5%] + secciones de 1.0 cm
2
de raz de Guava.
2. 0.2 mL de solucin en seccin 1. Se incubo a 25C / 48 hrs
3. 10 masas de huevos de Meloidogyne mayaguensis infectados, obtenidos a partir de seccin 2 se inocularon. Se incubo a 25C / 14 dias.
4. 30 masas de huevos de Meloidogyne mayaguensis, obtenidos a partir de seccin 1 se inocularon. Se incubo a 25C / 10 dias.


B. EVALUACIN DE HUEVOS & HONGOS NEMATFAGOS

C.1 AISLAMIENTO DE HONGOS NEMATFAGOS

5. Hongos aislados en seccin 4 se resembraron en sub-cultivo, medio PDA [39%]. Se guardo a 4C, se realizaron perforaciones en cada colonia
observada de aproximadamente 0.5 cm de dimetro.
6. Extracciones de seccin 5 fueron resembradas en Agar MEA [Extracto de malta 48%] Se incubo a 20C / 10 dias / oscuridad.
7. Se evalu morfologa colonial de los cultivos de la seccin anterior
8. Para la evaluacin microscpica de morfologa celular, se utilizo micro-cultivo en Agar Agua [12%]


C.2 CRITERIOS DE IDENTIFICACIN PARA LOS HONGOS NEMATFAGOS

1. Uso de claves (Zare et al. (2001) and Zare & Gams (2001).)
a. Tamao de conidias y clamidosporas
b. Formas
c. Nmero y configuracin de conidias
d. Presencia o ausencia de clamidosporas
e. Tipo de estructura con actividad nematfaga y forma de accin.



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C.3 CRITERIOS DE IDENTIFICACIN PARA LOS HONGOS NEMATFAGOS

2. A partir de los cultivos y asilamientos anteriores se obtuvo tambin otro hongo nematfago, este fue Lecanicillium psalliotae.

C.4 OTROS HALLAZGOS

Se evalu la temperatura ptima para mejorar la velocidad y calidad de crecimiento para fines comerciales, se obtuvieron los mejores resultados en las
temperaturas 24C y 28C.

SECCIN MORFOLOGA CELULAR & COLONIAL

Efecto de hifas de Pochonia chlamydosporia, en huevos de Toxocara canis

Clamidiosporas de Pochonia chlamydosporia


Accin de Lecanicillium psalliotae
En huevos de Meloidogyne mayaguensis

Accin de Pochonia chlamydosporia
En huevos de Meloidogyne mayaguensis

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Jersys Arevalo, Leopoldo Hidalgo-Daz, Irene Martins, Janana F. Souza, Jos Mauro C. Castro, Regina Maria D.G. Carneiro & Myrian S.
Tigano. Cultural and morphological characterization of Pochonia chlamydosporia and Lecanicillium psalliotae isolated from
Meloidogyne mayaguensis eggs in Brazil. Tropical Plant Pathology, vol. 34, 3, 158-163 (2009).
2. Araujo Juliana Milani, Arajo Jackson Victor de, Braga Fabio Ribeiro, Ferreira Sebastio Rodrigo, Tavela Alexandre de Oliveira. Atividade
predatria de clamidsporos do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Toxocara canis em condies laboratoriais. Rev. Bras.
Parasitol. Vet. [serial on the Internet]. 2013 Mar [cited 2014 June 29] ; 22( 1 ): 171-174.
Available from: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1984-29612013000100171&lng=en. http://dx.doi.org/10.1590/S1984-29612013000100033
3. Li J, Yu L, Yang J, Dong L, Tian B, Yu Z et al. New insights into the evolution of subtilisin-like serine protease genes in Pezizomycotina.
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Available from: http://www.biomedcentral.com/1471-2148/10/68