Anda di halaman 1dari 4

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BIOLARVISIDA DARI SIRSAK ( Annona muricata LINN.

) LARUTAN EXTRACT
DAUN TERHADAP LARVA NYAMUK (Aedes aegypti LINN.)

ABSTRAK
Untuk mengujii senyawa biolarvicidal dan potensi
larvisidadari metil ester asam hexadeconic yang diisolasi
dari Annona muricata Linn. (A. muricata) terhadap jentik
nyamuk Aedes aegypti Linn. (A. aegypti). Biolarvicidal
senyawa metil ester asam hexadeconic ditentukan dengan
menggunakan GC - MS , sedangkan bioassay larvisida
dilakukan dengan konsentrasi yang berbeda dari ekstrak air
daun A. muricata terhadap larva A. aegypti sesuai dengan
protokol standar. Isolasi dan identifikasi senyawa bioaktif
larvicide dari daun sirsak ( A. muricata ) terhadap larva A.
aegypti , penyebab demam berdarah telah dilakukan. Air (
air hujan ) ekstrak daun sirsak adalah agen larvicide aktif
dengan konsentrasi mematikan ( LC 50 ) bervariasi dengan
persentase konsentrasi dan waktu . LC 50 untuk 2,5 % = 3.0
jam , 2,0% = 3.30 jam , 1,5 % = 3.15 jam , 1,0 % = 4,0 jam
dan masing-masing 0,5 % = 5.0 jam. Jumlah kematian
terjadi pada 6.0 jam untuk konsentrasi 2,5 % , 6.30 jam
untuk 2.0 % , 7.30 jam untuk 1,5% dan 1,0 % , 8,0 jam
untuk konsentrasi 0,5 % . Penghapusan exoskeleton
(properti dechitinising ) terjadi antara 1,0 jam sampai 2,0
jam untuk konsentrasi tersebut diuji untuk pekerjaan ini .
Pemisahan oleh TLC, analisis dan identifikasi dengan GC -
MS menunjukkan puncak dari 14 senyawa , di mana ada tiga
senyawa yang dominan dengan waktu retensi relatif dekat
dan memiliki persentase kelimpahan yang cukup besar, yang
diidentifikasi sebagai metil ester asam heksadekanoat , metil
ester asam 9-octadecenoic (z) , dan 5-metil-2-hexanon
oxime dengan senyawa yang paling dominan yaitu metil
ester asam hexadecamic yang memiliki kelimpahan 44.11
%. Hasilnya membenarkan potensi larvisida senyawa
bioaktif dari ekstrak air daun A. muricata dan kebutuhan
untuk memasukkan mereka dalam manajemen vektor dan
kontrol .

Kata kunci : Sirsak , biolarvicide , Annona muricata , Aedes
aegypti , kematian .

