Anda di halaman 1dari 13

Pengayaan kultur bakteri pendegradasi emulsi.

Setelah beberapa transfer dalam media kultur pengayaan yang mengandung emulsi sebagai sumber karbon dan energi, populasi bakteri

campuran yang diperoleh dapat

mendepolimerisasi emulsi dan menggunakannya sebagai nutrisi untuk pertumbuhan.

satu populasi bakteri campuran yang diperoleh dari pengayaan kultur bakteri pada media emulsi diinokulasi ke

a satu populasi bakteri campuran yang diperoleh dari pengayaan kultur bakteri pada media emulsi diinokulasi ke MS buffer yang mengandung 0.73 mg emulsi per ml. Kekeruhan kultur (pada absorbansi 560 nm [A560]), dan jumlah bakteri per mililiter ditentukan setelah inkubasi dengan pengocokan pada suhu 30 ° C.

Sampel dari kultur campuran disentrifugasi untuk menghilangkan sel-sel; viskositas, aktivitas pengemulsi, dan kandungan gula total amino yang berisi cairan supernatan seperti yang dijelaskan dalam teks.

Depolimerisasi dari emulsi oleh kultur campuran adalah penyebabnya, setidaknya

sebagiannya, untuk menghasilkan depolymerase emulsi ekstraseluler. Seperti

yang terlihat pada Gambar. 1, penambahan

cairan supematant bebas sel dari kultur

campuran memberikan penurunan yang cepat

pada viskositas larutan emulsi. Kontrol yang

terdiri dari cairan supernatan yang memdidih tidak mempengaruhi viskositas larutan emulsi.

biakan murni dari bakteri pendegradasi emulsi dari kultur campuran.

kultur campuran mengandung sedikitnya satu jenis mikroorganisme yang mampu menghasilkan pengemulsi ekstraseluler. Untuk mengisolasi bakteri

pendegradasi emulsi yang diinginkan, sampel dari

kultur campuran di sebarkan ke media nutrien agar.

Setelah inkubasi pada 30 ° C selama 48 jam, 20 jenis koloni yang berbeda dipilih, 20 isolat diinokulasikan bersama-sama ke media emulsi dan diinkubasi selama 30 ° C selama 1 minggu, tidak satupun dari mereka mengurangi viskositas media.

Gambar. 1. depolimerisasi dari emulsi oleh cairan supernatan bebas sel dari kultur campuran. Sebuah kultur campuran

Gambar. 1. depolimerisasi dari emulsi oleh cairan supernatan bebas sel dari kultur

campuran. Sebuah kultur campuran ditanam pada media emulsi selama 40 jam disentrifugasi, dan cairan supernatant kemudian disaring melalui 0.45-m filter. Cairan supernatan bebas sel ini ditambahkan langsung ke volume yang sama pada larutan emulsi (1,46 mg / ml); viskositas campuran () dan kontrol yang mengandung cairan supernatan mendidih (0) ditentukan pada berbagai waktu inkubasi pada suhu 30 ° C.

Karena banyak koloni serupa muncul, adalah mungkin bahwa skrining pada 50 isolat yang berbeda akan

menghasilkan organisme yang relevan. Bahkan, dalam percobaan skrining yang lebih besar, 1 dari 50 isolat yang diperiksa mampu mendegradasi emulsi, sebagaimana ditentukan dengan berkurangnya aktivitas emulsi dan

viskositas media.

Regangan dari pendegradasi emulsi, disebut sebagai YUV- 1, adalah bakteri aerob, gram negatif, tidak membentuk spora, non- fotosintetik, bakteri berbentuk batang sekitar 4

m panjang dan diameter 1 m, dan membulat di akhir.

Bakteri biasanya muncul sebagai single, meskipun terkadang ada yang berantai pendek, hingga panjang tiga.

Rantai YUV-1 menghasilkan koloni kecil (diameter 1 sampai 2 mm) dari LB agar setelah inkubasi 2 hari pada suhu 32 ° C; koloni

dengan warna mengkilat yang dibiakkan melingkar dengan tepi halus. Sel-sel yang merupakan katalis positif dan nonhemolitik; gelatin

dan pati tidak terhidrolisis. Pertumbuhan tidak terjadi di plate

azida; Pertumbuhan di plate MacConkey rendah.

Suhu pertumbuhan optimum adalah antara 32 dan 40 ° C. Rantai YUV-1 tumbuh membutuhkan waktu dua kali lipat dari sekitar 2,5 jam dalam media yang mengandung ekstrak ragi 0,5 sampai 1,5% tetapi gagal tumbuh pada media dengan nutrisi kaldu (Difco) atau media minimal yang mengandung glukosa

atau asetat sebagai sumber karbon tunggal.

