Terobosan bioteknologi terbaru telah menyebabkan perkembangan berbagai metode untuk

deteksi dan identifikasi patogen manusia dalam vektor mereka. Antibodi monoklonal
diproduksi terhadap antigen sporozoite malaria telah diizinkan pengembangan beberapa
sensitif, tes imunologi spesies tertentu (IFA, IRMA, ELISA). Salah satunya, dua situs enzim-
linked Immunosorbent Assay (ELISA) telah dikembangkan sebagai alat epidemiologi
berguna dalam identifikasi nyamuk malaria yang terinfeksi. Metode ini menggunakan sangat
spesies antibodi monoklonal spesifik yang mengenali epitop imunodominan berulang dari
sirkumsporozoit (CS) protein Antibodi monoklonal telah beendeveloped untuk keempat
spesies malaria manusia. Fitur kunci dari teknik ELISA adalah penggunaan indikator enzim
untuk reaksi imunologis. Antigen capture atau "konfigurasi Sandwich ELISA menggunakan
monoklonal dimurnikan baik sebagai fase padat dan, konjugasi enzim, sebagai penanda untuk
kehadiran protein CS dalam homogenat nyamuk diinkubasi dalam sumur piring mikrotitrasi.
Teknologi ini telah menunjukkan keuntungan lebih dari metode lain untuk pengumpulan data
epidemiologi. Nyamuk dapat ditangkap, dikeringkan dan disimpan sampai waktu yang tepat
untuk pemeriksaan. The sporozoite tingkat spesies Plasmodium dapat diidentifikasi dengan
mudah, dan ketika dikombinasikan dengan tingkat man-menggigit memberikan tingkat
inokulasi sporozoite, sebuah estimasi entornologic penting dari jumlah potensi infektif
menggigit seseorang bisa berharap selama periode waktu tertentu. saat ini, nyamuk dapat
diuji secara individu atau menggenang hingga 20 anophelines. uji tersebut cukup sensitif
untuk mendeteksi 1 nyamuk yang terinfeksi per kolam renang atau sesedikit sebagai 25
sporozoit per 50 pl ekstrak nyamuk. prinsip dan prosedur dasar yang ditutupi tentang substrat
padat, adsorpsi ke substrat padat, buffer dan mencuci solusi, konjugat dan substrat enzim.
Keuntungan dan keterbatasan teknik ini dalam studi malaria ini dibahas.
PENDAHULUAN
Terobosan bioteknologi terbaru telah mengarah pada pengembangan berbagai metode untuk
deteksi dan identifikasi patogen manusia dan hewan di vektor mereka. Salah satunya, dua
properti atau sisi ganda en zyme-linked immunosorbent assay (ELISA) telah dikembangkan
sebagai epidemiologi- kal alat yang berguna dalam identifikasi malaria-in
fected mosquitoes1t3. Metode ini menggunakan sangat spesifik spesies antibodies4
monoklonal yang mengakui dan menangkap epitop immunodorninant berulang dari
sirkumsporozoit (CS) protein dari plasmodia parasites5. Sampai saat ini, antibodi monoklonal
telah dikembangkan untuk semua empat spesies sporozoite malaria manusia. Tibodies an-
monoklonal diproduksi terhadap antigen membran malaria permukaan sporozoite telah
diizinkan
* Kepala Divisi Entomologi, US Naval Medical Research Unit No 2 Jakarta Detasemen APO
San Fransisco, CA 96356
Bul. Penellt. Kesehat. 17 (2) 1989
tes imunologi spesifik spesies, yaitu immunofluorescent dan imun radiometrik hibridisasi
DNA as-mengatakan, sebuah 8 teknik kompetitif dan berpotensi kuat, telah mendapat
perhatian juga. Namun, salah satu kelemahan yang signifikan adalah bahwa tes ini tidak
panggung spesifik. Probe DNA perlu dikembangkan yang dapat membedakan antara tahapan
dalam siklus hidup. Hal ini melibatkan deteksi transkrip gen, RNA utusan yang tahap spesifik
dan cukup berlimpah. Tidak ada tes tersebut belum tersedia. Tulisan ini akan mengulas hanya
sporozoite ELISA dan penggunaan potensinya dalam studi epidemiologi malaria.
