4

ABSTRAK
Efek antineoplastik yang tepat dari kalsium dan vitamin D3 dalam usus
besar manusia tidak jelas . Uji coba studi vitro menunjukkan bahwa kedua agen
mengurangi stres oksidatif , namun temuan ini belum pernah diselidiki pada
manusia . Untuk mengatasi hal ini , kami melakukan uji coba , acak , doubleblind
, placebocontrolled , ! " ! uji klinis faktorial untuk menguji efek kalsium dan
vitamin D3 pada penanda kerusakan D#$ oksidatif ,% hidroksi !&
deo'yguanosine ( % )* d+ , , di mukosa kolorektal normal. -asien ( # . /! ,
dengan setidaknya satupatologi dikonfirmasi adenoma kolorektal diobati dengan !
g 0 d kalsium dan 0 atau %11 2U 0 d vitamin D3 dibandingkan dengan plasebo
selama 3 bulan . 4ecara keseluruhan pelabelan dan distribusi crypt kolorektal dari
% )* d+ di biopsi dari normalmuncul mukosa dubur yang terdeteksi oleh
imunohistokimia otomatis standar dan dihitung dengan analisis citra . 4etelah 3
bulan pengobatan , % )* d+ label sepanjang panjang penuh kolorektal kriptus
mengalami penurunan sebesar !! 5 ( - . 1,67 , dan !7 5 (- . 1,61 , dalam
kalsium dan vitamin D3 kelompok , masingmasing , tapi tidak dalam kalsium
ditambah kelompok vitamin D3 . Efek pengobatan diperkirakan adalah terkuat di
antara peserta dengan usus crypt vitamin D yang lebih tinggi ekspresi reseptor
baseline ( - . 1,17 , . 4ecara keseluruhan , ini awal. *asil penelitian menunjukkan
bahwa kalsium dan vitamin D3 dapat menurunkan kerusakan D#$ oksidatif
dalam posisi normal mukosa kolorektal manusia , mendukung hipotesis bahwa %
)* d+ label di kriptus kolorektal adalah diobati oksidatif D#$ kerusakan
biomarker risiko neoplasma kolorektal , dan memberikan dukungan untuk
penyelidikan lebih lanjut kalsium dan vitamin D3 sebagai agen kemopreventif
terhadap neoplasma kolorektal .
Introduksi
8anker kolorektal, penyebab kedua kanker kematian di $merika 4erikat
(6,, adalah penyakit yang sangat berkorelasi dengan paparan vitamin D rendah
dan dengan +aya 9arat diet, yang ditandai dengan relatif. 8onsumsi kalsium yang
rendah (!,. :ariasi dua puluh kali lipat dalam tingkat kanker usus besar
internasional, dan studi migrasi. ;enampilkan diperoleh berisiko tinggi dalam
7
satu generasi, menekankan pentingnya paparan lingkungan, terutama diet dan
aktivitas fisik, dalam etiologi kanker kolorektal (!, dan dengan demikian untuk
preventability nya.
4aat ini, tidak ada kesepakatan lengkap seperti apa faktor makanan
melindungi atau mempromosikan pengembangan kanker kolorektal maupun
preneoplastic diterima biomarker risiko. -enyelidikan lebih lanjut potensi
mekanisme dimana agen diet mengarah untuk klinis perubahan yang relevan
dalam jaringan kolon normal dan pengembangan biomarker risiko yang berasal
dari mekanistik seperti pemahaman sangat dibutuhkan.
$da yang kuat dan masuk akal secara biologis hewan percobaan bukti
untuk perlindungan terhadap kolorektal kanker dengan kalsium dan vitamin D (3,.
4elain itu, dalam epidemiologi penelitian, jumlah asupan kalsium yang lebih
tinggi telah secara konsisten dikaitkan dengan penurunan risiko untuk kolorektal
neoplasma (4%,, dan suplemen kalsium berkurang kekambuhan adenoma (/,.
<uga, beredar lebih tinggi !7 hydro'yvitaminD (!7)*vitamin D, tingkat telah
dikaitkan dengan mengurangi risiko neoplasma kolorektal (%, 61,. #amun, efek
antineoplastik kalsium dan vitamin D pada epitel kolorektal yang normal tetap
tidak jelas.
;ekanisme yang diusulkan kalsium terhadap kolorektal kanker termasuk
perlindungan terhadap colonocytes gratis empedu dan asam lemak (66,, efek
langsung pada siklus sel, dan modulasi dari $-= karsinogenesis kolon jalur (6!,.
4elain homeostasis kalsium, vitamin D mengatur peristiwa siklus sel,
mempromosikan degradasi asam empedu> faktor pertumbuhan pengaruh sinyal,
adhesi sel, dan perbaikan D#$, dan memodulasi? !11 gen (6!, 63,. 9aru 9ukti
juga menunjukkan bahwa vitamin D dan vitamin D reseptor (:D@, yang terlibat
dalam perlindungan terhadap oksidatif kerusakan (6463,.
;eskipun buktibukti ilmu dasar, tidak ada diterbitkan percobaan manusia
dari efek vitamin D dan 0 atau suplementasi kalsium pada penanda D#$ oksidatif
kerusakan, seperti %hidroksi!&deo'yguanosine (%)*d+,, di mukosa kolorektal
normal muncul. Untuk mengatasi hal ini, kami melakukan uji coba, acak,
doubleblind, placebocontrolled, ! " ! faktorial kemoprevensi percobaan klinis
dari suplemen kalsium dan vitamin D3, sendirian dan dalam kombinasi
3
dibandingkan dengan plasebo selama 3 bulan, untuk memperkirakan kemanjuran
agen ini pada panel biomarker (termasuk %)*d+, di kolorektal yang normal
mukosa. 8ami berhipotesis bahwa kalsium dan vitamin D3, sendirian dan dalam
kombinasi, penurunan epitel kolorektal kerusakan D#$ oksidatif.