PENDAHULUAN
Nyamuk bertanggung jawab untuk penyakit lebih banyak
dari kelompok lain dari Arthropoda. Untuk mengontrol
populasi nyamuk berbagai pestisida telah digunakan secara
luas. Laporan terbaru menyatakan bahwa nyamuk telah
menjadi genetik dan fisiologis resisten terhadap berbagai
insektisida konvensional [1]. Faktor-faktor ini telah
menciptakan kebutuhan lingkungan yang aman,
biodegradable dan sasaran insektisida spesifik terhadap
nyamuk . Pencarian untuk senyawa tersebut telah diarahkan
secara ekstensif pada kelompok tumbuhan [ 2,3 ] .
aegypti adalah vektor beberapa penyakit serius pada
manusia, seperti malaria, ensefalitis, demam kuning, demam
berdarah , demam berdarah dengue , filariasis dan arbovirus
[4]. Demam Berdarah Dengue ( DBD ) tidak memiliki obat
atau belum ada vaksin [5]. Salah satu cara untuk mencegah
penyebaran DBD adalah dengan pencegahan infeksi virus
dengue, dengan mengendalikan dan memberantas vektor
(nyamuk) untuk memutuskan transmisi penyakit [6].
Metode yang dikembangkan oleh WHO untuk memerangi
demam berdarah adalah sama dengan metode yang
digunakan untuk memerangi malaria, yaitu untuk membasmi
sumber penularan , yaitu larva nyamuk [7]. Pemberantasan
larva adalah strategi kunci program pengendalian vektor di
seluruh dunia [8]. Aegypti A. bertelur di air jernih yang tidak
langsung dipengaruhi oleh tanah dan lebih memilih tempat
di dalam ruangan daripada di luar ruangan karena suhu
dalam ruangan relatif stabil. Seekor nyamuk dapat bertelur
4-5 kali selama hidupnya dengan rata-rata jumlah telur
berkisar 10-100 telur dalam bertelur tunggal. Dengan
demikian jumlah total telur yang dihasilkan oleh nyamuk
betina tunggal antara 300-700 telur [9]. Pengendalian fisik
dilakukan dengan pengelolaan lingkungan hidup untuk
mencegah nyamuk berkembang biak. Pengendalian biologis
dilakukan dengan menggunakan predator dan organisme
patogen, sedangkan kontrol kimia dilakukan dengan
menerapkan insektisida sintetis untuk membunuh nyamuk.
Kontrol genetik dilakukan dengan menyebarkan jantan steril
ke dalam ekosistem, dan mengintegrasikan kontrol
dilakukan dengan menggabungkan berbagai teknik kontrol
yang ada [10]. Kontrol nyamuk yang paling banyak
digunakan adalah kontrol kimia. Alasan pemilihan ini adalah
hasil yang cepat dari kontrol ini. Namun, pengendalian
kimia dengan menggunakan insektisida sintetis benar-benar
menyebabkan efek samping yang merugikan, seperti
nyamuk bisa menjadi kebal, manusia dan ternak bisa
keracunan, kontaminasi sayuran dan kebun buah, serta
pencemaran lingkungan [11]. Perkembangan insektisida
baru yang lebih ramah lingkungan dan tidak menimbulkan
bahaya yang perlu dilakukan. Penggunaan bioinsektisida
tampak menjanjikan. Bioinsektisida atau insektisida biologi
adalah insektisida yang berasal dari bahan tanaman yang
mengandung bahan kimia (bioaktif) yang beracun bagi
serangga tetapi mudah terurai di alam. Jadi, tidak akan
mencemari lingkungan dan relatif aman bagi manusia.
Selain itu, insektisida nabati juga selektif [12]. Penelitian
senyawa bioaktif dalam keluarga Annonaceae berkembang
pesat. Senyawa acetogenin dari jenis Annonaceae
dilaporkan memiliki toksisitas yang efektif terhadap
serangga dari beberapa perintah seperti Lepidoptera,
Coleoptera, Homoptera dan Diptera [13,14]. Penelitian lain
melaporkan bahwa keluarga Annonaceae mengandung
acetogenin yang larvisida. Acetogenin juga bertindak
sebagai insektisida, acaricide, antiparasit dan bakterisida
[15,16]. A. muricata Linn. (Sirsak) ekstrak biji mengandung
annonacin, bullatacin, annonin VI, goniothalamin dan
sylvaticum bertindak sebagai insektisida [17,18]. Hasil uji
pendahuluan menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji sirsak
merupakan agen aktif larvicide. Uji fitokimia menunjukkan
bahwa ekstrak etanol biji sirsak mengandung senyawa
metabolit sekunder kelompok saponin, alkaloid dan
triterpenoid. Senyawa ini adalah senyawa kimia pertahanan
tanaman yang dihasilkan di jaringan tanaman. Mereka
beracun dan juga dapat bertindak sebagai racun pada perut
dan pernapasan [19]. Penelitian ini akan membahas kerja
dalam mengisolasi dan mengidentifikasi agen bioaktif dari
larvicide dari daun sirsak ekstrak air terhadap nyamuk
demam berdarah (A. aegypti) sebagai bioindikator larva.

BAHAN DAN METODE
Pengambilan dan identifikasi bahan tanaman : Daun
segar A. muricata Linn, dikumpulkan dari taman pribadi di
Tiruchirappalli, Tamil Nadu (Gambar a). Identitas
taksonomi tanaman ini dikonfirmasi oleh flora dari
Presidensi Madras [ 20 ]. Bahan daun dicuci di bawah air
keran , udara kering di tempat teduh dan kemudian homogen
menjadi bubuk halus dan disimpan di udara botol ketat steril
untuk pekerjaan eksperimental. Isolasi dan identifikasi
senyawa bioaktif - kromatografi lapis tipis (TLC): Pelat kaca
(4 cm x12 cm) yang digunakan di mana 30 gram silika gel
dicampur dengan 60 ml air suling hingga homogen dan
dilapiskan pada pelat kaca dengan ketebalan 0,25 cm dan
dikeringkan selama 1 jam pada suhu 110
o
C[21].

