PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI

PROTEASE DARI BAKTERI YANG

DIIOLASI DARI WHEY TAHU
Jurnal Teknologi Peranian !ol"# No"# $%&'%( )
'*+,'-.
Di/re0ena0ikan ole1)
Da2 S1ine Na1ari
En2 Ra13a4ai
PENDAHULUAN
PENDAHULUAN
Laar Belakang
En5i3 6an
ke7uu1an
6ala3
6i7i6ang
in6u0ri 6i
6unia
En5i3
Proea0e
En5i3 6ari
3ikroorgani0
3e
Li37a1 8air a1u $41e2 a1u(
) 3engan6ung /roein 0ekiar
'9:-; $Enie 6an Su/riana9
'++#(
Puri<ka0i 6an
karakeri0a0i
en5i3 /roea0e
Pe3an=aaan
en5i3 /roea0e
/a6a 7i6ang
/angan 6an
non,/angan
Su37er
en5i3 )
3ikroorgani0
3e
Penggalian
3ikroogani03
e /eng1a0il
/roea0e
Tinjauan Pustaka
Tinjauan Pustaka
Proea0
e
6i0e7u >uga peptidase aau
proteinase9 3eru/akan en5i3
golongan hidrolase 2ang akan
3e3e8a1 /roein 3en>a6i
3olekul 2ang le7i1 0e6er1ana9
0e/eri 3en>a6i oligopeptida
pendek aau asam amino,
6engan reaksi hidrolisi /a6a
ikatan peptida.
Srukur #D
en5i3
/e/i6a0e
2ang 7era0al
6ari =ungi
Su37er En5i3
En5i3 6a/a 6ii0ola0i 6ari u37u1an9 1e4an9
7akeri9 >a3ur9 ka/ang?2ea0"
En5i3 6ari 3ikroorgani03e le7i1 0ering
6igunakan 6ari /a6a en5i3 2ang 7era0al 6ari
u37u1an aau 1e4an9 karena aki@ia0
kaali0i0n2a le7i1 7e0ar9 0e1ingga 1a0iln2a le7i1
7an2ak9 3u6a1 6i3ani/ula0i geneik9 0e1ingga
/en2e6iaann2a i6ak erganung /a6a 3u0in 2ang
7eru7a1,u7a19 le7i1 0a7il9 1a0iln2a le7i1 7aik 6an
le7i1 a3an9 0era ke8e/aan u37u1
3ikroorgani03e 0anga 8e/a /a6a 0uau 3e6ia"
Da0ar Pe3urnian Proein
Se8ara u3u3 /roein 1aru0 6i/i0a1kan 6ari 7a1an
/en8e3ar 0e7elu3 6i/ela>ari =ung0i 6an
0rukurn2a
Aeo6e /e3urnian 7er6a0arkan aa0 keunungan
0i=a in6i@i6u /a6a /roein)

0i5e

B1arge

H26ro/1o7i8i2

0a7ili2

A8i@i2

a<ni2
Bara Pe3urnian En5i3

0enri=uga0i

<lra0i

Coakula0i 6an koagula0i

Pengen6a/an

ulra<lra0i 6an o03o0a 7alik9

kro3aogra<"
Sentrifugasi

Aeo6e ini 6i/ili1 unuk 3e3i0a1kan

laruan 6ari 3olekul 2ang le7i1 7e0ar
6ala3 0kala la7oraoriu3"

Dia3eer /arikel 2ang 7e0ar9 /er7e6aan

3a00a >eni0 /arikel 6an laruan 7e0ar9
0era @i0ko0ia0 laruan 2ang ren6a1 akan
3e3/er3u6a1 er>a6in2a /e3i0a1an
iltrasi

Filra0i 3eru/akan /e3i0a1an

/a6aan 6ari 0e>u3la1 laruan 3elalui
0e7ua1 /en2aring 0e1ingga /aerikel
/a6a akan era1an 6i /en2aring a6i"

Ke8e/aan aliran 8airan 2ang

3ele4ai /en2aring 7erganung /a6a
/er7e6aan ekanan9 1a37aan ole1
3aeri9 kekenalan 8airan9 6an
1a37aan ole1 la/i0an 2ang 0u6a1
er7enuk
lokulasi dan koagulas

Teknik ini 7aik 6igunakan

0e7elu3 0enri=uga0i aau <lra0i"

Koagula0i 3eru/akan a61e0i

0/onan anar/arikel 7ila
3uaan /arikel 2ang 0au 6a/a
6ineralkan ole1 3uaan /arikel
lain" Teknik ini 6a/a 6iera/kan
unuk /engen6a/an 0el uu1 9
/e8a1an 0el9 aau laruan /roein"
Ultra!ltrasi dan "smosa
#alik