Pasien dan Metode
-opulasi
-rotokol rinci perekrutan dan prosedur penelitian diterbitkan sebelumnya
(6A,. 4ecara singkat, memenuhi syarat pasien, usia 31 hingga A7 tahun, dalam
kesehatan yang baik secara umum, mampu informed consent, dengan riwayat
setidaknya satu patologi dikonfirmasi adenomatosa polip kolorektal dalam 33
bulan terakhir, dan tidak ada kontraindikasi untuk kalsium atau suplemen vitamin
D atau biopsi rektal prosedur dan tidak ada kondisi medis, kebiasaan, atau obat
penggunaan yang tidak akan mengganggu studi direkrut dari populasi pasien
menghadiri -encernaan -enyakit 8linik di Emory =linic, Emory University. @inci
kriteria eksklusi studi tertentu disajikan tempat lain (6A,. -enelitian ini disetujui
oleh Emory University 2nstitutional @eview 9oard. ditulis diinformasikan
persetujuan diperoleh dari masingmasing peserta studi.
-rotokol Uji 8linis
$ntara $pril !117 dan <anuari !113, 7!! pasien lulus screening grafik
awal untuk kelayakan , dan !!4 ( 43 5 , pasien mengirimkan surat pengantar
diikuti oleh sebuah wawancara telepon . 4ebanyak 617 ( 4A 5 , potensial peserta
menghadiri kunjungan kelayakan selama mereka diwawancarai , menandatangani
formulir persetujuan , selesai kuesioner , memberikan sampel darah , dan memulai
6 bulan placebo run pada periode . Diet dinilai dengan kuesioner frekuensi
makanan semikuantitatif ( 6% , . =atatan medis dan patologi yang terakhir . setelah
31 hari placebo run dalam persidangan , /! ( %% 5 , peserta tanpa signifikan
dirasakan efek samping dan yang telah mengambil minimal %15 dari tablet
mereka yang memenuhi syarat untuk acak penugasan . -esertanya kemudian
menjalani biopsi rektal dasar dan secara acak ditugaskan untuk
A
empat kelompok perlakuan sebagai berikut B kontrol plasebo kelompok, !,1 g
unsur kalsium ( kalsium karbonat dalam dosis yang sama dua kali sehari ,
kelompok suplementasi , %11 2U vitamin D3 kelompok suplementasi ( 411 2U dua
kali seharihari , , dan kalsium ditambah suplemen vitamin D. 8elompok
mengambil !,1 g kalsium elemental ditambah %11 2U vitamin D3 harian .
4emua tablet studi yang khusus diproduksi oleh Cishcon . 4uplemen dan
plasebo yang sesuai pil identik dalam ukuran , penampilan , dan rasa . plasebo
bebas dari vitamin D , kalsium , magnesium , dan kelat agen . @incian tambahan
pada alasan untuk dosis dan bentuk kalsium dan suplemen vitamin D bentuk yang
dijelaskan sebelumnya ( 6A , .
;asa pengobatan adalah 3 bulan , dan peserta kunjungan tindak lanjut
dihadiri pada ! dan 3 bulan setelah pengacakan dan dihubungi melalui telepon
antara tindak lanjut kunjungan kedua dan final . -il mengambil kepatuhan dinilai
dengan kuesioner , wawancara , dan jumlah pil . -eserta diminta untuk tetap
berada pada mereka diet biasa dan tidak mengambil suplemen giDi tidak
digunakan pada masuk ke ruang kerja . -ada masingmasing tindak lanjut
kunjungan , peserta diwawancarai dan mengisi kuesioner . -ada kunjungan
terakhir , semua peserta menjalani venipuncture dan prosedur biopsi rektal .
4emua peserta diminta untuk menjauhkan diri dari penggunaan aspirin selama A
hari sebelum setiap kunjungan biopsi . 4emua kunjungan untuk peserta diberikan
dijadwalkan pada waktu yang sama dari hari untuk mengendalikan variabilitas
sirkadian mungkin dalam ukuran hasil . Eaktorfaktor yang diduga berhubungan
dengan tingkat % )* d+ di mukosa usus normal ( misalnya , mikronutrien
antioksidan intake , dinilai pada awal dan pada akhir tindak lanjut kunjungi .
-eserta tidak harus berpuasa untuk mereka 8unjungan dan tidak mengambil
persiapan pembersihan usus atau enema
-engumpulan <aringan dan -rosesing
Enam spesimen biopsi 6.1mmtebal se'tant diambil dari dubur mukosa 61
cm proksimal eksternal aperture anal melalui sigmoidocsope kaku dengan cup
jumbo tang endoskopi fleksibel dipasang pada batang semifle'ible. 9iopsi yang
kemudian segera ditempatkan di -94, berorientasi bawah mikroskop bedah dan
%
ditempatkan di 615 formalin buffer normal, dan kemudian ditransfer ke A15
etanol !4 jam setelah penempatan awal di formalin.Fithin 6 minggu, biopsi
diproses dan tertanam dalam blok paraffin dengan tiga biopsi per blok.