Persiapan dari ektrak daun untuk senyawa bioaktif: The
Serbuk kring daun (500 mg) dari A. muricata yang dicampur
dengan 5.0 ml kloroform dan diletakkan pada sebuah
tempat, dikeringkan pada suhu ruang. 1 ml kloroform
dimasukkan ke sample kering dan ditotolkan pada pelat
TLC. pelat TLC disimpan dalam campuran eluent dengan
polaritas yang berbeda untuk memisahkan senyawa kimia
bioaktif di dalam ekstrak kloroform telah diuji. Eluen yang
digunakan adalah kloroform:n-hexane (8:2), chloroform:etil
asetat (8:2), chloroform:aseton (8:2), n-hexane:aseton (9:1),
dan chloroform:aseton (9:1). Sampel ditotolkan pada pelat
TLC yang dilakukan dengan menggunakan mikropipet yang
mana memiliki totolan berdiameter 0.5 mm.
Kloroform:aseton (9:1) adalah eluen terbaik sejak ia dapat
mmisahkan empat senyawa yang terkandung dalam ekstrak
daun [11].

Analisis Gas chromatography and mass spectroscopy (GC-
MS): Analisis GC-MS dilakukan dengan menggunakan GC
Clarus 500 Perkin Elmer peralatan dilengkapi dengan
sebuah detector ionisasi nyala dan injektor MS perpindahan
suhu dari 230C, leburan silica kolom kapiler Elite-5 MS (5%
Difenil / 95% Dimetil polisiloxan), 300.25 m df, ketebalan
film, Gas pembawa Helium digunakan pada laju alir 28
cm/sec. 1 ml extrak dicampur dengan metanol (80%)
disuntikkan pada tingkat split 10:1. Identifikasi senyawa ini
dilakukan dengan membandingkan GC retensi relatif dan
spektrum massa kepada mereka zat otentik dianalisis dalam
kondisi yang sama, berdasarkan Retensi Waktu mereka (RT)
dan dibandingkan dengan referensi senyawa (Tabel 2).
Persiapan ekstrak daun untuk aktivitas biologis: 500 mg
bubuk daun kering dicampur dengan 100 ml air hujan
merupakan konsentrasi 0,5%, sedangkan 1,0 g, 1,5 g, 2,0 g
dan 2,5 g merupakan 1,0% , 1,5% , 2,0% dan 2,5%
konsentrasi ekstrak daun digunakan untuk pekerjaan
penelitian. Organisme kontrol yang diselenggarakan dalam
air hujan (Gambar b). Uji Toksisitas: Berbagai konsentrasi
ekstrak daun A. muricata diuji aktivitas biologisnya terhadap
larva A. aegypti di cawan petri. Setiap konsentrasi (20 ml)
mengandung 20 larva termasuk kontrol. Pengamatan
dilakukan selama 24 jam pada kematian larva. LC 50 dan
mortalitas total untuk masing-masing konsentrasi dicatat.

HASIL
Efek larvisida dari A. muricata daun berair (air hujan)
ekstrak LC50 dan kematian total dalam hal waktu disajikan
dalam Tabel 1.

Konsentrasi maksimum 2,5 % diuji dalam pekerjaan ini
menunjukkan LC50 di 3,0 jam , 2,0% pada 3.30 h , 1,5 % di
3.15 jam , 1,0% pada 4,0 jam , 0,5 % pada 5.0 jam (Gambar-
2d-jam) , organisme hidup pada kontrol 24.0 jam dan
selanjutnya untuk semua perkembangan yang tahapan di
hari-hari berikutnya (Angka 1b,c) . Hal ini untuk dicatat
bahwa dalam semua konsentrasi ada Kematian 100 % terjadi
sehubungan dengan waktu 6.0 jam menjadi 8,0 jam (Angka-
1 jam, k). Pengamatan jumlah larva diamati pada 1,0 jam
(Gambar-1i).