Pa6a ulra<lra0i9 3olekul,3olekul 6i/ak0a

3ele4ai 0uau 3e37ran 6engan ukuran
/ori 0anga ke8il 6engan 3enggunakan
ekanan 1i6arulik"

Pa6a o03o0a 7alik ukuran /ori 0e6e3ikian

ke8iln2a 0e1ingga 2ang 6a/a 3ene37u0
3elalui 3e37rane 1an2a 3olekul,3olekul
/elaru"

O03o0a 7alik 0ering 6i/akai unuk

/e3ekaan en5i3 0e6angkan ulra<lra0i
6igunakan unuk =rak0iona0i /roein
7er6a0arkan ukurann2a"
$romatogra!

Kro3aogra< 3eru/akan 8ara

/e3i0a1an 7er6a0arkan
/er7e6aan inerak0i anara
ko3/onen,ko3/onen 2ang akan
6i/i0a1kan 6engan =a0a 6ia3 6an
=a0a gerak"
%etodologi
%etodologi
Ba1a
n
-
Sa3/el li37a1 8air a1u 6ari
in6u0ri ru3a1 angga 6i 6aera1
Tunggul4ulung Aalang"
-
Ae6ia 2ang 6igunakan unuk i0ola0i
er6iri 6ari skim milk %;9 /e/on
&9-;9 2ea0 ek0rak &9';9 gluko0a
%;9 NaBl &9';9 KH%PO* &9&&D;9
AgSO*":H%O &9&'; 6an $NH*(% SO*
&9&*; $El,0a=e2 6an Raou=9 %&&*(
Ala
Auokla=9 La3inar Air Flo49 @oreE9
/H3eer9 inku7aor9 nera8a Aeler9
0/ekro=oo3eer U!,%'&&9 Aini
Proean # Bell Elekro=ore0i09 shaker
waterbath, refrigerated centrifuge9
3ikro0ko/9 3ikro/i/e9 er3o3eer9
magnetic stirrer, hot plate,
refrigerator9 6an ala gela0"
Ta1a/ Peneliian
I0ola0i Bakeri Peng1a0il
Proea0e
Lan>uan
Pro6uk0i En5i3
Baker
i
Kulur 0arer
, Diu37u1kan 7akeri 6ala3 *- 3L
3e6ia 8air 6engan ko3/o0i0i skim
milk %;9 /e/on &9-;9 2ea0
ek0rak &9';9 gluko0a %;9 NaBl
&9';9 KH%PO* &9&&D;9
AgSO*":H%O &9&'; 6an $NH*(%
SO* &9&*; $El,0a=e2 6an Raou=9
%&&*(
, Diinku7a0i /a6a 0u1u #: FB 0ela3a
':,'D >a3 $ak1ir =a0e logari3ik("
Kulur
0arer
Ha0il
a" Dia37il 0e7an2ak -& 3L
6i3a0ukkan 6ala3 *-& 3L 3e6ia
/ro6uk0i /roea0e 8air
7" Diinku7a0i 6ala3 shaker waterbath
/a6a 0u1u #: FB 9 '%& r/3 0a3/ai
0u70ra 1a7i0
8" Di0enri=uga0i laruan 1a0il /ro6uk0i
en5i3 /roea0e 6engan ke8e/aan
:&&& r/3 /a6a 0u1u * FB 0ela3a
'& 3eni"
Su/ernaan G en5i3
/roea0e ka0ar
a" Diu>i aki@ia0 0/e0i<k $Sig3a9 '+++(
7" Diu>i ka6ar /roein $Bra6=or69 '+:.(
Pe3urnian Par0ial En5i3 Proea0e
Ekstrak kasar
protease
Su/ernaa
n
a" Dia37a1kan a3oniu3 0ul=a -&;
ke6ala3 -&& 3L ek0rak ka0ar en5i3
/roea0e"
7" Dia6uk 0ela3a 0e3ala3 /a6a 0u1u H *
FB $0aa /ena37a1an a3oniu3 0ul=a
-&;(
8" Di0enri=uga0i 6engan ke8e/aan :&&&
r/3 0ela3 '- 3eni
En6a/an en5i3
0eenga1 3urni
Diali0i0
En5i3 0eenga1
3urni
a" Dia37a1kan 7uIer =o0=a /H
: 6an 6i3a0ukkan ke6ala3
kanong 0elo=an
7" Diren6a3 6ala3 7uIer =o0=a
&9&%- A /H :
8" Dia6uk 3enggunakan 0irrer
/a6a 0u1u H * FB 0ela3a
0e3ala3"
6" Digani 7uIer /eren6a3
0eia/ . >a3 0ekali 0a3/ai
0e3ua gara3 er/i0a1
e" Di1enikan /ro0e0 6iali0i0
keika 0e3ua gara3 a3oniu3
0ul=a ela1 keluar 3e37ran
6engan 3engu>in2a
3enggunkan laruan BaBl%
6an HBl"
En5i3 0eenga1
3urni
Larutan &u'er
diluar kantong
selofan diuji
ke&eradaan garam
amonium sulfatn(a
dengan )ara *
ditam&ahkan +
tetes #a,l- .,/ %
dan + tetes H,l .,/
%. #ila ter&etuk
endapan putih
0#aS"12 maka
diasumsikan en3im
telah terpisah dari
amonium sulfat
Karakeri0a0i En5i3
Peneuan
Peneuan 7era 3olekul