;etode Gaboratorium
9lok parafin dipotong menjadi beberapa bagian 3.1 p; tebal , dengan
masingmasing level 41 p; terpisah . Gima slide dengan empat bagian tingkat per
pasien per biomarker siap untuk immunostaining . Untuk mengungkap epitop ,
panas dimediasi antigen -engambilan digunakan B slide ditempatkan dalam
dipanaskan -retreatment ;odule ( Gab :ision , dengan 611 " buffer sitrat ( p*
3,1 > D$8) 463// , dan dikukus untuk 41 min . 8emudian , slide ditempatkan
dalam D$8) )tomatis 2mmunostainer dan imunohistokimia diproses
menggunakan metode streptavidin biotin diberi label untuk % )* H d+ ( tikus
antibodi monoklonal untuk % )* d+ diproduksi oleh $bcam , jumlah clone
#47.6 , pada konsentrasi 6B611 > ref . 6/ , . Untuk setiap peserta , baseline dan
tindak up slide biopsi yang bernoda di batch yang sama , dan setiap kelompok
pewarnaan termasuk keseimbangan peserta dari masingmasing kelompok
perlakuan . 4lide yang tidak counterstained . 4etelah pewarnaan , slide
coverslipped dengan Geica =:7111 =overslipper ( Geica ;icrosystems , . Dalam
setiap batch pewarnaan slide , positif dan slide kontrol negatif dimasukkan . =olon
adenokarsinoma digunakan sebagai jaringan kontrol. #egatif dan slide kontrol
positif diperlakukan identik dengan pasien slide, kecuali bahwa pengencer
antibodi digunakan agak dari antibodi primer pada kontrol geser negatif . Untuk
:D@ , slide diproses seperti yang dijelaskan sebelumnya tapi menggunakan
mouse monoklonal D 3 antibodi mengangkat terhadap asam amino 3444!4 dari
:D@ manusia ( 4= 63.633 , 4anta =ruD 9iotechnology , pada konsentrasi
6BA,711 ( !1 , !6 , .
$nalisis +ambaran 2mmunohistochemically Detected 9iomarker pada 8riptus
8olon #ormal
;etode analisis citra kuantitatif ( I mencetak gol I , adalah digunakan
untuk mengevaluasi tingkat terdeteksi dari biomarker dalam usus kriptus , seperti
/
yang digambarkan dalam +ambar . 6 . -eralatan utama dan perangkat lunak untuk
prosedur analisis citra yang 4canscope =4 scanner digital ( $perio Cechnologies, ,
komputer , papan gambar digital , perangkat lunak ;atlab ( ;ath -ekerjaan , ,
=ellularEyes +ambar $nalisis 4uite ( DivEyes , , dan ;y4JG ( 4un
;icrosystems , . -ertama , slide yang dipindai dengan scanner digital $perio
4canscope =4 , dan gambar elektronik yang terakhir di =ellularEyes program
untuk mengidentifikasi kriptus usus dapat diterima untuk analisis . $ I diberikan
skor I crypt didefinisikan sebagai crypt utuh memperluas dari mukosa muskularis
ke lumen usus ( 6A , !! , . 4ebelum analisis , gambar kontrol negatif dan positif
slide diperiksa untuk pewarnaan kecukupan . standar pengaturan yang digunakan
pada semua peralatan di seluruh mencetak prosedur . Ceknisi terakhir slide dalam
=ellularEyes -rogram dan memilih dua dari tiga biopsi dengan 63 sampai !1 I
diberikan skor I hemicrypts (satu setengah dari crypt , per biopsi . ;enggunakan
papan gambar digital, batasbatas setiap hemicrypt dipilih dijiplak . -rogram
kemudian dibagi secara garis besar menjadi sama spasi segmen dengan lebar rata
rata colonocytes normal. $khirnya , program mengukur background dikoreksi
densitas optik dari pelabelan biomarker di seluruh yang hemicrypt serta dalam
setiap segmen . 8isaran densitas optik untuk % )* d+ pelabelan ditetapkan
antara 1,14 dan 1,!1 . 4emua data yang dihasilkan yang otomatis ditransfer ke
dalam database ;y4JG . 8emudian , teknisi pindah ke hemicrypt diidentifikasi
berikutnya dan diulang semua langkah analisis yang telah dijelaskan sebelumnya .
keandalan $ sampel kontrol yang sebelumnya dianalisis oleh pembaca yang
dianalisa selama persidangan untuk menentukan intrareader mencetak reliabilitas
dengan korelasi intraclass koefisien , yang 1,/4 untuk % )* d+ .
-rotokol ;enilai 8adar :itamin D 4erum
4emua tes laboratorium untuk serum !7)*vitamin D dan 6,!7
dihydro'yvitamin D K6,!7 ()*, !vitamin DL adalah dilakukan oleh Dr 9ruce
*ollis (;edical University of 4outh =arolina, menggunakan metode @2$ seperti
yang dijelaskan sebelumnya (!3,. 4ampel serum untuk awal dan tindak lanjut
kunjungan untuk semua mata pelajaran yang diuji bersamasama, memerintahkan
secara acak, dan diberi label untuk menutupi kelompok perlakuan, tindak lanjut
61
kunjungan, dan ulangan kualitas kontrol. @atarata koefisien intraassay variasi
adalah !,35 untuk serum !7)*vitamin D dan 3,!5 untuk 6,!7 ()*, !
vitamin D.
$nalisis 4tatistik
8ami menilai kelompok perlakuan untuk komparabilitas karakteristik pada
awal dan pada akhir followup oleh Eisher e'act test untuk variabel kategori dan
$#):$ untuk variabel kontinyu. 9eberapa variabel hasil didefinisikan untuk
memperkirakan pelabelan secara keseluruhan dan distribusi dalamcrypt dari %
)hd+ dalam kriptus. 8epadatan optik ratarata %)*d+ pelabelan dalam kriptus
dihitung untuk setiap pasien di baseline dan 3 bulan followup dengan
menjumlahkan semua kepadatan dari semua diabadikan dianalisis dari spesimen
biopsi dan membaginya dengan jumlah kriptus dianalisis. Ukuran distribusi
dalamcrypt marker dihitung untuk setiap pasien dengan mengambil cara dari
kepadatan biomarker di berbagai Dona bawah tanah (misalnya, bagian atas 415
dan bawah 315,.
