CK MITOKONDRIA: LOKALISASI, STRUKTUR DAN PENYATUAN FUNGSIONAL

UNTUK FOSFORILASI OKSIDATIF

Menariknya , dalam sel dengan kebutuhan energi tinggi , isoenzim CK sitosol umumnya
saling diekspresikan bersama dengan Mi-CK . Isoenzim CK mitokondria , seperti CKs sitosol ,
juga dikodekan oleh gen inti/nukleus, tetapi dibawa ke mitokondria , seperti yang diperlihatkan
dengan rangkaian yang mempunyai tiga bagian yang khas ( Haas dan Strauss , 1990) , dengan
munculnya protein prekursor berumur pendek ( Perryman et al , 1983; Haas et al , 1989) , dan
dengan subselular fraksinasi ( Jacobs et al . , 1964) . Efisiensi penyatuanfungsional antara reaksi
Mi - CK dan fosforilasi oksidatif sudah dibuktikan secara metode biokimia , kinetik dan
termodinamika serta dengan analisis radioisotop ( Bessman dan Fonyo, 1966; Jacobus dan
Lehninger , 1973; Saks et al , 1976a , b ; Yang et al , 1977; Altschuld dan Brierley , 1977; Saks
et al , 1980, 1984, 1985, 1986 ; DeFuria et al , 1980; Moreadith dan Jacobus , 1982; Erickson -
Viitanen et al , 1982a , b; Gellerich dan Saks , 1982; Barbour et al , 1984a , Jacobus , 1985a ;
Jacobus dan Diffley , 1986; .Gellerich et al , 1987 , 1989; Kuznetsov et al , 1989; .Kottke et al ,
1991). Jadi , Mi - CK tampaknya memiliki akses istimewa ke matriks mitokondria yang
dihasilkan ATP disajikan oleh adenin nukleotida Translocator ( ANT ) (Bessman dan Carpenter ,
1985; Jacobus et al , 1983; . Jacobus , 1985a ) ( lihat Gambar . 2b , 2c dan 3 ) . Meskipun tidak
ada bukti jelas untuk interaksi fisik secara langsung antara Mi - CK dengan ANT, membran
protein integral yang paling penting dari membran mitokondria bagian dalam ( Klingenberg ,
1979) , belum dilaporkan , sebuah hubungan Mi - CK dengan membran dalam itu sendiri
didukung oleh beberapa bukti : (i) studi subfractionation telah menunjukkan bahwa Mi CK
dikaitkan dengan bagian luar dari membran dalam ( Scholteet al , 1973; . Jacobus dan Lehninger
, 1973) . ( ii ) Enzim , hadir sebagian besar dalam bentuk octameric dalam mitokondria (
Marcillat et al , 1987; Schlegel et al , 1988a , 1990; . Quemeneur et al , 1988; Lipskaya dan
Trofimova , 1989a , b ) , tetap berikatan dengan hipo-osmotik mitokondria yang bengkak atau
mitoplasts ( Scholte , 1973; Vial et al , 1979; . Font et al , 1981, 1987; Brooks dan Suelter ,
1987a ) dan dapat dilepaskan dari mitoplasts dengan fosfat terutama dalam bentuk octameric nya
( Schlegel et al , 1988a , 1990. ; Wyss et al . , 1990) . Mi - CK dapat diikat kembali untuk
mengektraksi mitoplasts ( Lipskaya et al, 1980; Hall dan DeLuca , 1980; Marcillat et al , 1987) ,
dimana pH pada sedikit basa , octamers Mi - CK mengikat kembali rangkaian atas dimer
(Schlegel et al . , 1990) . Setelah Mi CK dimer terikat pada mitoplasts , mereka dapat menjalani
octameriz -asi yang kemungkinan difasilitasi oleh difusi lateral pada bagian dalam membran
(Schlegel et al , 1990; . lihat Gambar 3) . Rasio octamer / dimer Mi - CK dipengaruhi in vitro
dengan substrat, pH, kekuatan ion dan kosentrasi protein( Lipskaya et al , 1985; Marcillat et al ,