VECTOW-PARASIT hubungan KAPAL
Dalam rangka untuk sepenuhnya menghargai sporo- zoite ELISA teknik dan penggunaannya
dalam bidang epidemiologi malaria, pemahaman tentang ekstrinsik plasmodia (seksual)
siklus hidup 9 dalam vektor sangat penting. Dalam peristiwa normal, perempuan anopheles
mos- quito akan menyerap darah sebagai sowce protein untuk pengembangan telur sementara
pada saat yang sama in gesting infektif laki dan perempuan gameto- cytes dari individu
pasien. Pembuahan terjadi di midgut nyamuk yang menghasilkan zigot (ookinete). Tahap ini
in vades epitel midgut dan mulai pembangunan ookista. Tergantung pada mendatang
tempera, spesies parasit dan regangan dan kompetensi vektor, ookista akan menyelesaikan
ransum matu- dan pecah di 8 sampai 20 hari mengosongkan ke homocoel ratusan nyamuk,
jika tidak ribuan sporozoit. Ketika merilis sporozoit bergerak di seluruh tubuh nyamuk. Jika
berhasil, banyak menyerang kelenjar ludah di mana mereka menunggu injeksi ke host rentan
ketika
perempuan mencoba makan darah berikutnya. Nyamuk yang kompeten mampu menghasilkan
berbagai 100 sampai lebih dari 10.000 zoites sporo- dari makan infektif tunggal. Spesies
antibodi monoklonal spesifik yang diproduksi oleh garis sel hibrida dan digunakan dalam
ELISA mengekspresikan antigen mantel permukaan atau protein sirkumsporozoit (CSP) dari
sporozoite tersebut.
ELISA PRINSIP DAN METHO- DOLOGY
Fitur kunci dari teknik ELISA adalah penggunaan indikator enzim untuk reaksi imunologis.
Banyak waktu dan usaha masuk ke dalam pengembangan dan penyempurnaan dari ELISA
sesuai dengan tujuan-ob- tes. Berbagai macam sub strates, buffer, solusi mencuci andconju-
gerbang harus disaring untuk mendapatkan reaksi terbaik yang diinginkan. Kombinasi
substrat enzyme memiliki berbagai tions op yang memerlukan investigasi yang teliti untuk
tiba di konfigurasi yang optimal untuk tugas ''. Jika perlu, baterai monoclonals dihasilkan
harus disaring menghilangkan mereka dari sensitivitas rendah dan tivityll lintas reaksi. Yoh
umum, plastik dengan berbagai dan berbagai sifat serap telah menjadi hampir secara
universal diterima sebagai substrat padat pilihan. Antigen atau antibodi dapat pasif
teradsorpsi pada substrat padat atau mereka mungkin terkait dengan menggunakan berbagai
teknisi ques ''. Pilihan memblokir penyangga mungkin memiliki efek mendalam pada hasil uji
dan itu harus dievaluasi secara menyeluruh. Kebanyakan solusi mencuci mengandung
deterjen yang lemah yang membantu mengurangi reaksi pengikatan non-spesifik. Berbagai
macam enzim dan strates sub yang tersedia dan harus disesuaikan dengan konfigurasi yang
optimal. Jika hasilnya menjadi
Bul. Penellt. Kesehat. 17 (2) 1989
baca secara obyektif, pembaca plat dapat diatur pada panjang gelombang tertentu berdasarkan
profil penyerapan substrat yang digunakan. Berbagai konfigurasi yang tersedia tergantung
pada tujuan khusus pengujian. Konfigurasi umum digunakan termasuk langsung (antigen
deteksi), tidak langsung (antibodi deteksi tion), antigen capture, menangkap antibodi, dan
ELISA kompetitif atau memblokir. Sistem tion Amplifica-, misalnya, peroksidase
peroksidase anti, atau biotin-streptidin, juga tersedia untuk membantu meningkatkan sinyal
atau reaksi tertentu. The sporozoite ELISA adalah tigen capture an- atau "konfigurasi
sandwich yang merupakan alat yang berguna untuk deteksi cepat antigen CSP tertentu.
