UNAH | FACULTAD DE CIENCIAS | ESCUELA DE MICROBIOLOGA

2014
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AGENTES
NEMATFAGOS
EVALUADOS
Arthrobotrys oligospora

NEMTODOS UTILIZADOS
Haemonchus contortus

FORMAS DE CULTIVO & AISLAMIENTO (CONDICIONES Y RESULTADOS)

A. OBTENCIN DE HONGOS NEMATFAGOS DEL SUELO

TCNICA: SIEMBRA DIRECTA & INOCULACIN DIRECTA (Larsen et. al, 1991)

MEDIO: CHF-WA (Cloranfenicol [0.05%] Agar Agua [2%]), Agar Agua [2%]

MUESTRA: Muestra de suelos de pastoreo, Heces fecales de oveja.

FORMA DE SIEMBRA

1. 10 g de muestras + 50 mL agua destilada, mezclada vigorosamente por 30 minutos y reposo por 10 minutos adicionales.
2. Se tomo sobrenadante y se inoculo 1 mL en placas de CHF-WA, incubndose a 25C / 3 das.
3. Se tomo 2 g de heces fecales, se homogenizaron y se inocularon directamente en Agar Agua, incubndose a 25C / 3 das.

B. INFECCIN DE LARVAS (NEMTODOS: NOMBRE)

1. Se agrego a ambos cultivos de la seccin A.2 y A.3, aproximadamente 500-1000 larvas de Haemoncus contortus. Las larvas fueron obtenidas por la
tcnica de Baermann y mediante experimentacin IN VIVO en oveja.
2. Ambos cultivos fueron incubados posteriormente a 25C / 2 meses.
3. Monitoreo 3-4 veces por semana hasta completar 2 meses.

C. EVALUACIN DE LARVAS & HONGOS NEMATFAGOS

C.1 EVALUACIN DE LARVAS E IDENTIFICACIN DE HONGOS NEMATFAGOS

1. Se utilizo estereoscopio para visualizacin de conidias, estructuras miceliales y trampas nematofgicas.
2. Se realizo transferencia de piezas de 2x2 mm de cultivo de seccin B en Agar CHF-WA
3. Se utilizo cepas de referencia para identificacin de hongos
4. Los aislamientos identificados con las claves y criterios de la seccin C.3 fueron resembrados en AGAR PDA, incubndose a 25C / 3 semanas.

C.3 CRITERIOS DE IDENTIFICACIN PARA LOS HONGOS NEMATFAGOS

1. Uso de claves (Cooke, R.C. and Godfrey, B.E.S. (1964); Haard, K. (1968))
a. Tamao de conidias y clamidosporas
b. Formas
c. Nmero y configuracin de conidias
d. Presencia o ausencia de clamidosporas
e. Tipo de estructura con actividad nematfaga y forma de accin.


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C.5 RESULTADOS

Se obtuvieron los aislamientos a partir de PDA, segn la descripcin de la seccin C.1.4 identificndose las siguientes especies:
1. Arthrobotrys oligospora variantes IRAN 877 C, IRAN 878 C & IRAN 879 C
2. Se evalu el efecto de la temperatura para la velocidad y calidad de crecimiento del hongo nematfago, obtenindose
mejores tasas de crecimiento a 15-25 C.


SECCIN MORFOLOGA CELULAR & COLONIAL

EN FOTOGRAFA

(A). IRAN 878 C
(B). CBS 111.37
(C). Contaminacin con macroconidia multicelular curvada
con Fusarium spp. (flecha)
(D). IRAN 879 C
(E). CBS 251.82
(F). IRAN 877 C.
(G). Conidia en forma de gota (flecha simple) y
clamidosporas caractersticas en forma circular u
ovoide de CBS 583.91 D. flagrans (flecha doble).
(H). Clamidospora intercalaria (flecha)
(I). Formacin de trampa (flecha).




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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Ghahfarokhi, M. et. al. Screening of Soil and Sheep Faecal Samples for Predacious Fungi: Isolation and
Characterization of the Nematode-Trapping Fungus Arthrobotrys oligospora. Iranian Biomedical Journal 8 (3):
135-142 (July 2004)
2. Larsen, M., Wolstrup, J., Henriksen, S.A., Dackman, C., Gronvold, J. and Nansen, P. (1991) In vitro stress
selection of nematophagous fungi for biocontrol of parasitic nematodes in ruminants. J. Helminthol. 65:
193-200.