Lignin blocker dan menggunakan daripadanya

US 8580541 B2
ABSTRAK
Diungkapkan adalah metode untuk mengkonversi selulosa dalam biomassa lignoselulosa.
Metode ini memberikan untuk polipeptida lignin-blocking dan / atau perlakuan protein
padatan lignin tinggi. Treatment meningkatkan ketersediaan selulase dalam konversi selulosa
dan memungkinkan untuk penentuan kondisi pretreatment dioptimalkan. Selain itu, hasil
etanol dari proses Simultaneous Sakarifikasi dan Fermentasi ditingkatkan 5-25% dengan
treatment dengan polipeptida lignin-blocking dan / atau protein.
DESKRIPSI
REFERENSI SILANG UNTUK APLIKASI TERKAIT
Aplikasi ini adalah Bagian Kelanjutan -In- AS aplikasi paten Ser . 11/ 229, 817 , diajukan 19
September 2005 , sekarang US Pat . No 7.875.444 yang merupakan Kelanjutan -In- Bagian
dari aplikasi Ser . No 10/391 , 740 , diajukan 19 Maret 2003 sekarang US Pat . No 7604967 ,
dan PCT/US2004/008730 , diajukan 19 Maret 2004 . Isi semua aplikasi yang disebutkan di
atas tergabung disini sebagai referensi ke dalam aplikasi ini .

HAK PEMERINTAH
Pemerintah Amerika Serikat mungkin memiliki hak-hak tertentu dalam penemuan ini sebagai
penelitian yang relevan dengan pengembangan didanai oleh United States Department of
Energy ( DOE ) nomor kontrak DE FC36 - 00G0010589 dan DE FC36 - 01G011075 dan oleh
Institut Nasional Standar dan Teknologi ( NIST ) kontrak nomor 60NANB1D0064 .

LATAR BELAKANG
I. Bidang Teknik Penemuan
Pengungkapan ini berkaitan dengan bidang pengolahan biomassa untuk memproduksi
bahan bakar , bahan kimia dan produk lain yang berguna dan , lebih khusus , untuk
saccharifying bahan biomassa lignoselulosa untuk menghasilkan gula untuk konversi menjadi
etanol dan produk lainnya dengan meningkatkan glikosidase ( misalnya , selulase dan
xilanase ) efikasi melalui selektif mengikat dan / atau pemblokiran komponen lignin .
Penggunaan mencuci protein meningkatkan efisiensi biokonversi dengan meningkatkan
ketersediaan selulase dan enzim lain untuk selulosa .


II . Latar Belakang Penemuan Terkait
Biomassa selulosa berguna untuk menghasilkan etanol . Bahan-bahan tersebut secara
khusus dikenal sebagai bahan lignoselulosa , atau biomassa , ( misalnya, kayu dan limbah
padat ) , telah digunakan sebagai bahan sumber untuk menghasilkan karbohidrat , yang pada
gilirannya dapat digunakan untuk memproduksi etanol , serta produk lainnya .
Biomassa lignoselulosa adalah struktur yang kompleks dari serat selulosa yang
terbungkus dalam lignin dan hemiselulosa selubung . Rasio tiga komponen bervariasi
tergantung pada jenis biomassa . Rasio khas adalah sebagai berikut :

TABEL 1
JAGUNG JAGUNG
Kayu lunak tongkol RDF * STOVER
SELULOSA 42 % 40 % 52 % 37 %
Hemiselulosa 25 % 36 % 26 % 22 %
LIGNIN 28 % 13 % 20 % 17 %
LAIN 5 % 11 % 2 % 24 %
* RDF - Refuse Derived Fuel Dari Municipal Sistem Limbah
Tabel 1 adalah hanya perkiraan . Misalnya, kayu berbeda dalam komposisi ,
tergantung pada jenis tertentu dari kayu, di mana kayu lunak ( gymnosperma ) umumnya
memiliki lebih glucomannans dan kurang glucuronoxylans daripada kayu keras .
Selulosa merupakan polimer dari monomer D - glukosa dengan - 1-4 - kaitan antara
tiap monomer membentuk rantai sekitar 500 sampai 10.000 unit D - glukosa . Hemiselulosa
merupakan polimer dari gula , terutama D - xylose dengan pentosa lain dan beberapa heksosa
, juga dengan - 1-4 - hubungan . Lignin adalah polimer acak polifenol kompleks . Biomassa
lignoselulosa merupakan substrat murah dan tersedia untuk persiapan gula . Gula ini dapat
digunakan sendiri , difermentasi untuk menghasilkan alkohol dan bahan kimia industri ,
kimia atau dikonversi ke senyawa lain .
Etanol adalah salah satu dari alkohol yang dapat diproduksi menggunakan karbohidrat
berasal dari biomassa lignoselulosa , dan memiliki sejumlah kegunaan industri dan bahan
bakar . Dari khususnya hal yang penting adalah penggunaan etanol sebagai aditif bensin yang
meningkatkan oktan , mengurangi polusi , dan sebagian menggantikan bensin dalam
campuran bahan bakar. Formulasi bensin etanol dicampur - produk komersial terkenal yang
biasa disebut " gasohol " . Telah diusulkan untuk menghilangkan bensin hampir sepenuhnya
dari bahan bakar dan membakar ethanol dalam konsentrasi tinggi .
Konversi biomassa selulosa menjadi bahan bakar terbarukan dan bahan kimia sering
melibatkan kimia dan / atau perlakuan enzimatik dari biomassa dengan selulase atau enzim
lainnya . Secara khusus, enzim selulase menghidrolisis selulosa untuk D - glukosa , yang
merupakan gula sederhana . Dalam kadar lignin tinggi biomassa lignoselulosa , dosis tinggi
dari selulase yang diperlukan untuk menurunkan selulosa dengan hasil yang tinggi karena
lignin mengikat secara istimewa dengan selulase , sehingga mengurangi akses selulase
dengan selulosa . Akibatnya, saat memproses lignin bahan biomassa konten yang tinggi ,
kurang selulase tersedia untuk mendegradasi selulosa karena lapisan lignin dari serat selulosa
scavenges selulase . Dengan demikian , efektivitas proses untuk mencerna selulosa
berkurang.
Biokonversi biomassa selulosa menjadi etanol telah dipelajari sejak 1940-an . Namun,
proses selulosa - to- ethanol belum ekonomis dibandingkan dengan memproduksi produk-
produk minyak bumi oleh teknologi yang ada . Hidrolisis enzimatik adalah proses yang
cukup lambat. Biaya selulase yang tinggi , dan jumlah yang diperlukan selulase juga tinggi ,
yang meningkatkan biaya pengolahan . Pengurangan jumlah selulase yang diperlukan untuk
mendapatkan hasil yang memuaskan gula dapat memiliki dampak yang signifikan terhadap
proses ekonomi . Oleh karena itu, meningkatkan efisiensi penggunaan enzim merupakan
kebutuhan utama dalam proses biokonversi .
Mekanisme hidrolisis dan hubungan antara struktur dan fungsi berbagai selulase telah
dipelajari secara ekstensif . Beberapa faktor yang diduga mempengaruhi hidrolisis enzimatik
selulosa . Faktor-faktor ini meliputi kadar lignin , kadar hemiselulosa, isi asetil , luas
permukaan selulosa dan kristalinitas selulosa . Hal ini umumnya dipahami bahwa hadir lignin
dalam substrat yang kompleks , seperti kayu uap meledak , terutama kayu lunak , memiliki
efek negatif pada aktivitas selulase . Alasan yang tepat yang kurang dipahami karena
kompleksitas biomassa adalah sedemikian rupa sehingga mengurangi salah satu hambatan
untuk pencernaan dapat meningkatkan atau menyamarkan pentingnya orang lain . Misalnya,
hidrolisis selulosa telah ditunjukkan untuk meningkatkan dengan meningkatnya penghapusan
lignin , meskipun perbedaan dilaporkan dalam derajat penghapusan lignin yang diperlukan ,
serta bentuk fisik dari lignin .
Berbagai faktor dapat dikaitkan dengan efek buruk dari lignin pada sakarifikasi .
Rasio syringyl bagian untuk guaiacyl bagian dalam lignin dapat mempengaruhi sakarifikasi .
Meskipun peran yang tepat dari lignin dalam membatasi hidrolisis telah sulit untuk
menentukan , satu batasan yang signifikan mungkin adalah efek dari lignin pada serat
pembengkakan dan pengaruh yang dihasilkan pada aksesibilitas selulosa . Penghapusan
lignin meningkatkan aksesibilitas selulosa dan memungkinkan aktivitas selulase lagi. Hal ini
bermasalah di beberapa kompleks lignin secara fisik dan kimia tahan terhadap serangan
enzimatik . Sementara beberapa komponen lignin yang larut dalam air , yang lain tidak larut
dan dapat memicu dari solusi . Lignin kental memiliki kemampuan untuk menyerap protein
dari larutan air . Removal Lignin dapat membuka luas permukaan lebih untuk serangan
enzimatik dan mengurangi jumlah selulase yang non - spesifik teradsorpsi pada substrat
lignoselulosa . Studi yang melibatkan asam pretreated laporan kayu lunak korelasi positif
antara kecernaan dan tingkat delignifikasi , tetapi hasilnya rumit oleh adanya hemiselulosa .
Beberapa substrat membutuhkan suhu yang lebih tinggi untuk menghilangkan hemiselulosa
menjadi efektif ; menunjukkan hemiselulosa yang bukan satu-satunya faktor yang
mempengaruhi kecernaan tambahan dan bukti lain tidak mendukung peran untuk
hemiselulosa dalam mengubah kecernaan selulosa .
Meskipun kristalinitas selulosa umumnya beralasan untuk menghambat enzim , harga
lambat dengan meningkatnya kristalinitas dalam beberapa studi , namun peningkatan dalam
penelitian lain . Derajat kristalinitas mungkin tidak secara signifikan berubah dari waktu
hidrolisis diperpanjang . Kristalinitas tampaknya kurang penting daripada penghapusan lignin
dan tingkat dampak sakarifikasi lebih dari hasil . Beberapa penelitian telah difokuskan pada
menjelaskan curna selulosa oleh aksesibilitas selulosa untuk enzim . Korelasi telah
dikembangkan untuk berhubungan tarif untuk volume pori dan luas permukaan diakses .
Namun, bentuk kompleks selulase dapat menciptakan kesulitan dalam menembus pori-pori
tersebut , dan kekhawatiran telah dikemukakan tentang perubahan substrat selama
pengukuran tersebut . Selain itu , sebagian besar teknik pengukuran mengukur luas
permukaan kotor dan mungkin termasuk adsorpsi non - spesifik , misalnya , ke lignin .
Selulase sering digunakan sebagai campuran enzim yang memiliki aktivitas yang
berbeda , dan struktur enzim berbeda antara mikroorganisme yang mengekspresikan enzim
dari keluarga tertentu . Sementara mekanisme hidrolisis dan hubungan antara struktur dan
fungsi berbagai selulase telah dipelajari secara ekstensif , banyak rincian aktivitas enzimatik
masih kurang dipahami . Enzimatik hidrolisis substrat selulosa sangat dipengaruhi oleh
inhibisi produk akhir dan fitur enzim . Low aktivitas selulase tertentu pada selulosa
merupakan faktor penting yang membatasi efektivitas hidrolisis . Salah satu cara untuk
menghindari aktivitas spesifik yang rendah ini adalah untuk mendaur ulang dan
menggunakan kembali enzim . Namun, selulase adsorpsi non - produktif memainkan peran
penting dalam pengembangan cara-cara untuk menggunakan kembali enzim dan
mempengaruhi efisiensi daur ulang .
Selain kompleksitas berbagai jenis selulase , aktivitas di substrat juga rumit oleh
karakteristik substrat . Karena resistensi dari struktur yang kompleks dan komposisi biomassa
selulosa alami , substrat lignoselulosa harus pra-perawatan untuk menjadikannya sebagai
rentan mungkin untuk aksi enzim . Banyak metode pretreatment telah dikembangkan .
Sebagai contoh, peningkatan aksesibilitas substrat lignoselulosa dapat dicapai dengan pelarut
hemiselulosa dalam kondisi asam yang keras .
Adsorpsi selulase pada substrat lignoselulosa mengandung kandungan tinggi dari
bahan alami belum diteliti secara luas . Biasanya , substrat lignoselulosa mengandung konten
yang jauh lebih tinggi dibandingkan dengan lignin "model " substrat selulosa . Lignin dapat
menghambat hidrolisis enzimatik bahan lignoselulosa . Selulase tidak hanya terserap ke
bagian selulosa substrat , tetapi juga terserap untuk lignin . Lignin tidak hanya melindungi
selulosa tetapi juga bertindak sebagai adsorben kompetitif . Namun, lignin tidak muncul
untuk membatasi tingkat hidrolisis gugus karbohidrat jika selulase yang cukup hadir . Enzim
selulolitik mengikat kuat ke lignin . Ketika profil adsorpsi dibandingkan , protein enzim lebih
banyak dikaitkan dengan residu dihidrolisis bahan lignoselulosa dibandingkan model selulosa
. Misalnya, - glucosidase memiliki afinitas tinggi untuk berbagai fraksi lignin , sementara
itu tidak mengikat polisakarida .
Umumnya , lignin mungkin memainkan peran penting dalam hidrolisis enzimatik
bahan lignoselulosa ( Sutcliffe & Saddler , Biotechnol . Bioeng . Gejala -8 . , 17:749-62 (
1986) ;) . Telah ditunjukkan bahwa enzim tidak hanya terserap ke bagian selulosa substrat ,
tetapi juga berikatan kuat dengan lignin ( Boussaid et al , Optimasi pemulihan gula
hemiselulosa dari kayu lunak uap meledak , Prosiding Konferensi Biomassa of the Americas ,
3rd , Montreal , 24-29 Agustus 1997 ) : Chernoglazov et . al . , enzim MicroB . . Technol ,
10:503-507 ( 1988) ; Deshpande , M. V. dan K.-E. Eriksson , " pemanfaatan kembali enzim
sakarifikasi untuk bahan lignoselulosa , " Enzim dan Microbiol . Teknologi , 6 : 338-340 , (
1984) ; Sutcliffe & Saddler , Biotechnol . Bioeng . Gejala . 8th , 17:749-62 ( 1986) ) .
Khususnya , - glucosidase tampaknya memiliki afinitas tinggi untuk berbagai fraksi lignin
meskipun tidak mengikat polisakarida ( Sutcliffe & Saddler , Bioeng Biotechnol . Gejala . 8. ,
17:749-62 ( 1986) . The inaktivasi enzim selulase oleh lignin telah dilaporkan ( Avgerinos ,
GC dan DIC Wang , " delignifikasi pelarut selektif untuk peningkatan fermentasi , "
Bioteknologi dan Bioengineering , 25 ( 1 ) : . 67-83 , ( 1983) ; Excoffier , G. , B. Toussaint ,
et al " sakarifikasi uap Meledak - Poplar Kayu " Bioteknologi dan Bioengineering , 38 ( 11 ) :
. . . . . 1308-1317 , ( 1991) ; Sutcliffe & Saddler , gejala 8th Biotechnol Bioeng , 17:749-62 (
1986) tampaknya berbagai jenis lignin dan bentuk lignin mungkin telah mempengaruhi
adsorpsi komponen selulase ( Chernoglazov et al , Enzim MicroB Technol , 10:503-507 (
1988) ; Sutcliffe & Saddler , Biotechnol Bioeng gejala 8th , 17 . . . . . . : 749-62 ( 1986) .
Sebelumnya bekerja pada hidrolisis selulosa telah menunjukkan bahwa hidrolisis substrat
pra-perawatan ditingkatkan ketika protein hadir . Sebagai contoh, dilaporkan bahwa blok
peroksidase lignin lignin mengikat dalam biomassa untuk meningkatkan hasil etanol dari SSF
( WO 94/29474 ) . Itu hasil penambahan BSA di tingkat yang sama sebagai hasil hidrolisis
meningkatkan penambahan surfaktan juga ditunjukkan oleh Eriksson ( Eriksson , T. , J.
Borjesson , et al . " Mekanisme efek surfaktan dalam hidrolisis enzimatik lignoselulosa , "
Enzim dan Microbiol Teknologi . , 31 ( 3 ) : 353-364 , ( 2002) ) . Hal ini kemungkinan besar
bahwa lignin menghalangi efek dari protein di hidrolisis lignoselulosa dijelaskan oleh
kemampuan protein untuk memblokir situs adsorpsi non - spesifik dari fraksi non - selulosa
substrat dan meningkatkan jumlah selulase yang tersedia untuk menyerap pada fraksi selulosa
( Eriksson et al 2002; Kawamoto , H. , F. Nakatsubo , et al " Protein - menyerap kapasitas
sampel lignin , " Mokuzai Gakkaishi , 38 ( 1 ) : . . 81-4 , ( 1992); Zahedifar , M. , . FB Castro
, et al " . Pengaruh lignin hidrolitik pada pembentukan kompleks protein - lignin dan
degradasi protein oleh mikroba rumen " Animal Feed Science and Technology , 95 ( 1-2 ) :
83-92 , ( 2002) ) . Tentu saja, mekanisme interaksi protein dengan lignin untuk meningkatkan
kecernaan enzimatik adalah obyek dari penelitian intensif dan spekulasi .
Lignin memainkan peran penting dalam hidrolisis enzimatik bahan lignoselulosa ,
seperti yang dilaporkan dalam Sutcliffe & Saddler , Biotechnol . Bioeng . Gejala . 8th ,
17:749-62 ( 1986) . Profil adsorpsi perbandingan menunjukkan bahwa lebih banyak enzim
dipertahankan dengan residu dihidrolisis , dibandingkan dengan model selulosa murni ,
seperti yang dilaporkan dalam Abdel & Saddler , Int . Conf . Biotechnol . Pulp Pap . Ind , 7 ,
C239 - C242 ( 1998) . Dalam sebuah studi oleh Chemoglazov et . al . , enzim MicroB .
Technol . , 10:503-507 ( 1988) , endoglukanase yang teradsorpsi pada aktivitas lignin hilang .
Efek menonaktifkan lignin diamati juga dengan substrat uap meledak , tetapi tidak jika kedua
adalah yang diolah dengan asam , atau dengan kompleks lignocarbohydrate . Sutcliffe et al . ,
Biotechnol . Bioeng . Gejala , 17 : . 749-762 ( 1986) , melaporkan bahwa adsorpsi selulase
pada persiapan lignin berbeda dari kayu uap - diobati dipengaruhi oleh sifat dari lignin dan
- glucosidase yang paling terpengaruh oleh lignin . Dengan demikian , berbagai jenis lignin
dan bentuk lignin dapat mempengaruhi selulase adsorpsi . Juga , bentuk lignin , yang berisi
lignin dan lignocarbohydrate kompleks yang berbeda , tampaknya mempengaruhi selulase
berbeda . Hal ini umumnya sepakat bahwa bentuk dan posisi dari sebagian besar perubahan
lignin setelah uap ledakan , sehingga lignin terpisah dari selulosa untuk membentuk
aglomerat .
Beberapa proposal telah dibuat untuk memecahkan masalah tidak efektif dan / atau
tidak efisien degradasi enzim lignin tinggi yang mengandung bahan biomassa . Salah satunya
adalah langkah pretreatment yang mendegradasi atau menghilangkan setidaknya sebagian
dari hemiselulosa dan / atau lignin dari biomassa . Sebagai contoh, kombinasi dari panas dan
pra - perlakuan asam dari massa lignoselulosa untuk jangka waktu yang telah digunakan
untuk menghidrolisis hemiselulosa . Namun, proses ini menyediakan hanya sangat terbatas
penghapusan lignin , seperti yang dilaporkan dalam Grohmann et . al . Biotechnol . Bioeng .
Gejala . 17 , gejala . Biotechnol . Bahan Bakar Chem . , 8 , 135-151 ( 1986) dan Torget et al .
, Biokimia Terapan dan Bioteknologi , 34-35:115-123 ( 1992) .
Penghapusan lignin dari serat selulosa juga telah diusulkan meskipun menggunakan
alkali kaustik , seperti di Kraft pulping dan kertas pembuatan Namun , proses ini tidak
menghasilkan gula sederhana dan tidak memisahkan hemiselulosa dari selulosa .
Paten AS No. No 4.668.340 yang dikeluarkan untuk Sherman berkaitan dengan
biomassa pengolahan hidrolisis yang menghasilkan hampir secara eksklusif gula
hemiselulosa . Asam diperkenalkan kepada biomassa , dan akan dihapus dari setiap tahap
yang akan diumpankan ke berikutnya dalam urutan tersebut . Hidrolisis selulosa
diminimalkan dalam proses, dan hasil dalam pulp selulosa yang mengandung lebih dari 90 %
dari pakan - selulosa .
Paten AS No. No 4.708.746 yang dikeluarkan untuk Hinger berkaitan dengan
hidrolisis tertentu selulosa diikuti oleh pengobatan dengan tekanan tinggi uap . Namun,
penggunaan uap yang tinggi saja tidak menyediakan untuk hidrolisis lengkap dari substrat
selulosa .
Paten AS No. No 5.125.977 yang dikeluarkan untuk Grohmann et al . , Dan US Pat .
No 5.424.417 yang dikeluarkan untuk Torget et al . , Berkaitan dengan hidrolisis awal dari
biomassa lignoselulosa untuk melarutkan gula hemicellulosic dengan rilis bersamaan dari
beberapa lignin larut . Hidrolisis awal membuat selulosa yang tersisa lebih mudah dicerna
dengan enzim atau cara kimia lainnya . Paten AS No. No 5.424.417 menjelaskan suatu proses
dimana lignoselulosa dikenai langkah hidrolisis awal dengan melewatkan larutan asam atau
basa melalui partikel padat atau lignoselulosa , dengan penghapusan terus menerus produk
reaksi larut . Teknik ini memungkinkan kombinasi lebih ringan dari pH , suhu , dan waktu
dari hidrolisis awal konvensional . Ekstraksi hemiselulosa dan lignin terjadi secara bersamaan
dalam reaktor yang sama dan dalam kondisi yang sama .
Paten AS No. No 6.022.419 yang dikeluarkan untuk Torget et al . berhubungan
dengan proses di mana biomassa lignoselulosa difraksinasi dengan menggunakan asam encer
, misalnya , asam sulfat encer pada 0,07 % berat , untuk mengkonversi selulosa menjadi gula
monomer dalam hasil yang relatif tinggi . Namun, hidrolisis selulosa menggunakan katalis
asam mahal dan membutuhkan peralatan khusus . Selain itu, gula yang diinginkan yang labil
dalam kondisi yang keras , dan sejumlah besar tidak diinginkan dan beracun oleh produk
biasanya terbentuk. Jika terkena terlalu lama , glukosa yang berasal dari selulosa degradasi ke
hydroxymethylfurfarol , yang selanjutnya menurunkan menjadi produk degradasi yang tidak
diinginkan termasuk asam levulinic dan asam format . Kondisi asam sama menurunkan
xylose , yang terbentuk dari hemiselulosa .
WO 94/29474 untuk Hinman berhubungan dengan proses di mana pengobatan
lignoselulosa meminimalkan pengikatan selulase . Sebuah substrat terbentuk dari selulosa ,
hemiselulosa , dan pati . Suatu asam agen pretreatment hidrolitik ditambahkan ke substrat ,
sebagai adalah peroksidase lignin untuk memblokir situs mengikat lignin dalam biomassa .
Selulase ditambahkan ke substrat menggunakan Simultan Sakarifikasi dan Fermentasi ( SSF )
kondisi proses yang menguntungkan bagi kelangsungan hidup sel dan konversi etanol .
Kadal et al , 53 : 277-284 ( 1999) , berkaitan dengan penggunaan perawatan peroksida
untuk menghilangkan lignin dalam kondisi basa selama pemutihan pulp . Dalam kondisi
alkali , hidrogen peroksida bereaksi dengan struktur baik alifatik dan aromatik dari lignin ,
menyebabkan depolimerisasi dan penghapusan berikutnya dengan mencuci air . Gould,
Biotechnol . Bioeng . , 26:46-52 ( 1984) , melaporkan penggunaan peroksida alkali untuk
menghilangkan lignin dan meningkatkan hydrolyzability enzimatik residu herba . Ramos et al
. , Holzforschung 46:149-154 ( 1992) , melaporkan penggunaan peroksida alkali uap meledak
kayu . . Yang et al , Bioteknologi dan Bioengineering 77 ( 6 ) : 678-684 ( 2002) , melaporkan
penggunaan pengobatan peroksida alkali untuk meningkatkan daya cerna enzimatik uap
meledak substrat kayu lunak .
Umumnya , kayu lunak telah dianggap sebagai skenario terburuk sebagai bahan baku
untuk proses biokonversi karena lignin sangat bandel mereka mengurangi efisiensi hidrolisis
enzimatik . Schwald et al . , Enzim Systems untuk Degradasi Lignocelluosic , Goughlan , MP
, Elsivier , NY , hlm 231-242 ( 1989) , dan Wu et al . , Appl . Biochem . Biotechnol . , 77-79 ,
47-54 ( 1998) , melaporkan bahwa kompromi dalam kondisi pra-perawatan kemungkinan
akan diperlukan , jika residu kayu lunak harus dianggap sebagai bahan baku potensial untuk
pengolahan biomassa , yaitu , proses keparahan menengah diperlukan antara mereka
dioptimalkan untuk pemulihan hemiselulosa tinggi dan hidrolisis selulosa efisien .

