Anda di halaman 1dari 3

1!br0ken!!

Bila indeks kemurnian < 1,75 menandakan masih terdapat adanya protein
pada saat proses pengendapan DNA, sehingga benang-benang kromosom masih
bercampur dengan protein sehingga yang perlu dilakukan ialah melakukan isolasi ulang
dengan pengendapan protein kembali untuk menghasilkan hasil yang sesuai.
2!br0ken!! u!uan dari melisiskan sel darah merah yang tidak mengandung DNA genom,
agar sel darah putih yang mengandung inti sel dapat diisolasi atau dipisahkan dari sel
darah merah.
3!br0ken!! "rinsip utama dalam isolasi DNA ada tiga yakni penghancuran #lisis$, ektraksi
atau pemisahan DNA dari bahan padat seperti selulosa dan protein, serta pemurnian DNA.
Ada !uga yang menyebutkan bah%a prinsip isolasi DNA adalah melisiskan sel,
memisahkan DNA dari protein, mengendapkan DNA, melarutkan kembali DNA,
menghitung !umlah DNA yang diperoleh dan menilai kemurnian DNA.
&solasi DNA merupakan langkah yang tepat untuk mempela!ari DNA. "rinsipnya ada dua,
yaitu sentri'ugasi dan presipitasi. (entri'ugasi merupakan teknik untuk memisahkan
campuran berdasarkan berat molekul komponennya. )olekul yang mempunyai berat
molekul besar akan berada di bagian ba%ah tabung dan molekul ringan akan berada pada
bagian atas tabung. *asil sentri'ugasi akan menun!ukkan dua macam 'raksi yang terpisah,
yaitu supernatan pada bagian atas dan pelet pada bagian ba%ah #+ampbell dkk. ,--,.
115$. eknik sentri'ugasi tersebut dilakukan Di dalam sebuah mesin yang bernama mesin
sentri'ugasi dengan kecepatan yang ber/ariasi, contohnya ,5-- rpm #rotation per minute$
atau 0--- rpm #1imball ,--5. 23 4e%iston ,--,.1503 4"+* ,--5.,$. "resipitasi
merupakan langkah yang dilakukan untuk mengendapkan suatu komponen dari campuran.
DNA yang biasa digunakan dalam tes ada dua yaitu DNA mitokondria dan DNA intisel.
"erbedaan kedua DNA ini hanyalah terletak pada lokasi DNA tersebut berada dalam
sel,yang sat u dal am i nt i sel sehi ngga di s ebut DNA i nt i s el , s edangkan
yang sat u t er dapat di mitokondria dan disebut DNA mitokondria. 6ntuk tes DNA
yang paling akurat dalam tes DNA adalah inti sel, karena sel tidak pernah berubah seiring
dengan perka%inan keturununnya.
DNA dapat diperoleh dari sel yang mengandung inti seperti pada sampel. darah,
serum7plasma, !aringan, akar rambut, sperma. eknik utama dari isolasi DNA adalah.
1!br0ken!! "enghancuran dinding sel.
2!br0ken!! 4isis sel dengan menggunakan deter!en keras #(D( atau riton 8$.
3!br0ken!! )embersihkan debris sel dengan proteinase.
4!br0ken!! "encucian dengan menggunakan alkohol
ahapan teknik isolasi DNA, yaitu.
1!br0ken!! "enghancuran membran sel dengan Cell Lysis Solution #+4($
2!br0ken!! "enghancuran membran inti dengan Nuclei Lysis Solution #N4($
3!br0ken!! "engendapan protein dengan Protein Precipitation Solution #""($
4!br0ken!! "encucian DNA dengan isopropanol dan alkohol 7-9
5!br0ken!! :ehidrasi DNA dengan Rehidration Solution
u!uan sentri'ugasi.
1!br0ken!! (entri'uge pertama bertu!uan untuk memisahkan nukleus dari
sitoplasma
2!br0ken!! (entri'uge kedua bertu!uan untuk memisahkan DNA dari isi nukleus
3!br0ken!! (entri'uge ketiga bertu!uan untuk mengendapkan protein yang telah
dipresipitasi
4!br0ken!! ;ungsi larutan isolasi DNA
a!br0ken!! 4arutan pelisis sel darah merah
6ntuk melisiskan sel darah merah yang tidak mengandung DNA genom, agar sel
darah putih yang mengandung inti sel dapat diisolasi atau dipisahkan dari sel darah
merah.
b!br0ken!! 4arutan pelisis inti sel.
6ntuk melisiskan inti sel darah putih. &nti sel harus dilisiskan, karena substansi
gen yang kita inginkan ada di dalamnya
c!br0ken!! 4arutan lysis &
;ungsi larutan ini adalah untuk meresuspensi pelet sel bakteri setelah pemanenan
menggunakan sentri'us. <DA sebagai kelator untuk mengikat ion )g,= untuk
inakti/asi en>im DNase, glukosa untuk menyamakan potensial osmotik sel selama
proses lysis menggunakan (D( agar sel bakteri tidak meledak seketika.
d!br0ken!! 4ysis solution
;ungsi larutan ini adalah untuk melisiskan sel dengan cara melarutkan membran
sel #oleh (D($, dan mendenaturasi DNA kromosol namun tidak mendenaturasi DNA
plasmid. DNA plasmid tidak terdenaturasi karena si'atnya yang co/alently closed
circular DNA #cccDNA$
e!br0ken!! "+&AA #"henol +hloro'om &soamyl Alcohol$
;ungsinya untuk memisahkan komponen lipid dan polisakarida dari larutan
f!br0ken!! Neutrali>ing solution
;ungsi larutan ini adalah untuk menetralisir p* menghentikan denaturasi DNA
kromosomal sehingga terbentuk presipitat DNA kromosom yang menempel dengan
debris seluler, dan memisahkan DNA plasmid yang larut di dalam supernatan.
g!br0ken!! N<( urea
;ungsinya ialah sebagai pelisis membrane sel
h!br0ken!! 4arutan :Nase A
Ber'ungsi melisiskan :NA dari ekstrak DNA sehingga DNA tidak terkontaminasi
oleh :NA
i!br0ken!! 4arutan pengendap protein
Agar protein tidak megkontaminasi DNA
j!br0ken!! &sopropanol 1--9
Bertu!uan agar DNA tersebut mengendap7mengumpul sekaligus memisahkannya
dari garam-garam mineral sisa +AB
k!br0ken!! <tanol 7-9
"enambahan etanol bertu!uan untuk mempermudah ter!adinya presipitasi pada
DNA yang bersi'at transparan agar dapat diamati sebagai benang-benang DNA. Dalam
hal ini, etanol mempunyai si'at yang semi polar, sehingga bisa menarik molekul air dari
DNA, sehingga konsentrasi DNA dapat meningkat dan akhirnya terpresipitasi.
"resipitasi adalah prosedur yang dilakukan untuk mengendapkan suatu komponen dari
campuran.
l!br0ken!! <DA
Ber'ungsi sebagai penghancur sel dengan cara mengikat ion magnesium yang
diperlukan oleh sel untuk men!aga keutuhan selubung sel secara keseluruhan. (elain
itu, <DA berperan menginakti/asi en>im DNase yang dapat mendenaturasi DNA yang
diisolasi, <DA menginakti/asi en>im nuklease dengan cara mengikat ion magnesium
dan kalsium yang dibutuhkan sebagai ko'aktor en>im DNAse.