1987; Schlegel et al , 1988a ) . Ketika MgADP , creatine dan nitrat , yang dikenal untuk
menginduksi transisi-analog kompleks CK ( Milner - White & Watts , 1971) serta memisahkan
octameric Mi - CK in vitro ke dimer yang stabil ( Schlegel et al . , 1988a , 1990) , ditambahkan
ke mitoplasts , Mi - CK bersamaan dilepaskan dari membran ( Marcillat et al . , 1987) . ( iii ) Mi
- CK telah diterjemahkan in situ dengan metode immuno gold sepanjang membran krista
mitokondria ( Schlegel et al . , 1988a ; Wegmann et al , 1991a ) (Gambar 4 ) . ( iv ) Mi - CK
berinteraksi dengan vesikel cardiolipin ( Schlame & Augustin , 1985; Muller et al , . 1985;
Cheneval & Carafoli , 1988) . Cardiolipin adalah komponen fosfolipid penting dan pada
kenyataannya satu-satunya yang bermuatan negative pada fosfolipid membran mitokondria
bagian dalam ( Hovius et al . , 1990) . ( v ) Baru-baru ini , itu menunjukkan bahwa Mi - CK
mampu berinteraksi dengan membran model komposisi fosfolipid yang berbeda , serta dengan
monolayers membran mitokondria bagian dalam fosfolipid.
Terlepas dari interaksi dari Mi - CK dengan mitokondria bagian dalam membran ,
beberapa percobaan menunjukkan bukti terbaru bahwa Mi - CK juga berinteraksi dengan
membran luar : ( i ) Mi - CK , terutama dalam bentuk octameric sebagai dalam mitokondria utuh
, diperkaya dalam fraksi batas membran situs kontak terisolasi bersama-sama dengan kinase
perangkat lain seperti heksokinase dan nucleoside difosfat kinase ( Adams et al , 1989; Kottke et
al , 1991) . Mi - CK dalam situs kontak ditampilkan secara laten yang signifikan dalam aktivitas
enzimatik eksternal menambahkan substrat atau inhibitor ( Kottke et al . , 1991) . ( ii ) pelabelan
Immuno - gold sering mengungkapkan pengelompokan Mi-CK di tempat-tempat dimana bagian
dalam mendekati membran luar ( Schlegel et al , 1988a ;Wegmann et al, 1991 ) ( lihat Gambar .
4 ). ( iii ) Dalam percobaan histokimia in situ, strain - CK spesifik terjebak di lokasi kontak
antara bagian dalan dan membran luar mitokondria ( Biermans et al . , 1989, 1990) . Kedua
tingkat pembentukan situs kontak dan daerah diduduki oleh akumulasi produk sisa meningkat
secara signifikan atau menurun sebagai fungsi stimulasi metabolik atau inhibisi , secara masing-
masing ( Biermans et al . , 1990) . Hal ini mungkin menunjukkan bahwa pembentukan dan
tingkat kontak membran dalam - luar adalah dinamis dan tergantung pada keadaan metabolisme
mitokondria , seperti yang disarankan berdasarkan freeze fracturing elektron mikro - grafik
mitokondria utuh ( Knoll dan Brdiczka , 1983; Bucheler et al . , 1991) . ( iv ) Dalam beberapa
laporan , itu menekankan bahwa membran mitokondria terluar dan khususnya pori protein
mitokondria memainkan peran penting untuk ' compartmentasi dinamis ' nukleotida adenin
dalam mitokondria ruang antar membran( Ericson - Viitanen et al , 1982b ; . Gellerich et al ,
1987 , 1989; Brooks & Suelter , 1987b ) dan untuk transferdari PCr ke sitosol ( Brdiczka , 1990;
Kottke et al , 1991 ) .