THE SPOROZOITE ELlSA
Sistem ini menggunakan dimurnikan antibodi klon mono (MAb) baik sebagai fase padat dan,
konjugasi enzim, sebagai penanda untuk kehadiran protein CS. Tidak perlu untuk
memurnikan antigen atau pasangkan ke fase padat. Tes yang dijelaskan di sini dikembangkan
oleh peneliti di Walter Reed Army Institute for Research. Sandwich ELISA diawali dengan
adsorpsi MAb pengambilan ke sumur dari piring inicrotitration plastik. Setelah 30 menit
inkubasi pada suhu kamar isi baik yang disedot dan situs mengikat aktif yang tersisa di piring
diblokir dengan memblokir penyangga. Setelah identifikasi spesies, nyamuk yang akan diuji
adalah tanah dalam menghalangi buffer yang mengandung NONIDET P-40, diencerkan
dengan memblokir buff- er, dan 50 p1 aliquot ditambahkan ke sumur. Sisa triturate nyamuk
harus dibekukan untuk tes nanti jika diperlukan. Ini juga telah menunjukkan bahwa
pembekuan dan pencairan penyebab triturate meningkat CS gangguan antigen yang
menghasilkan spesifisitas uji yang lebih besar. Kontrol positif dan negatif juga ditambahkan
ke spesifik
sumur saat ini. Jumlah yang diukur dari protein combinant ulang atau aktual NP-40 sporozoit
diobati digunakan untuk kontrol tive gosi- kuantitatif. Ketika CS antigen hadir itu akan
membentuk kompleks antigen-antibodi dengan MAb capture. Setelah 2 jam inkubasi, triturate
nyamuk yang disedot dan sumur dicuci. Masing-masing peroksidase-linked MAb kemudian
ditambahkan ke sumur. Jf CS antigen telah ditangkap, langkah ini akan menyelesaikan tion
forma- dari "sandwich". Setelah l jam inkubasi tion isi baik yang disedot, piring dicuci dan
solusi peroksidase substrat yang jelas ditambahkan. Sebagai enzim peroksidase bereaksi
dengan substrat produk hijau tua terbentuk. Intensitas reaksi kolorimetri (sinyal) adalah
sebanding dengan jumlah CS antigen hadir dalam sampel uji. Hasil dibaca secara visual atau
414 NRN menggunakan pelat reader ELISA 30 atau 60 menit setelah substrzte ditambahkan.
Positif (= reaksi tive) sampel harus diuji ulang untuk tion confiia- dan, jika diinginkan,
perkiraan beban zoite sporo- per nyamuk dapat dilakukan dengan membuat perbandingan
kuantitatif dengan protein rekombinan CS densitas optik pembacaan angka jumlah
(direproduksi dari ELISA kit instruksi, RA Wirtz). A 96 polivinil baik U-bottom plate titrasi
mikro digunakan untuk substrat padat. Biasanya, sumur luar piring tidak digunakan karena
variabilitas dalam reaksi mengikat dan non-spesifik. A reaktif atau "yang positif" kontrol
ditempatkan di kiri atas. Lima sumur langsung di bawah kontrol positif ini berisi
laboratorium-dibesarkan non-reaktif atau "negatif" kontrol. Nyamuk dapat diuji secara
individual atau dapat dikumpulkan menjadi 5 atau 10 kepala-thoraxes per sumur
memungkinkan hingga 540 nyamuk diuji per piring. Hal ini dapat dijamin di daerah di mana
tingkat sporozoite diharapkan kurang dari 1%. Sebuah menguntungkan
Bul. Penelit. Kesehat. 17 (2) 1989
milik pooling adalah ketahanan terhadap efek yang tidak diinginkan dari variasi dalam
spesifisitas tes. Umumnya, keseimbangan antara ukuran kolam renang, sensitivitas dan
spesifisitas harus ditemukan sehubungan dengan hilangnya informasi di satu sisi dan
keuntungan dalam waktu dan tenaga kerja pada other12. Beberapa modifikasi tant impor-
telah terjadi baru-baru ini, yang paling penting adalah pengurangan diperlukan waktu
inkubasi. Waktu inkubasi mendatang antibodi kapiler pada substrat padat telah berkurang dari
semalam sampai 30 menit, yang telah menghasilkan penghematan sigmficant waktu dan
peningkatan sensitivitas assay. Seluruh tes yang sekarang dapat dilakukan dalam waktu 5
jam. Keuntungan saat ini dan keterbatasan pengujian ini terdaftar sebagai berikut:
Keuntungan: - deteksi spesies-spesifik Plasmodium nyamuk yang terinfeksi dan infeksi. -
Mampu mendeteksi 100 sporozoit per nyamuk (25 sporozoit per 50 p1 triturate). - Berpotensi
metode yang lebih dapat diandalkan untuk mendeteksi sporozoite mana nyamuk in tarif
fection dan / atau kepadatan sporozoite rendah atau sangat rendah. - Penggunaan reagen
stabil, sebagian besar cially komersil tersedia. - Kemampuan untuk menguji nyamuk kering,
beku atau segar tertangkap. - Kurang waktu mengkonsumsi dan tenaga daripada metode
diseksi mikroskopik standar. - Hasil dapat dibaca secara visual atau kuantitatif tively -
Peningkatan kemampuan mengidentifikasi vektor primer dan sekunder.