$nalisis primer didasarkan pada pengobatan yang ditugaskan di saat
pengacakan tanpa memandang status kepatuhan ( intentto treat , . @atarata
kepadatan biomarker yang dihitung untuk setiap kelompok perlakuan untuk
baseline dan 3 bulan tindak lanjut kunjungan . Efek pengobatan dievaluasi dengan
menilai perbedaan dalam kepadatan dari awal sampai 3 bulan kunjungan follow
up antara pasien dalam setiap kelompok pengobatan aktif dan plasebo kelompok
dengan ukuran berulang linear efek =$;-U@$# ;odel . ;odel ini termasuk
mencegat , tindak lanjut kunjungan efek (baseline dan tindak lanjut , , dan
interaksi antara kelompok perlakuan dan kunjungan efek tindak lanjut ( mutlak
efek pengobatan , . 8arena kepadatan optik diukur dalam unit sewenangwenang ,
untuk memberikan perspektif tentang besarnya dari efek pengobatan , kami juga
dihitung efek relatif, didefinisikan sebagai K ( kelompok perlakuan tindak lanjut
berarti , 0 ( kelompok perlakuan awal berarti , L 0 K ( placebo tindak lanjut
berarti , 0 ( plasebo awal berarti , L . Efek relatif memberikan perkiraan konservatif
dari perubahan proporsional pada kelompok perlakuan dibandingkan dengan pada
plasebo kelompok . 2nterpretasi dari efek relatif agak analog dengan rasio odds
66
( misalnya , efek relatif !.1 berarti bahwa perubahan proporsional dalam
pengobatan kelompok adalah dua kali lebih besar seperti yang di plasebo
kelompok > ref . 6A , !4 , . 8arena kelompok perlakuan yang seimbangpada
faktorfaktor risiko pada awal, tidak ada penyesuaian dibuatuntuk kovariat lain
dalam intentto treat analisis primer.
Distribusi kepadatan pewarnaan % )* d+ adalahgrafis dievaluasi
menggunakan prosedur loess dengan parameter smoothing 1,7 dan pas kuadrat
lokal . -ertama , jumlah bagian dalam hemicrypt a adalah standar untuk 71 .
8emudian , ratarata untuk setiap bagian di semua diabadikan diperkirakan oleh
model loess secara terpisahuntuk setiap pasien dan kemudian untuk setiap
perlakuan kelompok dengan tindak lanjut kunjungan . *asilnya diplot dalam
grafik bersama dengan menghaluskan garis .
4ebuah oksidatif balance score kuesioner yang diturunkan ( )94 ,
dihitung seperti yang dijelaskan sebelumnya ( !7 , !3 , . 4ecara singkat , variabel
kontinyu yang mencerminkan pro oksidan ( jenuh lemak dan total asupan Dat
besi , dan antioksidan ( tokoferol keseluruhan , karotenoid , vitamin = , lycopene ,
lutein 0 Dea'anthin , dan M crypto'anthin intake , eksposur dibagi menjadi
kategori tinggi dan rendah berdasarkan nilai median di antara semua peserta pada
awal. peserta dengan rendah (di bawah ratarata , paparan pro oksidan tertentu
diberikan 6 poin , sedangkan mereka yang tinggi (di atasmedian , paparan pro
oksidan yang sama diberikan 1 poin . Untuk paparan antioksidan , 6 poin
dianugerahi untuk setiap tingkat tinggi ( di atas median , eksposur dan 1 poin
untuk setiap tingkat rendah (di bawah ratarata , eksposur . untuk dikotomis
variabel ( Iya I versus I no I , , peserta menerima 6 poin untuk setiap antioksidan
eksposur ( regular penggunaan obat anti inflamasi nonsteroid ( #4$2D , dan 0
atau aspirin , suplementasi dengan selenium , dan tidak pernah perokok , .
8emudian , poin diberikan untuk setiap individu komponen )94 itu dijumlahkan
untuk menghitung skor keseluruhan . #ilai )94 yang lebih rendah menunjukkan
lebih tinggi prevalensi eksposur pro oksidan , sedangkan yang lebih tinggi. #ilai
)94 menunjukkan dominasi eksposur antioksidan . 8isaran )94 dasar dalam
penelitian ini adalah antara 3 dan 61 , dan median adalah 3 . 8ami dichotomiDed
dasar )94 berdasarkan nilai median dan ditugaskan setiap peserta untuk )94
6!
tinggi (di atas median , I $ntioksidan I , atau )94 rendah (di bawah ratarata , I
prooksidan I , kategori . Demikian pula , variabel kontinyu (misalnya , usia dan
ekspresi :D@ , yang dichotomiDed ( ke tinggi 0 kategori rendah, berdasarkan nilai
median dalam semua belajar peserta pada awal. $nalisis 8emudian ,
dikelompokkan dilakukan untuk mengeksplorasi efek perlakuan yang berbeda
pada usia awal ( N 31 dan O 31 tahun , , ekspresi :D@ ( tinggi 0 rendah , , % )*
d+ pelabelan ( tinggi 0 rendah , , )94 ( P 3 dan ? 3 , , tingkat pertama riwayat
keluarga kanker kolorektal (ya 0 ada , , jenis kelamin ( pria 0 wanita , ,
penggunaan #4$2D secara teratur ( ya 0 tidak , , serum. Cingkat D !7 )*
vitamin ( N !! dan O !! ng 0 mG , , dan pil kepatuhan terhadap pengobatan ( N %1
5 atau O %1 5 pengobatan diambil , . -erbedaan antara kategori diuji dengan
memasukkan istilah interaksi kategori intervensi dalam ;odel .