Translokasi nukleotida adenin, PCr dan Cr sepanjang membran mitokondria luar
disarankan harus dibatasi untuk protein pori pembentuk atau ' Porin ' ( Roos et at. , 1982), juga
dikenal sebagai VDAC ( tergantung tegangan anion carrier) ( Colombini, 1979). Porin dapat
mengasumsikan dua keadaan yang berbeda : keadaan konduktansi tinggi, anion - selektif dan -
konduktansi rendah , kation - selektif (Benz et a, 1990; Brdiczka 1990 !.). Disarankan yang
terakhir, yang tidak mengizinkan bagian senyawa bermuatan negatif seperti ADP , ATP dan PCr
(lihat Gambar. 3), diinduksi di lokasi kontak mitokondria oleh ' kopling kapasitif ' antara
membran dalam, yang dikenal menampilkan potensi membran, dan membran luar. Pori-pori di
luar kontak akan tetap anion - selektif, karena ada, jarak pemisahan antara dua membran yang
terlalu besar untuk memungkinkan 'kapasitif coupling' (Benz et at., 1990) (lihat juga Gambar. 3).
Akibatnya, creatine (Cr) akan melewati pori - kation selektif di kontak, sedangkan PCr akan
meninggalkan kompartemen antarmembran melalui pori-pori anion - selektif hanya di luar
kontak (Gambar 3). Semua gagasan ini didukung oleh temuan bahwa, meskipun membran luar
terganggu oleh digitonin, pori-blocking polyanion spesifik reversibel menghambat aktivitas Mi-
CK dengan menghalangi pengangkutan nukleotida adenin yang ditambahkan secara eksternal
melalui membran pori luar (Kottke et at., 1991) dan bahwa Mi-CK tidak dapat diakses untuk
bermuatan negatif inhibitor CK dan substrat PCr, jika senyawa ini ditambahkan eksternal
(Kuznetsov et al, 1989; . Kottke et al, 1991). ( v ) Baru-baru ini, Mi-ck ditunjukkan berinteraksi
tidak hanya dengan monolayers fosfolipid membran dalam, tetapi juga dengan membran luar
fosfolipid campuran ( Rojo ci aL , I99 Ia). Selain itu, Mi-ck octamers mampu menginduksi
kontak erat antara monolayer membran luar yang menyebar dan vesikel membran dalam
(Nicolay ci a, 1990; ! . Rojo ci di, 1991b;. Lihat Gambar 5.). Dibandingkan dengan octamers,
dimer Mi-CK secara signifikan lebih efektif dalam mendorong kontak dekat. Selain itu, baik
isoenzynies sitosol CK ( MM - dan HB - CK ) atau mitokondria adenilat kinase, juga protein
antarmembran dasar seperti Mi-CK, menunjukkan setiap kecenderungan untuk menginduksi
membran kontak ( Rojo ci di., 1991b ) (lihat Gambar. 5). (vi) Data struktur Mi-CK octamer
sendiri (Gambar 6) juga menjelaskan properti octamers Mi - CK untuk menghubungkan
membran dalam (IM) dan membran luar (OM) bersama-sama (Gambar 5), persis seperti
diharapkan terjadi di lokasi kontak transfer energi mitochondrial (Gambar 3). Octamer ini terdiri
dari empat dimer identik yang membentuk lekukan atau saluran di tengah molekul seperti kubus
, seperti yang diungkapkan oleh berbagai teknik mikroskopis elektron (DeLuca & Hall, 1980; ! .