Peneuan BA
3enggunakan
3eo6e So6iu3
De6o0il Sul=a
Poliakrila3i6a Gel
Elekro=ore0i0 $SDS,
PAGE("

Digunakan SDS,PAGE
6i0konin2u 6engan
staking gel #; 6an
separating gel '%9-;
$Lae33li9 '+:&(

Kon<r3a0i /ia
/roein aki= 2ang
3e3/un2ai aki@ia0
/roea0e
3enggunakan
3eo6e 5i3ogra="

Kon0enra0i gel 0a3a

6engan SDS,PAGE9
na3un 6ia37a1
ka0ein &9&-;
ke6ala3 separating
gel $Ae15ar6 e al"9
%&&-("
HAS4L DAN
PE%#AHASAN
HAS4L DAN
PE%#AHASAN
A" I0ola0i 6an Skrining I0ola
Bakeri Peng1a0il Proea0e
B" Pro6uk0i 6an /uri<ka0i /ar0ial
en5i3 /roea0e

Pro6uk0i en5i3 6ilakukan /a6a >a3 ke,': 6an ke,

'D $ak1ir =a0e logari3ik( 6i3ana 0aa i0ola
3eng1a0ilkan >u3la1 en5i3 /roea0e 2ang
o/i3u3"

I0ola0i en5i3 6ilakukan 0enri=uga0i /a6a 0u1u *

FB9 u>uann2a a6ala1 unuk 3eng1in6ari
6enaura0i 6an reak0i en5i3ai0 6ari en5i3
/roea0e"

Di/uri<ka0i 0e8ara /ar0ial 6engan 3eo6e

/engen6a/an a3oniu3 0ul=a /a6a renang
kon0enra0i #&,:&; 6an 6iali0i0"

Diali0i0 ini 7eru>uan unuk 3eng1ilangkan gara3

6an 5a erlaru lain "J
B" Karakeri0a0i En5i3
Karakeri0a0i en5i3 /roea0e 3eli/ui
7e7era/a a0/ek9 anara lain)
'" /H
%" Su1u o/i3u3
#" K3 6an ! 3aE
*" Penenuan 7era 3olekul 6engan Sul=a
Poliakrila3i6 Gel Elekro=ore0i0 $SDS,
PAGE(9 6ilan>ukan 6engan kon<r3a0i
/ia /roein aki= 2ang 3e3/un2ai
aki@ia0 /roea0e 6engan 3eo6e
5i3ogra3 $activity staining method(
'" Penenuan /H O/i3u3
Akti5itas protease optimum pada pH 6,7. memiliki
konformasi sisi aktif (ang sesuai dengan su&strat kasein
(ang men(e&a&kan ter&entukn(a kompleks E8S (ang
maksimal.
Se&agai pem&anding adalah protease (ang diihasilkan oleh
Bacillus subtilis (ang menunjukkan akti5itas protease
optimum pada pH 6
%" Penenuan Su1u
O/i3u3
Penetuan suhu optimum dilakukan pada 5ariasi suhu antara
-789. :, 0inter5al 7 :,2 dengan ;aktu inku&asi -. menit dan
pH 6,7. Dihasilkan &ah;a peningkatan akti5itas protease dari
isolat LnA1 ini men)apai nilai optimum pada suhu +6 :, dan
akti5itasn(a menurun diatas suhu optimumn(a.
Hal ini juga dialami oleh en3im protease (ang &erasal dari
&akteri Bacillus subtilis.
Penetuan suhu optimum dilakukan pada 5ariasi suhu antara
-789. :, 0inter5al 7 :,2 dengan ;aktu inku&asi -. menit dan
pH 6,7. Dihasilkan &ah;a peningkatan akti5itas protease dari
isolat LnA1 ini men)apai nilai optimum pada suhu +6 :, dan
akti5itasn(a menurun diatas suhu optimumn(a.
Hal ini juga dialami oleh en3im protease (ang &erasal dari
&akteri Bacillus subtilis.
#" Peneuan K3 6an !
3aE

