Anda di halaman 1dari 15

Kelompok 3 :

Ari Nugraha Saputra


Febby Aprilliani
Jen Retno
Maria Oktaviana
Misriani
Mia Pangestika
Rina Damayanti
Risma Anggriani
Shella Nur Alfianti
Northern Blotting...
Nourtern Blotting adalah metode laboratorium
yang digunakan untuk mendeteksi molekul
RNA spesifik antara campuran RNA.
Northern Blotting dapat digunakan untuk
menganalisa sampel RNA dari jaringan
tertentu atau jenis sel dalam rangka untuk
mengukur ekspresi RNA dari gen tertentu.
Teknik ini mirip dengan teknik Southern
Blotting
Sejarah ...
Teknik Northern Blotting dikembangkan
pada tahun 1977 oleh James Alwine, David
Kemp, dan George Stark di Stanford
University. Northern blotting mengambil
nama pertama dari teknik yang sama yaitu
Southern Blooting , nama untuk
biologi Edwin Southern.
Prinsip kerja..
Prinsip Northern Blotting adalah memisahkan
RNA berdasarkan ukuran dan terdeteksi pada
membran menggunakan probe hibridisasi
dengan urutan basa komplementer untuk
semua atau sebagian dari urutan mRNA target.
Cara kerja...
1. RNA diisolasi dari
beberapa sampel biologis
(misalnya berbagai
jaringan, berbagai tahap
perkembangan jaringan
yang sama dll)
2. Sampel RNA dipisahkan
menurut ukuran mereka
pada gel agarosa
Sampleas yang dimuat
pada gel
Gel yang dihasilkan
setelah menjalankan
3. Gel ini kemudian dihapuskan pada
membran nilon atau filter nitroselulosa



4. Membran ditempatkan
dalam cawan berisi
hibridisasi buffer dengan
probe berlabel (radioaktif
atau kimia berlabel). Probe
dirancang khusus untuk
urutan kepentingan.
Dengan demikian, akan
berhibridisasi ke RNA
pada blot yang sesuai
dengan urutan
kepentingan.
Probe dapat berupa
ss-DNA atau RNA.
5. Membran dicuci untuk menghilangkan
probe terikat.






Akses probe dihapus
6. Probe berlabel terdeteksi
melalui autoradiografi (jika
probe radioaktif yang
digunakan) atau melalui
reaksi
chemiluminescence (jika
probe berlabel kimia yang
digunakan). Dalam kedua
kasus ini menyebabkan
pembentukan dari sebuah
band gelap pada film X-ray.
Kita sekarang dapat
membandingkan pola
ekspresi dari urutan
kepentingan dalam sampel
yang berbeda
Interprtasi hasil
Aplikasi Northern
Blotting ..
Mendeteksi mRNA tertentu dalam sampel
Digunakan dalam screening rekombinan
dengan mendeteksi mRNA yang
dihasilkan oleh transgen
Dalam diagnosa penyakit
Dalam studi ekspresi gen
Keunggulan

Sering digunakan sebagai suatu analisis
yang hasilnya valid
Lebih sensitif dibandingkan dengan
penggunaan teknik RT-PCR
Digunakan untuk mengkonfirmasikan dan
memeriksa transgenik binatang
Dapat digunakan untuk penelitian sampai
kemajuan masa yang akan datang


Kekurangan
Memakan waktu banyak
Memerlukan sejumlah besar RNA untuk
deteksi
Secara kuantitatif tidak akurat untuk RNA
dengan konsentrasi rendah
Thank you