Schnyder eta, 1988, 199la, b ; Belousova et at , 1991; . Winkler ci at, 1991) (lihat Gambar 6),
serta dengan analisis X - ray kristal Mi-CK (Schnyder ci a, 1990)!. Hasil ini menunjukkan bahwa
octamer seperti kubus memiliki dua wajah identik atas dan bawah, berbeda dari empat sisi wajah,
dan bahwa depresi sentral seperti corong wajah atas dan bawah dihubungkan oleh saluran pusat
(Schayder eta!., l991a) (Gambar 6). Dengan demikian, tampaknya sangat mungkin bahwa
octamer Mi-CK melalui dua wajah atas dan bawah yang saling berhadapan yang dapat
berinteraksi secara bersamaan dengan membran mitokondria dalam dan luar, dan menggoda
untuk berspekulasi bahwa translokasi substrat dan produk terjadi melalui saluran pusat Mi- CK
octamer (Walliniann et at , 1989; . Schlegel et a , 1990; ! . Brdiczka , 1991) (lihat Gambar 3.). Ini
bahkan hipotesis bahwa octameric Mi-CK, tetrameric ATP / ADP Translocator (ANT) (Vignais
ci a 1989!.) Dan Porin oligomer (F) (Krause et al, 1986;. Linden & Gellerfors, 1983) merupakan
suatu saluran transportasi energi multienzim sangat terorganisir diperpanjang melalui membran
dalam dan luar di lokasi kontak (Gambar 3).
Perlu ditekankan di sini bahwa dengan representasi skematik pada Gambar. 3, itu tidak
dimaksudkan untuk menunjukkan bahwa octamers Mi-CK hanya secara enzim aktif di lokasi
kontak acitochondrial, melainkan bahwa kopling fungsional Mi-CK dengan ATP / ADP
translocators dan dengan Porin memfasilitasi transphosphorylation matriks yang dihasilkan ATP
ke PCr , ekspor dari mitokondria, dan impor Cr ke dalam mitokondria.
Sampai sekarang, siklus regulasi mengenai keseimbangan Mi-CK octamer / dimer dan
interaksi diferensial octamers dibandingkan dimer dengan membran dalam mitokondria
diselidiki in vitro (Lipskaya ci al , 1985;. . Schlegel ci at, 1990 ; Rojo et al., 1991a, b) (skematis
digambarkan dalam Gambar. 3) . Perkiraan konsentrasi vivo dari Mi - CK di ruang antar
membran jelas akan mendukung situasi 'all- octamer ' dari Mi - CK (lihat Schiegel ci di . , 1990)
. Namun, karena keseimbangan octamer / dimer serta interaksi octamers dan dimer dengan
membran mitokondria sensitif terhadap substrat dan produk CK dan ATP / ADP reaksi
Translocator serta pH , dan karena proporsi tertentu dari dimer Mi - CK selalu ditemukan ketika
Mi - CK dilepaskan dari mitokondria , siklus dinamis tersebut kemungkinan ada juga di vivo.

Fungsi Mi-CK dalam perlindungan potensial fosforilasi mitokondria
Letak Mi-Ck yang spesifik diantara membran pembungkus mitokondria menimbulkan
pertanyaan tentang mamfaat metabolisme yang ada di tempat tersebut. Dari sudut pandang
pertama, hal tersebut akan memperlihatkan efisien yang lebih dalam menghasilkan PCr di dalam
kompartemen matrik dan ekspor PCr tersebut. Tetapi, satu gagasan menyebut bahwa potensial
fosforilasi dalam mitokondria secara signifikan lebih rendah dibandingkan bila terjadi di sitosol
(8 kcal atau 33,5 kj/mol dalam mitokondria dibandingkan 12 kcal atau 50,2 kj/mol di sitosol).
Meskipun rendahnya ATP/ADP yang dibagi ke matrik (mendekati 0,2-2,0 atau 6-12, pada
penghitungan di mitokondiria hati tikus melalui perhitungan kimiawi (Soboll dkk, 1978) atau
melalui P-n.m.r. (Ogawa dan Lee, 1982), mitokondria masih mampu berkontribusi pada
potensial fosforilasi diluar mitokondria yang tinggi karena tidak samanya pertukaran elektron
antara ATP degan ADP melalui translokator adenin nukleotida (ANT) (Klingenber dkk,1969).
