LABORATORIUM

SUBTOPIK
PERLINDUNGAN LAB DARI ALIRAN
UDARA LUAR
PENATAAN RUANG
RUANG TRANSFER, KOTAK ASEPTIK,
LAF CABINET
A tissue culture lab consists of three work
spaces. Name them.
What is the preparation area and what is its
function?
Identify tools and equipment you would
find in the preparation area.
What is the purpose of the laminar air flow
hood?
How can you prevent contamination of the
cultures in a tissue culture laboratory?
FASILITAS

PERENCANAAN yang matang adalah tahap
pertama yang penting pada penentuan
lokasi dan ukuran laboratorium. Lab kecil
dapat digunakan pertama kali sampai
teknik dan pemasaran berkembang.
area minimum yang dibutuhkan untuk
pembuatan media, ruang transfer dan
ruang kultur utama adalah 150 sq ft (14
meter kuadrat). Dinding-dinding dapat
digunakan untuk memisahkan ruangan.
Lokasi yang baik antara lain:

1. terisolasi dari lalu lintas.
2. Tidak ada kontaminasi dari ruang yang
berdekatan.
3. panas terkontrol secara thermostatic.
4. Air dan salurannya untuk bak cuci.
5. fasilitas listrik yang memadai.
6. ketersediaan fan dan intake blower untuk
ventilasi.
7. pencahayaan yang baik.

Infrastruktur yang dibutuhkan
untuk KJT
Area pencucian (tempat mencuci wadah
dan membersihkan inplant tanaman)
Ruang pembuatan media (pembuatan,
penyimpanan & sterilisasi media)
Area transfer aseptik (inisiasi & sub-kultur
plantlet)
Ruang inkubator atau kultur (menyediakan
suhu dan cahaya yang sesuai untuk
plantlet dalam kultur)
DESAIN LABORATORIUM

Kebersihan adalah pertimbangan utama
ketika mendisain lab KJT.
Walaupun beberapa Negara tidak
mengetahui dengan pasti berapa kerugian
akibat kontaminasi, tetapi estimasi adalah
berkisar kurang dari 1% sampai 50%.
Prosedur membersihkan dan aseptic yang
dilakukan secara rutin dapat menurunkan
kerugian sampai kurang dari 1%.
Laboratorium harus memiliki dinding dan lantai
yang mudah dibersihkan. Cat dinding acrylic
atau urethane epoxy dapat digunakan; lantai
semen dapat dicat dengan epoxy atau
urethane floor enamel.
Filter High efficiency particulate air (HEPA)
atau filter lain dapat dipasang untuk menyaring
udara yang masuk ke laboratorium.
Jika mungkin pintu masuk berada di luar lab,
keset kasar dapat digunakan untuk
menghilangkan debu yang terbawa dari luar
atau sepatu dilepas.
Lalu lintas dan alur kerja dalam lab harus
diatur untuk meminimalkan kontaminasi.
Ruangan atau area paling bersih adalah
primary growth room, dan ruang transfer
aseptic.
Ruang ini harus didisain tidak terhubung
langsung dengan bagian luar bangunan.
Area preparasi media, area pencucian
peralatan gelas, atau ruang penyimpanan
harus terletak di luar ruangan ini
Ruang primary growth dan ruang transfer
aseptic harus ditutup dengan pintu.
Idealnya, area preparasi media terhubung
ke ruang sterilisasi, yang kemudian
terhubung ke ruang transfer aseptic dan
ruang primary growth.
Instalasi pengamanan juga harus
direncanakan. Alarm suhu dan api harus
disambung ke layanan telepon untuk
mengatasi masalah dengan cepat.
Siapkan pula generator untuk
mengantisipasi jika lampu padam
Ruang preparasi media
Suplai air, gas dan listrik
Water heater
Peralatan gelas
Hotplate dengan magnetic
strirrer
Heating-jacket atau hot plate
yang cocok untuk labu besar
Kukusan untuk memanaskan
media
Timbangan kasar (gram)
akurasi sampai 0,01 g
Timbangan mg (akurat sampai
0,1 mg)
Spatula untuk penimbangan
Mixer
Microwave untuk memanaskan
media dan agar
Sistem filter millipore
Dispensor otomatis
pH-meter
Peralatan distillasi
De-ionizer
Bahan-bahan kimia
Kitchen timer
Rak metal untuk tabung dan
petri dish di autoklaf
Wadah: test tube, labu,
plastik
Bahan untuk menutup
wadah: kapas, al foil, film
plastik, dsb)
Autoklaf
Tempat penyimpanan bahan
kimia & peralatan gelas
Tempat penyimpanan steril
untuk media, air steril, dsb
(Refrigerator)
Rak pengering
Pencuci pipet

