LAPORAN PRAKTIKUM disusun untuk memenuhi salah satu tugas mata kuliah Genetika oleh: Kelompok 1 Kelas A Arif Rachmatullah 1102750 Annik Melani 1106382 Delia Mutia Aini 1105506 Hana Azalia 1105168 Taurusiana Indargani 1103739 JURUSAN PENDIDIKAN BIOLOGI FAKULTAS PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS PENDIDIKAN INDONESIA 2014 2 BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Kemampuan organisme untuk bereproduksi menghasilkan jenisnya sendiri adalah salah satu ciri yang paling baik untuk membedakan makhluk hidup dari materi tak hidup (Campbell et al., 2008). Sel merupakan unit terkecil dari suatu organisme yang mempunyai kemampuan untuk bereproduksi dan melakukan metabolisme. Pembelahan sel merupakan salah satu bentuk reproduksi sel Eukariotik. Pembelahan sel ini merupakan salah satu yang penting untuk dipelajari dan dianalisis karena pada setiap tahap pembelahan sel mempunyai ciri dan keunikan masing-masing. Sehingga untuk seorang ilmuwan, percobaan mengidentifikasi tahapan tersebut sangat berguana untuk mempelajari tahapan selanjutnya dari organisme. Adapun untuk guru, dapat digunakan sebagai salah satu metode dalam kegiatan pembelajaran. Oleh karena itu diperlukan suatu percobaan untuk mengidentifikasi proses mitosis dari sel. B. Rumusan Masalah Rumusan masalah dari kegiatan percobaan ini adalah Apa sajakah tahapan yang teramati dari pembelahan sel akar bawang?. C. Tujuan Percobaan Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengidentifikasi tahapan pembelahan sel dan menghitung indeks mitosisnya. 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA Kromosom adalah suatu struktur makromolekul yang berisi DNA di mana informasi genetik dalam sel disimpan. kromosom merupakan alat transportasi materi genetik (gen atau DNA) yang sebagian besar bersegregasi menurut hukum Mendel. Setiap kromosom dalam genom biasanya dapat dibedakan satu dengan yang lainnya oleh beberapa kriteria, termasuk panjang relatif kromosom, posisi suatu struktur yang disebut sentromer yang memberi kromosom dalam dua tangan yang panjangnya berbeda-beda, kehadiran dan posisi bidang (area) yang membesar yang disebut knot (tombol) atau kromomer. Selain itu, adanya perpanjangan arus pada terminal dan material kromatin yang disebut satelit, dan sebagainya. Kromosom dibedakan atas autosom (kromosom pada sel somatik) dan kromosom pada sel kelamin (Suryo, 2005). 1. Tahapan Mitosis Menurut Suryo (2005) fase pada mitosis terdiri dari interfase, profase, metafase, anafase, dan telofase. Persentase waktu yang besar dalam siklus sel terjadi pada interfase. Berikut fase-fase pembelahan mitosis: a. Interfase Interfase atau stadium istirahat dalam siklus sel termasuk fase yang berlangsung lama karena pada tahap ini berlangsung fungsi metabolisme dan pembentukan dan sintesis DNA. Maka sebenarnya kurang tepat juga jika dikatan bahwa interfase merupakan fase istirahat, karena sebenarnya pada fase ini sel bekerja dengan sangat berat. Interfase dibedakan lagi menjadi tiga fase, yaitu: 1) Fase gap satu (G1) Pada fase ini terjadi beberapa kegiatan yang mendukung tahap tahap berikutnya, yaitu: a) Trankipsi RNA b) Sintesis protein yang bermanfaat untuk memacu pembelahan nukleus c) Enzim yang diperlukan