Menurut proses pretreatment tersebut , substrat selulosa yang dihasilkan oleh
pretreatment pada keparahan sedang (sekitar log R0 = 3.76 ) mengandung kadar lignin tinggi
yang membatasi aksesibilitas selulase dengan selulosa . Istilah " R0 " digunakan dalam
industri sebagai indikator keparahan relatif dari metode pengobatan untuk pengolahan
biomassa . Secara khusus , di bidang lignocellulosics dan fraksinasi komponen kayu , " R0 "
telah digunakan untuk mendefinisikan " parameter keparahan . " Persamaan ini dijelaskan
dalam Overend , RP & Chornet , E. (1987 Fraksinasi lignocellulosics oleh pretreatments uap
- cair . . . Phil Trans R. Soc Lond , 523-36 ) . . . :
R 0 = t exp [ ( T - 100 ) / 14,75 ] ( 1 )
dimana R0 adalah faktor keparahan dan dioptimalkan pada 3,8 untuk hidrolisis awal dari
hemiselulosa , t adalah waktu pemaparan dalam hitungan menit , dan T adalah temperatur
dalam derajat Celcius .

RINGKASAN
Pengungkapan ini kemajuan seni dan mengatasi masalah-masalah yang diuraikan di
atas dengan menyediakan metode yang lebih baik dan lebih efisien untuk enzimatik hidrolisis
biomassa lignin - konten yang tinggi . Misalnya, lignin memblokir protein dapat digunakan
dalam proses Simultaneous Sakarifikasi dan Fermentasi ( SSF ) untuk meningkatkan hasil
etanol . Keuntungan ini diperoleh tanpa harus menundukkan biomassa untuk kondisi reaksi
keras menggunakan proses yang menghindari produksi yang signifikan degradasi beracun
dan tidak diinginkan oleh - produk . Selain itu , metode pengukuran luas permukaan selulosa
diungkapkan , yang dapat dimanfaatkan untuk mengembangkan protokol pretreatment
dioptimalkan .
Dalam salah satu perwujudan , metode memanfaatkan protein dan / atau polipeptida
yang istimewa mengikat dengan lignin lebih mudah daripada selulosa . Sebuah biomassa
lignin - konten yang tinggi diperlakukan dengan protein blocking lignin dan / atau polipeptida
, misalnya dengan mencuci biomassa dengan komposisi yang terdiri dari protein lignin -
blocking dan / atau polipeptida atau dengan menambahkan bahan-bahan tersebut untuk kaldu
sakarifikasi . The lignin -blocking polipeptida dan / atau protein istimewa mengikat dan
dengan demikian menghambat lignin dari mengikat lanjut . Selulosa - hidrolisis enzim ,
seperti cellobiohydrolase dan - glucosidase , maka dapat menghidrolisis selulosa lebih
efisien dan cepat . Tanpa pengobatan biomassa mengandung-lignin dengan polipeptida lignin
-blocking dan / atau protein , lignin dalam biomassa ireversibel mengikat sebagian dari
selulosa hidrolisis enzim , membuat mereka tidak dapat menghidrolisis selulosa . Protein dan
/ atau perawatan polipeptida efektivitas adalah melalui lignin yang mengikat , sehingga
mengurangi dan / atau menghilangkan adsorpsi non - produktif dari selulosa hidrolisis enzim
. Pengobatan biomassa dengan protein lignin -blocking dan / atau polipeptida dengan
demikian meningkatkan pengolahan substrat lignin relatif tinggi dengan menghindari afinitas
lignin untuk enzim . The polipeptida mencuci mengurangi penggunaan enzim dan / atau
meningkatkan kinerja karena enzim tidak menjadi terikat lignin , dan tetap tersedia untuk
menghidrolisis biomassa .
Dalam satu aspek , metode ini mengurangi enzim pemuatan di hidrolisis biomassa
kadar lignin tinggi . Jumlah enzim , seperti selulase , yang diperlukan untuk memberikan
hidrolisis berkurang secara signifikan melalui mengobati biomassa dengan protein lignin -
blocking dan / atau polipeptida . Keuntungan ini mengurangi biaya keseluruhan proses
konversi biomassa .
Menurut salah satu perwujudan , metode meningkatkan daya cerna enzimatik selulosa
dan dengan demikian meningkatkan hidrolisis selulosa dari biomassa lignoselulosa dalam
proses biokonversi . Metode ini meliputi langkah-langkah mengobati biomassa lignin tinggi
dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein untuk memberikan biomassa
diperlakukan memiliki komponen lignin diblokir , dan mengekspos biomassa disuguhi
sejumlah efektif enzim hidrolisis . Sebagai contoh , enzim hidrolisis mungkin - glucosidase
, cellobiohydrolase , endoglukanase , atau kombinasi keduanya .
Dalam salah satu perwujudan , metode meningkatkan yield etanol dari proses sekitar
5-25 % Simultan Sakarifikasi dan Fermentasi ( SSF ) . The lignin blocking polipeptida dan /
atau protein dapat ditambahkan langsung ke kaldu sakarifikasi . The lignin blocking
polipeptida dan / atau protein akan disukai ditambahkan ke kaldu sebelum penambahan
enzim hidrolisis selulosa dan gula - ke - etanol mengubah mikroorganisme .
Menurut salah satu perwujudan , adalah mungkin untuk secara akurat mengukur luas
permukaan selulosa dari bahan baku biomassa . Pertama, lignin blocking polipeptida dan /
atau protein yang digunakan untuk menutupi situs lignin yang dinyatakan akan menyerap
selulase . Kedua , selulase ditambahkan dan terserap dengan kekhususan tinggi oleh
komponen selulosa biomassa . Sebuah korelasi linear antara luas permukaan selulosa dan
tingkat hidrolisis awal memungkinkan untuk menentukan kondisi pretreatment menyebabkan
luas permukaan selulosa terbesar terkena . Pengetahuan tentang kondisi pretreatment
dioptimalkan dapat diterjemahkan ke dalam penghematan biaya untuk pabrik pengolahan
biomassa .
Lignin -blocking polipeptida dan / atau protein yang berguna untuk tujuan ini
mencakup polipeptida dan / atau protein , atau lignin -blocking fragmen daripadanya ,
memiliki afinitas untuk lignin , dan terutama , misalnya , albumin serum bovine ( BSA ) ,
protein kedelai , amilase , telur ayam albumin , protein whey , dan kombinasinya. Lignin -
blocking polipeptida dan / atau protein dapat berupa polipeptida atau protein yang tidak
memiliki afinitas pengikatan yang cukup untuk selulosa , selulase atau enzim selulosa -
hidrolisis lainnya . Dengan cara contoh , lignin -blocking polipeptida dan / atau protein
mungkin memiliki berat molekul berkisar dari 2.000 menjadi 300.000 Dalton Dalton . Dalam
beberapa perwujudan , kisaran mungkin bahwa dengan berat molekul relatif tinggi , mulai
dari 55.000 sampai 80.000 Dalton Dalton , misalnya , bahwa dari albumin . Namun, lignin -
blocking polipeptida dan / atau protein yang memiliki berat molekul rendah juga dibayangkan
sebagai berguna dalam praktek metode ini . Ini lignin -blocking polipeptida yang lebih kecil ,
misalnya , dapat terdiri dari fragmen peptida yang terdiri dari asam amino yang mampu
secara efektif menghalangi atau mengganggu situs mengikat lignin . Ketika peptida
fragmentaris digunakan , mereka memiliki terminal amino lebih disukai .
The lignin blockers , seperti polipeptida , protein , dan fragmen daripadanya , bukan
molekul yang dinyatakan intrinsik tersedia untuk biomassa lignin mengandung . The lignin
blocker biasanya disediakan dalam persiapan yang relatif murni dan terisolasi dari bahan
tersebut, dan dalam konsentrasi yang tidak hadir di alam . Dengan demikian , kehadiran
insidental protein dan / atau peptida , misalnya , dalam sakarifikasi atau fermentasi media,
tidak akan memberikan tindakan lignin -blocking dari persiapan terdefinisikan . The lignin -
blocking polipeptida , protein dan / atau fragmen lignin -blocking daripadanya disediakan
untuk biomassa sebagai sumber eksternal dipasok bahan tidak melekat pada lingkungan
pribumi biomassa di bawah kondisi pengolahan biasa , intervensi absen oleh tangan manusia .
The polipeptida lignin -blocking dan protein dapat dibuat dalam komposisi dengan air
, misalnya. The lignin -blocking polipeptida atau protein yang digunakan pada langkah
mengobati mungkin termasuk konsentrasi yang relatif rendah lignin -blocking polipeptida
dan / atau protein , misalnya , 1 % dari lignin -blocking polipeptida dan / atau protein dengan
berat komposisi , atau dari 1 % sampai 5% berat komposisi .
Metodologi ini mempekerjakan komposisi polipeptida lignin -blocking dan / atau
protein , serta komposisi enzim hidrolisis selulosa , seperti selulase . Seperti digunakan di sini
, komposisi didefinisikan sebagai termasuk suspensi koloid , fase cair kabut , cair / suspensi
padat kabut , uap campuran , dan / atau solusi , yang mencakup protein lignin -blocking dan /
atau polipeptida atau lignin - memblokir fragmen daripadanya atau enzim hidrolisis selulosa .
Lignin adalah polimer fenolik yang dapat diperoleh dengan polimerisasi
dehydrogenative dari coniferyl alkohol dan / atau sinapyl alkohol . Lignin memiliki bentuk
larut yang larut dalam air dan non - air . Lignin Kedua tidak larut air dan larut dalam air
menyerap polipeptida dan protein . Lignin menyajikan situs adsorpsi non - spesifik untuk
polipeptida dan protein mengikat dengan , misalnya , lignin - mengobati polipeptida dan
protein seperti albumin bovine serum albumin dan telur ayam . Lignin kental memiliki
kemampuan untuk menyerap polipeptida dan protein dari larutan air . Kelompok
dihydroxyphenyl dan gugus hidroksil fenolik dari bentuk molekul lignin situs yang dapat
digunakan untuk mengikat dengan dan / atau endapan protein yang mengikat . Banyak
protein yang berbeda bisa, karena itu , dapat digunakan untuk mengikat lignin dan
meningkatkan akses enzim selulosa dalam biomassa .
Dengan cara contoh, biomassa lignoselulosa memiliki kandungan lignin tinggi
didefinisikan sebagai biomassa yang terdiri dari setidaknya 5% lignin berat , setidaknya 10%
lignin berat , setidaknya 20% lignin berat , setidaknya 40% lignin berat , dari 5% sampai 50
% lignin , atau dari 10 % sampai 50% lignin berat .