$nalisis statistik dilakukan dengan menggunakan 4$4 4istem software
versi /.6.3 ( 4$4 2nstitute, . Cingkat cutoff - P 1,17 ( dua sisi , digunakan untuk
menilai statistik signifikansi .
RESULT
8elompok perlakuan tidak berbeda secara signifikan pada peserta
karakteristik diukur pada awal ( Cabel 6 , atau akhir penelitian ( data tidak
ditampilkan , . Usia ratarata peserta adalah 36 tahun , 34 5 adalah lakilaki , A6
5 adalah -utih , dan !1 5 memiliki riwayat keluarga kanker kolorektal dalam
relatif tingkat pertama . 4ebagian besar peserta adalah kelebihan berat badan ,
bukan perokok , lulusan perguruan tinggi , dan punya satu kecil adenoma tubular
ringan displastik ( Cabel 6 , . 8epatuhan untuk mengunjungi kehadiran ratarata
/! 5 dan melakukan tidak berbeda secara signifikan antara empat kelompok
perlakuan . @atarata , setidaknya %1 5 dari pil diambil oleh /3 5 dari peserta
pertama kunjungan followup dan sebesar %4 5 pada akhir kunjungan tindak
lanjut . Cidak ada pengobatan atau biopsi komplikasi . Cujuh ( % 5 , mangkir up
karena intoleransi obat yang dirasakan ( n . ! , , keengganan untuk melanjutkan
partisipasi ( 3 n . , , saran dokter ( n . 6 , , dan kematian penyakit kardiovaskuler
( n . 6 , . putus sekolah termasuk satu orang dari suplemen vitamin D kelompok
dan dua orang dari masingmasing tiga kelompok lainnya.
63
-ada awal, tidak ada perbedaan yang signifikan antara empat kelompok studi
dalam serum !7)*vitamin D atau 6,!7 ()*, !tingkat vitamin D. -ada akhir
studi, vitamin D dan kalsium ditambah vitamin D kelompok memiliki tingkat
lebih tinggi dari serum !7)*vitamin D (- N1,116,, sedangkan plasebo dan
kalsium kelompok memiliki penurunan yang tidak signifikan sedikit di !7)*
vitamin D tingkat (Cabel !$,. 4eperti yang diharapkan, tingkat serum 6,!7 ()*,
!vitamin D pada akhir periode tindak lanjut tidak berbeda secara signifikan
antara kelompok belajar (6A,.
Distribusi %)*d+ pewarnaan densitas optik (IGabelI, sepanjang kriptus
kolorektal di baseline dan 3 bulan tindak lanjut kunjungan ditunjukkan pada
+ambar. !. Di masingmasing kelompok perlakuan, %)*d+ label tampaknya
yang tertinggi di bawah !15 sampai 315 dari kriptus, untuk mengurangi di
bagian tengah dari kriptus, dan kemudian untuk meningkatkan agak lagi menuju
lumen usus. 2tu distribusi dasar dari %)*d+ sepanjang kriptus di semua empat
kelompok perlakuan tampaknya hampir identik dalam bentuk dan rentang densitas
optik. -ada kelompok plasebo, dari awal untuk menindaklanjuti, %)*d+
pelabelan muncul meningkat sedikit di bagian tengah dari kriptus (+ambar !$,.
-enurunan postsupplemental besar dalam %)*d+ pelabelan sepanjang panjang
penuh crypt itu dicatat dalam kalsium dan vitamin D kelompok (+ambar !9 dan
=,. Di D ditambah kalsium kelompok vitamin, mirip dengan plasebo kelompok,
%)*d+ pelabelan sedikit meningkat dari baseline untuk tindak lanjut (+ambar
!D,.
-ada awal, tidak ada perbedaan dalam %)*d+ pelabelan sepanjang
panjang penuh kriptus antara empat kelompok perlakuan. 4ehubungan dengan
plasebo, %)*d+ pelabelan sepanjang panjang penuh kriptus mengalami
penurunan sebesar !!5 (- . 1.64, pada kelompok kalsium dan sebesar !75 (- .
1,61, dalam kelompok vitamin D dan meningkat sebesar 35 (- . 1.A1, dalam
kalsium ditambah vitamin D kelompok (Cabel !9,. Cemuan untuk atas 415 dan
lebih rendah 315 dari kriptus (yang diferensiasi dan proliferasi Dona, masing
masing> Cabel !9, dan untuk atas dan bawah !15 (daerah terdekat ke dan terjauh
dari lumen usus eksposur, masingmasing> data tidak ditampilkan, tidak berbeda
secara substansial dari orangorang untuk seluruh kriptus.
64
8ami menyelidiki apakah perubahan dalam !7)*vitamin D tingkat,
kepatuhan terhadap pengobatan, riwayat keluarga kolorektal kanker, jenis
kelamin, usia, merokok, penggunaan #4$2D, )94 dasar, dan dasar batchstandar
ekspresi :D@ atau %)*d+ label respon terhadap pengobatan dimodifikasi,
namun, ukuran sampel terlalu kecil untuk sebagian besar hasil ini dapat
diandalkan. Efek pengobatan pada %)*d+ variabel tidak bervariasi menurut
usia, status merokok, riwayat keluarga kanker kolorektal, penggunaan #4$2D,
atau perubahan serum Cingkat !7)*vitamin D (data tidak ditampilkan,. -ada
wanita, %)*d+ label menurun hanya pada kelompok kalsium (!75, - . 1,43,,
namun, pada pria, %)*d+ pelabelan menurun pada ketiga kelompok
pengobatan aktif (Cabel 3,. Di mereka yang tinggi (IantioksidanI, dasar )94, %
)*d+ pelabelan menurun pada ketiga kelompok pengobatan aktif. setelah 3
bulan pengobatan, sedangkan pada mereka yang rendah (I-rooksidanI, dasar
)94, %)*d+ menurun hanya pada kelompok vitamin D (6/5, - . 1,41, Cabel
3,.