Nilai K3 6an !3aE en5i3 /roea0e

6ari i0ola LnA* 6i1iung
7er6a0arkan aki@ia0 en5i3
er0e7u /a6a @aria0i kon0enra0i
0u70ra 6engan /H o/i3u3 :9-
6an 0u1u o/i3u3 #: FB"
Hu7ungan aki@ia0 en5i3 6engan
kon0enra0i 0u70ra 6i/erole1 gra<k
ran0=or3a0i Line4ea@er,Burk"

Nilai K3 6an !3aE 6ienukan

6engan /er0a3aan 2 G aE K 7"
#" Peneuan K3 6an ! 3aE
$Gra<k(
#" Peneuan K3 6an ! 3aE
(Lanjutan )

Ber6a0arkan /eneliian ini9 nilai K3 3enun>ukkan

7a14a /a6a kon0enra0i 0u70ra 0e7e0ar &9%.:
3g?3L reak0i 7er>alan 6engan ke8e/aan 3ak0i3u3"

Nilai !3aE 3enun>ukkan ke8e/aan /e37enukan

ko3/lek0 ES G ke8e/aan /enguraian ko3/lek0 ES
2aiu 0e7e0ar &9%&. 3g?3L?3eni"

A6a/un nilai K3 6an !3aE 6ari /roea0e 7akeri

Bacillus subtilis 7eruru,uru &9%.* 3g?3L 6an &9%&+
3g?3L?3eni"

Harga K3 2ang ren6a1 3enun>ukkan aki@ia0 en5i3

2ang inggi er1a6a/ 0u70ra9 0e7alikn2a 1arga K3
2ang 7e0ar 3enun>ukkan en5i3 3e3/un2ai aki@ia0
2ang ren6a1 er1a6a/ 0u70ra"
*" Penenuan Bera
Aolekul

Penenuan 7era 3olekul 6engan SDS,PAGE9

6ilan>ukan 6engan kon<r3a0i /ia /roein
aki= 2ang 3e3/un2ai aki@ia0 /roea0e
6engan 3eo6e 5i3ogra3 $activity staining
method("

Ber6a0arkan 1a0il /er1iungan 6i/erole1 *

/ia /roein 6ari i0ola LnA* 2ang 3e3iliki BA
:#9+.L -#9:&L #.9:&L 6an%+9:' kDa"

Selan>un2a 6ilakukan kon<r3a0i 5i3ogra3

unuk 3engea1ui /ia aki= 2ang /e3iliki
aki@ia0" Ha0iln2a9 6ikea1ui 7a14a 1an2a 6a
' /ia /roein 2ang 3enun>ukkan aki@ia0
/roea0e 2aiu /a6a BA %+9:' kDa"
*" Penenuan Bera
Aolekul
*" Penenuan Bera
Aolekul

A6an2a aki@ia0 6ari 5i3ogra3

6iun>ukkan 6engan er7enukn2a
5ona 7ening" Daera1 2ang
3enun>ukkan 5ona 7ening a6ala1
6aera1 0u70ra ka0ein 2ang ela1
6i6egra6a0i ole1 en5i3 /roea0e"
Ke0i3/ulan

Ha0il i0ola0i 7akeri /eng1a0il /roea0e 6ari li37a1

8air a1u eringgi 2aiu i0ola LnA* 2ang
3eru/akan 7akeri Gra3 /o0ii=9 kaala0e /o0ii=
6an 3e3/un2ai 0el 2ang 7er7enuk 7aang"

Ha0il /uri<ka0i /ar0ial en5i3 2ang 6ien6a/kan

6engan a3oniu3 0ul=a 3e3iliki aki@ia0 0/e0i<k
:9'# U?3g 6engan ingka ke3urnian '%9+. kali
6i7an6ingkan en5i3 ka0ar"

En5i3 /roea0e 3e3iliki aki@ia0 o/i3u3 /a6a

/H :9- 6an 0u1u #: FB"

Nilai K3 a6ala1 &9%.+ 3g?3L 6an nilai !3aE

a6ala1 &9%&: 3g?3L?3eni"

Ha0il elekro=ore0i0 SDS,PAGE 6an 5i3ogra3

3enun>ukkan 7a14a /roein 6engan aki@ia0
/roea0e 3e3/un2ai BA %+9:' kDa"
Sela3a
7ela>ar
Sela3a
7ela>ar