0,5% glukosa ditambahkan ke dalam medium ekstrak ragi, ada stimulasi pertumbuhan,

penurunan pH, dan pembentukan karakteristik flok sel yang terbungkus dalam matriks organik.

Karena faktor tersebut dan kemampuannya

pembentukan flok pada ketinggian C hingga N di

media pertumbuhan, menunjukkan bahwa strain YUV-1 adalah anggota dari genus Zoogloea

kultur campuran yang tumbuh pada media emulsi selama 3 hari itu diencerkan secara bertahap menjadi

a kultur campuran yang tumbuh pada media emulsi selama 3 hari itu diencerkan secara bertahap menjadi 1 ml media emulsi segar. Inkubasi dalam tabung reaksi kecil dengan pengocokan pada suhu 30 ° C. Konsentrasi sel awal ditentukan dengan plating pada LB agar.

b Degradasi Emulsi diukur dengan micromethod kualitatif. +, Emulsi terdegradasi; -, Emulsi tidak terdegradasi.

Pertumbuhan YUV-1 di rumput A. calcoaceticus RAG-1 dan degradasi sel-ikatan emulsan. A.

calcoaceticus-RAG 1 bentuk koloni putih kusam pada etanol agar, sedangkan mutan-RAG 1

mampu menghasilkan bentuk emulsan koloni

putih transparan

Saring YUV-1, ketika ditempatkan di rumput yang dibentuk sebelumnya untuk RAG 1, menghasilkan plak transparan

Plak muncul setelah 24 jam pada 30 ° C dan terus berkembang sampai seluruh bagian petridish tertutup. Plak meningkat dengan diameter sekitar 2,5 mm per

12 jam. RAG-1 sel dalam plak transparan tampaknya memiliki fenotipe sama

dengan mutan emulsannegative. Ketika-RAG 1 diambil dari dalam plak dan ditempatkan pada etanol agar, sel-sel tumbuh dan kembali penampilan aslinya.

Bukti langsung bahwa YUV-1 dilarutkan kapsul emulsan dari RAG-1 sel, sehingga membentuk plak keruh, diperoleh dengan menentukan sel-ikatan

hexosamine sebelum dan sesudah pengobatan-RAG 1 dengan YUV-1 . RAG-1

sel dalam plak hanya berisi 17,5, ug hexosamine per mg sel (berat kering), sedangkan kontrol tidak terkandung 53,3, g hexosamine per mg sel (berat kering). Jika isi hexosamine dari emulsan-negatif mutan AG-1 (mungkin karena bahan dinding sel) dikurangi dari RAG-1 nilai yang ditangani dan tidak ditangani pengurangan persen emulsan adalah [(43,4-7,6) / (43,4)] x 100 =

82%.

Rentang volume heksadekana diuji dengan 0,2 ml hidrokarbon, 93% dari sel

diperlakukan yang patuh, sedangkan hanya 61% dari kontrol RAG-1 sel yang terikat pada antarmuka heksadekana air.

Degradasi emulsan oleh YUV-1. Pertumbuhan, diukur baik oleh kekeruhan kultur atau jumlah sel yang layak

terjadi di A. calcoaceticus RAG-1 dan AG-1 tersebar ke petridish agar etanol dan diinkubasi pada 30 ° C. Setelah 24 jam, beberapa petridish yang berisi

rumput-RAG 1 diinokulasi dengan-YUV 1. Semua petridish kemudian diinkubasi untuk tambahan 3 hari di 30 0 C. Bakteri kemudian dipanen dari petridsish, dicuci dua kali dengan air dingin, dan kemudian

dihentikan dalam air untuk ca. 1.000 unit Klett untuk penentuan berat kering sel dan konten hexosamine.

Persentase berat kering sel yang emulsan dihitung dengan asumsi bahwa (i) 9,9, ug hexosamine per mg sel (berat kering)

adalah karena bahan dinding sel (analisis emulsan-negatif mutan AG-1), dan (ii) asam terhidrolisa murni hasil emulsan 25% hexosamine dengan uji ini.

Selama hari pertama, konsentrasi sel meningkat sekitar 10 kali lipat. Fase pertumbuhan awal ini pasti dengan mengorbankan

komponen tertentu dalam ekstrak ragi karena tidak ada bukti dari setiap degradasi emulsan. Selama lag pertumbuhan (24 sampai 48 jam), depolimerisasi luas emulsan terjadi, meskipun total hexosamine ekstraseluler tidak menurun. Oleh karena itu produk degradasi emulsan rendah molecularweight

terakumulasi selama periode ini. Selama fase pertumbuhan

kedua (48-70 jam), hexosamine dikonsumsi.