Cidak ada perbedaan yang substansial dalam perkiraan Efek pengobatan
sesuai dengan tingkat dasar dari %)hd+ pelabelan (data tidak ditampilkan,. Di
antara mereka dengan tinggi dasar kolorektal ekspresi crypt :D@, %)*d+
pelabelan mengalami penurunan sebesar 375 (- . 1,1/, dalam kalsium
kelompok, 745 (- . 1,113, pada kelompok vitamin D, dan 6A5 (- . 1,34, dalam
kalsium ditambah relatif kelompok vitamin D dengan plasebo, sedangkan tidak
ada penurunan terlihat pada mereka dengan ekspresi :D@ dasar rendah dan ada
peningkatan A75 dalam %)*d+ label di kalsium ditambah vitamin D relatif
terhadap kelompok plasebo. Ces untuk interaksi untuk efek pengobatan oleh :D@
4tatus bermakna secara statistik (- . 1,17> Cabel 3,.
DISKUSI
*asil dari uji coba ini , acak , terkontrol klinis percobaan menunjukkan
bahwa suplementasi dengan kalsium atau vitamin D3 , tetapi tidak dengan kedua
agen gabungan , dapat menurunkan kerusakan D#$ oksidatif , seperti yang
ditunjukkan oleh penurunan% )* d+ label imunohistokimia , di
normalappearing ini epitel kolorektal pasien adenoma sporadis . Cemuan ini
67
konsisten dengan hipotesis intake yang tinggi kalsium atau vitamin D3 dapat
menurunkan stres oksidatif dan kerusakan D#$ oksidatif dalam usus besar dan
dengan demikian mengurangi risiko neoplasma kolorektal . temuan kami juga
menunjukkan bahwa vitamin D3 dikombinasikan dengan kalsium mungkin
memiliki sebuah efek pengobatan yang lebih rendah atau tidak ada pada % H )hd+
pelabelan daripada baik kalsium atau vitamin D saja . 8onsisten dengan data
hewan yang ada ( 67 , !A , , kami menemukan bukti bahwa tingkat ekspresi :D@
dasar dapat memodifikasi Efek pengobatan kalsium dan vitamin D3 , sehingga
mereka dengan kolorektal ekspresi crypt :D@ yang lebih tinggi mungkin menjadi
lebih kuat responsif terhadap pengobatan . $khirnya, efek pengobatan kalsium
dan vitamin D3 cenderung kuat pada pria dan orangorang dengan antioksidan
awal yang lebih tinggi relatif terhadap eksposur pro oksidan .
4tres oksidatif , suatu kondisi yang ditandai oleh ketidakseimbangan pro
oksidan untuk antioksidan , yang menghasilkan makromolekul kerusakan dan
gangguan sinyal redoks dan kontrol (!%,, mungkin memainkan peran dalam
karsinogenesis kolon, menginduksi protein dan kerusakan D#$ dan peroksidasi
lipid dan merusak sinyal intraseluler. Di bawah yang normal kondisi, spesies
oksigen reaktif memiliki peran penting sebagai molekul sinyal intraseluler yang
mengatur banyak gen (!/,. #amun, di bawah kondisi peradangan, meningkat
generasi reaktif produk spesies oksigen menyebabkan kerusakan sel molekul
seperti oksidasi D#$ (!/,. -roduk yang paling banyak modifikasi D#$ oksidatif
oleh spesies oksigen reaktif adalah %)*d+ (31,. 2ni dasar teroksidasi
merupakan biomarker berguna stres oksidatif yang dapat diukur dalam urin,
darah, dan jaringan (6/, 36,. 9eberapa 4tudi menunjukkan peningkatan tingkat
oksidatif diubah D#$ pada adenokarsinoma kolorektal jika dibandingkan dengan
adenoma dan berdekatan epitel normal (3!, 33,. *al ini menunjukkan bahwa
penghambatan stres oksidatif dalam epitel kolorektal normal dapat memperlambat
atau mencegah karsinogenesis dan meminta pengembangan chemopreventive
agen seperti kalsium dan vitamin D yang menargetkan stres oksidatif dalam usus
besar. $da beberapa bukti untuk mendukung hipotesis kami bahwa kalsium dan
vitamin D dapat bertindak sebagai antioksidan dan kerusakan mengurangi D#$
agen di usus besar .
63
;embran sel kerusakan asam empedu , setidaknya sebagian melalui
mekanisme oksidatif ( 34 , 37 , , memprovokasi inflamasi respon dan kerusakan
D#$ menyebabkan ( 33 , , dan kedua kalsium dan vitamin D dapat mengurangi
beban asam empedu gratis dalam lumen usus . 8alsium langsung mengikat asam
empedu , rendering mereka lembam ( 3A , . D aktivasi vitamin dari manamana
:D@ di usus besar upregulates =Q-3$4 , yang pada gilirannya cataboliDes asam
empedu sekunder , asam lithocholic ( 3% , 3/ , . 4elanjutnya , darah tinggi tingkat
!7 )* vitamin D menyediakan kolam vitamin D yang tersedia untuk berbagai
jaringan , seperti epitel kolorektal . Dalam colonocytes , vitamin D meningkatkan
ekspresi enDim yang terlibat dalam respon antioksidan , menghambat peroksidasi
lipid bergantung besi dalam liposom , menurunkan glutathione reduktase
tingkat , menginduksi glutathione pero'idase dan manganesedependent aktivitas
supero'ide dismutase , dan meningkatkan tingkat glutathione ( refs. 63 , 41 , .
juga ditinjau dalam ref 64 , , sehingga mengurangi stres oksidatif pada epitel
kolorektal . *asil dari penelitian ini , dikombinasikan dengan biologi bukti ,
dukungan kalsium dan vitamin D3 sebagai D#$ oksidatif kerusakan pereduksi .