Jadi, karena ATP/ADP yang dibagi tersebut lebih tinggi signifikannya pada sisi luar dari
membran dalam dibandingkan pada kompartemen matrik, energi bebas dari hidrolisis ATP akan
meningkat selama pengeluaran ATP melalui membran dalam mitokondria (Klingenberg dkk,
1980)). Menurut Klingenberg, potensial membran dalam dapat menghasilkan ATP/ADP yang
dibagi tersebut dari 15-30 yang dibandingkan terhadap prosesnya pada sitosol sel hati (sobol
dkk,1978), tetapi jauh lebih rendahnya dibandingkan di otot dimana menggunakan parameter
yang sama di antara jarak 100-200 (Hebish.1986). klingenberg telah menyelidiki efesiesi dari
ATP ekspor pada penelitian secara in vitro yang bersaing tanpa sistem tranfosforilasi yang aktif,
seperti CK. Tetapi, hal tersebut jelas bahwa ikatan langsung CK pada membran dalam dan pada
ANT dengan sendirinya telah dapat secara signifikan meningkatkan efesiensi dari sistem
pertukaran energi mitokondria sejak hidrolisis energi bebas dari ATP yang berasal dari matrik,
yang langsung di paket menjadi bentuk PCr, yang bukan substrat untuk tranlokator. Jadi Mi-CK
memperkecil energi bebas yang dikehendaki untuk sintesis ATP di mitokondria. Sementara
dengan transfosforilasi ATP dalam memberikan PCr, ANT mendapatkan saturasi dengan ADP
dan siap untuk reaksi antipor ATP /ADP lain. Karena fakta berupa energi bebas dari ATP ekspor
oleh ANT dalam level yang sangat tinggi dan berupa PCr intramembran dan level Cr mungkin
tidak sebanding dngan yang di luar mitokondria. Mi-CK mampu untuk memfosforilasi Cr
meskipun pada potensial fosforilasi sistosol yang tinggi. Mamfaat selanjutnya untuk produksi
PCr yang efisien oleh mitokondria yang berasal dari hasil lokasi Mi-CK hanya dibalik
pengaturan kation dibalik membran luar. Dalam posisi pertahanan, Mi-CK akan mampu untuk
meradakan level PCr/Cr dan telah dapat memproduksi PCr meskipun pada potensial fosforilasi
yang tinggi di sitosol.

Hubungan antara Jumlah Relatif CK Mitokondrial dan Refluks Energi Reaksi CK diukur
dengan
31
P-n.m.r
Sudah diketahui sebelumnya bahwa kecepatan reaksi CK pada otot dapat beberapa kali
lebih besar dibandingkan kecepatan hidrolisis ATP dan sintesis ATP melalui fosforilasi oksidatif.
Kelebihan kapasitas dari sistem CK ini mungkin merupakan salah satu alasan mengapa terdapat
hubungan yang positif antara konsumsi oksigen otot jantung dan kecepatan reaksi CK melalui
pengukuran dengan menggunakan teknik
31
P-n.m.r. pada perfusi jantung. (Kupriyanov et al.,
1984; Perry et al., 1988), melalui pengukuran biokimia langsung (Mahler, 1985) dan dengan
kalkulasi model (Connett, 1988) (Figs. 2b and 2c).
Faktor yang mempengaruhi hubungan antara konsumsi oksigen dan reaksi CK pada otot
jantung tergantung pada proporsi relative Mi-CK pada jaringan (Perry et al., 1988). Mi-CK
absen pada otot jantung tikus embriogenik dan kelinci. (Hall&DeLuca, 1975; Ingwall et al.,
1980; Ingwall & Fossel, 1983). dan terjadi peningkatan ekspresi secara bertahap pada fase
postnatal hewan tersebut (McAuliffe et al., 1989) dimana fungsi transportasi Mi-CK mengalami
peningkatan. Selama periode ini, 3-4 minggu setelah dilahirkan, flux energy melalui sistem
CK/PCr ditemukan meningkat, parallel dengan peningkatan akumulasi Mi-CK (Perry et al.,
1988), dengan proporsi relative Mi-CK mencapai 20-30% dari kadar CK total jantung dewasa
(Ingwall & Fossel, 1983). Pada hewan besar seperti biri-biri (Ingwall et al., 1980) atau pada
ayam, yang mana mereka dapat berjalan dan makan beberapa saat setelah dilahirkan, maturasi
dari sistem CK terjadi antara kelahiran sampai menetas. ((Hall&DeLuca, 1976; Wegmann et al.,
1991a).