Keterbatasan: - bahan kontrol positif dan antibodi monoklonal (MAb) tidak tersedia secara
komersial com-. - Persyaratan Pendinginan untuk siap PBS, memblokir penyangga, nyamuk
grinding solusi, solusi mencuci, MAbs dan posisi- larutan stok kontrol tive. - Peningkatan
biaya untuk reagen dan perlengkapan lebih dari metode diseksi standar. - Kemungkinan
adanya non-reaktif strain parasit manusia untuk MAbs standar karena heterogenitas fenotipik
alami dalam domain berulang (epitop). - Sebuah ELISA positif pada nyamuk bukanlah bukti
bahwa spesies adalah vektor (yaitu hasilnya tidak identik dengan tingkat kelenjar ludah
sporozoite). Pasti bered kenang bahwa CS antigen hadir dalam mengembangkan ookista
(Beier et al, 1988) serta sporozoit gratis yang dapat ditemukan hampir di mana saja di tubuh
nyamuk 13.
Keterbatasan terakhir ini adalah salah satu yang penting berkaitan dengan malaria
epidemiologi. Bagaimana akurat adalah teknik ini dalam membangun tarif sporozoite bila
dibandingkan dengan metode diseksi standar? Sebuah studi terbaru oleh Robert et all3 inves-
tigated distribusi sirkumsporozoit antigen di Anopheles gambiae terinfeksi Plasmodium
falciparum. Mereka menemukan Istence mantan antigen bebas berhubungan dengan sporozoit
14 hari pasca-infeksi di kepala, kelenjar ludah, thorax, midgut, kaki, ovarium, tubula
Malphigi dan situs lainnya menggunakan CS ELISA serupa. Ponnudurai et all4 menemukan
bahwa kurang dari 50%. sporozoit yang Pf alciparum hadir dalam kelenjar ludah nyamuk tiga
minggu pasca tion infeksi. Sisanya ditemukan didistribusikan
Bul. Penellt. Kesehat. 17 (2) 1989
sepanjang sisa tubuh nyamuk. Mereka juga mengamati jumlah sporozoit ditemukan di dada
selalu lebih rendah dari yang diperkirakan oleh ELISA, menyimpulkan bahwa jumlah besar
CS antigen ditumpahkan dalam in-kelenjar ludah fected. Temuan ini mengkonfirmasikan
kemungkinan mendeteksi hemocoel sporozoit dengan ELISA yang tidak masuk kelenjar
ludah bahkan ketika membatasi assay ke bagian kepala-dada nyamuk. Kehadiran CS antigen
dalam dada dari satu nyamuk dan tidak adanya sporozoit dan CS antigen dari kelenjar ludah
yang menunjukkan bahwa menggunakan thoraxes, ELISA tidak bisa dis criminate antara
nyamuk yang terinfeksi dan infeksi. Mengapa perbedaan ini penting? Tingkat sporozoite
dianggap faktor dgn serangga yang paling komponen yang penting dalam epidemiologi
malaria1 manusia '. Ini adalah ukuran dari proporsi mos infektif uitoes dari 19 jumlah
anophelines diperiksa. Cally Epidemiologi-, kami tertarik untuk mengetahui tingkat
sporozoite pada titik-titik tertentu dalam waktu. Sayangnya, berapa persen dari nyamuk yang
terinfeksi menjadi infektif tergantung pada banyak faktor, prinsip yang merupakan tingkat
kelangsungan hidup sehari-hari. Akan nyamuk hidup cukup lama untuk menjadi infektif? Jika
kita extrapo- akhir sembarangan, kita bisa sangat melebih-lebihkan kemampuan vectorial
pada populasi anopheles berdasarkan tarif sporozoite berlebihan. Ini juga akan
memungkinkan spesies tor nonvec- untuk menguji positif karena beberapa anophelines
adalah ca? Dapat mendukung perkembangan sporozoit yang tidak dapat masuk ke glands16
saliva. Singkatnya, infeksi tidak perlu menyebabkan infektivitas. Organisasi Kesehatan Dunia
telah merekomendasikan penggunaan ELISA dan teknik munoradiometric im- untuk deteksi
sporozoite di lapangan tertangkap nyamuk, bagaimanapun, terdapat informasi yang
bertentangan di
