Beta-Lactam Resistensi antibiotik antara Enterobacter spp.

Terisolasi dari Infeksi pada Hewan

1.pendahuluan
Pada 1970-an, Enterobacter pertama kali tercatat sebagai penyebab umum dari infeksi
nosokomial di immuno-dikompromikan host , dengan pernafasan, kemih, dan saluran pencernaan
menjadi situs yang paling umum infeksi . Ac-suaikan Infeksi Nosokomial Nasional Surveilan-lance System
(NNIs), Enterobacter spp. menyumbang 5% sampai 7% dari infeksi manusia didapat di rumah sakit di
Amerika Serikat 1976-1989 .
Enterobacter menjadi resisten terhadap beta laktam antibiot-ics dengan memproduksi diperpanjang-
spektrum beta-laktamase (ESBL) protein, yang memecah cincin laktam beta dari antibiotik dan
menonaktifkan itu. The ESBL pertama mengisolasi kembali sistant terhadap sefalosporin diperpanjang-
spektrum, khususnya SHV-beta-laktamase, dilaporkan pada tahun 1983, di Jerman . Selama lima tahun
terakhir, frekuensi Enterobacter resistensi terhadap ketiga generation sefalosporin telah meningkat di
seluruh dunia .
ESBLs telah digambarkan berasal dari TEM dan SHV-beta-laktamase gen . TEM dan SHV-beta-lac-
tamases memberikan perlawanan terhadap penisilin spektrum luas . Gen AmpC beta-laktamase
bertanggung jawab untuk ketahanan terhadap cefoxitin, sebuah generasi kedua sefalosporin . CTX-M,
ESBL lain, telah berkembang, menjadi re-sistant untuk aminopenicillins, carboxypenicillins, ureidopeni-
cillins dan spektrum sempit sefalosporin . Di antara semua, TEM beta-laktamase ESBLs adalah bentuk
paling umum ditemukan di Amerika Serikat .
2.bahan dan metode
2.1. epidemiologi Investigasi
Selama periode Oktober 2003 sampai Maret 2010, enam puluh budaya yang positif untuk
Enterobacter, yang tiga puluh tujuh pasien dirawat di Animal Besar Ser-keburukan dari Bates Acheson
Teaching Hospital Hewan Lois (LAHIR) ditinjau. Mikrobiologi laporan Pene-ratory digunakan untuk
menentukan pasien memiliki resistensi yang tinggi terhadap Ceftiofur, sefalosporin generasi ketiga.
Kriteria yang digunakan sebagai definisi rumah sakit infeksi tions termasuk pasien dengan setidaknya
100-h tinggal di rumah sakit dan dengan budaya positif Enterobacter diperoleh dalam jangka waktu
tinggal di rumah sakit. Medis re-kabel yang digunakan untuk menentukan demografi hewan, infeksi /
kondisi detik-ondary, lokasi rumah sakit, prosedur dilakukan, dan obat-obatan diberikan selama waktu
tinggal. Sampel lingkungan dikumpulkan melalui-out LBAVTH, dari dispenser sabun, grafik teknisi,
gunting rambut, microwave, persiapan-daerah, keyboard komputer, dan USG dan mesin rontgen.
Penyeka steril digunakan untuk menyeka permukaan dan kemudian segera ditempatkan ke dalam
tabung yang berisi 50% air steril dan 50% Luria Bertani (LB) kaldu nutrisi. Dalam 1 jam koleksi, sampel
melesat ke piring LB agar dan diinkubasi selama 24 jam pada 37 C. Sembilan berbeda colo-perusahaan,
morfologi mirip dengan Enterobacter, re-berlapis untuk mendapatkan kultur murni... Lingkungan
sampling tidak memiliki hubungan sementara dengan puncak wabah , tapi bertujuan untuk menentukan
kemungkinan adanya Enterobacter dalam lingkungan rumah sakit .
