Analize citogenetice la pacienii cu

hipostatur: evaluarea cauzelor

determinante

Coordonatori: Absolvent:
Conf. Dr. Viorica COIER Paula Petronela GROZA
Asist. Dr. Diana MICLEA (UMF Cluj)
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar
Facultatea de Zootehnie i Biotehnologii
Cluj-Napoca
2014
CUPRINS
PARTEA I
Documentare tiinific
1. INTRODUCERE
2. HIPOSTATURA
3. GENA SHOX
4. EVIDENIERA
MUTAIILOR GENEI
SHOX
PARTEA II
Cercetri personale
5. IPOTEZE i SCOP
6. STUDIUL I
7. STUDIUL II
8. STUDIUL III
9. STUDIUL IV
10. PERSPECTIVE
INTRODUCERE

IMPORTANTA: SHOX factor genetic de importan major
n creterea i dezvoltarea organismelor, mutaiile acesteia
cauzeaz hipostatur.
- Aplicarea precoce a tratamentului n vederea corectrii
defectului de cretere.




SCOP: Studierea posibilelor anomalii numerice i
structurale ale cromozomului de sex X care cauzeaz
hipostatura, n special a mutaiilor genei SHOX.


TEMA: Evaluarea cauzelor determinate ale
hipostaturii
Conceptul de
hipostatur
- un individ cu nlime sub media persoanelor acelai
sex i aceeai vrst.
- 3% din totalul populaiei globale

CLASIFICARE

a) Primar
b) Secundar
c) Idiopatic
Sursa:
http://www.gfmer.ch
Sursa: http://internalmedicine.pagesperso-orange.fr/madelung.htm
LANGER
LERI-WEILL
TURNER
GENA SHOX
Regiuniile pseudoautozomale
blocuri de secvene identice
de pe heterozomi;
- 2 astfel de regiuni la oameni;
- PAR1 2.7Mb, 500 kb de
telomeri
- PAR2 0.33Mb;
- Conin 29 gene cu ereditate
pseudoautozomal.
- O singur gen cauzatoare de
boli
MUTAII
59 de mutaii - pozitionate pe toate lungimea genei.
Pot fi: Deleii 70 %, Substituii, Inserii.


100% - cazurile de Sindrom Turner
70-80% - cazurile de Discondrosteoz Leri Weill
2-15% - cazurile de hipostatur idiopatic
EVIDENIERA
MUTAIILOR
Tehnici

Bazate pe PCR - MLPA

Bazate pe HIBRIDARE -
FISH


CERCETRI PERSONALE
Cariotipare
-
MONOSOMII
Evideniere deleii
-
SHOX
STUDII:
1 - BIOINFORMATIC
3 - CLINICE CITOGENETICE
DEPARTAMENTUL DE GENETIC UMF CLUJ
Evideniere

MOZAICISME
Studiul Bioinformatic
GENA SHOX UMAN
Familia de gene SHOX SHOX i SHOX 2


Datele de identificare a genelor
SHOX n bazele de date:
- ID de identificare 6473 (NCBI)
- Numrul de acces ENSG00000185960
(EMBL)
- Sinonime: SS; GCFX; PHOG; SHOXY.
- Acces referine secven genomic:
NC_000023.11.
- Secvena genomic - 35068 nucleotide,
- Regiunea genomic cuprins ntre poziiile
624344..659411.
- SHOX2 - ID 6474 (NCBI),
- Localizare: 3 n poziia q25.32,
- Coordonatele genomice (GRCh37):
3:157,813,799 - 157,823,95.1
- Sinonime: OG12; SHOT; OG12X.

Asamblarea exomului transcriptul
primar al SHOX a

Studiile Clinice Citogenetice
I. Evidenierea absenei cromozomului
X

OBIECTIV:
Evidenierea absenei unui
cromozom X
Material :
Snge periferic de la 22 de paciente cu hipostatur
Metod :
Cariotiparea clasic
Rezultate:
Confirmare absen cromozom X 4 paciente
METOD
Cariotiparea standard
Etape

1. Recoltare snge venos : 5 ml snge venos de la 10
paciente cu hipostatur
2. Cultura celular: tuburi Chromosome kit P 7 ml mediu
complet + factor mitogen + 800 l snge termostat
37C, 72 h.
3. Blocarea n metafaz: 100 l colchichin termostat
37C, 5% CO , 40 minute.
4. oc hipoton: soluie hipoton KCl 0,075M
centrifugare tuburi (5min. 1500 RPM)... 10 ml
KCl 0,075M (37 C) termostat 37 C, 5% CO, 20 min.
5. Fixarea : metanol+acid acetic glacial (3:1)
6. Etalare
7. Colorare Giemsa

REZULTATE
Cariotip normal - 18 paciente
Cariotip TURNERIAN
4 paciente.
II. Observarea mozaicismelor la
pacientele cu cariotip normal
OBIECTIV:
Observarea mozaicismelor
Material:
Sngele periferic de la 18 paciente cu cariotip normal
200 de interfaze 15 metafaze
Metod:
Tehnica FISH sond centromeric pentru cromozomul X
Rezultate:
Absena mozaicismelor
Material i metod
Microscopul n epifluorescen
Zeiss
Pretratamentul lamelor Tratementul lamelor
Lame
REZULTATE
Tehnica FISH
III. Evidenierea deleiilor genei SHOX
Rezultate:
o Nu s-a observat nici o deleie a genei SHOX prin
tehnica utilizat.
OBIECTIV:
o Evidenierea existenei deleiei genei SHOX
Material:
o Sngele perifieric de la cele 18 paciente
o 200 interfaze 15 metafaze
Metod:
o Tehnica FISH sond de locus specific regiunii SHOX
o Semnal fluorescent ROU
Semnalul rou pentru locusul SHOX
REZULTATE
CONCLUZII
Testarea genetic n cazul hipostaturii este
foarte important pentru stabilirea
tratamentului adecvat.
Tehnica FISH nu prezint o sensibilitate
ridicat dect pentru deleiile de mari
dimensiuni.
Utilizarea, pe viitor, a unor tehnici de nalt
precizie cum ar fi MLPA.
V MULUMESC
PENTRU ATENIE !!!