literatur tentang keakuratan dan plicability ap- dalam pekerjaan epidemiologi. Wirtz et all1 di
Papua Nugini menemukan korelasi yang sangat baik antara ELISA dan hasil diseksi standar;
ada perbedaan sigmficant terlihat antara dua metode. Dalam tetangga membosankan Irian
Jaya (Indonesia), kami membandingkan dua metode tetapi dalam cara yang kurang ketat
(Bangs et al, tidak dipublikasikan). Berdasarkan hasil kami, kami menemukan perbedaan
signScant menjadi- tween dua metode. The ELISA (kepala-hanya thorax) terdeteksi 6 kali
lipat nyamuk positif antigen lebih sporozoite daripada metode diseksi mengamati sporozoit
yang sebenarnya di kelenjar ludah. Koros et all7 dari Kenya menunjukkan tes ELISA
berlebihan proporsi Anopheles dengan sporozoit kelenjar ludah 44,7% dan teknik
pembedahan yang lebih sensitif dibandingkan ELISA untuk mendeteksi infeksi ringan. Hasil
ini menunjukkan bahwa adalah penting bahwa vektor baru dijelaskan, terutama yang
sekunder, perlu dikonfirmasi melalui studi kompetensi vektor eksperimental untuk benar-
benar mendeteksi sporozoit dalam kelenjar ludah.
Aplikasi di Bidang Malaria epidemiologis logi:
Bagaimana dengan penggunaan praktis dari teknik-nique ini malaria epidemiologi? Adalah
penting bahwa semua hasil dilaporkan dan diinterpretasikan sehubungan dengan keterbatasan
bahwa positif ELISA bukan bukti konklusif untuk Kerja membentuk aran nyamuk individu
sebagai vektor, melainkan menunjukkan bahwa CS antigen dapat berkembang dalam spesies
itu. Keterbatasan utama dari sporozoite ELISA adalah bahwa ia tidak dapat membedakan
antara nyamuk yang terinfeksi dan infeksi. Ini menghasilkan beberapa masalah yang melekat
dengan timation es- tingkat sporozoite benar. bahkan
Bul. Penelit. Kesehat. 17 (2) 1989
ketika membatasi assay ke bagian kepala-dada nyamuk, positif-palsu kelenjar ludah yang
mungkin karena sirkulasi CSP. Kelemahan ini harus diingat ketika menafsirkan hasil tes.
Tingkat sporozoite dikenakan hubungan langsung dengan risiko infeksi malaria pada populasi
manusia. Estimasi akurat tingkat ini memainkan peranan penting dalam malaria epidemiologi
dan membantu kita untuk memperkirakan intensitas transmisi dan vectorial 18 kapasitas pada
waktu tertentu dan daerah. Pengembangan ELISA telah secara dramatis meningkatkan
kemampuan kita untuk mendeteksi, identifikasi dan kuantisasi sporozoit dalam nyamuk
dibandingkan metode bagian dis standar. Sejumlah penelitian telah dilakukan dalam evaluatin
yang penggunaan berbohong dari sporozoite ELISA 19.2821.223fE: ELISA juga telah
memainkan peran penting dalam studi epidemiolo ical baru-baru ini di Papua Nugini 24 *
2'26. Peningkatan kesadaran en- dinamika transmisi tomologic telah membantu menuju
pemahaman yang lebih baik antar-hubungan yang kompleks antara vektor, parasit dan tuan
rumah. Tes ini telah memungkinkan kami untuk memeriksa sejumlah besar dan berbagai
spesies anopheles, menentukan pentingnya mereka, dan langsung kontrol dan surveillance
kegiatan khusus terhadap mereka. Tingkat sporozoite, dalam kombinasi dengan parameter
lain, seperti tingkat menggigit dan preferensi tuan rumah, memungkinkan estimasi indeks
transmisi penting lainnya, seperti tingkat sporozoite inokulasi dgn serangga atau harian
(EIR). EIR merupakan fungsi dari tingkat sporozoite dan tingkat manusia-menggigit (rata-
rata jumlah gigitan / manusia / malam). Indeks ini dianggap sebagai minant menghalangi-