Dalam berbagai perwujudan , biomassa lignoselulosa terdiri dari kayu , residu
pertanian dan kehutanan , rumput seperti switchgrass , produk ruminansia pencernaan ,
limbah kota ( pabrik kertas limbah , koran , kardus , dll ) , atau kombinasinya . Misalnya,
bahan lignoselulosa dapat meliputi birch , cemara Douglas , brangkasan jagung , jerami , atau
kombinasi keduanya . Bahan-bahan ini dapat dikenakan untuk preprocessing lain yang
menurunkan atau meningkatkan kadar lignin mereka, misalnya , limbah dari pabrik kertas .
Dengan demikian , metode ini berlaku untuk proses rehabilitasi lingkungan , serta produksi
etanol dari biofuel .
Diharapkan bahwa pertama mengobati biomassa dengan polipeptida lignin -blocking
dan / atau protein , atau lignin -blocking fragmen daripadanya , dan kemudian menambahkan
enzim hidrolisis selulosa memberikan efisiensi tertinggi dalam konversi selulosa . The lignin
-blocking polipeptida dan / atau perlakuan protein biomassa juga dapat terjadi bersamaan
dengan penambahan enzim selulosa - hidrolisis untuk biomassa . Namun, keuntungan yang
lebih rendah dalam efisiensi konversi dapat diamati .
Mengobati biomassa dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein , misalnya
dengan mencuci dengan larutan protein , dapat diikuti dengan menambahkan selulase , atau
enzim aktivitas hidrolisis selulosa yang sama . Langkah mengobati ini menghasilkan hasil
hidrolisis dari selulosa yang dapat diukur sebagai peningkatan persentase efisiensi konversi
selulase . Dengan cara contoh , sebuah peningkatan 20 % pada konversi persentase dari total
selulosa untuk karbohidrat dapat diperoleh dibandingkan dengan hasil hidrolisis dari selulosa
dari biomassa yang tidak diobati dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein .
Seperti digunakan disini, istilah " polipeptida lignin -blocking dan / atau protein " berarti
setiap protein mampu memberikan peningkatan komparatif dalam efisiensi konversi selulase
dengan mengikat dengan lignin untuk meningkatkan ketersediaan hidrolisis enzim .
Sakarifikasi substrat kadar lignin yang tinggi sering menguntungkan oleh setidaknya
peningkatan 5 % dalam efisiensi konversi .
Masih perwujudan lain berkaitan dengan proses-proses untuk memproduksi senyawa
organik dari biomassa lignoselulosa lignin mengandung tinggi . The mencuci atau lignin -
blocking polipeptida dan / atau protein mengobati langkah bisa didahului , misalnya, dengan
langkah hidrolisis menghubungi biomassa lignoselulosa dengan asam dan uap untuk
memberikan biomassa padat diobati dengan komponen lignin yang lebih besar . Biomassa
terhidrolisis kemudian dicuci dan diobati dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau
protein . Pengobatan lignin -blocking Ini diikuti dengan menambahkan sejumlah efektif
enzim hidrolisis dalam kondisi yang cocok untuk hidrolisis selulosa untuk menghasilkan
karbohidrat pada tingkat efisien tinggi . Jumlah efektif hidrolisis enzim untuk polipeptida
lignin -blocking dan / atau biomassa protein yang diobati , misalnya , setidaknya 25 % kurang
dari jumlah efektif hidrolisis enzim yang diperlukan untuk hasil konversi serupa dari
biomassa lignoselulosa yang tidak diobati dengan lignin -blocking polipeptida dan / atau
protein .

Proses langkah-langkah di samping langkah hidrolisis atau langkah-langkah mungkin
termasuk mengekstraksi karbohidrat , fermentasi karbohidrat dalam kehadiran
mikroorganisme mengubah gula - to- ethanol untuk periode waktu dan dalam kondisi yang
sesuai dalam campuran reaksi untuk memproduksi etanol dan penggalian etanol dari
campuran reaksi . Ekstraksi dapat terjadi , misalnya, dengan ultrafiltrasi dan / atau distilasi
fraksional . Kinerja selulase diukur sebagai konsentrasi selulase minimum yang diperlukan
untuk mencapai konversi selulosa time-to - target meningkat dari 5 % menjadi 75 % , atau
dari 20 % menjadi 75 % , yang diukur sebagai perbedaan persentase dibandingkan dengan
proses lainnya yang tidak memberikan untuk protein lignin -blocking dan / atau perlakuan
polipeptida dari biomassa .
Perwujudan lain dari metode ini terdiri dari pencampuran partikel biomassa yang
memiliki kadar lignin yang tinggi dengan jumlah yang cukup dari asam encer untuk
menghasilkan makanan basah biomassa lignoselulosa , pemanasan biomassa untuk
menghapus hemiselulosa , pendinginan dan mencuci solid, memperkenalkan jumlah yang
cukup dari lignin -blocking polipeptida dan / atau protein untuk padatan sisa untuk
menghasilkan biomassa diobati dengan komponen lignin diblokir , dan menambahkan
sejumlah efektif enzim hidrolisis terhadap biomassa diperlakukan untuk menyediakan
karbohidrat .
Substrat pra-perawatan dalam kondisi yang sangat parah yang lebih mudah diakses
enzim selulase , tetapi memiliki pemulihan yang lebih rendah dari gula hemiselulosa
diturunkan . Sebaliknya , pretreatment dalam kondisi kurang parah umumnya membebaskan
gula hemiselulosa yang diturunkan , tapi menghasilkan residu padat yang tidak mudah setuju
untuk hidrolisis selulosa .
Efek ini dalam hidrolisis lignoselulosa dijelaskan oleh kemampuan protein untuk
memblokir situs adsorpsi non - spesifik dari fraksi non - selulosa substrat dan meningkatkan
jumlah selulase yang tersedia untuk menyerap pada fraksi selulosa . Lignin afinitas untuk
selulase mungkin diblokir oleh protein dalam tiga cara berikut :
( 1 ) hubungan fisik yang erat dengan lignin ;
( 2 ) adsorpsi kelompok hidrofobik untuk lignin ; dan
( 3 ) curah hujan yang melibatkan kelompok dihydroxyphenyl dan gugus hidroksil fenolik
lignin .
Adapun mekanisme yang terakhir , lignin adalah fenolik polimer kompleks yang
mungkin timbul dari polimerisasi dehydrogenative dari coniferyl alkohol dan / atau sinapyl
alkohol . Protein menyerap lignin Kedua tidak larut air dan larut dalam air . Kapasitas
adsorpsi bervariasi tergantung pada metode pretreatment yang berbeda dan bahan baku .
Selain itu , hasil menunjukkan bahwa protein ditambahkan pada konsentrasi rendah tidak
mempengaruhi laju hidrolisis , yang menunjukkan bahwa protein tidak berpengaruh pada
mekanisme katalitik enzim selulolitik . Oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa protein blok
situs adsorpsi non - spesifik pada lignin untuk mencegah tidak produktif mengikat selulase
pada lignin . Perbaikan mengakibatkan hidrolisis dapat terjadi dengan memperkenalkan
muatan negatif ke permukaan lignin karena adsorpsi protein . Pada gilirannya , muatan
negatif mencegah pengikatan bermuatan negatif enzim hidrolisis . Tanpa terikat oleh teori ,
diyakini bahwa nonspesifik mengikat protein untuk menurunkan lignin tidak produktif
mengikat selulase pada permukaan lignin . Penggunaan pengobatan protein dalam proses
untuk konversi lignoselulosa menguntungkan memfasilitasi penurunan tingkat selulase
pembebanan untuk mencapai persentase konversi target yang sama . Sebagai contoh, dalam
studi yang dilaporkan di bawah , adalah mungkin untuk menurunkan beban enzim sebesar 50
% untuk mencapai tingkat yang sama konversi selulosa hidrolitik dengan penambahan
protein pada 2 g / L untuk pra-perawatan substrat lignoselulosa .

Uraian Singkat Gambar
Gambar . 1 adalah diagram skematik peralatan proses menunjukkan yang dapat digunakan
sesuai dengan salah satu perwujudan yang menggunakan BSA protein cuci untuk konversi
lignoselulosa ;
Gambar . 2 menunjukkan perubahan konsentrasi larutan yang dihasilkan dari hidrolisis -
selulosa dan brangkasan jagung ( CS1 ) , dengan dan tanpa protein ( BSA ) Selain itu ;
Gambar . 3 menunjukkan menyaring aktivitas kertas ( FPA ) yang terdiri dari perubahan
selama hidrolisis brangkasan jagung dengan dan tanpa penambahan protein ;
Gambar . 4 menunjukkan total protein dalam supernatan selama hidrolisis - selulosa dengan
dan tanpa penambahan protein ;
Gambar . 5 menunjukkan protein dalam supernatan selama hidrolisis brangkasan jagung
dengan dan tanpa penambahan protein ;
Gambar . 6 menunjukkan harga berbagai protein lignin -blocking dibandingkan dengan
konversi persen yang diperoleh dari masing-masing protein ;
Gambar . 7 menunjukkan hubungan antara tingkat hidrolisis awal dan adsorpsi selulase
maksimum untuk pretreatment brangkasan jagung , yang telah dikenakan Pra cuci Bovine
Serum Albumin ;
Gambar . 8 menunjukkan peningkatan yield etanol bila pengobatan lignin -blocking
digunakan dalam proses SSF ;
Gambar . 9 menunjukkan hasil perbandingan SSF dari S. cerevisiae DSA , Brettanomyces
custersii dan kultur campuran mereka pretreated brangkasan jagung dengan dan tanpa lignin -
blocking pengobatan di bawah 15 FPU / g selulosa pemuatan
Gambar . 10 menunjukkan perbandingan hidrolisis xilan dari waktu ke waktu di bawah
kondisi aliran yang berbeda dengan menggunakan larutan asam encer ;

Gambar . 11 menunjukkan penghapusan perbandingan lignin seperti yang disebabkan oleh
kondisi aliran yang berbeda dengan menggunakan larutan asam encer ; dan
Gambar . 12 menunjukkan lignin memblokir perawatan untuk meningkatkan pencernaan
selulosa dan xilan dari pulp yang diputihkan .

Uraian Lengkap
Ada sekarang akan ditampilkan dan dijelaskan metode untuk meningkatkan efisiensi
proses dalam membuat produk yang berguna dari kadar lignin tinggi biomassa lignoselulosa .
Efisiensi ditingkatkan dengan memperlakukan biomassa dengan protein lignin - mengikat dan
/ atau polipeptida . Dalam beberapa perwujudan , ini dicapai dengan mencuci protein dari
biomassa . Protein mengikat lignin membuat lignin kurang tersedia untuk mengikat selulase
atau enzim selulosa - hidrolisis lainnya . Dengan demikian , lebih selulase tersedia untuk
menghidrolisis selulosa dalam biomassa protein yang diobati , dan kurang selulase pada
akhirnya diperlukan untuk memberikan hasil yang lebih tinggi dari gula komponen dari
biomassa . Proses ini sehingga jauh lebih efisien dibandingkan dengan penemuan sebelumnya
. Selain itu, tingkat hidrolisis awal yang terbukti berkorelasi langsung dengan luas permukaan
selulosa , sehingga kondisi biokonversi pretreatment ( misalnya , waktu, suhu , reagen ) dapat
dioptimalkan oleh instansi yang diungkapkan di sini .
Pembahasan berikut ini memberikan contoh-contoh spesifik dari proses ini
menunjukkan sarana-sarana sesuai dengan berbagai perwujudan melalui contoh , dan bukan
oleh keterbatasan .
Gambar . 1 menunjukkan salah satu perwujudan dari sistem reaktor 100 yang dapat
digunakan untuk konversi biomassa . Bahan lignoselulosa 102 disampaikan kepada chopper
pabrik 104 oleh aksi transfer perangkat 106 , seperti pipa elevator atau bubur . Pabrik chopper
104 daging dan / atau grinds bahan biomassa lignoselulosa tumpukan 102 , sesuai kebutuhan,
untuk ukuran yang telah ditentukan yang cocok untuk pengolahan hilir . Ini akan dihargai
bahwa bahan lignoselulosa dapat berupa bahan baku yang mengandung lignin dan selulosa ,
khususnya bahan kandungan lignin tinggi selulosa . Dengan demikian , sistem reaktor 100
dapat digabungkan untuk menerima bahan baku tersebut , misalnya , untuk memproses kayu ,
brangkasan jagung , jerami , serbuk gergaji , kulit kayu , daun , residu pertanian dan
kehutanan , rumput , produk ruminansia pencernaan , limbah kota , limbah pabrik kertas ,
koran, kardus , atau kombinasinya . Setiap proses pertanian , industri , atau kota yang
menggunakan atau pembuangan limbah tersebut dapat dimodifikasi untuk menggabungkan
sistem reaktor 100 .
Sebuah conveyer108 sekrup transfer bahan lignoselulosa cincang dari pabrik
helikopter 104 . Steam 110 dapat ditambahkan untuk sekrup conveyer 108 , yang dapat
dikonfigurasi untuk menghasilkan ledakan uap dalam bahan lignoselulosa 102 , misalnya ,
dengan mengolah bahan lignoselulosa pada tekanan tinggi yang cukup untuk mencegah
mendidih dan suhu 120 C sampai 240 C selama waktu mulai dari satu menit sampai enam
puluh menit atau lebih . The screw extruder 108 opsional bubur bahan lignoselulosa cincang
dengan solusi pengasaman 112 yang berisi , misalnya, dari 1 % sampai 5 % berat asam sulfat
dicampur dengan homogenitas dalam air , misalnya , untuk menghasilkan pH 1,2-1,4 .
Pembuangan dari screw extruder 108 berkelebat ke tangki tinggal 114 , yang dipertahankan
pada suhu di bawah 100 C untuk mendinginkan bahan dan menghentikan reaksi selanjutnya
.
Tangki tinggal 114 discharge menjadi sekrup conveyor 116 , yang pada pertama tiga
cara stasiun pencampuran 118 mencampur bubur dengan larutan kapur 120 , misalnya , satu
dengan kapur cukup untuk memberikan pH yang telah ditentukan dari 10 sampai 11 . Bubur
dibuang ke dalam padatan memegang tangki 122 di mana ia berada untuk waktu yang tepat
memungkinkan kapur untuk menghapus produk samping merusak hidrolisis asam .
Tambahan asam 124 , seperti asam sulfat , dapat ditambahkan ke dalam padatan memegang
tangki 122 untuk menyesuaikan pH ke kisaran dari 5 sampai 7 . Padatan memegang tangki
122 pembuangan ke kedua tiga cara pencampuran stasiun 126 untuk lebih lanjut
pencampuran dengan solusi pra-cuci 128 yang berisi protein lignin -blocking dan / atau
polipeptida , misalnya , satu menyampaikan sebuah lignin protein memblokir 1 % sampai 5
% dan / atau polipeptida konten berat bubur . Pencampuran lebih lanjut terjadi melalui
turbulator 130 , yang dibuang ke sepertiga tiga cara pencampuran stasiun 140 . Atau,
turbulator 130 mungkin reaktor aliran-melalui di mana padatan disimpan untuk selang waktu
dengan recycle dari pra-cuci larutan protein 128 , sebuah reaktor fluidized bed dengan recycle
dari solusi pra-cuci protein 128 , atau aduk - tank .
Pada gilirannya , ketiga tiga cara pencampuran stasiun 140 memperkenalkan solusi
enzimatik 142 yang berisi enzim prehydrolyzing , misalnya , selulase atau campuran selulase
dan enzim lain, termasuk glucosidase . Atau , solusi enzimatik 142 berisi inokulum dan
media pertumbuhan termasuk mikroorganisme yang mampu saccharifying bubur untuk
hidrolisis selulosa oleh in vivo produksi enzim tersebut . Bubur perjalanan ke sebuah bejana
reaktor hidrolisa dipanaskan 144 , yang mungkin menjadi salah satu dari serangkaian kapal
reaktor tersebut , untuk waktu tinggal yang tepat memungkinkan hidrolisis bubur . Sebagai
contoh, ini waktu tinggal mungkin dari satu sampai tujuh hari . Serangkaian ( tidak
ditampilkan ) kapal reaktor hidrolisa 144 dapat mengizinkan proses batch kontinyu . Reaktor
hidrolisis 144 mungkin , misalnya , menjadi reaktor aliran-melalui di mana padatan 148
disimpan untuk selang waktu dengan recycle cairan , reaktor fluidized bed dengan daur ulang
cairan , atau aduk - tank .
Bubur debit dari reaktor hidrolisa 144 dapat mengalami pencampuran tambahan di
sebuah stasiun pencampuran keempat 154 , yang menambahkan aliran kedua 156 , seperti
aliran air dengan enzim tambahan atau aliran mikroorganisme yang mengandung berguna
untuk proses konversi , yaitu konversi dari gula menjadi alkohol . Kedua aliran 156 bereaksi
dalam reaktor converter 158 , misalnya , untuk mengubah gula menjadi alkohol atau senyawa
organik lainnya . Discharge dari reaktor converter 158 dapat diajukan ke pemisah pusaran
160 , yang pembuangan padatan untuk pembuangan limbah di mana padatan mungkin ,
misalnya , digunakan sebagai bahan bakar boiler . Cairan dari pusaran pemisah disampaikan
kepada kolom distilasi 162 , yang berkonsentrasi produk yang berguna , misalnya , ethanol ,
untuk lebih lanjut hilir pengolahan 164 , seperti filter molekuler untuk menghilangkan air .
Sisa cairan dan / atau padatan dari kolom distilasi 162 diserahkan untuk mendaur ulang
pengolahan 166 , misalnya , untuk menyaring partikel halus dan tambahkan asam untuk
penggunaan cairan seperti solusi pengasaman 112 .
Ini akan dihargai bahwa peralatan umumnya diperlihatkan dalam Gambar . 1 dapat
digunakan atau diadaptasi untuk melaksanakan berbagai proses yang dikenal . Proses
sebelumnya tidak mencakup penggunaan wash ( pra-cuci ) komposisi , seperti polipeptida
lignin -blocking dan / atau pra-cuci protein solusi 128 , dan dapat diadaptasi untuk
penggunaan tersebut sesuai dengan sarana-sarana yang dijelaskan di sini . Penggunaan
tersebut dari komposisi cuci , pra-cuci solusi 128 , menghasilkan pengurangan biaya yang
signifikan dalam keseluruhan proses produksi gula atau senyawa organik difermentasi dari
kadar lignin tinggi lignoselulosa dengan mengurangi penggunaan enzim .
Umumnya , setiap proses sakarifikasi lignin tinggi selulosa dapat ditingkatkan dengan
menggunakan polipeptida untuk memblokir situs spesifik adsorpsi hidrofobik bahan pada
substrat selulosa untuk meningkatkan ketersediaan hidrolisis enzim untuk sakarifikasi
selulosa . Proses ini mungkin misalnya , memerlukan pembuatan pulp, pembuatan kertas ,
mengobati limbah dari proses pembuatan pulp, mengobati limbah dari proses pembuatan
kertas , proses biokonversi , proses biopolimer , uji analitik pengikatan protein , assay analitik
enzimatik , proses pengolahan limbah , dan kombinasinya.
Sebagai contoh , penggunaan diaduk reaktor tangki hidrolisis enzimatik terus menerus
, atau serangkaian reaktor tersebut , telah menunjukkan hasil sakarifikasi substansial setara
dengan penggunaan reaktor batch yang pada dasarnya adalah tangki tinggal ; Namun , hasil
ini setara dicapai dengan menggunakan konsentrasi yang lebih rendah dari hidrolisis enzim .
Sampai tiga kali lebih sedikit enzim yang diperlukan dengan menggunakan diaduk reaktor
hidrolisa enzimatik tangki terus menerus . Keuntungan ini diperkuat dalam suatu sistem yang
menggunakan rangkaian tangki reaktor hidrolisis enzimatik terus menerus diaduk , misalnya,
di mana proses desain sedemikian rupa sehingga reaktor pertama mungkin saccharify hingga
75% dari selulosa yang tersedia dan diikuti oleh satu atau lebih hilir reaktor untuk
menyelesaikan proses konversi . Instansi ini mempercepat proses konversi secara keseluruhan
dan menghasilkan efisiensi konversi yang lebih besar . Reaktor hilir mungkin reaktor diaduk
lainnya , reaktor batch atau reaktor aliran plug ( tidak ditunjukkan dalam gambar . 1 ) . Pada
konsentrasi enzim encer ini , penggunaan lignin memblokir protein ini sangat berguna karena
enzim encer akan , jika tidak, preferentially mengikat lignin dan menjadi tidak tersedia .
Sebagaimana digunakan di sini , biomassa lignoselulosa memiliki " high- lignin isi"
didefinisikan sebagai biomassa memiliki setidaknya sekitar 10% lignin berat per berat
selulosa . Dengan cara contoh , biomassa tersebut adalah karakteristik tanah kayu .
Modifikasi proses yang dikenal untuk menyertakan penggunaan pra-cuci solusi 128 secara
substansial meningkatkan efisiensi konversi selulosa dalam pengolahan kandungan lignin
tinggi selulosa .