untuk replikasi DNA 4 d) Tubulin dan protein yang akan membentuk benang spindel Periode untuk fase G1 membutuhkan waktu yang berbeda beda antar individu. Adakalanya G1 membutuhkan waktu 3 4 jam, namun ada juga yang tidak mengalami fase G1 ini, hal ini terjadi pada beberapa sel ragi. 2) Fase Sintesis (S) Pada fase ini terjadi replikasi DNA dan replikasi kromosom, sehingga pada akhir dari fase ini terbentuk sister chromatids yang memiliki sentromer bersama. Namun, masih belum terjadi penambahan pada fase ini. Lamanya waktu yang dibutuhkan pada fase ini 7 8 jam. 3) Fase Gap dua (G2) Pada fase ini terjadi sintesis protein protein yang dibutuhkan pada fase mitosis, seperti sub unit benang gelendong, pertumbuhan organel organel dan makromolekul lainnya (mitokondria, plastid, ribosom, plastid, dan lain lain). Fase ini membutuhkan waktu 2 5 jam. b. Profase Pada awal profase, sentrosom dengan sentriolnya mengalami replikasi dan dihasilkan dua sentrosom. Masing-masing sentrosom hasil pembelahan bermigrasi ke sisi berlawanan dari inti. Pada saat bersamaan, mikrotubul muncul diantara dua sentrosom dan membentuk benang-benang spindle, yang membentuk seperti bola sepak. Pada sel hewan, mikrotubul lainnya menyebar yang kemudian membentuk aster. Pada saat bersamaan, kromosom teramati dengan jelas, yaitu terdiri dua kromatid identik yang terbentuk pada interfase. Dua kromatid identek tersebut bergabung pada sentromernya. Benang-benang spindel terlihat memanjang dari sentromer. c. Metafase Masing-masing sentromer mempunyai dua kinetokor dan masing-masing kinetokor dihubungkan ke satu sentrosom oleh serabut kinetokor. Sementara itu, kromatid bersaudara begerak ke bagian tengah inti membentuk keping metafase (metaphasic plate). d. Anafase 5 Masing-masing kromatid memisahkan diri dari sentromer dan masing-masing kromosom membentuk sentromer. Masing-masing kromosom ditarik oleh benang kinetokor ke kutubnya masing-masing. e. Telofase Ketika kromosom saudara sampai ke kutubnya masing-masing, mulainya telofase. Kromosom saudara tampak tidak beraturan dan jika diwarnai, terpulas kuat dengan pewarna histologi. Tahap berikutnya terlihat benang-benang spindle hilang dan kromosom tidak terlihat (membentuk kromatin; difuse). Keadaan seperti ini merupakan karakteristik dari interfase. Pada akhirnya membran inti tidak terlihat diantara dua anak inti. Sitokinesis, selama fase akhir pembelahan mitosis, muncul lekukan membran sel dan lekukan makin dalam yang akhirnya membagi sel tetua menjadi dua sel anak. Sitokinesis terjadi karena dibantu oleh protein aktin dan myosin. 2. Mitosis Akar Bawang Gambar 1. Mitosis Akar Bawang (Sumber : Fajar, 2010) Sel akar bawang yang baru terbentuk berisi 16 kromosom , dimana 8 diantaranya disumbangkan oleh tumbuhan yang menyediakan gamet jantan , disebut kromosom paternal . sedangkan sisa yang 8 lagi disumbangkan oleh tumbuhan yang menghasilkan sel telur , disebut kromosom maternal . Kromosom kromosom yang berasal dari induk betina bentuknya serupa dengan yang berasal dari induk jantan , sepasang kromosom itu disebut kromosom homolog . Gambar 2. Akar Bawang Merah (Sumber : berita.upi.edu) 6 Mitosis pada tumbuhan terjadi selama mulai dari 30 menit sampai beberapa jam dan merupakan