paling penting dari malaria prevalence27.I t mencerminkan jumlah yang diharapkan dari
infeksi gigitan / manusia / malam. Dari EIR, perhitungan pada num- ber diharapkan infektif
sporozoite gigitan satu
bisa berharap lebih dari sepanjang tahun dapat dilakukan dengan multipying EIR rata-rata
untuk semua periode pengambilan sampel dengan 365 hari. Fungsi inversi EIR (ItEIR) adalah
waktu inokulasi paparan, yang merupakan waktu teoritis yang diperlukan bagi seorang
individu untuk terkena satu gigitan infektif. Hari-hari untuk infektif inokulasi dapat
menggambarkan perbedaan musiman dalam tingkat penularan cor terkait dengan curah hujan
atau variabel lain. Hubungan antara preferensi makan (indeks darah manusia) dan tingkat
sporozoite memberikan informasi tentang kapasitas vectorial dan untuk memprediksi
perubahan respon im- 28 diajukan selama program intervensi. Untuk menggambarkan
beberapa contoh dari apa yang ELISA dapat memberikan, ~ urkoett a124 telah menunjukkan
korelasi antara jumlah EIR dan prevalensi parasit pada anak-anak. Mereka juga menemukan
peningkatan efisiensi transmisi P. falciparum yang mereka dikaitkan dengan kepadatan
sporozoite berat nyamuk yang terinfeksi secara alami dibandingkan dengan mos uitoes
terinfeksi 8 dengan P. vivax. Burkot et a1 mampu menunjukkan variasi dalam rata-rata
sporozoite dan tarif okulasi informasi antara desa-desa yang berbeda dari kedekatan geografis
dekat serta tarif yang bervariasi dalam desa dari waktu ke waktu. Kemajuan Biotechnologic
yang baik sesuai dan berlaku untuk penggunaan lapangan akan selalu disambut oleh penyidik
dan personil kontrol untuk lebih akurat mengukur kejadian malaria dan intensitas penularan.
Laboratorium dan lapangan lebih lanjut evaluasi dan perbaikan dari sporozoite ELISA
diharapkan akan membantu untuk mengatasi berbagai keterbatasan sewa skr nya. Dalam hal
fase IIb atau malaria I11 uji coba lapangan vaksin, informasi latar belakang dinamika
transmisi dan tarif paparan akan sangat berharga untuk pemilihan lokasi, waktu dan vaksin e
~ ~ aluationI t ~. Diharapkan bahwa suatu hari beberapa tes dapat dilakukan pada individu
nyamuk yang dapat
Bul. Penelit. Kesehat. 17 (2) 1989
akurat mengidentifikasi, menentukan infektivitas dan tuan rumah preferensi dengan
menggunakan probe DNA, sporozoite dan ELISA makan darah.
REFERENSI
1 Burkot. T.R., J.L. Williams dan I. Schneider (1984). Identifikasi nyamuk yang terinfeksi
ciparum fal- Plasmodium oleh immunosorbent assay antibodi ganda enzyme-linked. Am. J.
Trop. Med. Hyg, 33:. 783-788. 2 Wirtz, R.A., T.R. Burkot, R.G. Andre, R. Rosen- berg, W.E.
Collins. D.R. Roberts (1985). Identifikasi zoites Plasmodium vivax sporo- dalam nyamuk
menggunakan assay enzyme-linked immunosorbent. Am. J. Trop. Med. Hyg, 38:. 1048-1054.
3 Collins, F.H., P.M. Provell, G.H. Campbell, dan W.E. Collins (1988). Monoklonal antibodi
berbasis assay enzyme-linked immunosorbent (ELISA) untuk detectioy Plasmodium malariae
sporozoit dalam nyamuk. Am. J. Trop. Med. Hyg, 38:. 283-288. 4. Zavala, F., R.W. Gwads,
F.H. Collins, R.S. Senzweig Nus-, dan V. Nussenzweig (1982). Antibodi monoklonal
terhadap protein sirkumsporozoit mengidentifikasi spesies parasit malaria dalam nyamuk
yang terinfeksi. Alam (Lon- don) 299: 737- 738. 5. Nardin, EH, V. Nussenzweig, RS
Nussenzweig, W.E. Collins. K.T. Harina5uta.P. Tapchaisri, Y. Chomcharn (1982). Protein
sirkumsporozoit parasit malaria manusia modium Plas- falciparum dan Plasmodium vivax. J.