Di antara proses untuk memproduksi etanol dari substrat lignoselulosa ( misalnya ,
pohon, rumput , dan limbah padat ) adalah mereka yang dikenal sebagai mikroba Konversi
Langsung ( DMC ) atau Bioprocessing konsolidasi ( CBP ) proses dan Simultan Sakarifikasi
dan Fermentasi ( SSF ) proses . Proses ini dapat menggunakan berbagai mikroorganisme
untuk mengubah bahan organik menjadi etanol . Dalam metode DMC / CBP , sistem mikroba
tunggal kedua menghasilkan enzim selulase dan menghasilkan ethanol sebagai produk
fermentasi . Metode SSF menggunakan dua unsur biologis , yang didasarkan pada enzim
selulase dan yang lainnya , yang fermentasi gula menjadi etanol .

Sebagai alternatif untuk menambah selulase dalam larutan enzimatik 142 , selulase dapat
diproduksi menggunakan proses fermentasi biomassa , misalnya , dalam proses DMC seperti
yang dijelaskan di Brooks et al . , Proc . Annu . Bahan Bakar Biomassa gejala . , 2 ( 1978) ,
atau proses SSF seperti yang dijelaskan di Ghose et al . , Biotechnol . . Bioeng , 26 ( 4 ) :
377-381 ( 1984) . Proses ini dapat digunakan , sebagaimana telah diubah dengan penggunaan
pengobatan protein , seperti dengan mencuci atau Pra cuci langkah dengan komposisi terdiri
dari lignin blocking polipeptida dan / atau protein , sesuai dengan prinsip-prinsip yang
diuraikan di sini . Salah satu contoh dari suatu organisme yang berguna dalam mengkonversi
bahan organik menjadi etanol melalui proses DMC adalah Clostridium thermocellum .
Contoh lain dari mikroorganisme yang cocok yang dapat digunakan dengan opsi proses DMC
termasuk Fusarium oxysporum dan C. cellulolyticum . Selain itu, organisme tersebut dapat
digunakan dalam co - kultur dengan C. thermosaccharolyticum atau organisme serupa
pentosa - memanfaatkan seperti C. thermohydrosulfuricum dan Thermoanaerobacter
ethanoliticus . Contoh dari mikroorganisme lain yang dapat digunakan dalam praktek metode
yang diklaim sesuai dengan proses SSF adalah Sacchararomyces cerevisiae ( yang
menghasilkan etanol ) .

Berbagai media pertumbuhan yang cocok untuk proses pencernaan mikroba yang dikenal
dalam bidang ini . Umumnya , media pertumbuhan yang cocok mampu menyediakan
komponen kimia yang diperlukan untuk mempertahankan aktivitas metabolik dan untuk
memungkinkan pertumbuhan sel . Salah satu medium pertumbuhan yang efektif mengandung
komponen per liter air berikut :
* Disusun dalam reaktor plugflow pada 220 C, 9 detik waktu tinggal dengan 1 % H2SO4
Media disebutkan di atas tertuang melalui contoh . Media tumbuh yang cocok lain dapat
digunakan juga, termasuk media industri berbasis jagung minuman keras curam .

Menurut perwujudan lain , biomassa yang telah dirawat karena hidrolisis enzimatik diproses
lebih lanjut untuk menghasilkan molekul organik , misalnya , dalam reaktor converter 158 .
Seperti ditunjukkan dalam Gambar . 1 , pH diubah oleh larutan kapur 120 , yang juga dapat
terjadi hilir posisi yang ditunjukkan dalam gambar . 1 . Salah satu selulase diketahui atau
kompleks selulase dapat digunakan dalam solusi enzimatik 142 atau 156 . Misalnya , selulase
pencernaan dapat dilakukan selama satu sampai tiga hari pada suhu yang optimal untuk
selulase digunakan . Solusi yang mengandung gula kemudian dipisahkan dari residu ,
misalnya dengan filtrasi , sedimentasi , atau sentrifugasi . Larutan gula dapat pulih seperti
gula atau mungkin difermentasi untuk menghasilkan bahan kimia organik yang diinginkan .

Menurut berbagai perwujudan dan instansi , bahan lignoselulosa 102 mungkin biomassa kayu
, biomassa herba ( misalnya hijauan rumput ) , dan bahan limbah ( misalnya , limbah padat
perkotaan ) . Berbagai ukuran dari bahan baku lignoselulosa sangat bervariasi dan tergantung
pada jenis bahan yang digunakan serta persyaratan dan kebutuhan dari suatu proses . Ukuran
partikel bahan baku lignoselulosa pemakaian dari pabrik helikopter 104 sebelum pengolahan
hilir berkisar dari kurang dari satu milimeter dengan diameter beberapa inci diameter .
Ukuran partikel dari bahan baku lignoselulosa setelah pengolahan melalui screw extruder 116
adalah di kisaran 1-4 milimeter . Bahan baku lignoselulosa disukai adalah bahan biomassa
kayu terdiri dari partikel kayu keras . Contoh kayu keras termasuk poplar , oak , maple , dan
birch .

Seperti yang digunakan disini merupakan " jumlah signifikan mengurangi " selulase atau
enzim selulosa - hidrolisis lainnya adalah jumlah enzim yang kurang dari yang dibutuhkan
untuk menghidrolisis biomassa tinggi lignin yang belum diobati dengan polipeptida lignin -
blocking dan / atau protein . Lebih khusus lagi , "jumlah signifikan mengurangi " dari
hidrolisis enzim merupakan selisih antara jumlah selulase yang dibutuhkan untuk
menghidrolisis setidaknya 50 % dari selulosa dalam high- lignin selulosa biomassa yang telah
diobati dengan protein lignin -blocking dan / atau polipeptida dan jumlah selulase atau enzim
selulosa - hidrolisis lain yang diperlukan untuk mendapatkan jumlah yang sama hidrolisis
selulosa tinggi lignin selulosa biomassa yang tidak diobati dengan protein lignin -blocking
dan / atau polipeptida . Dalam perwujudan khusus, " jumlah signifikan mengurangi " enzim
hidrolisis selulosa adalah sekitar 20 % sampai enzim sekitar 50% kurang dari yang
dibutuhkan untuk menghidrolisis selulosa dalam biomassa lignoselulosa tidak diobati dengan
protein lignin -blocking dan / atau polipeptida . Peningkatan ini dimungkinkan dengan
menggunakan protein blocking lignin dan / atau komposisi pengobatan polipeptida , dalam
hal ini solusi pra-cuci , 128 , yang ditunjukkan dalam Gambar . 1 .

Bahan lignoselulosa sebaiknya tanah sebelum diserahkan kepada pengolahan hilir , misalnya
, seperti dengan menggunakan pabrik helikopter 104 . Jika sifat dari bahan lignoselulosa
adalah sedemikian rupa sehingga akan memecah di bawah kondisi pengolahan hilir , maka
grinding tidak diperlukan . Ukuran partikel mungkin tidak penting tetapi hidrolisis umumnya
hasil lebih cepat dan mungkin untuk hasil yang lebih tinggi dengan ukuran partikel yang lebih
kecil , sehingga optimasi ekonomi dapat dicapai antara biaya penggilingan bahan
lignoselulosa dan keuntungan biaya yang lebih tinggi . Ukuran partikel yang lebih kecil
inheren memberikan permukaan yang lebih luas untuk selulase untuk menyerang dan
menurunkan selulosa .

Ukuran partikel yang tepat bervariasi dengan bahan baku dan sifat fisik yang melekat , serta
kondisi aliran . Dalam kebanyakan proses , ukuran partikel sesuai untuk kayu tanah berada di
kisaran sekitar 0,1 mm sampai 30 mm lebih disukai berkisar dari 0,5 mm sampai 4 mm .
Bahan lain mungkin lebih besar atau lebih kecil tergantung pada bahan tertentu , terutama
mereka yang memiliki setidaknya satu dimensi tipis seperti kertas atau jerami . Jika seseorang
bergantung pada efek gravitasi atau pengapungan menyebabkan pergerakan bahan
lignoselulosa padat sehubungan dengan cairan , maka ukuran partikel mungkin perlu
disesuaikan tepat untuk memungkinkan gerakan padat / cair selama hidrolisis . Ukuran
optimal tergantung pada bahan lignoselulosa tertentu yang digunakan dan ukuran reaktor dan
konstruksi dan sudah ditentukan oleh studi empiris rutin untuk kondisi reaktor dan aliran
reaktor .

Bahan-bahan selulosa mungkin termasuk kayu , rumput , kayu lunak , limbah kertas dan pulp,
limbah rumah tangga , limbah pertanian seperti jerami , tongkol jagung , brangkasan ,
biomassa dari semua jenis , dll dan campurannya . Pemilihan bahan selulosa tergantung pada
ketersediaan dan biaya bahan selulosa tertentu yang sedang diproses . Keuntungan dari
sekarang lignin -blocking polipeptida dan / atau metode pengobatan protein yang paling jelas
dalam biomassa selulosa yang memiliki kadar lignin minimal 5 % , 10 % atau lebih ,
misalnya , 11 % , 12 % , 15 % , 17 % , 20 % , 24 % , 25 % , 30 % , 35 % , 40 % , 45 % , 50 %
, 60 % , 70 % , atau lebih . Metode pengobatan lignin -blocking juga dapat digunakan untuk
mengolah bahan baku selulosa baik dan sebagian diolah memiliki konten yang lebih rendah
lignin , misalnya , 7 % , 6 % , 5 % atau kurang .

Dalam beberapa perwujudan , pembuluh reaktor 144 dan 158 secara umum mungkin
memiliki kandungan padatan sekitar 5 % sampai 50 %, lebih disukai 8 % sampai 50 % ,
ketika padatan yang hadir dengan cairan pada akhir hidrolisis . Semakin tinggi kandungan
padatan umumnya lebih diinginkan tetapi konsentrasi mungkin dibatasi oleh desain reaktor
dan kebutuhan cairan untuk memanaskan makanan padat . Pada awal hidrolisis , kandungan
padatan dapat berkisar dari 0 % sampai 100 % berat , seperti reaktor pada awalnya hanya
berisi padatan lignoselulosa atau cairan .

Dalam perwujudan lain masih , enzimatik solusi 142 termasuk selulase ditambahkan ke pH
bubur disesuaikan . Selulase mencerna selulosa menjadi gula sesuai dengan instruksi pabrik
untuk pencernaan selulosa . Salah satu selulase diketahui, kompleks selulase , enzim atau
hidrolisis selulosa lainnya , dapat digunakan . Pencernaan terjadi , misalnya , selama satu
hingga tujuh hari pada suhu optimal untuk selulase untuk menghasilkan solusi yang
mengandung gula . Gula yang mengandung larutan dipisahkan dari residu , misalnya dengan
filtrasi , sedimentasi atau sentrifugasi . Solusi yang mengandung gula dapat diproses untuk
memulihkan gula atau lebih bereaksi atau difermentasi untuk menghasilkan bahan kimia
organik yang diinginkan , seperti alkohol .

Dalam proses fermentasi , misalnya, mikroorganisme fermentasi dalam larutan enzimatik
kedua 156 mungkin sama seperti yang digunakan dalam larutan enzimatik 142 , tapi mungkin
ada perubahan kondisi proses , seperti konversi dari aerobik untuk kondisi proses anaerobik
dalam reaktor converter 158 . Selulosa pencernaan terutama menghasilkan glukosa dalam
tangki padatan 122 dan reaktor hidrolisa 146 . berbagai lebih luas mikroorganisme dapat
digunakan untuk menghasilkan berbagai macam bahkan lebih luas dari senyawa organik
dalam reaktor converter 158 . residu digest dapat difermentasi di cara apapun yang diketahui
per se untuk memanfaatkan glukosa . Jika diinginkan , debit dari screw extruder 116 dapat
dipisahkan menjadi komponen-komponen cair dan padat untuk aliran proses yang terpisah
dan digabungkan pada posisi hilir .

Sebagai alternatif untuk pencernaan selulase terpisah dan fermentasi , kedua reaksi dapat
terjadi bersamaan dalam sakarifikasi dan fermentasi proses simultan , misalnya , dalam
reaktor hidrolisa 144 . Setiap fermentasi yang beroperasi dalam kondisi yang cocok untuk
selulase dapat diterima . Kondisi dan konsentrasi dalam sakarifikasi dan fermentasi simultan (
pH , suhu , dll ) dapat diukur dan disesuaikan untuk dioptimalkan baik untuk sakarifikasi atau
fermentasi atau untuk optimasi keseluruhan . Kondisi dapat diubah sebagai proses
berlangsung .

Uraian berikut dari perwujudan khusus mengajarkan dengan cara misalnya , bukan dengan
pembatasan . Ini akan dihargai bahwa contoh-contoh ini berlaku untuk berbagai sakarifikasi
dan fermentasi proses . Oleh karena itu , adaptasi dan modifikasi tersebut harus dan
dimaksudkan untuk dipahami dalam arti dan rentang setara dari perwujudan yang
diungkapkan . Hal ini harus dipahami bahwa ungkapan atau istilah yang digunakan dalam
dokumen ini untuk tujuan deskripsi dan bukan dari keterbatasan .

Semua referensi yang disebutkan dalam aplikasi ini digabungkan dengan mengacu pada
tingkat yang sama seolah-olah sepenuhnya direplikasi di sini . Dalam contoh berikut ,
Laminex selulase dibeli sebagai Cytolase ( merek dagang dari Genencor terletak di San
Francisco , California ) . Aktivitas spesifik enzim selulase adalah sekitar 28 unit kertas saring
internasional ( IFPU ) / ml , sebagaimana ditentukan oleh National Renewable Energy
Laboratory Laboratorium Analisis prosedur PAP - 006 ( NREL , 2001) . - glucosidase
dibeli sebagai Novozyme 188 Sigma ( merek dagang dari Novozyme berlokasi di Franklin
, NC ) , dan digunakan dalam persiapan hadir pada rasio 1:1.75 ( FBUase : CBUase ) .
Namun, komposisi enzim hidrolisis yang memiliki rasio 1:1 sampai 1:10, atau 1:01-1:02 juga
dipertimbangkan . Reagen Sisanya ditentukan oleh nama kimia dibeli dalam kemurnian
penelitian pada urutan komersial dari rumah pasokan laboratorium nasional . Bubuk selulosa
( - selulosa ) , yang digunakan sebagai substrat kontrol , diperoleh dari Sigma Chemical Co
of St Louis , Mo

Rasio tertentu dari enzim dapat disesuaikan pada kasus - per kasus , misalnya, untuk
mengoptimalkan jumlah aktivitas yang dibutuhkan dengan mikroorganisme tertentu yang
sedang digunakan . Dalam beberapa kasus , tidak ada - glucosidase dapat digunakan karena
mikroorganisme yang digunakan .