Yang menarik, selama stimulasi kronik dari otot rangka (Schmitt & Pette, 1985) atau
pada latihan lari jarak jauh (Apple & Rogers, 1986), konversi dari kontraksi cepat sampai
kontraksi lambat serat otot disertai dengan penurunan signifikan dari aktifitas CK total dan
ukuran kolam PCr. Namun, diwaktu yang sama, terjadi peningkatan aktifitas Mi-CK beberapa
kali lipat. Dengan begitu, jumlah absolute dari Mi-CK berhubungan dengan potensial oksidatif
dari serat otot (Wallimann et al., 1989); Yamashita & Yoshioka, 1991).. Menurut pendapat kami,
merupakan argument yang kuat dari fungsi utama sirkuit PCR, yaitu sebagai penyangga energy
yang lebih menonjol dalam glikolisis, kontraksi cepat otot dengan peningkatan kadar CK
sitosolik dan kolam PCr (Wallimann & Eppenberger, 1985) (Fig 2b), dan untuk transport energy
yang mana lebih jelas pada kontraksi lambat oksidatif dan otot jantung, keduanya memiliki kadar
Mi-CK yang relative tinggi (Approx, 12 and 15-25% dari Mi-CK total, dibandingkan dengan
glikolisis otot yang hanya 4%) (Ingwall & Fossel, 1983; Wallimann et al., 1989; Wallimann &
Eppenberger, 1990; Yamashita & Yoshioka, 1991) (Fig. 2c). Respon seluler deplesi keratin :
Mi-CK dan adaptasi metabolik jangka panjang untuk status energy seluler yang rendah
Suplai makanan dengan analog keratin guanidinopropionic acid (GPA) menunjukan
perubahan metabolik pada otot skeletal. Sebagai contoh, 90% deplesi PCr, 20-50% menurun
aktivitas CK total dan menrun pada potensi glycolytic dengan peningkatan kapasitas oksidatif
yang dapat digambarkan((Fitch et al., 1974; Shoubridge et al., 1985a). Disana tidak terdapat
perbedaan yang signifikan pada tampilan otot pada beberapa hewan. Hasil yang didapatkan
bahwa pendapat yang menunjukkan antara PCr dan aktivitas CK menunjukkan metabolism
aerobic. Walaupun level PCr pada hewan yang terintoksifikasi dengan GPA yang masih dengan
jarak miofibrilar M-Band CK (Saks et al., 1976a)dan lebih luas dibandingkan perbedaan
konsentrasi PCr atau gradient yang dibutuhkan untuk mendukung energi maksimal yang masuk
dari mitokondria menuju myofibril((Jacobus, 1985b). Walaupun demikian, kompensasi jangka
lama pada adaptasi metabolik yang menempati otot pada hewan ((Shoubridge et al., 1985b)
dengan GPA dan metabolic tipe perubahan fiber dan alterasi dari ekspresi isoenzim dicatat
sebagai konsekuensi rendahnya PCr dan kadar ATP secara kronik. Perluasan adaptasi, khususnya
peningkatan aktivitas mitokondria, kemampuan otot dalam memberikan nutrisi dengan GPA
dengan adanya metabolisme aaerob yang diaktifkan lebih efektif dibandingkan pada hewan
control dan metabolic yang terjadi menuju suatu daya tahan pada tipe otot yang lemah.