Isolasi kultur
LAF
Suplai gas ke LAF
Stereo-microscope
(u/ meristem
culture)
Bunsen atau L
spiritus
Dry sterilizer
u/pisau, scalpel,
dsb



Petri dish u/
subkultur
Sentrifus low speed
Hipoklorit u/ ster.
Tanaman
Alkohol 96
Kertas saring

Material tanaman
Bahan
pensteril
konsentrasi Durasi
(menit)
keefektifan
Ca hipoklorit
Na hipoklorit
H2O2
Air bromine
Silver nitrate
Mercuri
chloride
Antibiotik
9-10%
2%
10-12%
1-2%
1%
0,1-1%

4-50mg/l

5-30
5-30
5-15
2-10
5-30
2-10

30-60
Very good
Very good
good
Very good
Good
Satisfactory

Fairly good
Konsentrasi dan lamanya disinfeksi jangan
sampai mematikan sel tanaman
Dapat juga dilumuri etil atau isopropil
alkohol (jangan metanol) kemudian
dipanaskan atau dibakar sampai alkohol
menguap
Perendaman selama 30 detik dlm etanol
70% sebelum diberi pensteril atau
penambahan beberapa tetes surfaktan, mis
tween 80
Setelah perlakuan: bilas dengan air suling
steril berulang kali sampai pensteril terbilas
sempurna
Ruang kultur
Pengontrol suhu (17-27oC): AC dan/atau
pemanas ruangan
Suplai energi untuk cahaya, pendinginan
atau pemanasan
Rak kultur
Timer
Alarm sistem untuk malfungsi
Rak untuk test tube
Meja untuk mengadakan pengamatan
shaker
A tissue culture lab consists of three work spaces. Name them.
The lab consists of a preparation area, a transfer room and a growth
room.
What is the preparation area and what is its function?
In the preparation room are found the scientist's kitchen, where
plants, equipment and nutrient media are sterilized and prepared for
use in tissue culture.
Identify tools and equipment you would find in the preparation area.
Items include a refrigerator to store chemicals; a precision scale for
measuring media ingredients; a hot plate for heating media; a pH
meter to measure alkalinity/acidity of the nutrient media; glassware;
and an autoclave to sterilize glassware and tools.
What is the purpose of the laminar air flow hood?
The hood provides a sterile work environment in which cultures are
initiated, or trimmed, divided, and replanted onto nutrient media.
How can you prevent contamination of the cultures in a tissue culture
laboratory?
Sterilize all work surfaces, tools and equipment; disinfect explants;
sterilize nutrient media; work with cultures under the sterile
environment created by a laminar air flow hood; and remove any
cultures from the growth room that are contaminated. It is also
important that all lab workers frequently wash their hands and
employ appropriate laboratory techniques.
TUGAS
MEMBAGI KELAS MENJADI 10 KELOMPOK
MENCARI JURNAL 10 TAHUN TERAKHIR YANG
MEMBAHAS TENTANG:
PEMILIHAN MEDIA & KONDISI KULTUR
PADA :
KULTUR KALUS
KULTUR SUSPENSI SEL
KULTUR AKAR & HAIRY ROOT
KULTUR ORGAN/ TUNAS
KULTUR ENDOSPERM
DIKUMPUL DAN DIDISKUSIKAN PEKAN DEPAN