Ragi yang digunakan dalam sakarifikasi dan fermentasi simultan ( SSF ) Contoh adalah
Saccharomyces cerevisiae D5A dan Brettanomyce custersii ( CBS 5512 ) , seperti yang
dijelaskan dalam Spindler et al , Bioteknologi Letters , 14 : . 403-407 ( 1992) dan US Pat . No
5.100.791 , yang digabungkan dengan rujukan pada tingkat yang sama seolah-olah
sepenuhnya diungkapkan disini . Referensi ini menunjukkan produksi etanol dari polisakarida
dalam suatu proses tunggal - langkah di mana sebuah isolat Brettanomyces custersii
digunakan dalam kombinasi dengan karbohidrase untuk secara bersamaan saccharify dan
fermentasi polisakarida . Ini isolat B. custersii dapat memfermentasi selobiosa dan glukosa
menjadi etanol . Sebuah media yang mengandung 4 % selulosa diinokulasi dengan B.
custersii CBS 5512 , dan selulase ditambahkan . Setelah 5 hari medium mengandung 33 g
etanol per liter . Beberapa ragi lainnya menunjukkan tingkat rendah dan hasil etanol .

Komposisi pengobatan protein dapat dibuat seperti mencuci , seperti solusi, disiapkan dalam
air suling . Sebagai contoh , salah satu solusi mencuci tersebut dibuat dengan melarutkan 10
gram ( bg. ) albumin serum sapi dalam satu ( 1 ) liter ( 1000 ml ) air suling . Sebagai contoh,
di mana biomassa dicuci memiliki berat sekitar 100 gram , komposisi protein cuci di atas
akan disiapkan dan biomassa akan dicuci dengan dua liter larutan BSA 1 % dijelaskan .

Contoh 1 Tinggi Lignin - lignoselulosa Biomassa Pengobatan dengan Protein Lignin Binding
Contoh ini menunjukkan kegunaan menggunakan pengobatan protein , seperti protein /
polipeptida cuci langkah, untuk meningkatkan efisiensi aktivitas selulase di berbagai konten
high- lignin sumber biomassa lignoselulosa . Dibandingkan dengan metode sebelumnya yang
mencoba untuk menurunkan dan menghapus konten lignin , metode blok sekarang lignin
dengan protein yang mengikat yang mencegah lignin dari pemulungan enzim pencernaan .
Contoh ini membandingkan metodologi Pra cuci protein dalam bentuk pretreatment mencuci
. Teknik penemuan sebelumnya yang mencakup pengolahan biomassa dengan hidrolisis asam
dan / atau ledakan uap dapat menguntungkan dimodifikasi untuk menyertakan pra-cuci
langkah protein seperti yang dijelaskan di bawah ini . Hasil penelitian menunjukkan bahwa
efisiensi yang sama dapat diperoleh dengan menggunakan enzim selulase substansial kurang
ketika biomassa kadar lignin tinggi prewashed dengan larutan protein yang mengandung
protein lignin mengikat.

Biomassa dari dua jenis tanaman diperiksa : brangkasan jagung ( CS ) dan cemara Douglas .
Sampel CS berbeda dalam komposisi , seperti yang dilaporkan dalam Tabel 3 . Untuk setiap
sampel , analisis kimia dilakukan untuk menentukan konsentrasi awal selulosa , lignin dan
hemiselulosa pada akhir pretreatment asam , sebelum mencuci protein , dan sebelum
hidrolisis selulase . Kadar selulosa , kadar lignin , hemiselulosa dan konten yang ditentukan
oleh National Renewable Energy Laboratory Laboratorium Analitik Prosedur PAP - 002 &
003 ( NREL , 2001) .

Dalam satu contoh dari hasil , pretreatment dari CS ( 1 ) adalah dengan 1 % H2SO4 ( aq)
pada 140 C selama 40 menit , atau 0,1 % H2SO4 pada 160 C selama 80 menit , seperti
yang ditunjukkan pada Tabel 3 . The residu padat dicuci dengan air ( 15 kali berat ) untuk
menghapus kelompok asam sebelum hidrolisis enzimatik . Untuk sampel CS ( 2 ) ,
pretreatment dilakukan dengan menggunakan reaktor flowthrough dengan air pada 215 C
dengan kecepatan 25 ml / menit . Contoh CS ( 2 ) tidak diasamkan . Contoh CS ( 3 ) adalah
pra-perawatan dengan menggunakan solusi dengan 0,1 % H2SO4 ( aq) pada 25 ml / menit
selama 20 menit . Contoh CS ( 4 ) adalah pra-perawatan dalam kondisi dasar simulasi proses
AFEX yang mensyaratkan berbagai pemuatan amonia dari 1 unit amonia untuk satu unit
biomassa kering , dengan kadar air sistem sebesar 60 % berat . Suhu untuk proses ini adalah
90 C dan pengobatan berlangsung selama 5 menit .

The Douglas fir ( Pseudotsuga menziesii ) gubal dan kayu batang yang terkelupas dan
disaring untuk ukuran chip yang relatif homogen dari 4 4 1 cm . Chip uap meledak di
batch berat kering 50 g menggunakan kondisi ledakan uap dari 195 C, 4.5 min . , Dan 4,5 %
( b / b ) SO2 seperti yang dijelaskan sebelumnya di Boussaid et al . ( Optimalisasi
hemiselulosa pemulihan gula dari kayu lunak uap meledak , Prosiding Konferensi Biomassa
of the Americas , 3, Montreal , 24-29 Agustus , 1997) . Kondisi ledakan uap ini dipilih dari
13 set eksperimental yang mencakup variasi pada lima tingkat suhu , kadar SO2 dan waktu .
Mereka menyediakan pemulihan terbaik dari keseluruhan gula yang berasal dari hemiselulosa
dan selulosa . Residu padat dicuci dengan air ( 15 kali berat ) untuk menghapus kelompok
asam sebelum hidrolisis enzimatik .

Protein mencuci sampel yang dipilih sedemikian rupa sehingga terjadi efisiensi konversi
dalam sampel yang pra - dicuci dengan 1 % bovine serum albumin bisa dibandingkan dengan
efisiensi sampel yang tidak prewashed dengan albumin serum sapi .

Protein Pra cuci termasuk mencuci masing-masing sampel dengan 1 % ( b / b ) larutan
protein dengan menyaring solusi melalui filter glass menengah 3 kali pada suhu kamar .
Residu padat kemudian diproses lebih lanjut di 2 % konsentrasi padatan ( g weight/100
kering mL ) dalam 50 mM buffer asetat , pH 4,8 , yang mengandung 40 mg / mL tetrasiklin
dan 30 mg / mL cycloheximide . Labu mengandung filtrat buffer yang pra - diinkubasi pada
45 C. pada rotary shaker pada 150 rpm selama 10 menit . Enzim yang ditambahkan untuk
memulai hidrolisis setelah aklimatisasi . Aliquots 0,5 mL diambil pada waktu yang berbeda (
0 , 0.2 , 1 , 4 , 8 , 12 , 24 , 48 , 72 jam ) , segera dingin di atas es , dan disentrifugasi pada
5.000 rpm selama 10 menit . Analisis total gula dilakukan pada supernatan yang dihasilkan .

Preparat enzim yang digunakan untuk semua studi hidrolisis diperoleh dari Genencor .
Pengobatan dilakukan dengan selulase lengkap ditambah dengan f3 - glucosidase , (
Novozyme 188 ) pada rasio 1:1.75 m ( FPUase : CBUase ) . Perawatan enzimatik
dilakukan pada berbagai FPUase / g selulosa . Jumlah FPU dihitung dengan menambahkan
kegiatan baik Celluclast dan Novozyme 188 . Persiapan selulase memiliki 28 unit
kertas saring ( FPU ) / mL , sedangkan Novozyme 188 memiliki 8 FPU / mL , dan 480 -
glucosidase IU / mL , dan dilengkapi untuk menghindari inhibisi produk akhir akibat
akumulasi selobiosa .

Jumlah protein diukur dengan menggunakan Protein Assay Bio - Rad menggunakan BSA
sebagai standar , sesuai dengan produsen arah yang ditentukan . Jumlah protein diserap dalam
supernatan dilaporkan sebagai persentase dari jumlah protein hadir dalam substrat kosong

Kandungan gula padatan dan asam lignin larut ditentukan dengan menggunakan prosedur
lignin Klason diterbitkan oleh Renewal Energy Laboratorium National Laboratory Analytical
Prosedur PAP - 002 & 003 ( NREL , 2001) . Sekitar 300 mg dari sampel tanah untuk
melewati layar 40 - mesh dari seri saringan standar AS , tersedia dari Central Ilmiah Ohio ,
ditimbang dengan ketelitian 0,1 mg , dan ditempatkan di 10 mL tabung reaksi , yang
kemudian ditempatkan dalam mandi air , yaitu mandi air Shaker 3540 dari Apogen
Teknologi Melrose Park, Illinois Tiga mililiter 72 % H2SO4 ditambahkan ke tabung reaksi
dan tabung ditempatkan dalam bak air pada 30 1 C selama 1 jam dengan sering diaduk.
Tabung yang dikosongkan menjadi 250 mL labu Erlenmeyer yang berisi 84 ml air deionisasi
, menghasilkan larutan asam 4 % . Termos tersebut ditutup dengan aluminium foil dan
ditimbang sebelum autoklaf pada 120 C selama 1 jam . Setelah autoklaf , penurunan berat
badan ditentukan dan disesuaikan kembali dengan menambahkan jumlah yang tepat air
deionisasi sebelum vakum penyaringan campuran melalui wadah media . Residu padat dicuci
dengan 225 ml air panas untuk menghilangkan asam yang tersisa . Wadah dan total asam
residu larut ( tidak termasuk ash ) yang dipanggang dalam oven pada 105 C selama 12 jam .
Berat padatan yang tersisa dibagi dengan berat awal bahan awal memberikan fraksi residu
tidak larut asam , yang biasanya ditunjuk sebagai kadar lignin Klason .

Gula analisis komposisi dari semua biomassa sampel padat dan cair dilakukan oleh prosedur
analitis Prosedur standar yang ditetapkan oleh National Renewal Energy Laboratory
Laboratorium , LAP - 001 , 002003005 & 012 ( NREL , 2001) . Filtrat dari asam uji residu
larut dijelaskan di atas dimuat pada sistem kinerja tinggi kromatografi cair , yaitu Waters
2695 dari Waters of Milford , Mass , dilengkapi dengan detektor indeks bias berdenyut (
Waters 2410 bias diferensial ) untuk mendapatkan gula komposisi. Sampel cair disaring
dari hidrolisis juga dijalankan oleh metode ini . Sebuah larutan gula campuran komposisi
diketahui arabinosa , galaktosa , glukosa , mannose , xylose dan dirawat secara paralel
dengan persis urutan yang sama seperti yang dijelaskan dalam prosedur residu asam larut
untuk memperkirakan kerugian gula faktor koreksi untuk hidrolisis asam dan autoklaf .
Sampel filtrat disaring melalui 0,2 m NM filter yang diperoleh dari Fisher of Pittsburgh , Pa ,
dan volume 20 uL dibebankan pada botol sampel yang kemudian dimuat ke dalam sistem
kromatografi cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor indeks bias berdenyut untuk
mendapatkan kadar gula . Kolom ini diseimbangkan dengan de - terionisasi air pada laju alir
0,6 mL / menit . Kolom Aminex HPX - 87P dari Bio - Rad dari Sunnyvale , California
digunakan untuk penentuan kadar gula .

Tabel 3 memberikan perbandingan berbagai digestions yang dilakukan pada bahan biomassa
tertentu . Dalam beberapa kasus, digestions dilakukan tanpa pra-cuci protein .
Sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 3 , pengobatan protein disediakan efisiensi enzim
ditingkatkan untuk semua substrat diuji . Secara khusus , pretreatment protein diikuti dengan
hidrolisis menggunakan konsentrasi selulase yang lebih rendah ( mg / ml ) mampu mencapai
efisiensi konversi yang sama seperti yang dilakukan konsentrasi selulase yang lebih tinggi
dalam kasus di mana tidak ada pretreatment protein . Jumlah yang relatif lebih besar dari
enzim diselamatkan dengan meningkatnya jumlah kandungan lignin substrat . Hasil dari
penelitian ini menunjukkan bahwa perlakuan protein meningkatkan tingkat hidrolisis enzim
selulase dari selulosa bahkan di paling bandel dari bahan biomassa lignoselulosa . Hal ini
ditunjukkan di sini bahwa pengobatan protein menghemat 33-50 % aktivitas FPU atau lebih
untuk mencapai kira-kira konversi total yang sama dari selulosa , yaitu , konversi total plus
atau minus sekitar tiga persen dari total konversi tanpa pra-cuci protein . Dalam kasus lignin
tinggi Douglas Fir , di mana kadar lignin mendekati berat selulosa , peningkatan sepuluh
persen dalam efisiensi konversi diperoleh menggunakan 50 % lebih sedikit selulase .

Dengan cara contoh , sampel CS ( 2 ) menunjukkan konversi persen dari 88,6 % tanpa pra-
cuci protein dengan menggunakan 15 FPU / g , dan konversi persen dari 90,4 % dengan pra-
cuci protein menggunakan 10 FPU / g . Perbedaan dari 5 FPU / g atau 33 % hasil kurang
aktivitas selulase dalam efisiensi konversi sedikit lebih tinggi dari 90,4 ( peningkatan 2 %
terhadap 88,6 % ) akibat penggunaan pra-cuci protein . Hasil ini menunjukkan menggunakan
pengobatan pra-cuci protein dapat menurunkan konsumsi selulase , misalnya, dari 5 %
menjadi 50 % , atau 20 % sampai 30 % , 20 % sampai 40 % , atau bahkan 50 % atau lebih
untuk memberikan dasarnya hasil yang sama diukur sebagai konversi persentase selulosa
menjadi karbohidrat .

Tabel 3 juga menunjukkan jumlah yang sama aktivitas selulase menyediakan persen konversi
meningkat mulai dari 4,4 % dalam kasus CS ( 3 ) menjadi 36 % dalam kasus cemara Douglas
, yang memiliki kandungan lignin yang lebih besar . Sebagai contoh , sampel cemara Douglas
dicerna menggunakan 20 FPU / g selulase dengan dan tanpa pra-cuci protein . Protein pra-
cuci menghasilkan konversi persen 73,5 % , dibandingkan dengan 54,2 % tanpa pra-cuci
protein untuk mencapai peningkatan 36 % atau persentase perbedaan dibandingkan dengan
54,2 % .

Contoh 2 Protein Pengobatan Tinggi Lignin - Mengandung Biomassa
Contoh ini menunjukkan utilitas meningkatkan degradasi selulosa dan efisiensi selulase , atau
enzim selulosa merendahkan lainnya , dengan menghambat kapasitas pengikatan lignin
dengan protein / peptida memiliki lignin mengikat afinitas non - spesifik .

Dua jenis sumber selulosa dipelajari . Salah satu jenis yang - selulosa - selulosa murni tanpa
kandungan lignin yang cukup . Jenis biomassa lainnya diperiksa adalah brangkasan jagung (
CS ) . Tujuh sampel yang diteliti termasuk - selulosa tanpa pra-cuci protein , - selulosa
dengan pra-cuci protein , CS dengan pra-cuci protein , CS tanpa pra-cuci protein , dan CS
dengan mencuci protein selama masa studi . The CS memiliki kandungan lignin dari sekitar
10% sampai 17 % berat .

Konversi sampel selulosa termasuk - selulosa dan CS diperiksa . Setiap sampel pra - diobati
dengan 0,1 % H2SO4 pada 180 C selama 40 menit . Sampel prewashed disiapkan dengan
mencuci sampel tiga kali pada suhu kamar dengan 1 % ( b / b ) larutan bovine serum albumin
( BSA ) larutan protein . Padatan tetap pada filter kaca menengah pada suhu kamar ( rasio
solid untuk solusi protein adalah 1 g : 20 mL , kisaran kapasitas protein - menyerap lignin
sekitar 0,4-0,96 mg BSA / lignin mg ) . Residu padat kemudian diproses lebih lanjut pada 2
% konsentrasi padatan ( g weight/100 kering mL ) dalam 50 mM buffer asetat , pH 4,8 , yang
mengandung 40 mg / mL tetrasiklin dan 30 mg / mL cycloheximide . Labu mengandung
filtrat buffer yang pra - diinkubasi pada 45 C. pada rotary shaker pada 150 rpm selama 10
menit , dan enzim yang ditambahkan untuk memulai hidrolisis setelah aklimatisasi . Aliquots
0,5 mL diambil pada waktu yang berbeda ( 0 , 0.2 , 1 , 4 , 8 , 12 , 24 , 48 , 72 jam ) , segera
dingin pada es dan disentrifugasi pada 5000 rpm selama 10 menit . Jumlah analisis gula
dilakukan pada supernatan yang dihasilkan . Prosedur Identik dilakukan selama analisis dari
semua sampel . Hasil Sakarifikasi diukur sebagai konversi dari total selulosa .

Preparat enzim yang digunakan untuk semua studi hidrolisis diperoleh dari Genencor .
Pengobatan dilakukan dengan selulase lengkap ditambah dengan Novozyme 188 -
glucosidase , dengan rasio 1:1.75 ( FPUase : CBUase ) . Perawatan enzimatik dilakukan pada
15 FPU / g selulosa . Jumlah FPU dihitung dengan menambahkan kegiatan baik Celluclast
dan Novozyme 188 . Persiapan selulase memiliki 28 unit saringan kertas ( FPU ) / mL ,
sedangkan Novozyme 188 memiliki 8 FPU / mL , dan 480 - glucosidase IU / mL , dan
dilengkapi untuk menghindari inhibisi produk akhir akibat akumulasi selobiosa .