Exp. Med, 156:. 20-30. 6 Collins, F.H., F. Zavala, P.M. Graves, AH Cochrane, RW Gwadz,
J. akoh, dan RS Nussenzweig (1984). Uji coba lapangan pertama assay immunoradiometric
untuk mendeteksi sporozoit malaria dalam nyamuk. Am. J. Trop. Med. Hyg, 33:. 538-543. 7
Subbarao, SK, T. Adak, K. Vasantha, H. Joshi, K. Raghvendra, AH Cochrane, RS Senzweig
Nus- dan Wakil Direktur Utama Shaxma (1988). Tibility Suscep- Anopheles spesies
culicijacies A dan B untuk Plasmodium vivax dan Plasmodium falciparum yang ditentukan
oleh uji radiometrik imun. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg, 82:. 394-397. 8 Holmberg, M.
dan H. Wigzell (1987). Tes hibridisasi DNA untuk mendeteksi malaria
sporozoit dalam nyamuk. Parasitol. Hari ini, 3: 380 9. Bruce-Chwatt, L.J. (1985). Penting 2ed
Malariology. John Wiley and Sons, Inc New York 452 p. 10. Burgess, G.W. (1988). Prinsip
dasar ELISA dan variasi konfigurasi. In: Teknologi ELISA dalam Diagnosis dan Penelitian,
Bur- GESS, GW ed. James Cook Univ., North Queensland, Australia 11 Wirtz, RA, F.
Savala, Y. Charoenvit, GH Campbell, T.R. Burkot, I. Schneider, K.M. Esser, R.L. Beaudoin
dan R.G. Andre (1987). Pengujian Perbandingan tibodies an- monoklonal terhadap sporozoit
Plasmodium falciparum untuk pengembangan ELISA. Bull. Wld. Hlth. Org, 65:. 39-45. 12.
van Druten, J.A.M. dan J.P. Verhave (1988). Timation es- tingkat malaria sporozoite
menggunakan pooled sampel nyamuk. Excerpta Med. Int. Congr. Ser. 810, p. 125. 13.
Robert, V., J.P. Verhave, T. Ponnudurai. L. Louwe, P. Scholtens dan P. Carnevale (1988).
Studi distribusi circumsporowite an- tigen di Anopheles gambiae terinfeksi Plasmodium
falciparum, dengan menggunakan enzyme linked immunosorbent assay. Trans. Roy. Soc.
Trop. Med. Hyg, 82:. 389-391. 14. Pomudurai, T., A.H. W. Lensen, G.J. Van Gemert, T.
Bensink, M. Bolmer, J.B.A. Hooghof, J.P. Verhave dan J.H.E. Meuwissen (1988). Sporozoit
dari Plasmodium falciparum dalam nyamuk dan signifikansinya dalam epidemiologi malaria.
Excerpta Med. Int. Congr. Ser. 810, p. 126. 15. Macdonald, G. (1955). Pengukuran transmisi
malaria. Proc. R. Soc. Med, 48:. 295-302. 16. Rosenberg, R. (1985). Ketidakmampuan
sporozoit Plasmodium knowlesi untuk menyerang Anopheles kelenjar ludah freeborni. Am. J.
Trop. Med. Hyg, 34:. 687-691. 17. Koros, J.K., J.C. Beier, P.V. Perkins, F. Onyango, R.A.
Wirtz, T.P. Gargan, R.E. Whitmore dan D.K. Koech (1987). Evaluasi Kritis diseksi dan
ELISA teknik untuk deteksi sporozoite dalam kelenjar ludah nyamuk Anopheles. Program
36th Ann. Ruang. Am. Soc. Trop. Med. Hyg., P. 291. 18. Molineaux, L. dan G. Gramiccia
(1980). The Garki Proyek: Penelitian epidemiologi dan
Bul. Penelit. Kesehat 17 (2) 1989 203
pengendalian malaria di Sudan savana Afrika Barat. Wld. Hlth. Org., Jenewa. 3 11 p. 19
Wirtz, R.A., T.R. Budcot, P.M. Graves, dan R.G. Andre (1987). Evaluasi Bidang enzyme tes
immunosorbent terkait untuk Plas- modium falciparum dan Plasmodium vivax sporozoit
dalam nyamuk (Diptera: Culicidae) dari Papua Nugini. J. Med. Entomol, 24:. 433-437. 20.