PEMBAHASAN
Larvisida (nyamuk) khasiat dilaporkan oleh banyak pekerja
[22-26]. Dalam semua laporan ini organik pelarut yang
digunakan dalam ekstrak tumbuhan. Dalam hal ini
melaporkan habitat alami A. aegypti air hujan sumber saja
diuji dengan ekstrak daun A. muricata. Analisis GC - MS
mengungkapkan adanya utama ester bioaktif senyawa metil
Asam hexadoconic ( Gambar 2 ) .
- Gambar 1 . Efek larvisida sirsak ( Annona muricata Linn )
daun ext berair ekstrak nyamuk ( Aedes aegypti ) larva ( a-
Annona muricata Linn . Ranting , b - larva Aedes aegypti
dalam air hujan , c - Control ( air hujan ) , dA . berair
muricata ( air hujan ) ekstrak daun 0,5 % , e - konsentrasi
1,0% , f - 1.5 % , g - 2.0 % , h - 2.5 , i-Dechitinising milik
larva ( 1 jam ) , j - Morfologi larva mati ( 3 jam ) dan k
Morfologi larva mati ( 6 jam ).



Total kematian larva A. aegypti antara 6,0-8,0 jam mungkin
disebabkan karena bioaktif ini majemuk. Karya ini akan
membantu untuk menggabungkan senyawa bioaktif ini
dalam vektor manajemen dan kontrol .

UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis (MNA) ingin mengucapkan terima kasih DST-FIST,
Pemerintah India, New Delhi untuk menyediakan fasilitas
infrastruktur kepada Departemen Pertanian, Kampus
Nasional, Tiruchirappalli, Tamil Nadu. Penulis juga
mengungkapkan terima kasih kepada Padmavibhushan Dr
V. Krishnamurthy, Presiden, Sri. K. Ragunathan, Sekretaris
dan Dr K. Anbarasu, Kepala Sekolah, Kampus Nasional,
Tiruchirappalli atas segala dukungan dan dorongan yang
diberikan kepada PG dan Penelitian Departemen
Bioteknologi untuk membawa atas pekerjaan penelitian .