Gambar . 2 menunjukkan hasil . Ini akan dihargai bahwa - selulosa tidak termasuk
komponen lignin yang cukup ; Namun , sampel biomassa - selulosa menunjukkan sedikit
peningkatan dalam efisiensi konversi yang dihasilkan dari BSA cuci. Peningkatan ini di
kisaran ketidakpastian deterministik eksperimental . Seperti perbedaan ini kurang dari 1 %
hingga 3% efisiensi konversi dari waktu ke waktu , BSA dianggap tidak substansial
mengganggu interaksi selulase - selulosa . The CS1 sampel, yaitu , sampel memiliki
kandungan lignin yang lebih tinggi daripada - selulosa , menunjukkan perbedaan efisiensi
konversi sekitar 15 % setelah sekitar 25 jam .

Pengobatan pretreatment brangkasan jagung dengan BSA sebelum penambahan selulase
sangat meningkatkan laju hidrolisis , dan konversi selulosa pada 72 jam ditingkatkan menjadi
sekitar 90 % ketika diobati dengan BSA dibandingkan hanya sekitar 78 % bila campuran
selulase dipekerjakan sendiri . Ketika selulase dan BSA ditambahkan pada saat yang sama ,
tingkat hidrolisis awal secara signifikan meningkat , dan hasil akhir adalah sekitar 5 % lebih
tinggi daripada ketika selulase digunakan sendiri . Menambahkan BSA sepuluh jam setelah
penambahan selulase tak banyak berpengaruh pada kinerja pada tahap awal hidrolisis tetapi
tidak meningkatkan hasil akhir sekitar 2 % . Gambar . 2 juga menunjukkan bahwa
menambahkan BSA untuk brangkasan jagung , yang diobati dengan BSA sebelum
penambahan selulase dan kemudian dihidrolisis selama sepuluh jam , meningkatkan hasil
akhir sekitar 3 % dibandingkan dengan cuci tunggal dengan BSA . Hasil ini menunjukkan
bahwa peningkatan terbesar dalam coversion diperoleh bila protein lignin -blocking dan /
atau polipeptida ditambahkan ke substrat sebelum penambahan enzim hidrolisis selulosa ;
Namun , peningkatan konversi dapat dicapai ketika protein lignin -blocking dan enzim
hidrolisis ditambahkan secara bersamaan dan / atau ketika protein lignin -blocking
ditambahkan setelah dimulainya hidrolisis .

Lignin -blocking polipeptida dan protein yang dapat digunakan sebagai dijelaskan di sini
memiliki utilitas disukai meningkatkan efisiensi hidrolisis selulosa biomassa yang
mengandung setidaknya 5% lignin berat . Prinsip ini ditunjukkan dalam gambar . 2 , di mana
CS1 ditambah BSA mencapai sekitar efisiensi konversi lima belas persen lebih besar
daripada CS1 tanpa BSA .

Lebih khusus , sebagai kontrol eksperimental , konversi persen ( % ) dan tingkat konversi (
waktu , jam ) dari biomassa - selulosa dengan protein - pengobatan dan tanpa pengobatan
protein hampir sama . Sampel termasuk - selulosa + BSA mencapai konversi 38 % pada 12
jam , dan 53 % pada 25 jam . Sampel termasuk - selulosa tanpa BSA mencapai konversi 37
% pada 12 jam , dan 52 % pada 25 jam . The brangkasan jagung termasuk lebih dari sekitar
10 sampai 17% lignin , memberikan perbedaan yang jauh lebih signifikan dalam konversi
persen . Sebuah jumlah yang jauh lebih besar dari selulosa biomassa dikonversi dalam lignin
-blocking polipeptida dan / atau protein diobati , lignin mengandung biomassa dibandingkan
dengan biomassa tidak diobati dengan polipeptida lignin -blocking dan / atau protein .
Menggunakan jumlah yang sama enzim selulase ( 20 FPU / g selulosa enzim pemuatan ) ,
peningkatan diamati dalam konversi selulosa setelah sekitar 12 jam ditunjukkan .
Peningkatan konversi selulosa terus dari waktu ke waktu . CS + BSA mencapai konversi 70
% pada 12 jam , dan 81 % pada 25 jam . CS tanpa BSA mencapai 50 % konversi pada 12 jam
dan 62 % pada 25 jam . Di sini , perbedaan dalam konversi selulosa dari protein -
diperlakukan brangkasan jagung biomassa sekitar 20 % ditunjukkan setelah 25 jam .
Perbedaan dalam jumlah konversi selulosa antara protein - dirawat dan diperlakukan
biomassa non - protein dipertahankan selama periode 70 jam dipantau .

Contoh 3 Biokonversi Steam - Hydrolyzed kayu lunak dengan Protein Treatment
Contoh ini lebih lanjut menunjukkan efisiensi biokonversi substrat lignoselulosa kayu lunak
yang pra-perawatan dengan asam dikatalisis langkah hidrolisis awal uap . Contoh yang
diberikan di sini dari biomassa lignoselulosa kayu lunak dibuat dari bahan pohon cemara
Douglas .

Sebuah sampel pohon cemara disiapkan seperti yang dijelaskan di Boussaid et al . , Optimasi
hemiselulosa pemulihan gula dari kayu lunak uap meledak ( Douglas fir ) . Membuat Bisnis
dari Biomass Energi , Lingkungan , Kimia , Serat dan Bahan , Prosiding Konferensi
Biomassa of the Americas , 3, Montreal , 24-29 Agustus 1997 . Biomassa tersebut kemudian
diproses melalui perawatan pra - hidrolisis steam ledakan ( 195 C, 4,5% SO2 selama 4,5
menit ) . Uap meledak , biomassa prehydrolyzed kemudian diobati dengan loading 20 FPU /
g selulosa . The persen konversi dengan hidrolisis enzimatik adalah 54,2 % setelah 72 jam .
Sebaliknya , ketika uap meledak uap biomassa dihidrolisis diperlakukan dengan 1 % bovine
serum albumin persiapan , dan kemudian diobati dengan jumlah yang jauh lebih rendah dari
selulase , 10 FPU / g selulosa , konversi dari 59,7 % diperoleh ( Lihat Tabel 3 ) . Hasil
penelitian menunjukkan penurunan dari 50 % memuat enzim yang memproduksi produk
konversi sedikit lebih dari uap meledak biomassa dari Douglass cemara .

Contoh 4 Enzim Pemanfaatan / Pengawetan sebagai Dinilai oleh Filter Paper Activity ( FPU )
dengan dan Tanpa Protein Pengobatan Biomassa
Contoh ini menunjukkan bahwa dengan perlakuan awal biomassa lignoselulosa dengan lignin
-blocking polipeptida dan / atau protein , aktivitas enzim selulase akan dipertahankan dalam
aktif , keadaan terikat . Aktivitas relatif enzim ( selulase ) diukur sebagai aktivitas kertas filter
( FPA % ) .

Jagung brangkasan ( CS1 ) , itu prehydrolyzed dengan 0,76 % H2SO4 , pada 160 C, selama
10 menit . Kedua protein diobati dan non - protein diobati sampel brangkasan jagung
diperiksa dimulai dengan 20 FPU / g enzim selulosa pemuatan . Jumlah filter perubahan
aktivitas kertas kemudian dimonitor untuk kedua sampel sebagai fungsi waktu . Hasil ini
akan ditampilkan sebagai gambar . 3 .

Relatif FPA dipelihara untuk tingkat yang lebih besar dan untuk jangka waktu yang lebih
lama dengan biomassa yang telah diobati dengan protein , dibandingkan dengan biomassa
yang belum diobati dengan protein . Relatif FPA % dari sampel CS1 turun dari 100 %
menjadi 42 % setelah hanya sekitar 4 jam , dan kemudian jatuh lagi menjadi sekitar 30 %
setelah 25 jam . Sebaliknya , relatif FPA % dari CS1 ditambah BSA hanya turun menjadi
sekitar 80 % setelah sekitar 4 jam dengan protein lignin -blocking biomassa diobati , dan
hanya turun sampai 50 % dibandingkan FPA % setelah 25 jam ( Lihat Gambar . 3 ) .

Data ini menunjukkan bahwa pengobatan secara efektif mengikat protein lignin dalam
biomassa brangkasan jagung , dan dengan demikian menghalangi lignin dari mengikat
tersedia selulase . Untuk alasan ini , aktivitas FPU selulase dipertahankan untuk jangka waktu
yang lama . Faktor ini menyajikan keuntungan ekonomi substansial dalam menggunakan
lignin -blocking pretreatment protein lignin mengandung biomassa dalam biokonversi
menjadi etanol .

Contoh 5 Protein dalam Solusi dan Efisiensi Biokonversi di Lignin Versus Non - Lignin
Mengandung Biomassa
Contoh ini diberikan untuk menunjukkan bahwa polipeptida lignin -blocking dan / atau
protein , seperti BSA , dan enzim selulase , diserap secara berbeda oleh biomassa yang
mencakup komponen lignin , dibandingkan dengan biomassa yang tidak termasuk lignin yang
signifikan komponen . Prinsip ini ditunjukkan dalam contoh ini menggunakan - selulosa ,
biomassa dengan sedikit lignin , dan CS , yang tidak mencakup setidaknya 10 % lignin .

Gambar . 4 menunjukkan analisis total protein dalam larutan dari waktu ke waktu selama
hidrolisis biomassa dari - selulosa . The FIG . 4 Penelitian dilakukan dengan menggunakan
enzim selulase muatan awal enzim selulosa 20 FPU / g . Gambar . 4 menunjukkan bahwa
dengan tidak adanya lignin dalam biomassa akibat penggunaan - selulosa , setiap protein
yang ditambahkan ke dalam larutan tersebut tidak akan terserap ; oleh karena itu tetap
menjadi komponen terukur dalam larutan . Pada 0 jam , sampel - selulosa ditambah BSA
menunjukkan jumlah terdeteksi protein 1,2 mg / mL dalam larutan , yang meningkat menjadi
1,4 mg / mL pada penambahan selulase 1,5 jam (gambar 4 ) . Jumlah protein dalam larutan
kemudian turun menjadi 1,2 mg / mL pada sekitar 1 jam . Tentang jumlah yang sama protein
nilai solusi diperoleh dengan menggunakan - selulosa diobati dengan BSA yang ada
selulase telah ditambahkan . Seiring waktu , ada sekitar peningkatan 0,1-0,15 mg / mL dalam
jumlah protein terukur dalam larutan dalam sampel - selulosa yang baik selulase dan
protein ( BSA ) pengobatan telah diberikan . Tidak ada peningkatan jumlah terukur total
protein dalam larutan dari waktu ke waktu ditunjukkan dengan - selulosa diobati dengan
BSA , tapi tidak selulase .

Gambar . 4 juga menunjukkan bahwa - selulosa yang selulase telah ditambahkan
menghasilkan protein yang relatif statis dalam tingkat terdeteksi solusi atas seluruh jangka
waktu diperiksa . Seperti ditunjukkan , total protein sekitar 0,2 mg / mL dalam larutan itu
dibuktikan dengan sampel ini pada 0 jam , dan jumlah ini relatif sama pada 50 jam ( Lihat
Gambar . 4 ) .

Gambar . 5 menunjukkan analisis total protein dalam larutan dari waktu ke waktu selama
hidrolisis biomassa brangkasan jagung ( ditampilkan sebagai CS1 ) . The FIG . 5 Penelitian
dilakukan dengan menggunakan enzim selulase muatan awal 20 FPU / g selulosa . Gambar .
5 menunjukkan bahwa dengan adanya biomassa lignoselulosa ( CS ) , protein ditambahkan
dalam bentuk enzim ( selulase ) atau mencuci protein ( BSA ) , diserap oleh substrat sehingga
tidak terdeteksi dalam larutan . Penurunan total protein dalam larutan berpendapat untuk
mencerminkan adsorpsi BSA , selulase , atau keduanya, untuk komponen lignin dari
biomassa . Gambar . 5 menunjukkan penurunan yang signifikan dari protein ( termasuk
selulase dan / atau BSA ) dalam larutan menggunakan biomassa yang mencakup komponen
lignin . Sebuah protein yang diobati ( BSA ) biomassa brangkasan jagung menunjukkan
protein awal dalam larutan ukuran 1,2 mg / mL . Langkah ini turun menjadi 0,9 mg awalnya /
mL sekitar 1 jam , dan kemudian naik lagi menjadi 1,2 mg / mL pada penambahan selulase
sekitar 3 jam . Protein di tingkat larutan menurun secara dramatis di sekitar 8 jam untuk
sekitar 0,2 mg / mL , dan tetap pada tingkat ini selama seluruh periode penelitian , 50 jam .

Jagung brangkasan sampel juga diperiksa tanpa telah diobati dengan protein ( BSA ) .
Selulase ditambahkan pada sampel ini juga. Protein awal nilai solusi jauh lebih rendah ,
sebesar 0,2 mg / mL , pada titik waktu 0 jam . Jumlah ini menurun menjadi sekitar 0,1 mg /
mL setelah sekitar satu jam , dan tetap pada tingkat rendah ini untuk periode yang diamati
dari studi , 50 jam .

Sebagai perbandingan , penambahan BSA , tanpa penambahan berikutnya dari selulase ,
menunjukkan konsentrasi mulai dari sekitar 1,2 mg / mL yang terus menurun menjadi sekitar
0,1 mg / mL kurang dari sampel yang mengandung BSA dan selulase . Semakin rendah
tingkat ekuilibrium diamati ketika BSA digunakan sendiri mencerminkan kurangnya
kontribusi selulase ( sekitar 0,1 mg / mL ) , yang tidak akan meningkatkan tingkat dengan
yang diamati untuk BSA dan campuran selulase .

Bersama-sama , Gambar . 4 dan 5 menunjukkan bahwa protein BSA hampir tidak
berpengaruh pada tingkat hidrolisis - selulosa . Namun, tingkat hidrolisis CS1 ditingkatkan
oleh pra-cuci BSA . Hasil ini menunjukkan bahwa protein memiliki pengaruh yang kecil pada
mekanisme katalitik enzim selulolitik , dan mengkonfirmasi bahwa penggunaan pra-cuci
protein meningkatkan ketersediaan selulase pada substrat . Oleh karena itu, ada kemungkinan
bahwa protein -blocking situs adsorpsi non - spesifik pada lignin merupakan peran kunci dari
pengobatan protein dalam menjelaskan efek positif dari protein pada hidrolisis enzimatik
lignoselulosa .

Secara keseluruhan , sampel biomassa dengan lignin menunjukkan tingkat yang jauh lebih
rendah dari protein dalam larutan selama periode pengujian seluruh dibandingkan dengan
biomassa yang tidak mengandung komponen lignin . Dengan demikian , protein , dalam
bentuk BSA , selulase , atau keduanya , yang diserap oleh komponen lignin dari biomassa ,
dan karena protein tidak terdeteksi dalam larutan . Protein yang diserap dengan komponen
lignin dari biomassa . Kesimpulan ini didukung oleh pengamatan protein terdeteksi dalam
larutan ketika memeriksa biomassa yang tidak termasuk komponen lignin . Protein dalam
larutan tertinggi di biomassa - selulosa yang telah diobati dengan protein BSA dan selulase
. The - selulosa ditambah BSA pengobatan menunjukkan total protein lebih rendah dalam
larutan dari sampel yang selulase dan BSA ditambahkan . Biomassa - selulosa yang hanya
selulase telah ditambahkan menunjukkan jumlah konsisten lebih rendah dari total protein
terdeteksi , 0,2 mg / mL dalam larutan selama periode uji keseluruhan . Di sini , selulase
bertindak untuk menghidrolisis selulosa tersedia dari - selulosa , tanpa hambatan komponen
lignin .

Contoh 6 Protein Sequential Penambahan dan Pengobatan
Untuk mengukur hidrolisis hanya dengan selulase , 0,26 mg selulase ditambahkan per ml
suspensi 2 % dari Avicel atau pra-perawatan padatan brangkasan jagung pada saat nol .
Pengaruh albumin serum bovine ( BSA ) ( Sigma , St Louis , Mo ) Selain itu pertama kali
ditentukan dengan menambahkan cukup BSA untuk pretreated brangkasan jagung untuk
membuat 1 % ( b / b ) larutan 1,5 jam sebelum dan / atau 10 jam setelah penambahan selulase
. Selain itu , selulase pada pemuatan 15 FPU / g selulosa ditambahkan pada saat yang sama
dengan BSA cukup untuk membuat larutan 1 % untuk suspensi 2 % dari pra-perawatan
brangkasan jagung . Akhirnya , 1,2 mg BSA ditambahkan per mL suspensi pada waktu nol
diikuti dengan 0,26 mg selulase satu setengah jam kemudian . Dalam hal ini , campuran
tersebut dengan cepat dipindahkan ke wadah menengah ( Fisher Scientific Company , Pa )
sebelum menambahkan enzim untuk menyaring off bagian cair gratis , dan padatan kemudian
dicuci tiga kali dengan supernatan .

Perjalanan waktu hidrolisis enzimatik selulosa di Avicel dan pretreated brangkasan jagung
diikuti selama loading selulase dari 15 FPU / g selulosa dengan dan tanpa pengobatan BSA .
Seperti terlihat pada gambar . 5 , pengobatan dengan BSA sebelum penambahan selulase tak
banyak berpengaruh pada konversi Avicel selama periode reaksi . Namun, pengobatan pra-
perawatan brangkasan jagung dengan BSA sebelum penambahan selulosa sangat
meningkatkan laju hidrolisis , dan konversi selulosa pada 72 jam ditingkatkan menjadi sekitar
90 % ketika diobati dengan BSA dibandingkan hanya sekitar 78 % bila campuran selulase
dipekerjakan sendiri . Menambahkan BSA setelah penambahan selulase tak banyak
berpengaruh pada kinerja pada tahap awal hidrolisis tetapi tidak meningkatkan hasil akhir
oleh beberapa persen . Ketika selulase dan BSA ditambahkan pada saat yang sama , tingkat
hidrolisis awal secara signifikan meningkat , dan hasil akhir adalah sekitar 5 % lebih tinggi
daripada untuk menambahkan selulase saja .