2.2 . Extended- Spectrum Beta - laktamase
Dari 37 kasus yang diteliti, enam isolat Enterobacter telah disimpan di laboratorium bakteriologi
. Mereka dikumpulkan dari jumlah pasien 27 , 28 , 34 , 35 , 36 , dan 37 . Budaya diinokulasi ke piring agar
darah domba dari spesimen beku dan diinkubasi selama 48 jam pada 35 C. Menggunakan BBL
Prompt Inokulasi System ( Becton , Dickinson dan Perusahaan , Franklin Lakes , NJ ) , suspensi bakteri
siap untuk melakukan disk difusi tes sus - ceptibility ( DDST ) di piring Mueller Hinton - . Cefo - taxime -
klavulanat , sefotaksim , ceftazidime , dan ceftazi -dime - klavulanat disk , masing-masing pada
konsentrasi 30 mg , ditempatkan sekitar 20 pM terpisah untuk DDST tersebut . Kleb - siella pneumoniae ,
tahan terhadap generasi ketiga Cepha - losporin , dan Escherichia coli digunakan sebagai kontrol positif
dan negatif , masing-masing. Sebuah hasil positif bagi kehadiran ESBL adalah 5 mm kenaikan di zona
diameter difusi , dibandingkan dengan agen antimicro - bial dan rekan asam klavulanat nya .
Untuk menilai resistensi antibiotik dari sembilan koloni bakteri terisolasi dari sampel rumah sakit ,
bakteri kembali dilapiskan pada pelat agar LB yang mengandung 0,9 mg / L ceftiofur . Konsentrasi
ceftiofur cocok konsentrasi DDST tersebut . Keenam isolat diuji untuk gen ESBL - resistensi menggunakan
primer pada Tabel 1 [ 11-14 ] .
2.3 . Ekstraksi DNA
Semua DNA bakteri yang digunakan dalam penelitian ini diekstraksi dan dimurnikan
menggunakan Tissue Kit DNeasy ( Qiagen , Valencia , CA ) mengikuti prosedur produsen Lampiran E .
DNA dinilai untuk kualitas dan kuantitas dengan gel elec - trophoresis , menggunakan 1 % agarose gel
diwarnai dengan etidium bromida .
2.4 . PCR Identifikasi Gen ESBL
Polymerase chain reaction ( PCR ) digunakan untuk memperkuat 16 s gen RNA ribosom dari
sembilan isolat rumah sakit , serta gen ESBL tertentu di kedua sampel Enterobacter klinis dan isolat sakit
ceftiofur - tahan . Primer yang digunakan ditunjukkan pada Tabel 1 . PCR dilakukan dengan
menggunakan sistem FideliTaq ( USB , Cleveland , OH ) dengan bersepeda sebagai berikut : 35 siklus dari
96 C selama 30 detik , 55 C/60 C selama 30 detik , dan 68 C selama 1,5 menit . Sebelum siklus
pertama , suhu 95 C diadakan selama 5 menit , dan pada akhir siklus terakhir , suhu 68 C
dipertahankan selama 4 menit . PCR produk divisualisasikan dengan elektroforesis gel agarosa
menggunakan 1 % bernoda gel denganetidium bromida. Band bunga yang dipotong dan diekstraksi
menggunakan PrepEase Gel Extraction Kit (USB, Cleveland, OH). Sampel diekstraksi
diserahkan ke Pusat Genome Research dan Biocomputing (CGRB) di Oregon State University
untuk sequencing DNA. Basis data pencarian dan urutan perbandingan yang dilakukan
menggunakan layanan jaringan BLAST di National Center for Biotechnology Information
(NCBI).
2.5. Analisis Statistik
Evaluasi statistik dilakukan dengan menggunakan 2-tailed Stu-dent t-test dan uji 2
untuk perbandingan antara kelompok. Sebuah nilai p kurang dari 0,5 dianggap signifikan.
3. hasil
3.1. Hasil epidemiologi
Enam puluh strain Enterobacter diisolasi dari infeksi di rumah sakit 2003-2010. Dari 60,
37 kasus di-fection di LBAVTH yang dipelajari. Pasien yang terlibat dalam setiap wabah jarang
di kios yang sama atau cukup dekat untuk menyebarkan bakteri melalui kontak langsung.
Pandangan keseluruhan menunjukkan bahwa kebanyakan kasus memiliki pertumbuhan Entero-
bacter dari infeksi di saluran kemih, sistem reproduksi-tion, patah tulang, dan situs sayatan bedah
(Tabel 2). Namun, tidak ada usia atau jenis kelamin korelasi ditemukan pada pasien dengan
infeksi Enterobacter. Beberapa kasus memiliki beberapa tinggal di rumah sakit. Tabel 3
menunjukkan persentase resistensi terhadap sefalosporin generasi ketiga, gentamisin dan
enrofloxacin (kuinolon). resistensi terhadapcephalosporin generasi ketiga meningkat dari 16 % di
antara Enterobacter isolat ( 2002) menjadi 71,4 % pada tahun 2003 , 64 % pada tahun 2004 , 78,5 %
pada tahun 2005 , 80 % pada tahun 2006 , 88,8 % pada tahun 2007 , 80 % pada tahun 2008 , 42 % pada
tahun 2009 dan 18 % pada tahun 2010 ( Tabel 3 ) . Pria menyumbang 56,8 % dari total pasien , dan
perempuan ac - dihitung 43,2 % dari total pasien dicatat. Usia rata-rata berusia 10 tahun . Pengamatan
dari catatan pasien dibandingkan dengan Enterobacter mereka susceptibil - ity ( Tabel 4 ) menunjukkan
bahwa infeksi dengan strain Enterobacter ditemukan melalui rumah sakit dalam beberapa gelombang
wabah .