Baker, E.Z., J.C. Beier, S.R. Lemah lembut dan R.A. Wirtz (1987). Deteksi dan kuantifikasi
Plas- modiumf alciparum andP. viva.r infeksi di Thai-Kampuchean Anopiteles (DIPT e ra:
Culicidae) oleh enzyme-linked immunosor- assay membungkuk. 3 Med. Entomol, 24:. 536-
541. 21. Herawati, P.R.J., I.S. Weerasinghe dan R.A. Wirtz (1988). Peran anophelines dalam
transmisi malaria manusia: Penggunaan ELISA untuk konfirmasi infeksi alami. Excerpta
Med. Int. Congr. Ser. 810, p. 126. 22. Beier, J.C., P.V. Perkins, R.A. Wirtz, R.E. Whitmore
lebih, M. Mugambi, W.T. Hockmeyer (1987). Bidang evaluasi yang immunosorbent assay
enzyme-linked (ELISA) untuk modium falciparum deteksi sporozoite Plas- dalam nyamuk
anopheles dari Kenya. Am. J. Trop. Med. Hyg, 36:. 459-468. 23. Beier, M.S..I.K. Schwartz.
J.C. Beier, P.V. Perkins, F. Onyango, J.H. Koros, G.H. Campbell, P.M. Andrysiak dan A.O.
Brandling-Bennett (1988). Identifikasi spesies malaria dengan ELISA di sporozoite dan
ookista terinfeksi
Anopheles dari Kenya Barat Am. J. Trop. Med. Hyg, 39:. 323-327. 24. Burkot, T.R., P.M.
Graves, J.A. Cattan, R.A. Wirtz dan F.D. Gibson (1987). Efisiensi transmisi sporozoite di
malarias manusia, Plasmodium falciparum dan P. vivax. Bull. Wld. Hlth. Org, 65:. 375-380.
25. Burkot, T.R., P.M. Graves, R. Pam, R.A. Wirtz dan P.F. Heywood (1988). Studi misi
malaria manusia transponder di kompleks punctulatus Anopheles di Papua Nugini: tarif
sporozoite, tarif inokulasi, dan sporozoite universitas-den-. Am. J. Trop. Med. Hyg, 39:. 135-
144. 26. Burkot. T.R., C. Dye dan P.M. Graves (1989). Analisis beberapa faktor yang
menentukan tingkat sporozoite, indeks darah manusia, dan tarif menggigit anggota kompleks
punctulatus Anopheles di Papua Nugini. Am. J. Trop. Med. Hyg, 40:. 229-234. 27. Birley,
M.H. dan J.D. Charlwood (1987). Tingkat Sporozoite dan prevalensi malaria. Parasitol. Hari
ini, 3: 23 1-2. 28 Dye, C. (1986). Kapasitas vectorial: kita harus mengukur semua
komponennya? Parasit. Hari ini, 2: 203-209. Organisasi Kesehatan Dunia 29 (1985). Prinsip
uji vaksin malaria: RepoIt dari mengadakan pertemuan bersama dari kelompok kerja ilmiah
tentang munology im- malaria dan penelitian lapangan terapan dalam malaria, TDR /
IMMAL-lapangan-MAL / VAC / 85.3.
PERTANYAAN DAN JAWABAN:
1 Pertanyaan: Apakah anda menggunakan produksi sendiri dari monoklonal Ab anti-
sporozoit (Namru 2 laboratorium) atau ELISA kit tersedia secara komersial untuk pekerjaan
Anda? Jawaban: Namru-2 tidak menghasilkan yang sporozoite Ag sendiri, semua berasal dari
WRAIR - semua dalam "diteliti" kebijakan. ELISA kit harus menjadi tersedia dari WHO
suatu saat nanti. Banyak keterbatasan perlu bekerja.
2 Pertanyaan: - Mengenai membuat lebih ELISA Anda "lapangan yang berlaku" bisa Anda
gunakan prosedur pelestarian sederhana untuk buffer seperti menambahkan NaN3 (natrium
azida) untuk buffer? - Apakah Anda dianggap sebagai spacer ditambahkan ke mAb capture
untuk meningkatkan sensitivitas (batas deteksi) dari BLDSA? Jawaban: - Saya harus merujuk
pertanyaan itu kepada seseorang, Bob Winz, (WRAIR) yang memiliki dan bertanggung
jawab untuk pengembangan dan perbaikan dari tes saat ini. - Batas Deteksi (yaitu ZS
sporozoit per 50 ul triturate) adalah saya merasa lebih dari cukup sensitif. Ambang batas
deteksi N 100 sporozoite per nyamuk ketika nyamuk infektif alami. Biasanya memiliki jauh
melebihi dari angka yang saya percaya membuat tes diterima.
Bul. Penelit. Kesehat. 17 (2) 1989