Selain itu, gambar . 5 menunjukkan bahwa menambahkan BSA untuk pretreatment
brangkasan jagung , yang telah diobati dengan BSA sebelum menambahkan selulase dan
dihidrolisis selama 10 jam , meningkatkan hasil akhir sekitar 3 % . Hal ini juga menunjukkan
bahwa hasil akhir masih meningkat sekitar 2 % bahkan ketika BSA telah ditambahkan ke
brangkasan jagung pra-perawatan setelah 10 jam dari hidrolisis . Jelas, selain BSA adalah
sangat efektif bila ditambahkan sebelum selulase , konsisten dengan itu menjadi ireversibel
terikat lignin . Namun , menambahkan BSA dengan selulase masih menghasilkan beberapa
keuntungan di kedua tarif dan hasil . Selain itu , menambahkan BSA setelah hidrolisis mulai
harga juga ditingkatkan apakah pretreated brangkasan jagung diobati dengan BSA sebelum
hidrolisis atau tidak . Hasil yang terakhir dapat dikaitkan dengan BSA melekat lignin terpapar
selama hidrolisis dan mengurangi non produktif selulase adsorpsi dalam proses selanjutnya .
Atau atau di samping ini , pengamatan ini bisa disebabkan oleh BSA menyerap pada lignin
berikut desorpsi selulase . Dalam hal apapun , hasil ini mendukung gagasan bahwa BSA
menempel kompetitif untuk lignin di hadapan selulase .

Contoh 7 Proses Biokonversi Kontrol
Contoh ini menunjukkan cara untuk mengoptimalkan efisiensi ekonomi dalam satu proses
biokonversi .

Sebuah sumber bahan baku biomassa yang dipilih , biasanya didasarkan pada biaya dan
ketersediaan . Batch uji bahan baku dikenakan beberapa protokol pretreatment yang berbeda
untuk mengekspos selulosa , misalnya , AFEX , ledakan uap atau asam hidrolisis awal .
Setiap metode pretreatment dapat diuji dengan menggunakan berbagai kondisi , misalnya ,
dengan mengubah suhu , asam atau bahan kimia lainnya , konsentrasi dan waktu . Selulase
ditambahkan ke batch pra-perawatan dan tingkat hidrolisis awal diukur untuk
mengidentifikasi metode pretreatment yang menghasilkan tingkat hidrolisis awal tertinggi .
Tingkat dapat diukur dengan teknik yang dikenal dalam bidang ini , seperti spektroskopi neon
.

Proses kontrol dapat dibentuk dengan menggunakan data empiris untuk menghitung tingkat
hidrolisis dan sakarifikasi kali yang melibatkan substrat selulosa dan enzim hidrolisis .
Perhitungan ini mungkin melibatkan perkiraan luas permukaan atau pengukuran . Ketika efek
luas permukaan dicatat , selulase pencernaan selulosa sering reaksi kinetika orde satu .
Teknik yang berbeda untuk menghitung luas permukaan selulosa meliputi, misalnya , teknik
Bennet - Emmit - Teller yang menggunakan nitrogen pada substrat kering untuk menentukan
luas permukaan kotor , tidak hanya luas permukaan terekspos . Teknik lain adalah dengan
menggunakan Pengecualian Teknik Larutan yang membuat asumsi geometri pori ,
mengabaikan luas permukaan eksternal dan menggunakan zat terlarut untuk mengukur luas
permukaan kotor . Sebuah teknik selulase adsorpsi meliputi adsorpsi non - spesifik , seperti
lignin , dan mengukur luas permukaan kotor sebagai fungsi terukur selulase terikat .

Salah satu cara untuk menghitung kapasitas adsorpsi maksimum untuk selulase pada selulosa
adalah dengan menggunakan isoterm Langmuir :

[ E ] ad = [ A ] max [ S ] Total [ E ] gratis K d + [ E ] gratis
mana [ E ] iklan adalah konsentrasi protein terserap ( selulase mg / mg selulosa ) ; [ E ] bebas
adalah konsentrasi selulase unadsorbed ( mg selulase / ml ) ; [ A] max adalah maksimal
terserap selulase ( selulase mg / mg selulosa ) ; [ S ] total total konsentrasi substrat ( mg / ml )
; Kd adalah konstanta kesetimbangan ( ml / mg selulase ) .

Ketika [ S ] Total >> [ E ] Total :

[ E ] ad = [ A ] max [ S ] Total [ E ] Total K d + [ A ] max [ E ] Total

Salah satu cara untuk memproyeksikan aktivitas hidrolitik , misalnya , sebagai persentase dari
total selulosa terlarut dari waktu ke waktu , adalah dengan menggunakan salah satu teknik di
atas untuk menghitung langsung atau tidak langsung luas permukaan dan menggunakan
model matematika untuk memetakan luas permukaan untuk tingkat hidrolisis . Gambar . 7
menunjukkan satu model tersebut untuk sejumlah sampel brangkasan jagung komposisi yang
berbeda . Sebuah model matematika ada sebagai korelasi linear antara luas permukaan
selulosa , yang diukur sebagai selulase adsorpsi , dan laju hidrolisis awal , sehingga batch
menunjukkan tingkat hidrolisis awal tertinggi adalah tentu sampel dengan luas permukaan
selulosa yang paling terkena .

Perbedaan tingkat hidrolisis relatif dapat lebih dipetakan ke komposisi selulase yang sangat
selaras dengan jenis biomassa yang menjadi sasaran sakarifikasi dan karakteristik tanaman
atau fasilitas di mana konversi berlangsung . Gambar . 8 menunjukkan hasil etanol dari waktu
ke waktu untuk brangkasan jagung yang mengalami hidrolisis bawah berbeda FPU dan CBU
beban . The brangkasan jagung pra-perawatan dengan 1 % berat asam sulfat pada 140 C
selama 40 menit . Loadings termasuk sampel yang berbeda pada 25 FPU / g selulosa dengan
perbandingan FPU : CBU termasuk 1:0 , 1:0.25 , 1:0.75 , 1:1.75 dan . Beban tambahan
belajar di 15 FPU / g selulosa ( FPU : CBU 1:1.75 ) , 60 FPU / g selulosa ( FPU : CBU
1:1.175 dan 120 FPU / g selulosa ( FPU : . CBU 1:1.175 ) Kecuali jika ditunjukkan pada
Gambar . 8 , sampel sasaran BSA pra-cuci 1 % sebelum sakarifikasi .

Gambar . 8 menunjukkan bahwa jenis tertentu dari brangkasan jagung dapat menerima ,
setara sebagai substansial , hidrolisis enzim yang mengandung baik 15 FPU / g selulosa (
FPU : CBU 1:1.175 ) , 25 FPU / g selulosa ( FPU : CBU 1:1.175 ) tanpa protein pra-cuci ,
atau 25 FPU / g selulosa ( FPU / CBU 1:0.025 ) . Rasio relatif aktivitas - glucosidase dalam
campuran selulase dapat mempengaruhi hasil etanol dan tingkat produksi secara signifikan .

Dalam sistem yang dihuni dengan hasil untuk berbagai bahan brangkasan jagung disajikan
dengan cara dari Gambar . 8 , di mana masing-masing bahan dipetakan ke tingkat hidrolisis ,
itu adalah masalah sederhana untuk menjalankan analisis tingkat hidrolisis dalam sifat
gambar . 7 untuk posisi biomassa masuk pada model matematika dan menghubungkan
biomassa untuk bahan analog memiliki tingkat hidrolisis yang sama . Dengan cara ini , adalah
mungkin untuk memilih kombinasi enzim / pra-cuci dari bahan yang tersedia memiliki biaya
paling tidak , di mana kombinasi akan mencapai , misalnya , konversi etanol proses SSF dari
jumlah yang telah ditetapkan selama waktu yang telah ditentukan .

Seperti pada Gambar . 8 khususnya , manfaat dari menggunakan pra-cuci BSA dalam proses
SSF ditampilkan untuk tertentu brangkasan jagung spesimen . Ketika 25 FPU / g ( FPU :
CBU = 1:1.75 ) enzim hidrolisis selulosa ditambahkan ke sampel diobati dengan protein
lignin -blocking , yield etanol meningkat sekitar 5 % setelah 24 jam , 10 % setelah 48 jam ,
20 % setelah 72 jam , dan 25 % setelah 98 jam dibandingkan dengan sampel dengan
pemuatan enzim yang sama yang belum diobati dengan protein lignin -blocking .

Brettanomyces custersii (CBS 5512) adalah glukosa yang menjanjikan dan selobiosa
fermentasi ragi untuk SSF selulosa untuk produksi etanol karena dapat menggunakan
selobiosa , inhibitor kuat aksi selulase , langsung ( Spindler et al , Bioteknologi Letters , 14 : .
403-407 , 1992) . Secara khusus, suplementasi - glucosidase yang lebih penting untuk
penggunaan S. cerevisiae D5A daripada B. custersii untuk mendapatkan hasil dan tingkat
etanol yang sama . Karena perawatan lignin blocking sangat efektif dalam mengurangi
adsorpsi - glucosidase pada lignin , kurang suplemen harus diperlukan bila kedua selobiosa
fermentasi ragi dan lignin blocking bekerja . Misalnya hasil penelitian kami menunjukkan
bahwa kultur campuran D5A dan B. custersii dalam kombinasi dengan lignin blocking
memberikan kinerja yang lebih baik dibandingkan penggunaan salah satu bahan-bahan ini
sendirian dan juga memungkinkan penghapusan suplementasi dengan - glucosidase .
Gambar . 9 menunjukkan hasil yield etanol perbandingan menggunakan proses SSF
membandingkan S. cerevisiae D5A , Brettanomyces custersii dan kultur campuran mereka ,
pada pra-perawatan brangkasan jagung dengan dan tanpa pengobatan menghalangi - lignin
bawah 15 FPU / g selulosa pemuatan ( FPU : CBU = 1:1.75 ) . Penggunaan lignin memblokir
peptida ditampilkan untuk meningkatkan hasil etanol dalam kultur campuran hasil fermentasi
, dan S. cerevisiae hasil - karena fermentasi dilengkapi - glucosidase lebih tersedia .

Hasil ini menunjukkan bahwa organisme yang dapat memfermentasi selobiosa dan mungkin
oligomer lain dapat digunakan dalam kombinasi dengan senyawa lignin memblokir untuk
mengurangi secara substansial jumlah enzim yang dibutuhkan untuk mengkonversi biomassa
selulosa pra-perawatan menjadi etanol atau produk lainnya . Secara khusus, biomassa
pretreated diperlakukan dengan lignin memblokir polipeptida untuk mengurangi non
produktif mengikat selulase untuk lignin dan fraksi non - selulosa lainnya . Bahan diobati
dengan lignin memblokir polipeptida ditambahkan ke kapal fermentasi enzim selulase
bersama dan organisme fermentasi , seperti Brettanomyces custersii , yang dapat
mengkonversi selobiosa dan mungkin oligomer selulosa lainnya langsung ke produk dalam
sakarifikasi dan fermentasi simultan ( SSF ) modus operasi . Bahan-bahan ini dapat
ditambahkan sekaligus atau dalam beberapa urutan , seperti pertama lignin memblokir
polipeptida , maka selulase , dan akhirnya organisme . Selain itu, suhu dapat disesuaikan
untuk memanfaatkan urutan yang dipilih , dengan satu suhu yang digunakan saat blocker
lignin ditambahkan , suhu tinggi ketika enzim ditambahkan , dan suhu yang lebih rendah
digunakan sebelum menambahkan organisme fermentasi , untuk urutan contoh mencatat .
The oligomer fermentasi organisme cepat mengkonversi selobiosa , yang merupakan
inhibitor kuat aktivitas selulase , untuk produk fermentasi , sehingga mengurangi jumlah
selobiosa hadir bersama-sama dengan efek penghambatan terkait . Selain itu, banyak lignin
memblokir polipeptida telah ditemukan untuk menjadi sangat efektif dalam mengurangi
secara substansial produktif mengikat komponen enzim selulase , - glucosidase , untuk
lignin , sehingga lebih tersedia - glucosidase untuk mengkonversi selobiosa menjadi
glukosa .

Dengan menggunakan lignin memblokir polipeptida bersama-sama dengan fermentasi
organisme oligomer , konsentrasi selobiosa berkurang , sehingga efektivitas enzim -
glucosidase ditingkatkan dibandingkan dengan pendekatan baik sendiri . Ini penggunaan hasil
polipeptida lignin blocking kinerja yang lebih baik daripada yang mungkin sebaliknya. Atau ,
pendekatan ini memungkinkan seseorang untuk mencapai kinerja yang sama dengan jauh
lebih sedikit enzim , secara substansial mengurangi biaya . Pendekatan ini juga dapat
digunakan untuk secara bersamaan memfermentasi gula biomassa lainnya menjadi etanol
dengan menambahkan gula dari hemiselulosa ke kapal yang sama dalam apa yang disebut
sakarifikasi simultan dan co - fermentasi ( SSCF ) modus operasi , dengan menggunakan
rekayasa genetika Klebsiella oxytoca dan E. coli menjadi contoh organisme yang dapat
memfermentasi gula tersebut ditambah oligomer selulosa . Hasil mempekerjakan organisme
tersebut dengan polipeptida lignin blocking memungkinkan untuk mencapai tingkat yang
tinggi , hasil , dan konsentrasi produk dengan jauh lebih sedikit enzim dan penghapusan biaya
tinggi yang terkait . Menggunakan polipeptida lignin pemblokiran dalam kombinasi dengan
selobiosa fermentasi organisme juga dapat menguntungkan mengurangi atau menghilangkan
kebutuhan untuk melengkapi dengan - glucosidase .

Contoh 8 SFS Pengolahan
Contoh ini menunjukkan kondisi proses yang lebih disukai untuk digunakan dalam stop-
aliran -stop ( SFS ) proses , khususnya , di pengasaman yang terjadi pada padatan memegang
tangki 122 menggunakan tambahan asam 124 , seperti yang digambarkan dalam Gambar . 1 .
Padatan memegang tangki 122 mungkin batch, flowthrough , atau reaktor SFS . Pengolahan
SFS , seperti yang dijelaskan di sini , tidak memerlukan penggunaan lignin -blocking
polipeptida ; Namun , hal ini juga terjadi bahwa hasil SFS ditingkatkan dengan penggunaan
lignin -blocking polipeptida .

Jagung brangkasan tumbuh dekat Harlan , Iowa dianalisis oleh Laboratorium Energi
Terbarukan Nasional , yang memberikan analisis komposisi dari glukan 36,1 % , 21,4% xilan
, arabinan 3,5% , mannan 1,8% , 2,5% galactan , lignin 17,2 % , protein 4,0% , ( 1991) . Gula
monomer yang ditentukan dengan menggunakan kolom Bio - Rad Aminex HPX087P pada
perangkat Waters HPLC dilengkapi dengan 2414 detektor indeks bias . Sebuah pra-cuci
protein tidak digunakan .

Hidrolisis asam diuji dalam reaktor menggunakan larutan encer asam sulfat dalam air , yaitu
0,05 % berat asam sulfat , pada 180 C. Hasil hidrolisis asam diukur sebagai penghapusan
xylan bawah kondisi aliran yang berbeda melalui reaktor . Kondisi aliran termasuk 16 menit
dari total waktu tinggal dalam reaktor . " Batch " aliran itu hanya memperkenalkan larutan
asam encer ke dalam reaktor untuk gabungan tinggal dengan brangkasan jagung . Dua
flowthrough berjalan dibuat , masing-masing , dengan menggunakan 1 ml / menit dan 10 ml /
menit dari larutan asam encer . Sebuah stop- aliran -stop run termasuk mengalir larutan asam
encer pada 10 ml / menit selama selang waktu 4-8 menit , dengan kondisi batch yang
digunakan untuk sisa waktu tinggal 16 menit .

Gambar . 10 memberikan hasil ditentukan sebagai persentase dari xilan asli yang tersisa
dalam reaktor selama interval aliran enam belas menit untuk kondisi aliran yang berbeda .
Umumnya , pembentukan xylose merupakan hasil gula hemiselulosa . Operasi flowthrough
ditingkatkan removal xilan , dibandingkan dengan kondisi batch. Removal xilan meningkat
dengan laju alir , misalnya , terutama di awal reaksi dimana laju aliran meningkat dari 1 ml /
menit sampai 10 ml / menit pada 8 menit total removal xylan juga meningkat dari sekitar 25
% sampai 75 % . Semua kondisi aliran menghasilkan tingkat yang relatif lambat dari
hidrolisis untuk sekitar empat menit . Ini tampaknya disebabkan oleh perpindahan panas
tertunda melalui biomassa dan daerah antar muka terbatas antara asam dan biomassa .

Pada laju alir yang lebih tinggi , tingkat pemindahan xylan turun setelah sekitar 75 % xilan
telah dihapus , misalnya , pada sekitar 8 menit aliran untuk SFS dan 10 ml / menit berjalan .
Hasil ini konsisten dengan konsep bahwa bahan-bahan lignoselulosa memiliki dua kategori :
hidrolisis cepat dan hidrolisis lambat . Sekitar 30 % dari bahan lignoselulosa adalah hidrolisis
lambat . Kondisi laju aliran tinggi terutama efektif dalam hidrolisis cepat bahan lignoselulosa
hidrolisis , dan kurang efektif dalam hidrolisis bahan hidrolisis lambat .

Kondisi stop- aliran -stop memiliki keuntungan mengurangi konsumsi air , bersama dengan
kebutuhan energi terkait , karena larutan asam encer mengalir hanya sebagian kecil dari total
selang tinggal ; Namun , efisiensi hidrolisis hampir sama baiknya dengan yang diperoleh dari
menggunakan volume yang lebih tinggi 10 Kondisi ml / menit terus menerus .