bagian dari suatu proses yang berputar dan terus-menerus. Pada praktikum kali ini digunakan akar bawang merah (Allium cepa) karena jaringan akar bawang merah (Allium cepa) merupaskan jaringan yang mudah ditelaah untuk pengamatan mitosis (Sugiri, 1992). Proses mitosis ini terjadi bersama dengan pembelahan sitoplasma dan bahan- bahan di luar inti sel. Pada mitosis setiap induk yang diploid (2n) akan menghasilkan dua buah sel anakan yang masing-masing tetap diploid serta memiliki sifat keturunan yang sama dengan sel induknya. 7 BAB III METODE PERCOBAAN A. Tempat dan Waktu Percobaan Waktu : Kamis, 24 April 2014. Tempat : Laboratorium Mikrobiologi FPMIPA UPI. B. Alat dan Bahan Alat: 1. Mikroskop 1 buah; 2. Botol vial 5-10ml dengan tutup gabus atau tutup plastik 2 buah; 3. Kaca objek dan kaca penutup 2 buah; 4. Model mitosis; 5. Pipet 3 buah; 6. Water bath atau penangas air 1 set; 7. Cawan petri 2 buah; 8. Silet 1 buah; 9. Tusuk gigi atau batang korek api 1-2 buah. Bahan: 1. Bawang merah 10 buah; 2. HCl 4% / HCl 1 N secukupnya; 3. Asam asetat 10% secukupnya; 4. Mertilen blue secukupnya; 5. Kuteks bening secukupnya; C. Cara Kerja Menanam Bawang 1. Bawang merah yang baik dan tidak berjamur dipilih sebanyak 10 siung per-kelompok, kemudian sisa-sisa akar dibersihkan dengan cara dicabut dan dicukil. 8 2. Bawang merah direndam di dalam wadah berisi air.bagian bakal akar dipastikan terendam semua dalam air. 3. Rendaman bawang merah disimpan pada tempat yang gelap dan hangat, misalnya di lemari. 4. Air rendaman diganti setiap hari. 5. Akar tumbuh dalam waktu 24 jam hingga 72 jam. Panjang akr yang baik untuk percobaan pembuatan praparat mitosis sebaiknya tidak lebih dari 1,5 cm. Fiksatif 1. Akar bawang yang telah tumbuh sepanjang lebih kurang atau maksimal 1,5 cm dikeringkan dengan tisu, kemudian dipotong dengan menggunakan gunting kecil/ silet/ cutter sepanjang 0,5 cm-1 cm dari ujung akar. 2. Akar dimasukkan ke dalam botol vial larutan farmer (Alkohol 100%: Asam asetat glasial = 3:1), botol vial ditutup dan disimpan di dalam freezer. Akar bawang akan dapat bertahan lebih dari 6 bulan 3. Botol-botol dikeluarkan dari dalam freezer.Larutan farmer dibuang dari botol.Potongan akar dalam botol dicuci dengan air ledeng.kran sebanyak 7 x. iar cucian terakhir dibuang 4. Setiap botol diisi dengan larutan HCl 4% atau 1 N sebanyak 1-2 ml dan disimpanpada suhu ruang selama 3 menit. 5. Tutup botol dibuka,kemudian botol-botolberisi akar bawang diinkubasi pada suhu 60oC selamatepat 8 menit. 6. HCl dari tabung dikeluarkan,kemudian akar dibilas denganmenggunakan air keran sebanyak 5 x.air keran dibuang dari tabung reaksi. 7. Larutan metilen blue ditambahkan sebayak sekitar 1ml ke dalam masing- masing botol vial dan tabung disimpan pada suhu ruang selama2-3 menit 8. Larutan metilen blue dibuang, akar dalam tabung dicuci sebanyak8 x. 9. Akar dikeluarkan dari dalam tabung reaksi 10. Akar bawang disquash dengan cara: a. .Satu tetesair diteteskan ke atas kaca objekdan satu akar bawang diletakkan di atasnya dengan menggunakanpinset 9 b. Bagian ujung akar yang membulatdipotong dengan menggunakan silet tajam sepanjang sekitar 2 mm. Bagian sisa akar yang tidak terpakai dibuang c. Kaca penutup diletakkan di atasnya