(Shoubridge &Radda, 1984)berpendapat bahwa pentingnya sirkuit PCr masih berlangsung pada
hewan yang bergantung pada GPA. Paling signifikan hal yang paling baru ditemukan bahwa,
sebaliknya hasil yang lebuh awal didapatkan pada otot skeletal ((Meyer et al., 1986). Pada otot
jantung, GPA-fosfat digunakan oleh CK yang bertujuan dalam perubahan antara beraktivitas
dengan efisien(Conley &Kushmerick, 1990), walaupun GPA-fosfat sedikit dimetabolisme oleh
PCr analog (Chevli & Fitch, 1979). Selain itu, penelitian terbaru dengan nutrisi EPA
menyarankan bahwa deplesi PCr pada jantung menunjukkan biokimia fundamental yang
ditampilkan, fisiologis dan perbedaan termodinamika yang dibandingkan dengan jantung
normal(Zweier et al., 1991).
Sebagai salah satu bagian dari adaptasi yang telah digambarkan, mitokindria silinder
yang luas dengan inklusi parakristalin, memperbanyak dalam Mi-CK, telah ditemukan pada
kardiomiosit tikus dewasa dalam medium yang bebas keratin (Eppenberger-Eberhardt et al.,
1991)inklusi dan akumulasi Mi-CK yang terdapat disana tampak atau dapat dimunculkan
kembalidengan penambahan medium kultur dengan 20mM-kreatin atau 10 mM-GPA secara
berturu-turut. Dalam opini tersebut dijelaskan bahwa sel jantung yang dikultur mengkompensasi
energy intraseluler yang rendah (total Cr rendah) dengan status dalm dua cara : akumulasi Mi-
CK yang meningkatkan katalisis efisiensi(Vmax/Km)dengan produksi PCr pada sitosol total
tingkat Cr yang rendah secara substansial dibandingkan normal dan hal ini juga meningkatkan
transport energy dalam fungsi sirkuit PCr. Beberapa dalam interpretasi sebuah penelitian dengan
menggunakan sampel jantung yang normal, perfusi dengan 2-deoxy-D-glucose dan insulin
(Hoerter et al., 1988). Walaupun dalam kasus ini kadar PCR dideplesi sebanyak 85-90% dari
tingkat yang asli dan ATP tidak dapat diukur lebih lama dengan n.,m.r, jantung masih beraksi
dengan 65% dari tekanan sistolik yang tersisa. Dibawah kondisi yang normal, ketika suplai
oksigen normal, fungsi transport energy (kapasitas energy yang rendah) menunjukkan
pengaturan sesudah deoxyglucose dan insulin. Sebaliknya pada situasi hipoksia, yang mana
tampilan jantung tidak dapat dilihat korelasi dengan tingkat PCr. Jika disuplai kembali dengan
ATP melalui fosforilasi oksidatif yang menghambat dan hal ini ditujukan untuk fungsi transport
energi untuk sistem CK/PCr yang terjadi, tampilan jantung menurun secara mendadak secara
cepat menuju kolam PCr seluler (Hoerter et al., 1988. Penelitian eksperimen dengan deplesi PCr
dan uptake oksigen pada otot Sartorius katak (Mahler, 1985)disetujui secara penuh dengan
interpretasinya, hal ini menyarankan bahwa respiarsi otot memiliki batas kecepatan dalm
produksi ADP via Mi-CK


Batasan Difusi Nukleotida Adenin
Sejauh fungsi transportasi energi dari sistem CK / PCr yang bersangkutan, PCr dan ADP,
selama pembentukan tersedia di banyak konsentrasi yang lebih tinggi dalam sel, fluktuasi
kebutuhan energi. Di samping itu, PCr dan Cr adalah senyawa kecil dengan tanpa atau lebih
rendah muatan negatif dibandingkan dengan nukleotida adenin. Kesesuaian PCr dan Cr sebagai
'molekul transportasi' baru-baru ini dikonfirmasi oleh non-invasif
31
P-pulsed gradien pengukuran
n.m.r secara in vivo, menunjukkan bahwa panjang rata-rata difusi PCr dan Cr (57 dan 37 m)
secara signifikan lebih tinggi daripada ADP dan ATP (1,8 dan 22 m) (Yoshizaki et al., 1990).