Tabel 4 memberikan perbandingan konsentrasi xilosa untuk batch, flowthrough , dan asam
SFS pretreatment . " Batch 1 " kondisi yang selama 16 menit seperti dijelaskan di atas ,
sementara " Batch 2 " yang selama 40 menit . " FT1 " dan " FT2 " itu , masing-masing, 1 ml /
menit dan 10 ml / menit berjalan dijelaskan di atas . " SFS1 " kondisi termasuk modus batch
operasi selama 4 menit diikuti oleh aliran pada 10 ml / menit selama 4 menit dan kemudian
modus batch selama 8 menit . " SFS2 " kondisi termasuk modus batch selama 4 menit diikuti
oleh aliran pada 10 ml / menit selama 8 menit dan kemudian modus batch selama 4 menit .
Tabel 4 menunjukkan bahwa peningkatan laju aliran menghasilkan hasil gula yang lebih
tinggi , misalnya, di mana imbal hasil meningkat dari 64 % menjadi 95 % antara FT1 dan
FT2 ; Namun , keuntungan hasil diimbangi dengan konsentrasi yang relatif encer . Sebagai
perbandingan , kondisi aliran SFS1 menghasilkan hasil total menengah 80,4 % , namun
konsentrasi xilosa relatif tinggi . Atau , larutan asam encer dapat didaur ulang untuk bagian
ulangi melalui brangkasan jagung untuk meningkatkan konsentrasi xilosa .


Kondisi aliran juga diamati untuk menghilangkan lignin dari brangkasan jagung . Sebelum
dan sesudah kadar lignin aliran Klason ditentukan untuk masing-masing sampel mengalami
mengalir kondisi seperti yang dijelaskan dalam konteks gambar . 10 . Gambar . 11
menunjukkan hasil sebagai grafik batang yang menunjukkan persentase asli Klason lignin
dihapus dari sampel setelah aliran . Kurang dari 12 % dari Klason lignin telah dihapus oleh
batch processing , sedangkan penghapusan lignin meningkat menjadi 28 % dengan
flowthrough pada 1 ml / menit dan 52 % dengan flowthrough pada 10 ml / menit . Kondisi
SFS mengakibatkan penghapusan 38 % .

Contoh 9 Pulp & Paper Process
Uraian di atas menekankan pengobatan protein biomassa selulosa dalam proses biokonversi ;
Namun , hal ini juga terjadi bahwa pra-cuci protein dan pengolahan SFS berguna dalam
proses lainnya yang menggunakan bahan-bahan lignoselulosa , seperti pembuatan pulp,
pembuatan kertas , dan terkait proses pengelolaan air limbah .

Produksi pulp konvensional termasuk, misalnya , penggunaan xilanase untuk memfasilitasi
atau meningkatkan pemutihan serat . Xilanase mengurangi kebutuhan untuk bahan kimia
pemutihan , dan memiliki kelebihan lain termasuk manfaat ekonomi dan lingkungan .
Xilanase menguntungkan meningkatkan kecerahan serat dan meningkatkan throughput yang
produksi dalam keadaan di mana jumlah pemutihan kimia terbatas . Penggunaan xilanase
mengurangi emisi polutan tanpa memerlukan investasi modal yang signifikan .

Xilanase mengikat dengan lignin dalam banyak cara yang sama bahwa selulase dan enzim
hidrolisis lainnya mengikat dengan lignin . Dengan demikian , konsep menggunakan pra-cuci
protein , seperti dijelaskan di atas , juga berlaku untuk proses menggunakan xilanase dan
enzim hidrolisis lainnya pada substrat lignoselulosa , bahkan dengan tidak adanya selulase .
Sebuah solusi xilanase untuk digunakan dalam proses pembuatan pulp dan kertas dapat
mengandung , misalnya, lignin memblokir polipeptida ditambah cellobiohydrolase dari
Trichoderma reesei dan , opsional, proteinase yang akan menurunkan pra-cuci protein setelah
cellobiohydrolase telah memiliki waktu untuk menurunkan xylan tersebut . Gambar . 12
menunjukkan penggunaan lignin memblokir polipeptida ( BSA ) meningkat, pulp yang
diputihkan disediakan oleh Potlatch Corporation, Spokane , Washington, pencernaan selulosa
dan xilan bawah enzim pemuatan 2FPU / g selulosa dalam jumlah masing-masing sekitar 45
% dan 48 % atas hasil dalam kondisi yang sama berjalan tanpa lignin menghalangi
polipeptida .

Dalam operasi daur ulang kertas , diharapkan untuk menyertakan proses penghilangan tinta
untuk mengurangi sisa tinta atau pewarna dan mengurangi jumlah kotoran . Sebuah solusi
untuk digunakan dalam proses penghilangan tinta dapat mencakup , misalnya , selulase ,
xilanase , lipase dan / atau amilase . Tabel 5 membahas masalah lain yang mungkin ditemui
dalam limbah atau pengolahan kertas daur ulang , bersama-sama dengan kategori perawatan
enzimatik untuk menyelesaikan masalah ini .
Limbah pulp dan kertas proses mengandung banyak kontaminan termasuk bahan organik dan
anorganik , bahan kimia pemutihan , bantu drainase , membantu pembentukan , alat bantu
penghilang busa , dan biocides . Kontaminan ini mungkin setidaknya sebagian direhabilitasi
menggunakan kombinasi selulase dan lipase .

Teknik proses pembuatan bubur kertas dapat mengambil manfaat dari menggunakan selulase
dan / atau xilanase untuk meningkatkan dewatering , meningkatkan kecepatan mesin ,
meningkatkan kekuatan web basah , dan mengurangi energi pemurnian . Hidrolisis enzim
juga menyediakan berkurang kekasaran serat dengan penurunan nilai handsheet kekasaran ,
dan kehilangan kekuatan serat . Proses pembuburan Kraft sama menguntungkan , dengan
keuntungan tambahan dalam hal peningkatan kepadatan handsheet .

Setiap masalah yang dibahas di atas dalam konteks memiliki resolusi enzimatik lebih lanjut
direhabilitasi dengan menggunakan pra-cuci protein untuk mengikat lignin . Seperti
disebutkan sebelumnya , penggunaan protein efektif untuk mencegah mengikat antara enzim
hidrolisis dan lignin , yang meningkatkan ketersediaan hidrolisis enzim .

CONTOH 10 Lainnya Lignin blokir Peptides
Protein lignin -blocking digunakan dalam contoh sebelumnya adalah BSA , yang memiliki
berat molekul yang relatif tinggi dari 66.000 Dalton . Polipeptida lain dan / atau protein yang
memiliki kemampuan untuk memblokir lignin mengikat juga berguna . Jadi, sementara
protein dan / atau polipeptida yang memiliki berat molekul rata-rata dari 2.000 Dalton
menjadi 300.000 Dalton umumnya berguna , protein atau polipeptida memiliki kapasitas
untuk memblokir lignin mengikat , dan memiliki berat molekul dalam kisaran sekitar 55.000
Dalton sampai sekitar 80.000 Dalton sangat berguna . Ini telah dikonfirmasi oleh analisis
mikroskopis substrat pertanian termasuk brangkasan jagung dan jerami gandum bahwa
peptida fluorescently berlabel memiliki berat molekul dalam rentang yang terakhir ini
berukuran dengan benar untuk menembus bukaan di substrat dalam aliran - melalui reaktor
sedangkan peptida juga cukup besar untuk meningkatkan lignin efek memblokir .
Kemampuan untuk menembus di 80.000 Dalton ditambah dengan peptida yang lebih besar
pada 55.000 Dalton memberikan efek lignin blocking yang optimal untuk jumlah peptida
digunakan .

Banyak protein dan polipeptida memiliki afinitas mengikat non - spesifik untuk lignin juga
dapat digunakan untuk memberikan keuntungan yang sama . Sebagai contoh, protein seperti
protein kedelai , misalnya , tepung kedelai dan / atau bungkil kedelai dapat digunakan untuk
memblokir lignin dengan mempersiapkan polipeptida atau komposisi protein dalam air , dan
menggunakan campuran sebagai pra-cuci biomassa . Salah satu manfaat menggunakan
polipeptida lignin -blocking adalah bahwa polipeptida relatif murah dapat digunakan untuk
mengurangi atau menghilangkan afinitas yang lignin akan , sebaliknya , memiliki untuk
enzim yang lebih mahal . Aktivitas enzimatik tidak diperlukan dari polipeptida lignin -
blocking , dan berbagai bahan polipeptida yang cocok untuk tujuan ini . Berbagai murah
bahan protein dapat digunakan sebagai blocker lignin , yang mungkin mencakup , misalnya ,
protein hewani seperti ikan atau limbah pengolahan daging , albumin , atau protein whey .
Dalam aspek lain , biaya rendah bahan limbah protein mungkin termasuk protein nabati ,
seperti limbah pengolahan gula , rusak atau kadaluarsa stok pangan , protein kedelai , limbah
pengolahan biji-bijian , protein atau alga . Dalam aspek lain , protein mikroorganisme seperti
yang diperoleh dari bakteri , jamur atau ganggang juga dapat digunakan . Albumin adalah
protein yang cocok , terutama , albumin serum bovine ( BSA ) dan albumin telur ayam ;
Namun , protein lain, seperti protein kedelai , amilase , protein whey , atau orang lain , dapat
memberikan alternatif yang efektif dengan biaya lebih rendah . Dalam salah satu perwujudan
, berbagai jenis biaya bahan protein yang rendah dapat dikombinasikan dan digunakan
bersama-sama sebagai lignin blocker . Dalam perwujudan lainnya, bahan protein lignin -
blocking mungkin termasuk bovine serum albumin ( BSA ) dan setidaknya satu anggota
lainnya yang tercantum di atas , seperti limbah pengolahan ikan , limbah pengolahan daging ,
protein whey , limbah pengolahan biji-bijian , limbah pengolahan gula , manja atau stok
pangan kadaluarsa , protein alga , protein kedelai , protein bakteri , protein jamur atau
kombinasinya . Sebaiknya , protein bakteri atau protein jamur ekstrak total protein dari
bakteri atau jamur , masing-masing. Protein jamur lebih disukai dari ragi .

Sebuah studi banding dilakukan untuk menentukan efisiensi relatif dari berbagai sumber
protein . Jagung brangkasan adalah pra-perawatan dengan 1 % berat asam sulfat ( aq) pada
140 C selama 40 menit . Sebuah efisiensi konversi selulosa ditentukan untuk spesimen yang
diperlakukan dengan lignin memblokir protein dari berbagai sumber , yaitu , BSA , amilase ,
jagung minuman keras curam dan bungkil kedelai , menggunakan selulase memiliki
konsentrasi 15 FPU / g selulosa selama 72 jam . Seperti terlihat pada gambar . 6 , semua
protein yang disediakan konversi sekitar 80 % dari selulosa dari brangkasan jagung pra-
perawatan . Sebaliknya , kontrol yang terdiri dari pretreatment brangkasan jagung yang tidak
dicuci dengan lignin memblokir protein , diproduksi hanya 65 % konversi selulosa menjadi
gula . Gambar . 6 juga menunjukkan bahwa bungkil kedelai merupakan sumber protein
termurah , diikuti dalam rangka peningkatan beban oleh jagung minuman keras curam ,
amilase dan albumin serum bovine . Karena efisiensi konversi secara substansial tidak
sensitif terhadap jenis protein protein biaya yang paling efektif dapat dipilih ; misalnya, di
mana bungkil kedelai adalah biaya sekitar delapan kali lebih efektif dari BSA .

Lignin-blocking/binding polipeptida dan protein , seperti yang didefinisikan untuk tujuan di
sini , adalah molekul yang mengganggu kemampuan lignin untuk mengikat selulase atau
enzim selulosa - hidrolisis lainnya . Selanjutnya, lignin-blocking/binding polipeptida dan
protein memiliki afinitas tinggi untuk mengikat lignin dan aktivitas mengikat relatif kecil (
misalnya 1 % sampai 3 % b / b ) untuk selulosa atau selulosa hidrolisis enzim , seperti
selulase . Protein ini lignin-blocking/binding dan polipeptida selanjutnya dapat digambarkan
memiliki ukuran 55.000 Dalton 80.000 Dalton . Namun, fragmen peptida yang lebih kecil
dari BSA , atau protein lignin -blocking lain , memiliki berat molekul rendah , yang
mempertahankan aktivitas lignin mengikat cukup, juga dapat digunakan dalam komposisi
pengobatan Pra cuci .

Deskripsi dari perwujudan spesifik mengungkapkan konsep-konsep umum bahwa orang lain
dapat memodifikasi dan / atau beradaptasi untuk berbagai aplikasi atau penggunaan yang
tidak berangkat dari konsep-konsep umum . Oleh karena itu , adaptasi dan modifikasi
tersebut harus dan dimaksudkan untuk dipahami dalam arti dan rentang setara dari
perwujudan yang diungkapkan . Hal ini harus dipahami bahwa ungkapan atau istilah yang
digunakan dalam dokumen ini untuk tujuan deskripsi dan bukan pembatasan .
Klaim ( 20 )
Apa yang diklaim :
. 1 Sebuah metode untuk meningkatkan hidrolisis selulosa dari biomassa lignoselulosa dalam
proses biokonversi , mengatakan metode yang terdiri dari:
mengobati kata biomassa , yang terdiri dari komponen lignin dan komponen selulosa ,
dengan komposisi yang mengandung bahan protein lignin -blocking untuk memberikan
campuran reaksi yang mengandung komponen lignin diobati ,
dimana bahan protein lignin -blocking setidaknya satu anggota yang dipilih dari kelompok
yang terdiri dari bovine serum albumin ( BSA ) , limbah pengolahan ikan , limbah
pengolahan daging , albumin , protein whey , limbah pengolahan biji-bijian , limbah
pengolahan gula , manja atau makanan kadaluarsa saham , protein alga , protein kedelai ,
protein bakteri , protein jamur dan kombinasinya ; dan
menambahkan enzim hidrolisis ke dalam campuran reaksi untuk menghidrolisis komponen
selulosa biomassa menjadi karbohidrat .
2 . Metode klaim 1 , selanjutnya terdiri dari langkah-langkah
fermentasi karbohidrat dalam campuran reaksi dalam kehadiran mikroorganisme mengubah
gula - ke - etanol ; dan
mengekstraksi etanol dari campuran reaksi fermentasi .
3 . Metode klaim 1 dimana enzim hidrolisis digunakan dalam langkah menambahkan terdiri
dari selulase .
4 . Metode klaim 1 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati terdiri
minimal 20 % lignin berat .
5 . Metode klaim 1 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati selanjutnya
didefinisikan sebagai terdiri dari 10 % sampai 50% lignin berat .
6 . Metode klaim 1 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati terdiri
minimal 40 % lignin berat .
7 . Metode klaim 1 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati dipilih dari
kelompok yang terdiri dari kayu , kayu lunak , tanaman herba , rumput , limbah kertas dan
pulp, limbah rumah tangga , dan residu pertanian .
8 . Metode klaim 1 , dimana bahan protein lignin -blocking terdiri dari sedikitnya satu
anggota yang dipilih dari kelompok yang terdiri dari protein bakteri , protein jamur dan
kombinasinya.
9 . Metode klaim 1 , dimana bahan protein lignin -blocking adalah dari ragi .
10 . Metode klaim 1 dimana langkah mengobati biomassa dilakukan sebelum langkah
penambahan enzim hidrolisis .
11 Sebuah metode untuk meningkatkan hasil etanol dari biomassa lignoselulosa dalam proses
biokonversi , yang terdiri dari . :
mengobati kata biomassa , yang terdiri dari komponen lignin dan komponen selulosa ,
dengan komposisi yang mengandung bahan protein lignin -blocking untuk memberikan
campuran reaksi yang mengandung komponen lignin diobati ,
dimana bahan protein lignin -blocking dipilih dari kelompok yang terdiri dari bovine serum
albumin ( BSA ) , limbah pengolahan ikan , limbah pengolahan daging , albumin , protein
whey , limbah pengolahan biji-bijian , limbah pengolahan gula , manja atau stok pangan
kedaluwarsa , protein alga , protein kedelai , protein bakteri , protein jamur dan kombinasinya
;
menambahkan enzim hidrolisis ke dalam campuran reaksi untuk menghidrolisis komponen
selulosa biomassa menjadi karbohidrat ;
fermentasi karbohidrat dalam campuran reaksi dalam kehadiran mikroorganisme mengubah
gula - ke - etanol ; dan
mengekstraksi etanol dari campuran reaksi fermentasi .
12 . Metode klaim 11 dimana enzim hidrolisis digunakan dalam langkah menambahkan
terdiri dari selulase .
13 . Metode klaim 11 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati terdiri
minimal 20 % lignin berat .
14 . Metode klaim 11 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati
selanjutnya didefinisikan sebagai terdiri dari 10 % sampai 50% lignin berat .
15 . Metode klaim 11 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati terdiri
minimal 40 % lignin berat .
16 . Metode klaim 11 dimana biomassa yang digunakan dalam langkah mengobati dipilih dari
kelompok yang terdiri dari kayu , kayu lunak , tanaman herba , rumput , limbah kertas dan
pulp, limbah rumah tangga , dan residu pertanian .
Metode 17 . Klaim 11 , lebih lanjut terdiri menambahkan selobiosa fermentasi organisme
untuk biomassa .
18 . Metode klaim 11 dimana langkah mengobati biomassa dilakukan sebelum langkah
penambahan enzim hidrolisis .
19 . Metode klaim 11 , dimana bahan protein lignin -blocking terdiri dari sedikitnya satu
anggota yang dipilih dari kelompok yang terdiri dari protein bakteri , protein jamur dan
kombinasinya.
20 . Metode klaim 11 , dimana bahan protein lignin -blocking adalah dari ragi .