d. Agar sel-sel terpisahkan. Penutup kaca diketuk-ketuk secara hati- hati dengan ujung jari tangan/ujung kuku/ujung pulpen/ ujung pinsilhingga warna bulatan sampel yang semula biru tua menjadi lebih muda dan ukuransampelmenjadi minimal 3xlebih besar dari ukuran semula e. Preparat diletakkan di antara kertas tisu; kemudian ditekan secara hati-hati dengan menggunakan jari tangan,kari tangan tidak boleh digerakkan ataupun digeser. f. Preparat diletakkan di meja mikroskop untuk diamati pada perbesaran objektif 4x, 10x-40x/ 63x g. Preparat diamati. 10 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Percobaan Gambar 1. Tahap Mitosis Akar Bawang Yang Didapatkan Sumber: (Dokumentasi Kelompok 1A, 2014) Tabel 1. Keterangan Proses Pembelahan yang didapatkan Profase Metafase Anafase Telofase 11 Tabel 2. Hasil Pengamatan dan Indeks Mitosis No Kode slide Jumlah total sel yang diamati Jumlah sel sedang dalam tahap interfase Jumlah sel dalam tahap Mitosis Jumlah total sel dalam tahap mitosis Indeks Mitosis
x 100% Profase Metafase Anafase Telofase 1 A 238 201 9 12 7 9 37 15,55 % 2 B 450 399 15 15 11 10 51 11,33% 3 C 389 350 14 7 8 10 39 10,03% Rata-rata 12,30% 12 B. Pembahasan Berdasarkan hasil pengamatan, semua fase dari pembelahan sel dapat teramati. Mulai dari profase, metafase, anafase, telofase dan interfase. Jumlah sel dalam fase interfase mempunyai jumlah yang sangat banyak dibandingkan dengan fase lainnya. Penyebab jumlh sel pada tahap interfasi banyak ini kemungkinan disebabkan karena panjang akar bawang yang terlalu panjang sehingga proses pembelahan sel nya menurun dan sudah tidak lagi mempunyai sifat meristematis (aktif membelah). Biasanya tahap profase agak sulit dibedakan dengan interfase, tetapi biasanya pada tahap profase inti sel agak pudar dan tidak terlalu padat, sedangkan pada tahap interfase inti sel terlihat sangat padat dan pekat. Ini dikarenakna pada tahap profase membran inti sel mulai melebur dan kromosom mulai bersatu membentuk kromatid. Pada percobaan kali ini dilakukan perhitungan indeks mitosis yang didapat dari jumlah sel yang sedang dalam tahap mitosis dibagi jumlah sel total, yang kemudian dikalikan dengan 100%. Pada percobaan ini didapatkan nilai indeks mitosis dengan rata-rata 12,30%. Nilai tersebut termasuk ke dalam nilai yang rendah, dimana bagian akar yang diamati mulai kehilangan kemampuan meristematisnya. 13 BAB V PENUTUP A. Kesimpulan Tahapan mitosis yang teramati pada pembuatan sediaan mikroskopis akar bawang adalah profase, metafase, anafase, telofase dan interfase dengan indeks mitosis sebesar 12,30 %. B. Saran Pada saat menumbuhkan akarbawang, sebaiknya ditumbuhkan selama 3-4 hari sebelum dilakukanya percobaan, agar akar bawang mempunyai panjang yang sesuai untuk dilakukannya pengamatan pembelahan sel. 14 DAFTAR PUSTAKA Fajar, M. (2010). Pengamatan Mitosis. [Online]. Tersedia: http://wikisains.blogspot.com/2010/11/pengamatan-mitosis.html. [6 Mei 2014]. Campbell, et al. (1999). Biologi Edisi kelima-Jilid 1. Jakarta: Erlangga. Campbel, et al. (2008). Biologi Edisi Kedelapan-Jilid1. Jakarta: Erlangga. Sugiri, N. 1992. Biologi Jilid 2. Jakarta: Erlangga Suryo. (2005). Genetika untuk Strata 1. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. .