Hasil ini juga menegaskan bahwa, in vivo, ADP, dengan panjang difusi rata-rata 1,8 m, jelas
difusi yang paling dibatasi dari semua metabolit di atas (Jacobus, 1985b, Mahler, 1985;.
Yoshizaki et al, 1990), tapi difusinya mungkin masih cukup untuk transportasi energi dalam sel
berukuran kecil atau berstruktural khusus, sel berukuran besar. Misalnya, otot terbang serangga
tertentu, sangat mampu meninggikan fluks energi aerobik, tampaknya tidak mengandung kinase
phospagen mitochodrial (Schneider et al, 1989;. Ellington & Hines, 1991). Pada otot-otot
khusus, baris padat mitokondria yang berbaris di aposisi dekat dengan myofibrils individu
(Smith, 1996) sedemikian rupa bahwa jarak difusi dari mitokondria ke myofibrils sangat kecil.
Namun, dalam serat otot dengan diameter besar dan dengan mitochodria sebagian besar
subsarcolemmal, jarak difusi agak besar (10-100 m) harus diatasi. Disana, tingkat difusi ADP
adalah 1-2 kali lipat di bawah yang diperlukan untuk tingkat tertinggi metabolisme oksidatif
(Kammermeier, 1987). Di samping itu, pada jarak tertentu dari setiap mitokondria (2-3),
keterbatasan difusi ADP akan mendorong penurunan energi bebas hidrolisis ATP oleh 4-9 kJ /
mol, yaitu di bawah nilai kritis untuk reguler fungsi dari masing-masing proses ATP-dependent
(Mainwood & Rakusan, 1982).
Masalah 'penyediaan energi' dan ' transportasi ' antara situs produksi ATP dan situs
pemanfaatan ATP , termasuk konsekuensi termodinamika dinyatakan di atas , tampaknya sangat
jelas dalam sel yang sangat polar dengan CK spasial terkotak isoenzymed , misalnya dalam sel
fotoreseptor ( Wallimann et al, 1986a; Hemmer et al, 1989;. Wegmann et al, 1991a) dan
spermatozoa (Tombes & Shapiro, 1985;. Wallimann et al, 1986b;. Tombes et al, 1987). Dalam
sel ini, keterbatasan difusi nukleotida adenin yang mungkin terjadi, karena situs konsumsi energi
(dengan asosiasi tertentu B-CK, Quest & Shapiro, 1991) dipisahkan oleh jarak yang besar,
misalnya 50m dari segmen dalam untuk dan untuk segmen luar fotoreseptor hingga 100 dari
batas tengah ke ujung distal dari ekor sperma (lihat di bawah). Sifat dari sistem CK / PCr
tampaknya cukup cocok untuk mengatasi keterbatasan difusi dalam sel-sel polar dengan
memanfaatkan PCr dan Cr sebagai mediator antara mitochondia dan situs pemanfaatan energi .

Pemisahan Fosfat Energi Tinggi Intraseluler
Karena isoenzim CK yang terkotak dalam sel, dan karena reaksi enzimatik CK bekerja
dalam arah yang berlawanan di lokasi konsumen energi yang menghasilkan energi dan,
kemungkinan bahwa substrat dan produk dari reaksi CK juga dipisahkan sampai batas tertentu
dalam sel, beberapa low-M, metabolit seperti nukleotida adenin mungkin tidak merata, tetapi
dapat dipisahkan secara mikro bahkan tanpa pemisahan dengan membran (Jones, 1986; Miller &
Horowitz, 1986, dan referensi di dalamnya). Ini mungkin sangat relevan untuk otot dengan
aparat kontraktil yang sangat terstruktur dengan perubahan lokal potensi Donnan (Bartels &
Elliott, 1985).