REFRENSI

1. Sukumar K, Perich MJ, Boobar LR. Botanical
derivatives in mosquito control: A review. J Am
Mosq Control Assoc. 1991; 7: 210-237.
2. Srinivasa RM, Sunil M, Suryanarayana MV,
Venkateshwarlu Y, Srinivasalu M. Effect of
lamellarin alkaloid mixture obtained from marine
ascidian, Didemrum obscurum and its synergistic
action with Beanveria bassiana on Culex
quinquefasciatus larvae. Nat. Prod. Rad. 2005; 4:
460-465.
3. Thomas TG, Raghavendra K, Saxena Shivlal VK.
Mosquito larvicidal properties of latex from
unripe fruits of Carica papaya (Caricaceae). J
Commun Dis. 2004; 36: 290-292.
4. Ndione RD, Faye O, Ndiaye M, Dieyl A, Afoutou
JM. Toxic effects of neem products (Azadirachta
indica A. Juss) on Aedes aegypti Linnaeus 1762
larvae. Affric J Biotechnol. 2007; 6: 2846-2854.
5. Daniel. When larvae and mosquitoes are
resistant to insecticides. Farmacia. 7: 44.
6. WHO. Prevention and control of dengue and
dengue hemorrhagic fever. Jakarta: Penebit Buku
Kedokteran (EGC). 2005.
7. Manuel FB, Douglas KA. Human medical agent
from plant. Washington DC, American Chemical
Society. 1992.
8. Okumu FO, Knols BJG, Fillinger U. Larvacidal
effect of a neem (Azadirachta indica) oil
formulation on the malaria vector Anopheles
gambiae. Malaria J. 2007; 6: 63.
9. Lee HL. Breeding habitats and factors affecting
breeding of Aedes larvae in urban town of
Peninsular, Malaysia. J Biosci. 1990; 1: 107-112.
10. Hadi UK, Soviana S. Ektoparasit: Pengenalan,
Diagnosis dan Pengendaliannya. Bogor: IPB.
2000.
11. Komansilan A, Abadi AL, Yanuwiadi B, Kaligis
DA. Isolation and identification of biolarvicide
from soursop (Annona muricata Linn) seeds to
mosquito (Aedes aegypti) larvae. International
Journal of Engineering and Technology. 2012;
12: 28-32.
12. Moehammade N. Potensi biolarvasida ekstrak
herba Ageratum conyzoides Linn. dan daun
Saccopetalum horsfieldii Benn. terhadap larva
nyamuk Aedes aegypty. Jurnal Berkala
Penelitian Hayati (in Indonesian). 2005; 10: 1-4.
13. Hui YH, Rupprecht JK, Anderson JE, Wood
KV, McLanghlin. Bullatalicinone, a new potent
bioactive acetogenin and squamocin from
Annona bullata (Annonaceae). Phytother Res.
1991; 5: 124-129.
14. Li XH, Hui YH, Rupprecht JK, Lin YM, Wood
KV, Smith DL, Chang CJ, McLaughin JL.
Bullatacin, Bullatacinone, Sqnamone, a new
bioactive Acetogenin from the bark of Annona
squamosa. J Natur Prod. 1991; 53: 81-86.
15. Alali FQ, Lin XX, McLanghlin JL.
Annonaceous acetogenins: recent progress. J
Nat Prod. 1999; 62: 504-540.
16. Abubacker MN, Deepalakshmi T. Antioxidant
and antibacterial activity of (Annona muricata L.)
leaf aqueous extract. International Journal of
Plant Sciences. 2012; 7: 301-306.
17. Wurangian FL. Penentuan kadar senyawa
Annonasin pada ekstrak biji sirsak (Annona
muricata L.) untuk formula pestisida secare
kromatograft cair kinerja tinggi (KCKT). Master
thesis, Universitas Padjadjaran, Bandung, (in
Indonesian). 2001.
18. Rupprecht JK, Hui YH, Mc Laughlin.
Annonaceous acetogenins: A review. J Nat Prod.
1990; 53: 237-278.
19. Yeni. Efektivitas ekstrak daun Babandotan
(Ageratum conyzoides Linn.) terhadap larva
Anopheles sundacius Linn. di Desa Babakan
Pangandaran Jawa Barat. Jurusan Biologi
FMIPA, Universitas Lampung, Bandar Lampung,
Laporan Kerja Praktik, (in Indonesian). 2008.
20. Gamble JS. Flora of the Presidency of Madras.
Botanical Survey of India, Calcutta (WB), India.
1967.
21. Bothast RJ, Hesseltine CW. Bright greenish
yellow fluorescence and aflatoxin in agricultural
commodities. Appl Microbiol. 1975; 30: 337-338.
22. Fayemiwo KA, Adeleke MA, Okoro OP,
Awojide SH, Awoniyi IO. Larvicidal
efficacies and chemical composition of essential oils
of Pinus sylvestries and Syzygium aromaticum
against mosquitoes. Asian Pacific Journal of
Tropical Biomedicine. 2014; 4: 30-34,
23. Periyanayagam K, Sundara Saravanan K, Ismail
M. Dechitinising property of Caesalpinia bonduc
(Linn.) Roxb. against Culex quinquefasciatus.
Natural Product Radiance. 2007; 6: 290-292.
24. Mariath IR, Heloina de S Falco, Barbosa-Filho
JM, Layanna CF de Sousa, Anna Claudia de A
Tomaz, Batista LM, Margareth de Fatima FM
Oiniz, Athayde-Filho PF, Tavares JF, Silva MS,
Emidio Vasconcelos L da Chnha. Plants of the
American continent with antimalarial activity.
Brazilian Journal of Pharmacognosy. 2009; 19:
158-192.
25. Promsiri S, Naksathit A, Kruatachue M, Thavara
U. Evaluations of larvicidal activity of medicinal
plant extracts to Aedes aegypti (Diptera:
Culicidae) and other effects on a non-target fish.
Insect Science. 2006; 13: 179-188.
26. Rajeshwar Y and Lalitha R. Preliminary
phytochemical screening and in vitro
anthelmintic effects of Acmella paniculata plant
extracts. 2013, Biolife, 1(3); 106-112.

Konflik dari Pernyataan yang menarik: We
declare that we have no conflict of interest.