9ertentangan dengan hipotesis asli kita dan apa yang telah telah dijelaskan dalam
beberapa studi epidemiologi dan klinis ( 4647 , , kami tidak melihat efek
pengobatan di kalsium ditambah vitamin D kelompok . 8ami juga dilaporkan
sebelumnya bahwa vitamin D dikombinasikan dengan kalsium mungkin memiliki
efek pengobatan yang lebih rendah pada apoptosis epitel kolorektal dan
diferensiasi daripada kalsium atau vitamin D secara terpisah ( 6A , 43 , . $da
beberapa penjelasan yang mungkin untuk Cemuan ini . ;engingat ukuran sampel
kecil dari penelitian , kurangnya efek pengobatan pada kalsium dan vitamin
8elompok D mungkin karena kebetulan . *al ini juga kemungkinan bahwa dua
agen mungkin telah dilemahkan efek satu sama lain . 6,!7 ( )* , ! vitamin D3
;enagatur homeostasis kalsium ( 4A , . 4ebagai konsentrasi kalsium menurun ,
produksi 6,!7 ( )* , ! vitamin D3 meningkat , yang pada gilirannya
meningkatkan kalsium usus penyerapan ( 4A , . -eningkatan kalsium dalam diet
dapat menekan 6,!7 ( )* , ! vitamin sintesis D3 di seluler tingkat , yang pada
gilirannya juga menipiskan aktivasi vitamin Detoksifikasi enDim D responsif .
satu hewan -enelitian ( 4% , menemukan bahwa kalsium dan vitamin D lebih
6A
inhibitor ampuh tumorigenesis usus bila diberikan secara terpisah , namun
beberapa studi hewan lain melaporkan sinergis efek dengan kalsium dan vitamin
D yang dikombinasikan ( 4/ ,71 , . 4ebuah uji kekambuhan adenoma besar juga
didukung sebuah meningkatkan efek kemopreventif vitamin D dengan kalsium
( 4! , . Diambil sama sekali , efek gabungan dari kalsium dan vitamin D pada
kerusakan D#$ oksidatif diepitel kolorektal tidak jelas dan mengharuskan
klarifikasi melalui penelitian yang lebih besar .
9erbeda dengan itu pada lakilaki , tidak ada bukti untuk efek pengobatan
vitamin D sendirian dan dalam kombinasi dengan kalsium pada crypt kolorektal
tingkat pelabelan % )* H d+ pada wanita . $da beberapa penjelasan yang
mungkin untuk temuan ini , termasuk kekuatan statistik yang sangat rendah untuk
mendeteksi efek pengobatan karena ukuran sampel yang kecil . -enjelasan lain
yang mungkin adalah bahwa perempuan di penelitian kami mungkin memiliki
penurunan kadar estrogen , seperti mayoritas dari mereka yang menopause dan
tidak mengambil estrogen . -erempuan *ealth 2nitiative *ormon @eplacement
Cherapy Crial ( 76 , menemukan bahwa endogen estrogen plus progestin terapi ,
tetapi tidak estrogen saja terapi , mengurangi risiko kanker kolorektal ( 7! , .
#amun, satu studi menemukan bahwa manusia intervensi estrogen diaktifkan jalur
:D@ dan menurunkan regulasi jalur sinyal inflamasi dan kekebalan dalam
mukosa dubur wanita menopause ( 73 , . )leh karena itu , temuan penelitian kami
konsisten dengan hipotesis bahwa tingkat estrogen yang rendah dapat
mengganggu :D@ sinyal di mukosa kolorektal , sehingga ada perubahan di
tingkat % )* d+ setelah suplementasi dengan vitamin D , namun studi lebih
lanjut diperlukan untuk mengklarifikasi masalah ini .
4tudi epidemiologi belum konsisten ditemukan asosiasi neoplasma
kolorektal dengan individu pro oksidan dan faktor antioksidan meskipun
biologis yang kuat alasan dan bukti ilmu dasar . beberapa analisis ( !7 , !3 ,
menyatakan bahwa stres oksidatif , inflamasi , diet , dan faktor risiko lain dapat
secara sinergis atau individual mempengaruhi risiko neoplasia kolorektal melalui
beberapa jalur . )leh karena itu, kami menggunakan )94 untuk mengkategorikan
pasien ke dalam profil stres oksidatif yang berbeda berdasarkan beberapa faktor
penentu stres oksidatif . kami hipotesis bahwa pasien dengan stres oksidatif yang
6%
berbeda profil mungkin merespon secara berbeda terhadap kalsium dan 0 atau
vitamin D. ;ereka dengan )94 awal yang tinggi ( keseimbangan yang lebih
tinggi antioksidan untuk eksposur pro oksidan , memiliki lebih besar
diperkirakan kalsium dan kalsium ditambah vitamin D efek pengobatan pada %
)* d+ pelabelan dibandingkan dengan )94 rendah . $ )94 rendah
mencerminkan jumlah asupan rendah antioksidan seperti vitamin = dan karoten
yang tinggi dikombinasikan dengan pro oksidan eksposur seperti tinggi lemak
atau besi intake . Dalam usus besar lumen , kalsium gratis langsung mengikat
asam empedu ( 3A , , dengan demikian mengurangi efek procarcinogenic asam
empedu di usus yang epitel . )rang dengan asupan lemak tinggi memiliki lebih
tinggi tingkat lumen kolon dari deo'ycholic dan lithocholic empedu asam ( 33 ,
dan mungkin memerlukan lebih banyak kalsium untuk menetralkan $sam empedu
yang merusak D#$ daripada orangorang pada rendah lemak diet . EnDim
antioksidan pada manusia berfungsi dalam kombinasi dengan senyawa
antioksidan rendah berat seperti vitamin = , R tokoferol , dan M karoten ( 74 , .