Tidak ada Enterobacter ditemukan di lingkungan sam-prinsip . Namun, kami memutuskan untuk
menyelidiki apakah gen ESBL yang umum di bakteri yang diisolasi . Dari 39 sam-prinsip yang
dikumpulkan dalam survei lingkungan (koleksi dilakukan saat puncak perlawanan itu atas ) , sembilan
koloni terpilih diidentifikasi sebagai : Micrococ - cus ( 2 ) , Gordonia , Exiguobacterium , Dietzia , Bacillus
pumilus , Bacillus spp . , Paenibacillus , ditemukan pada pemangkas rambut bedah , wadah betadine di
suite bedah minor , ruang mahasiswa mesin fotokopi senior, teknisi grafik di lorong , dan ruang
komputer radiologi , masing-masing ( Tabel 5 ) . Dari sembilan isolat , strain Bacillus spp . , Bacillus
pumilus , dan Gordonia menunjukkan resistensi pada pelat ceftiofur - diinokulasi . Namun, primer ESBL
diperkuat produk sesuai dengan gen ESBL tidak satu pun dari tiga isolat resisten .
3.2. Extended-Spectrum Beta-laktamase
Untuk menentukan apakah ESBL dikaitkan dengan resistensi beta-laktamase dari enam isolat
yang diperoleh dariperiode wabah , DDST itu dilakukan dan kembali berkonsultasi dalam lima positif ( 83
% ) dan satu negatif ( 17 % ) untuk kehadiran ESBLs ( Tabel 6 dan Gambar 1 ) . Penyelidikan lebih lanjut
menggunakan primer ESBL khusus untuk menguji gen ESBL juga dilakukan ( Tabel 7 ) .
4 hasil pembahasan
Infeksi nosokomial komplikasi sering rawat inap , yang disebabkan oleh patogen
oportunistik yang mendapatkan akses ke host menjalani prosedur invasif , seperti operasi ,
intubasi , dan penempatan garis pembuluh darah. Infeksi nosokomial di rumah sakit hewan dapat
menginfeksi hewan lain , serta ditularkan kepada personil manusia. Enterobacter adalah genus
dari bakteri gram negatif umum, yang dapat dikaitkan dengan infeksi rumah sakit resisten
antibiotik . Karena wabah di resistensi antibiotik dalam genus , kami memutuskan untuk
menyelidiki lima tahun Enterobacter infeksi dalam Layanan Hewan besar Bates Acheson
Teaching Hospital Hewan Lois ( LBAVTH ) di Oregon State University. Demografi dari 37
pasien yang terinfeksi Enterobacter dari LBAVTH yang diperoleh dari grafik dan ana - lyzed .
Cluster diidentifikasi infeksi menyarankan kemungkinan sumber pasien - lingkungan infeksi .
The lingkungan hidup rumah sakit adalah sampel dalam upaya untuk menentukan sumber infeksi
. Meskipun Enterobacter tidak terisolasi , tiga dari sampel yang dikumpulkan mengandung
bakteri yang resistan terhadap generasi ketiga sefalosporin . Entero bacter - isolat dari enam dari
37 pasien dianalisa lebih lanjut untuk kehadiran gen resistensi ESBL tertentu. Semua enam dari
isolat memendam beberapa diperpanjang - spektrum gen beta - laktamase , yaitu , CTX - M - 15 ,
TEM - 80 , SHV - 2 dan AmpC . Singkatnya , Enterobacter infeksi di rumah sakit hewan itu
disebabkan oleh strain beta - laktam - tahan , membawa gen ESBL - tahan . Petugas rumah sakit
hewan harus menyadari potensi untuk transmisi , untuk kedua manusia dan hewan , bakteri
ESBL - gen yang mengandung .