Dalam kolorektal yang epitel , vitamin D mengaktifkan ekspresi enDim
antioksidan ( 64 , , yang mungkin tidak berfungsi dengan baik dalam lingkungan
antioksidan habis . )leh karena itu , adalah mungkin bahwa efek kalsium dan
vitamin D pada kerusakan D#$ oksidatif penanda % )* d+ yang dimodifikasi
oleh ada atau tidak adanya berbagai pro oksidan atau paparan antioksidan .
Di sisi lain , temuan kami mungkin karena untuk kesempatan dan
penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengkonfirmasi mereka . 8arena
hilangnya lengkap the:D@ meningkat secara signifikan % )* d+ label dalam
usus tikus ( 67 , !A , , kita hipotesis tingkat ekspresi :D@ yang berbeda dalam
normalappearing yang mukosa kolorektal memodifikasi pengobatan vitamin D
efek . 8onsisten dengan hipotesis ini , kami mengamati substansial penurunan %
)* d+ label pada peserta studi dengan tinggi , tetapi tidak rendah , ekspresi
:D@ dasar . -enelitian ini memiliki beberapa keterbatasan . -ertama , efek
pengobatan vitamin D dan kalsium pada D#$ oksidatif kerusakan penanda %
)* d+ di bagian usus besar selain rektum tidak jelas, karena kami tidak
mengumpulkan biopsi jaringan dari berbagai bagian dari usus besar dan tidak ada
penelitian yang diterbitkan dari % )* d+ label seluruh usus . 8eterbatasan
6/
potensi lain dari penelitian ini adalah bahwa tidak diketahui apakah penanda stres
oksidatif berhubungan dengan risiko kanker usus pada manusia . #amun, literatur
substansial diterbitkan mendukung masuk akal yang dari peranan penting bagi
peningkatan kerusakan D#$ oksidatif dalam karsinogenesis kolon , terutama
untuk transisi dari adenoma kolorektal ke karsinoma ( 3! , 33 , . gigih stres
oksidatif menyebabkan protein dan kerusakan D#$ dan peroksidasi lipid , yang
dapat menyebabkan genetik dan epigenetik perubahan , dan dapat memfasilitasi
pengembangan neoplasia dari mukosa kolorektal normal ( !/ , . )leh karena itu ,
% )* d+ di mukosa kolorektal normal dapat berfungsi sebagai biomarker
risiko neoplasma kolorektal . $khirnya, 8eterbatasan yang paling jelas dari studi
ini adalah contoh kecil ukuran, yang mungkin telah meningkatkan kemungkinan
kesempatan Cemuan dalam mendeteksi atau tidak mendeteksi efek pengobatan .
8ekuatan penelitian ini meliputi acak tersebut , doubleblind , desain percobaan
plaseboterkontrol > protokol tinggi kepatuhan oleh peserta penelitian ,
pemeriksaan kedua efek independen dan gabungan kalsium dan vitamin D3 pada
penanda stres oksidatif > otomatis standar penanganan biopsi dan prosedur
immunostaining , dan penggunaan teknologi mutakhir untuk melakukan
kuantitatif analisis citra . 8ekuatan lain dari studi ini adalah bahwa kita deteksi
imunohistokimia digunakan dari % )* d+ di epitel kolorektal karena sangat
penting untuk mendeteksi % H )hd+ di colonocytes tapi tidak dalam limfosit
infiltrasi atau sel bercampur lainnya . Deteksi seperti ini dimungkinkan dengan
pengembangan antibodi monoklonal spesifik terhadap % )* d+ ( 6/ , dan
metode analisis citra baru kami . 8romatografi cair kinerja tinggi , alternatif
metode untuk mengukur % )* d+ di jaringan usus besar, mungkin melebih
lebihkan kerusakan D#$ oksidatif di colonocytes , terutama dengan adanya
peradangan. akhirnya , penelitian ini adalah studi manusia pertama yang menguji
pengaruh kalsium dan atau vitamin D pada D#$ oksidatif marker pada mukosa
kolorektal normal.
4ecara keseluruhan, ini hasil awal dari uji coba klinis ini percobaan
menunjukkan bahwa kalsium dan vitamin D, yang diberikan secara terpisah, dapat
menurunkan kerusakan D#$ oksidatif dalam normalmuncul epitel kolorektal,
efek pengobatan kalsium dan vitamin D pada kerusakan D#$ oksidatif penanda
!1
%)*d+ mungkin terkuat pada mereka dengan ekspresi :D@ yang lebih tinggi di
usus besar, dan %)*d+ mungkin menjadi biomarker dimodifikasi dari stres
oksidatif yang dapat digunakan dalam usus terkait kanker chemoprevention uji
coba untuk menilai efektivitas pengobatan. *asil kami mendukung penyelidikan
lebih lanjut kalsium dan vitamin D sebagai kemopreventif agen terhadap
neoplasma kolorektal.